反义基因

摘要： 该文将HSP70反义基因片段与TA29花药特异性启动子连接构建成植物表达载体,应用农杆菌介导法将其导入到烟草细胞得到转基因植株.通过分子杂交检测和GUS基因表达检测及育性分析证明HSP70反义基因片段已整合进烟草基因组中,并导致转基因烟草出现雄性不育.花药和花粉的显微观察结果表明,转基因烟草的雌蕊正常、但花药和花粉出现败育,而对照植株的雌蕊和雄蕊都正常.通过线粒体HSP70蛋白的提取和测定,发现热激前后对照株的HSP70蛋白含量之比是1.39倍,转基因烟草不育株的HSP70蛋白含量之比为1.01倍,从而证明HSP70反义基因能够有效抑制HSP70蛋白表达而导致植物出现雄性不育.这一研究结果为利用基因工程技术创造植物雄性不育系提供了一种新的策略和途径.

摘要： 2015年辽宁高考理综试题中出现2道涉及前沿科学的试题,题目中涉及到端粒、反义基因的相关知识在教材中讲述不多,为了帮助广大教师学生更好地理解相关知识,对端粒酶、反义基因进行诠释.

摘要： 2016年高考新课标卷Ⅱ第31题,是生物试题中文字量最大的一道题,以表格的形式给出实验处理和结果,需要学生根据结果推断代谢过程并做出判断,对于学生获取信息能力和实验探究能力都进行了较为深入的考查。这类问题也是高考中的常见题型,常结合代谢、调节、生态等知识点进行考查,对学生的能力要求比较高。本文将以此题引入,给出此类问题的训练策略和学习建议,再通过几道经典高考试题的练习进行巩固。

摘要： 利用农杆菌EHA105介导转化,将PG基因转入加工番茄B04植株。通过对影响外植体转化的因素(预培养时间、侵染时间、农杆菌浓度、共培养时间)进行了深入探讨,建立了加工番茄品种B04子叶外植体的高频遗传转化体系,并通过农杆菌介导法将PG反义基因导入加工番茄品种B04,获得PG抗性植株。其最佳预培养时间为2天;当农杆菌的菌液浓度为OD600=0.6、侵染时间为10 min时转化率最高;其最佳的共培养时间为2天。对获得的41株抗卡那霉素转基因植株进行PCR检测,其中9株为阳性植株,其转化率为22%。初步证实了部分加工番茄B04植株中已导入PG反义基因。

摘要： 为了研究TGF-β信号传导中的关键蛋白Smad4在草鱼Ctenopharyngodon idellus发育过程中的作用，克隆出草鱼Smad4基因cDNA全序列，其碱基长度为2974 bp，其中开放阅读框1644 bp，编码547个氨基酸．生物信息学分析结果显示，草鱼Smad4蛋白相对分子质量为59690.3，分子式为C2632 H4073 N753 O791 S24，理论等电点为6.5，含有MH1和MH2这2个高度保守的功能结构域．BLAST相似性分析显示，草鱼Smad4蛋白的氨基酸序列与鲤鱼Cypri-nus carpio、斑马鱼Danio rerio的相似性较高，分别为94.23％和92.97％．还将草鱼Smad4基因的开放阅读框片段反向插入表达载体pcDNA3.1（＋），成功构建了反义Smad4基因真核表达载体pcDNA3.1（＋）-Anti-Smad4．%Smad4 is a key protein in TGF-βsignal transduction , which can regulate the developmental processes like cell proliferation and differentiation .In order to study the role of Smad 4 in developmental process of grass carp (Ctenopharyngodon idellus), a full length of 2 974 bp of Smad4 cDNA sequence from grass carp was obtained , a 1 644 bp CDS ( coding sequence ) encoding a polypeptide of 547 amino acids was determined in the Smad 4 of grass carp .Bioinformatics analysis showed that the relative molecu-lar mass of grass carp Smad4 protein was 59 690.3, the molecular formula was C 2 632 H4 073 N753 O791 S24 , isoelectric point was 6.5, and it contained both MH1 and MH2 highly conserved functional domains . BLAST homology analysis showed higher homology of grass carp Smad 4 protein with common carp and ze-brafish , which was 94.23%and 92.97%respectively .The open reading frame of grass carp Smad4 gene was reversely inserted into the expression vector pcDNA 3.1(+) , which constructed the antisense Smad4 gene eukaryotic expression vector pcDNA 3.1 (+)-Anti-Smad4 .

摘要： Fas/FasL是近年来研究较多的凋亡和免疫调节分子,在肿瘤的免疫逃逸中占重要地位,这一机制的阐明,对肿瘤的治疗有重要的意义.随着反义基因技术的不断发展,以Fas/FasL为靶点的反义基因研究,因其特异性高,副作用小等优点,被认为是最有前途的肿瘤治疗方法之一.该文就目前针对以FasL为靶点的反义基因技术与肿瘤免疫逃逸的相关研究做一综述.

摘要： 目的:利用基因工程对野生青蒿进行人工操纵来提高其青蒿素生产能力.方法:从已有载体pROKII-SS通过PCR获得鲨烯合酶基因(SS),然后连接pMD-18载体,测序后,酶切,连接表达载体PBI121-SS,通过菌液PCR,抽取质粒,酶切检测.结果:通过上述方法植物表达载体PBI121-SS构建成功,并转化农杆菌LBA4404.

摘要： 旨在获得转淀粉分支酶反义SBEⅠ基因的‘华南木薯8号’转基因植株,为利用转基因技术改良木薯淀粉品质打下基础。在建立了木薯从胚状体子叶到完整植株的再生体系的基础上,用块根特异表达启动子Sporamin驱动的木薯淀粉分支酶SBEⅠ反义基因,通过农杆菌介导法对‘华南木薯8号’进行遗传转化。共接种‘华南木薯8号’子叶517块,获得7株生长良好的转化再生植株,转化再生频率达到1.35%。经PCR检测,其中5株转化再生植株扩增出目的条带,初步证实木薯淀粉分支酶SBEⅠ反义基因已整合进了‘华南木薯8号’基因组中。通过农杆菌介导法可以将淀粉分支酶SBEⅠ反义基因导入到‘华南木薯8号’基因组中,获得了5株转基因植株。

摘要： In this study, an up-regulated partial gene of ATP-dependent RNA helicase from banana fruit was acquired by suppression subtractive hybridization method. Through NCBI -Blastx, it was found that the gene contained a complete RNA helicase superfamily C-terminal domain of HELICc structure. A genomic Southern Blot analysis showed that there was only one copy of the gene in the banana genome. We constructed an antisense gene plant expression vector containing an intact HELICc domain. Then we transformed this vector into tomato by using agrobacterium mediated transformation. In the transgenic tomato plants, variations happened in leaves, flowers and the growthform. The results of the study laid preliminary foundation for identifying function of banana RNA helicase gene.%本研究利用前期抑制差减杂交技术筛选获得的香蕉果实上调表达的基因片段,经NCBI比对,表明该基因片段属于香蕉ATP依赖的RNA解旋酶(Helicase)基因家族成员,含有完整的RNA解旋酶超家族C-末端结构域HELICc结构.经Southern杂交证实,此RNA解旋酶基因在香蕉基因组中只有一个拷贝.构建RNA解旋酶基因的反义基因植物表达载体PBIPC86,转化番茄获得6株转基因番茄植株.转基因番茄植株的叶、花和生长形态均有变异,部分转基因番茄生长势弱.该研究结果对鉴定香蕉RNA解旋酶基因功能奠定了初步基础.

摘要： 目的 探讨反义tankyrase 1基因转染对SGC-7901胃癌细胞形态学的影响.方法 构建人tankyrase 1基因反义真核表达载体,采用脂质体法将其转染至SGC-7901胃癌细胞中,从光镜、电镜水平观察转染与未转染细胞形态学的变化.结果 与亲本细胞相比,光镜下反义tankyrase 1基因转染的SGC-7901细胞胞体增大,胞浆丰富,核浆比例降低,核分裂象减少,核型变规则;透射电镜下核异型性减少,核膜较规则,细胞器丰富,部分细胞胞质内有微腺腔形成.结论 反义Tankyrase 1基因转染能部分逆转SGC-7901细胞的恶性表型,有促进其分化的作用.

摘要： 整合素表达于血管内皮细胞的有腔和无腔面,介导内皮细胞的粘附、迁移和毛细血管管腔的形成,在肿瘤血管的生成中起重要作用。采用基因阻遏技术在转录和翻译水平调节整合素αv、β3基因的表达、利用单克降抗体或者拮抗肽,通过其偶联相应的示踪剂或化疗药物实现对肿瘤的导向诊断和治疗,是近年肿瘤研究的热点。本实验通过建立大鼠胰腺癌模型,利用整合素αv、β3反义基因转染大鼠胰腺癌,探讨了其对胰腺癌生长及血管生成的抑制作用。

摘要： 以一个哈密瓜ACC氧化酶cDNA克隆为目的基因供体,双元质粒载体pB1121为待插入中间载体,构建了带有NPT11植物选择标记的反义基因表达载体,并将其引入根癌农杆菌菌株LBA4404中.

摘要： 骨肉瘤是一种临床常见恶性骨肿瘤，尽管骨肉瘤的治疗有了长足的进展，近80％患者能保留病肢，且5年生存率由20％左右提高到近80％，但仍有半数以上的患者死于骨肉瘤的转移和复发随着肿瘤分子生物学的发展，肿瘤基因治疗概念的提出及实验研究结果，显示出其良好的临床应用潜力，到目前人们针对骨肉瘤及其肺转移已探索开展了抑癌基因治疗、反义基因治疗、自杀基因、免疫基因治疗，药物抵抗基因治疗，联合基因治疗和肿瘤特异性靶向治疗研究等多种极富前景的肿瘤基因治疗方法。本文现做一综述。

摘要： 如何提高转化效率是植物遗传转化中的一个关键问题.本文以香蕉(Musa spp.)的横切薄层切片(tTCL)外植体作为转化受体,通过测定GUS基因瞬时表达率,对影响根癌农杆菌转化香蕉的因素进行了研究,为提高转化效率提供前提.

摘要： 本文中公开了含有多核苷酸的金属‑配体复合物，用于制备它们的化合物，和使用它们的方法。

摘要： 一种表达人类血管紧张素II受体I反义基因的重组腺相关病毒(rAAV)，它适用于高血压、心力衰竭、肾脏疾病及其他相关疾病的基因治疗，该载体系统包括包装质粒pXX

摘要： 一种表达人类CYP2J2反义基因的重组腺相关病毒及其制备方法，本发明所提供的该重组腺相关病毒，是从人类CYP2J2cDNA长1509bp，编码含503个氨基酸的蛋白质，利用PCR法从人类白细胞DNA中克隆人类CYP2J2cDNA，通过三种质粒磷酸钙共转染法包装制备含反义目的基因的重组腺相关病毒并纯化，制备的重组腺相关病毒转染不同种类的人肿瘤细胞系，它能明显抑制各种肿瘤细胞的增殖和迁移、促进肿瘤细胞的凋亡，抑制在体肿瘤瘤体的生长和转移。因此，确定，CYP2J2的选择性抑制剂和表达反义CYP2J2基因的重组腺相关病毒是肿瘤治疗的潜在药物。

摘要： 本申请涉及一种植物育种方法，包括步骤：提取油料作物的DNA，克隆磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPCase)的基因片段；构建磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因的反义基因Anti-PEP，然后将反义基因连接到含有报告基因和抗生素抗性基因的载体上；通过电击法将导入重组载体到根癌农杆菌中，并用所述根癌农杆菌感染油料作物的无菌苗；将植株转到含有抗生素的分化培养基上培养；筛选导入反义基因的植株，经3-4世代选育，得到含有纯合Anti-PEP的高籽粒油脂含量油料作物新品系。本发明可用于提高油料作物籽粒的油脂含量。

摘要： 一种低温诱导型启动子驱动的AcInv反义基因植物表达载体构建及抗低温糖化马铃薯品系培育方法，从拟南芥菜叶片克隆了低温诱导型Rd29A启动子和马铃薯普通栽培种块茎酸性转化酶基因cDNA；用Rd29A启动子片段替换植物表达载体pBI121上的组成型表达启动子－CaMV 35S启动子，并将AcInv基因cDNA片段反向插入到Rd29A启动子和NOS终止子之间，建成了Rd29A启动子驱动的低温诱导型AcInv反义基因植物表达载体pBIAc；用直接导入法转化农杆菌LBA4404，获得了由低温诱导型Rd29A启动子驱动的AcInv反义基因农杆菌工程菌。还提供了一种利用低温诱导型Rd29A启动子驱动的AcInv反义基因农杆菌工程菌转化马铃薯品种，培育块茎抗低温糖化品系的方法。利用该方法，获得了“Ac转大西洋”和“Ac转甘2”两个转基因品系，其中“Ac转大西洋”块茎还原糖含量为0.08％；“Ac转甘2”块茎还原糖含量为0.44％。在低温(4°C±2°C)贮藏6周后，“Ac转大西洋”品系块茎还原糖含量为0.18％；“Ac转甘2”品系块茎还原糖含量为0.52％。

摘要： 一种表达人类CYP2J2反义基因的重组腺相关病毒及其制备方法，本发明所提供的该重组腺相关病毒，是从人类CYP2J2 cDNA长1509bp，编码含503个氨基酸的蛋白质，利用PCR法从人类白细胞DNA中克隆人类CYP2J2 cDNA，通过三种质粒磷酸钙共转染法包装制备含反义目的基因的重组腺相关病毒并纯化，制备的重组腺相关病毒转染不同种类的人肿瘤细胞系，它能明显抑制各种肿瘤细胞的增殖和迁移、促进肿瘤细胞的凋亡，抑制在体肿瘤瘤体的生长和转移。因此，确定，CYP2J2的选择性抑制剂和表达反义CYP2J2基因的重组腺相关病毒是肿瘤治疗的潜在药物。

摘要： 蓝色黑鸭草(Phalaris coerulescens)的类硫氧还蛋白反义基因(Antisense Thioredoxin S，Anti－TrxS)在抗穗发芽小麦中的应用。属于转基因小麦培育技术领域。通过把蓝色黑鸭草(Phalaris coerulescens)的类硫氧还蛋白反义基因(Anti－TrxS)导入普通小麦，得到的转基因小麦可抗穗发芽，从而有效避免因小麦生产过程中穗发芽带来的减产减收和收获期籽粒发芽造成的小麦品质下降。

摘要： 一种表达人类血管紧张素II受体I反义基因的重组腺相关病毒(rAAV),它适用于高血压、心力衰竭、肾脏疾病及其他相关疾病的基因治疗,该载体系统包括包装质粒pXX

摘要： 利用反义基因调控籽粒蛋白质/油脂含量的方法,包括:(1)克隆磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因或乙酰辅酶A羧化酶基因的部分片段,并将其构建成反义基因;(2)用转基因法将所述反义基因导入油料作物细胞,改变蛋白质合成的关键酶—磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶或脂肪酸合成限速酶—乙酰辅酶A羧化酶的活性,调节其生物合成的共同底物PEP的流向,从而定向改变籽粒蛋白质、油脂含量。本发明可用来定向调控油料作物籽粒蛋白质/油脂含量。

摘要： 一种有抗异种排斥反应作用的反义基因克隆及其在哺乳动物细胞中转化和筛选的方法。其特点是提取梅山猪DNA,经聚合酶链反应扩增克隆编码异种抗原位点合成酶基因片段反向连入载体,得到有可转录反义基因质粒pCN84,用于动物细胞、受精卵或器官得到稳定转化细胞株或转基因器官、动物,或转化细胞作核卵移植用于克隆动物,所得细胞或器官缺乏主要异种移植抗原,避免异种免疫识别和结合及免疫攻击,有效对抗移植后超急性排斥反应。