大肠杆菌O152中第三个糖基转移酶基因功能的质谱表征

摘要

应用生物技术大量生产糖链是最有前景的途径。细菌表面多糖抗原基因簇中含有丰富的糖合成基因资源。以细菌表面多糖抗原合成基因为研究材料，可以同时破译和鉴定大量糖基转移酶，具有重要的科学和应用价值。本实验室在完成大肠杆菌0152抗原基因簇的破译基础上，运用生物信息学方法预测了wfgE基因为0152抗原基因簇中编码涉及重复单位中第三个糖苷键Glc-β1→2-Glc键合成的糖基转移酶。为鉴定wjgE基因的功能，在对基因wfgE进行克隆、大肠杆菌中高效表达的基础上，以实验室自制的Glc-β1→3-G1cNAc-α-P03-P03-(CH2)11为受体底物，UDP-Glc为给予体底物进行酶促反应，应用电喷雾离子化多级串联质谱对酶促反应三糖产物的糖链序列和精细结构进行分析。探索的高效、准确、快捷和灵敏的寡糖结构生物质谱分析方法，对糖基转移酶基因特定功能的鉴定有普遍适用性。