炭疽杆菌S层蛋白SLH结构域多抗的制备及其在S层蛋白表达分析中的应用

摘要

目的：原核表达炭疽杆菌S层蛋白EA1的保守结构域SLH结构域，并制备该蛋白的多克隆抗体分析多个炭疽杆菌突变株s层蛋白表达情况。方法：从炭疽杆菌A16R中经PCR扩增得到S层蛋白EA1的保守结构域SLH结构域编码序列，将其克隆至原核表达载体pET-15b(+)中，将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)，在IPTG诱导下进行蛋白表达;以包涵体蛋白为抗原，免疫新西兰大耳白兔制备该蛋白的多克隆抗体;用ELISA法t检测抗血清效价。最后用制备的血清对不同炭疽杆菌菌株S层蛋白的表达进行分析。结果：目的蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中主要以包涵体的形式表达，包涵体粗纯后纯度约90％;制备了针对SLH结构域蛋白的高效价抗血清，ELISA抗体滴度为1：102400;同时该血清能够用于分析炭疽杆菌S层蛋白的表达变化。结论;抗SLH结构域多抗为后续研究炭疽S层蛋白奠定了实验基础。