K562

摘要： 目的研究去甲泽拉木醛(demethylzeylasteral,ZST93)在体外抑制慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia,CML)细胞的增殖作用,并初步探讨其可能的作用机制。方法以K562细胞为研究对象,采用CCK-8、细胞生长曲线和倒置显微镜检测ZST93对K562细胞增殖抑制作用;细胞转染和Western blot分析细胞自噬;PI染色、Annexin V-FITC/PI和流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。结果ZST93对K562细胞株的生长呈剂量和时间依赖性的抑制作用,IC_(50)值为2.59μmol·L^(-1),使细胞周期阻滞于G_(1)期。自噬检测中发现ZST93可诱导GFP-LC3积累、LC3-Ⅰ转化为LC3-Ⅱ以及p62表达水平降低。ZST93通过调控自噬激活caspase-8,诱导外部凋亡信号通路,促使caspase-9、caspase-3和PARP剪切而被激活,针对caspase-3的抑制剂Z-DEVD-FMK能够降低ZST93诱导的K562细胞凋亡。结论ZST93可有效抑制K562细胞增殖,促进细胞周期阻滞、细胞凋亡和自噬激活,可能与自噬激活/caspase-8/caspase-3凋亡信号通路有关。

摘要： 目的探讨重楼皂苷Ⅶ(PP7)抑制慢性粒细胞白血病(CML)K562细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用机制,为临床治疗提供理论参考。方法用细胞增殖活性试剂盒(CCK-8)检测不同浓度PP7对K562细胞增殖的影响,用荧光素标记磷脂酰丝氨酸/碘化丙啶(Annexin-Ⅴ-FITC/PI)试剂盒检测PP7对K562细胞凋亡的作用,用免疫印迹法(Westernblot)检测PP7诱导K562细胞凋亡的作用机制。结果PP7能浓度依赖性地抑制K562细胞生长,Annexin V-FITC/PI结果表明,PP7以剂量依赖性方式诱导细胞凋亡。促凋亡蛋白Bax、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9(Caspase-9)的水平随着PP7浓度的增加而增加,而抗凋亡蛋白Bcl-2的水平下降。结论PP7通过线粒体调节的内在凋亡途径显著抑制K562细胞生长并诱导细胞凋亡,表明PP7在未来CML治疗中有成为治疗药的潜能。

摘要： 目的用聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)对齐墩果酸(oleanolic acid,OA)进行修饰,并探讨其衍生物对人慢性粒细胞白血病细胞K562的抑制作用。方法以OA和PEG为原料,酯化法、纳米沉淀法合成齐墩果酸聚乙二醇衍生物,核磁共振、电子显微镜、动态光散射检测衍生物表征。CCK-8法检测齐墩果酸聚乙二醇衍生物对K562细胞增殖抑制的影响,倒置显微镜检测齐墩果酸聚乙二醇衍生物对K562细胞形态的影响,流式细胞术检测齐墩果酸聚乙二醇衍生物对K562细胞凋亡的影响,Western blot检测K562细胞凋亡蛋白(Caspase-3、Caspase-9、PARP-1)及其剪切后蛋白表达。结果成功合成了齐墩果酸聚乙二醇自组装颗粒OAP5,粒径为(584.49±76.2)nm,结构为核-壳结构,电位趋近于0 mV。OAP5对白血病细胞K562具有增殖抑制作用,处理48 h后的IC 50为(16.10±0.64)μg/ml。OAP5处理K562细胞后,细胞密度降低,萎缩变形,折光性变差。OAP5能够促进K562细胞凋亡,剪切Caspase-3、剪切Caspase-9、剪切PARP-1表达增多(P<0.05)。结论OAP5能够通过诱导白血病细胞K562凋亡作用而抑制K562细胞增殖,为齐墩果酸抗肿瘤临床应用提供了依据。

摘要： 目的 比较丁酸钠、氯化血红素(Hemin)及DMSO诱导K562红系分化作用的差异.方法 检测在1.5 mmol/L丁酸钠,20μmol/L Hemin及2％DMSO处理下,K562细胞增殖、细胞周期、四甲基联苯胺(TMB)染色阳性率及CD235 a表达量的变化.结果 连续药物暴露120 h后结果显示,丁酸钠对K562细胞增殖有抑制作用,48～72 h细胞阻滞于G0/G1;96～120 h细胞阻滞于G2/M期,120 h TMB阳性率为(22.02±2.27)％.Hemin对K562细胞的增殖及细胞周期均无影响;120 h TMB阳性率为(90.83±2.69)％.DMSO处理的K562细胞其G0/G1期比例增多,但暴露时间大于72 h时,细胞增殖与对照组差异无统计学意义;120 h TMB阳性率为(1.84±0.48)％,相较于对照组阳性率(2.89±0.18)％差异无统计学意义.丁酸钠和Hemin处理120 h后血型糖蛋白A(CD235 a)的表达水平较对照组和DMSO处理组升高,且2组间差异无统计学意义.DMSO处理组CD235 a与对照组差异无统计学意义.结论 通过综合比较红系分化诱导前后K562细胞增殖、细胞周期、TMB阳性率及CD235 a表达量的变化发现,Hemin是较丁酸钠和DMSO体外诱导K562红系分化更有效的化学试剂.

摘要： 目的:探讨ADAR1 shRNA对人白血病细胞株K562细胞增殖的影响.方法:利用实时荧光定量聚合酶联反应(quantitative real time PCR,qRT-PCR)和蛋白质印记法(Western-blot)检测ADAR1在慢性粒细胞白血病(急变期)患者和正常成人中的表达.培养人白血病细胞株K562细胞,用慢病毒介导的siRNA转染K562细胞,建立稳定的敲减ADAR1的K562细胞株(shADAR1),qRT-PCR和Western-blot方法检测K562细胞和shADAR1细胞中ADAR1的mRNA和蛋白的表达.MTT法检测细胞增殖情况.结果:ADAR1的mRNA表达和蛋白水平在慢性粒细胞白血病(急变期)患者中的表达明显高于正常成人(P<0.05).shADAR1细胞中ADAR1的mRNA和蛋白表达明显低于K562细胞(P<0.05).shADAR1细胞增殖率明显低于K562细胞(P<0.05).结论:ADAR1在慢性粒细胞白血病(急变期)患者中表达增加,通过siRNA抑制ADAR1的表达能明显抑制人白血病细胞株K562细胞增殖,ADAR1基因可能成为治疗慢性粒细胞白血病的新靶点.

摘要： 目的:对毛蚶抗癌蛋白(ASAP)进行了分离纯化,并研究分离后毛蚶抗癌蛋白主要组分的抗癌作用.方法:依次利用阴离子交换层析、疏水作用层析、凝胶过滤层析对ASAP进行分离;联合p53基因表达激活及CCK-8细胞活力测定检测分离组分的抗癌活性;CCK-8细胞活力测定法检测毛蚶抗癌蛋白主要组分对人结直肠癌Colo205、HT-29、人肺癌A549、人慢性髓性白血病K562细胞活力的影响;Annexin-V/PI双染结合流式细胞术检测细胞凋亡;Western Blotting法检测细胞凋亡相关蛋白:Mcl-1、Bcl-2、Bax、procaspase-3的表达情况.结果:从ASAP中分离得到的毛蚶抗癌活性蛋白主要组分C6在24～72 h内对Colo205、HT-29、A549、K562的细胞活力均有不同程度的抑制作用,其中对Colo205细胞的抑制作用最明显,作用72 h时IC50为5.7μg/mL;C6可以诱导Colo205细胞凋亡且呈一定剂量依赖性;C6可以抑制抗凋亡蛋白Mcl-1和Bcl-2的表达,上调凋亡蛋白Bax的表达,引起凋亡蛋白caspase-3前体procaspase-3下降.结论:毛蚶抗癌蛋白主要组分C6对人多种癌细胞活力具有抑制作用,可诱导人结直肠癌Colo205细胞发生caspase通路依赖的细胞凋亡.

摘要： 目的探讨通过慢病毒载体上调GADD45α基因对伊马替尼(IM)耐药株K562IR细胞的增殖、迁移及凋亡的影响。方法培养K562细胞及伊马替尼耐药细胞K562IR,采用实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR)和Western blot法检测K562和K562IR细胞中GADD45αmRNA和蛋白的表达水平;采用过表达GADD45α的慢病毒载体及对照载体转染于K562IR细胞中,分别为Lv-GADD45α和Lv-NC,通过Western blot检测上调后各组细胞GADD45α蛋白表达水平,并进一步用CCK-8法、Tanswell法和Annexin V-FITC/PI双染法检测转染后细胞增殖、迁移和凋亡的变化。结果K562IR细胞中的GADD45α蛋白和mRNA表达水平低于K562细胞,GADD45α基因转染后,Lv-GADD45α组细胞中的GADD45α蛋白表达水平高于Lv-NC组。Lv-GADD45α组细胞在伊马替尼处理后,IC_(50)值低于Lv-NC组,凋亡率高于Lv-NC组,同时细胞迁移能力也下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论通过上调伊马替尼耐药株K562IR细胞中GADD45α基因,可以增强慢性髓系白血病细胞K562IR对于伊马替尼的敏感性,抑制白血病细胞的增殖、促进其凋亡。

摘要： 目的 通过观察慢性高原病患者骨髓红系统K562细胞中HIF-1α及红系转录因子的表达水平,探讨低氧和红系转录因子对红系造血的影响.方法 利用磁珠免疫分选技术获得慢性高原病骨髓单个核细胞中CD235a细胞作为观察组,同时选择白细胞轻度减少患者作为对照组,通过RT-PCR法检测骨髓CD235a细胞中HIF-1α及红系转录因子mRNA的表达,将过表达及干扰HIF-1α的慢病毒转染后的K562细胞在常氧状态下培养72 h后收集细胞,分别作为过表达组和干扰组,用RT-PCR检测红系转录因子的表达水平.结果 结果 显示观察组HIF-1α和GATA1 mRNA表达高于对照组,而NFE2、c-MYB、FOG-1、LMO2、β-globin和α-globin的mRNA水平无显著差异.慢病毒转染K562细胞最佳转染复数MOI为10,转染效率为50％左右,经过嘌呤霉筛选后转染阳性细胞达90％以上.过表达组中GATA1、NFE2、FOG-1和β-globin mRNA表达高于干扰组.上述差异具有统计学意义(P<0.05).结论 低氧-HIF-1-红系特异基因(GATA-1、FOG-1和β-globin)表达轴在低氧诱导红系造血过程中发挥着重要的调控作用.

摘要： 目的：研究体外培养条件下PRKDC表达对氢醌诱导人K562细胞凋亡的影响,以探讨其表达与氢酿诱导K562细胞凋亡的关系.方法：CCK-8法检测氢醌对细胞生长抑制作用;流式细胞术annexin-V加碘化丙啶(PI)双染法检测细胞凋亡率的变化;适时定量PCR方法检测PRKDC在mRNA表达水平,免疫荧光法和western blotting法检测PRKDC的蛋白表达水平。结果：加入不同浓度氢醌培养24h后,CCK-8法检测细胞生长抑制明显,存在剂量-反应关系,特别是氢醌浓度达100μM时,细胞的生长抑制明显高于空白对照组,差异有显著性(P<0.01);流式细胞术检测结果发现,不同浓度氢醌作用后,细胞凋亡率逐渐增加,尤其是氢醌浓度达100μM时,细胞凋亡率明显高于空白对照组,差异有显著性(P<0.01);另外发现,氢醌作用细胞24h后,随着浓度的增加,细胞凋亡率明显增加,PRKDC基因在mRNA表达水平和蛋白表达水平也相应增加,氢醌浓度达100μM时,mRNA和蛋白表达量最高,结果具有统计学意义(p<0.01).结论：体外培养条件下,PRKDC的表达上调可能对氢醌诱导K562细胞凋亡起重要作用,并存在剂量-反应关系.

摘要： 目的：研究体外培养条件下PRKDC表达对氢醌诱导人K562细胞凋亡的影响,以探讨其表达与氢酿诱导K562细胞凋亡的关系.方法：CCK-8法检测氢醌对细胞生长抑制作用;流式细胞术annexin-V加碘化丙啶(PI)双染法检测细胞凋亡率的变化;适时定量PCR方法检测PRKDC在mRNA表达水平,免疫荧光法和western blotting法检测PRKDC的蛋白表达水平。结果：加入不同浓度氢醌培养24h后,CCK-8法检测细胞生长抑制明显,存在剂量-反应关系,特别是氢醌浓度达100μM时,细胞的生长抑制明显高于空白对照组,差异有显著性(P<0.01);流式细胞术检测结果发现,不同浓度氢醌作用后,细胞凋亡率逐渐增加,尤其是氢醌浓度达100μM时,细胞凋亡率明显高于空白对照组,差异有显著性(P<0.01);另外发现,氢醌作用细胞24h后,随着浓度的增加,细胞凋亡率明显增加,PRKDC基因在mRNA表达水平和蛋白表达水平也相应增加,氢醌浓度达100μM时,mRNA和蛋白表达量最高,结果具有统计学意义(p<0.01).结论：体外培养条件下,PRKDC的表达上调可能对氢醌诱导K562细胞凋亡起重要作用,并存在剂量-反应关系.

摘要： 目的：研究体外培养条件下PRKDC表达对氢醌诱导人K562细胞凋亡的影响,以探讨其表达与氢酿诱导K562细胞凋亡的关系.方法：CCK-8法检测氢醌对细胞生长抑制作用;流式细胞术annexin-V加碘化丙啶(PI)双染法检测细胞凋亡率的变化;适时定量PCR方法检测PRKDC在mRNA表达水平,免疫荧光法和western blotting法检测PRKDC的蛋白表达水平。结果：加入不同浓度氢醌培养24h后,CCK-8法检测细胞生长抑制明显,存在剂量-反应关系,特别是氢醌浓度达100μM时,细胞的生长抑制明显高于空白对照组,差异有显著性(P<0.01);流式细胞术检测结果发现,不同浓度氢醌作用后,细胞凋亡率逐渐增加,尤其是氢醌浓度达100μM时,细胞凋亡率明显高于空白对照组,差异有显著性(P<0.01);另外发现,氢醌作用细胞24h后,随着浓度的增加,细胞凋亡率明显增加,PRKDC基因在mRNA表达水平和蛋白表达水平也相应增加,氢醌浓度达100μM时,mRNA和蛋白表达量最高,结果具有统计学意义(p<0.01).结论：体外培养条件下,PRKDC的表达上调可能对氢醌诱导K562细胞凋亡起重要作用,并存在剂量-反应关系.

摘要： 目的：研究体外培养条件下PRKDC表达对氢醌诱导人K562细胞凋亡的影响,以探讨其表达与氢酿诱导K562细胞凋亡的关系.方法：CCK-8法检测氢醌对细胞生长抑制作用;流式细胞术annexin-V加碘化丙啶(PI)双染法检测细胞凋亡率的变化;适时定量PCR方法检测PRKDC在mRNA表达水平,免疫荧光法和western blotting法检测PRKDC的蛋白表达水平。结果：加入不同浓度氢醌培养24h后,CCK-8法检测细胞生长抑制明显,存在剂量-反应关系,特别是氢醌浓度达100μM时,细胞的生长抑制明显高于空白对照组,差异有显著性(P<0.01);流式细胞术检测结果发现,不同浓度氢醌作用后,细胞凋亡率逐渐增加,尤其是氢醌浓度达100μM时,细胞凋亡率明显高于空白对照组,差异有显著性(P<0.01);另外发现,氢醌作用细胞24h后,随着浓度的增加,细胞凋亡率明显增加,PRKDC基因在mRNA表达水平和蛋白表达水平也相应增加,氢醌浓度达100μM时,mRNA和蛋白表达量最高,结果具有统计学意义(p<0.01).结论：体外培养条件下,PRKDC的表达上调可能对氢醌诱导K562细胞凋亡起重要作用,并存在剂量-反应关系.