二苯乙烯苷对转α-synuclein蛋白基因细胞的影响

摘要

目的:建立α-synuclein基因转染细胞+Aβ的拟AD细胞模型,研究二苯乙烯苷在体外对拟痴呆细胞模型的作用,探讨何首乌主要有效成分二苯乙烯苷(TSG)神经保护的作用机制,为阐明何首乌的功效机制提供试验依据。方法:TSG购自中国药品生物制品检定所,纯度>99％。过表达A53T突变型α-synuclein基因的SY5Y细胞和相应的空载体细胞由医科院药物所陈乃宏教授馈赠。通过CCK8等检测Aβ25-35损伤细胞的浓度、时间曲线,以建立Aβ损伤的细胞模型。高糖DMEM培养基中加入15％胎牛血清及G418,接种于96孔培养板培养,待细胞融合率达到70％进行分组。将不同浓度的TSG(3.125nM、6.25nM、12.5nM、25nM及50nM)分别与转染α-synuclein基因及空载体的SY5Y细胞共同孵育24h,之后弃去含药培养基并加入工具药Aβ25-35孵育24h。应用CCK8试剂盒测定细胞的存活率,DCFH-DA测定细胞的活性氧(ROS)水平。结果:25uM的A β 25-35作用24h即可对A53T α-synuclein基因转染细胞造成明显损伤,而A53T α-synuclein基因转染细胞较空载体SY5Y细胞对A β 25-35损伤更为敏感。TSG与细胞共同孵育24小时,药物浓度范围在3.125-50nM范围内,细胞生长状况良好,OD值无明显降低。细胞与A β 25-35孵育24h后,细胞活力下降了45%,而TSG可以明显拮抗A β 25-35引起的细胞存活率下降,并随剂量的增加保护作用上升,至50nM保护作用最强(P<0.05)。细胞受A β25-35的损伤,细胞内的活性氧水平显著升高,而TSG则显著抑制了A β 25-35的损伤,使得胞内ROS水平降低(P<0.05)。结论:成功建立了α-synuclein基因转染细胞复合A β损伤的拟痴呆细胞模型。作为中药何首乌的主要有效成分,二苯乙烯苷具有明显的神经保护作用,为进一步阐明何首乌的作用机制提供了理论基础,同时也为开发防治老年性痴呆等神经系统退行性疾病的新药提供了良好的前景。