猪圆环病毒2型WH株的分离与鉴定

摘要

本文从临床上表现为仔猪断奶多系统衰竭综合征(PMWS)的病死猪中取淋巴、脑等组织病料，扩增猪圆环病毒2型(PCV2)主要结构蛋白基因ORF2，证实为PCV2阳性病料组织后，接种到无PCV1污染的传代PK-15细胞分离培养，培育成1株PK-15传代细胞培养适应毒，命名为WH株。分离毒株经连续传代培养20代，对传代细胞病毒液经间接免疫荧光检测可见PCV特征的荧光斑，而胞浆中无荧光斑，表明毒株有感染性；用PCR证实了该病毒有很好的稳定性：同时用IFA和荧光定量PCR测定了其病毒的滴度，试验结果表明该病毒滴度随代次显著增加，第20代时分离毒株(WH株)TCID50/mL达到107.0TCID50/mL，拷贝平均数为5.84×1016/0.1μg。用2ml的病毒细胞培养物接种30日龄抗体阴性仔猪4头，可引起典型PMWS临床症状。本研究为进一步开展该病毒的致病性、疫苗免疫、诊断及分子生物学等研究奠定了基础。