结核分枝杆菌Ag85A/MPT-64融合基因DNA疫苗的构建及免疫研究中ELISPOT技术的应用

摘要

目的：构建编码结核分枝杆菌蛋白Ag85A／MPT-64融合基因为基础的DNA疫苗，并利用ELISPOT技术检测去免疫原性。方法：利用PCR和基因克隆技术从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出Ag85B／MPT-64编码基因，构建真核表达载体，用酶切和双向DNA测序进行鉴定。鉴定正确的阳性克隆重组质粒，肌注免疫小鼠，3周后用ELISPOT法检测抗体滴度。结果：构建到真核载体中的结核分枝杆菌H37Rv株Ag85A/MPT-64融合基因经序列测定证实无突变。ELISPOT法检侧几何平均滴度为1:1000。结论：以Ag85A/MPT 64融合基因为基础的DNA疫苗的成功构建和表达以及ELISPOT技术的应用，为进一步研究其在结核病与肿瘤防治方面的作用奠定了基础。