H5N1禽流感病毒

摘要： 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所陈化兰院士团队在H5N1亚型高致病性禽流感病毒研究方面取得重要进展,该研究系统阐明了目前在全球肆虐的H5N1禽流感病毒的起源、进化和时空传播,并对我国监测到的H5N1病毒进行了系统的生物学研究。相关研究结果发表在《新发病原体与感染》。

摘要： 为了探索引起H5N1高致病性禽流感病毒(highly pathogenic avian influenza virus,HPAIV)致病性差异的宿主因子,选取了一对主要由PA基因造成在小鼠上致病性差异的H5N1禽流感病毒(CK10与GS10),通过病毒感染A549细胞,利用PA抗体进行免疫沉淀(immunoprecipitation,IP)试验以筛选与PA互作的宿主蛋白,并进行LC-MS/MS鉴定.结果发现与低致病性的GS10相比,共有160种宿主蛋白能够特异性与高致病性CK10病毒PA蛋白结合.对这160种蛋白进行生物信息学分析,通过Gene Ontology(GO)注释分析发现这些蛋白主要参与翻译、基因表达、病毒转录和病毒感染等生物学进程,通过KEGG通路分析发现这些蛋白主要参与的细胞通路包括翻译、传染病与信号转导等.此后,利用免疫共沉淀技术(co-immunoprecipitation,Co-IP),证实所筛选的宿主蛋白eEF1A1能够特异性地与CK10病毒PA蛋白相互作用.本研究筛选到了致病性不同的禽流感病毒的差异互作宿主蛋白,可为进一步了解流感病毒复杂的致病机制提供参考.

摘要： Objective To observe the inhibitory effect of the extracts of Nidus Collocaliae on avian influenza A H5N1 virus in vitro. Methods Nidus Collocaliae water extract, artificial gastric juice digestion products of Nidus Collocaliae water extract, and artifitial intestinal juice digestion products of Nidus Collocaliae water extract were prepared for the experimental study. 293T cells transfection in vitro was carried out. The effects of 3 kinds of Nidus Collocaliae extracts on H5N1 pseudovirus and VSV-G pseudovirus were determined by luciferase detection kit. Blood clotting response to erythrocyte hemagglutinin subtypes H5, H7, H9 antigens and the inhibitory effects of 3 kinds of Nidus Collocaliae extracts were observed. The effects of 3 kinds of Nidus Collocaliae extracts on neuraminidase activity were determined by neuraminidase inhibitor screen kit. Results The 3 kinds of Nidus Collocaliae extracts had inhibitory effects on H5N1 avian influenza pseudovirus, the effects being enhanced with the increase of the concentrations of Nidus Collocaliae extracts. Of the 3 extracts, artificial intestinal digestion products had the strongest inhibitory effect, while Nidus Collocaliae water extract had the weakest effect. However, Nidus Collocaliae extracts had no obvious effect on VSV-G pseudovirus. The concentration of H5, H7 antigen for positive blood clotting response was 1 ∶ 128, and that of H9 antigen was 1 ∶ 256. The 3 kinds of Nidus Collocaliae extracts at certain concentrations could inhibit blood clotting response to H5, H7, H9 antigen, but had no obvious effect on neuraminidase. Conclusion The anti-H5N1 virus effect of Nidus Collocaliae extracts has been achieved probably through resisting hemagglutinin.%【目的】观察燕窝提取物体外抑制H5N1禽流感病毒的作用。【方法】制备燕窝水提物、燕窝水提物人工胃液消化物、燕窝水提物人工肠液消化物。通过体外293T细胞转染方法，应用荧光素酶检测试剂盒检测3种燕窝提取物对H5N1禽流感假病毒、 VSV-G假病毒活性的影响；观察禽流感病毒H5、 H7、 H93种亚型抗原凝血反应及3种燕窝提取物对其抑制作用；应用神经氨酸酶抑制剂筛选试剂盒检测3种燕窝提取物对N1型神经氨酸酶（NA）活性的影响。【结果】3种燕窝提取物对H5N1禽流感假病毒活性均有抑制作用，抑制作用的强度随燕窝提取物浓度增高而增加，其中人工肠液消化物作用最强，水提取物最弱，但对VSV-G假病毒活性均无显著抑制作用。 H5、 H7型抗原凝血价为1∶128， H9型抗原凝血价为1∶256，3种燕窝提取物在一定浓度条件下对H5、 H7、 H9抗原血凝反应均有抑制作用，但对NA均没有抑制作用。【结论】燕窝提取物抗病毒的作用可能是通过抑制血凝素的活性而实现的。

摘要： 联合国总部7月13日讯,联合国粮农组织今天发表媒体通报表示,非洲国家喀麦隆近日检测出高致病性的H5N1型禽流感病毒,这一能够导致家禽快速死亡并使人类感染和死亡的病毒可能持续在西部和中部非洲扩散。

摘要： 联合国粮农组织近日发表媒体通报表示,非洲国家喀麦隆近日检测出高致病性的H5N1型禽流感病毒,这一能够导致家禽快速死亡并使人类感染和死亡的病毒可能持续在西部和中部非洲扩散。粮农组织敦促该地区的国家为防范这一病毒提高警惕,并展开紧急应对行动。

摘要： 为筛选H5N1禽流感病毒(AIV)血凝素蛋白(HA)特异性中和抗体,本研究构建了表达HA蛋白的重组质粒,利用该重组质粒及缺失表达人免疫缺陷病病毒1型(HIV-1)囊膜蛋白基因的骨架质粒,构建了表面整合有H5亚型AIV HA蛋白的HIV假病毒.利用该假病毒系统,筛选得到一株具有中和活性的单克隆抗体(MAb).经测定,该MAb与纯化的全病毒具有较好的反应性,其对HIV-H5HA假病毒的中和效价为64.中和试验表明该MAb能够有效阻断野生型病毒对鸡胚的感染.本研究结果为开发H5N1AIV的被动免疫治疗方法奠定了基础,同时对亚单位疫苗的研制也具有一定的意义.

摘要： 近日，广西南宁市动物园饲养的老虎陆续出现发病死亡。截至2月5日，发病虎8只，死亡2只。2月4日，广西动物疫病预防控制中心诊断为疑似禽流感感染，并采样送检。2月12日，国家禽流感参考实验室从送检的死亡老虎病料样品中检出H5N1亚型高致病性禽流感病毒。

摘要： 目的：2005年5月我国青海湖发生H5N1型禽流感,导致6 345只野生禽类死亡.一年后,对2 006年5月青海疫区内死亡的斑头雁等禽类样本进行实验室分离与鉴定,以探索禽流感病毒在野生禽类中的存亡规律、序列及致病性变化.方法：应用鸡胚接种、血细胞凝集、RT-PCR等实验技术分离、鉴定病原,应用接种收获的鸡胚尿囊液对SPF鸡及Balb/c小鼠进行致病性实验,并应用DNAstar MegAlign及GenBank Blaster对测得的病毒序列进行分析.结果：6份样本中分离得到4株病毒,经实验确定为高致病性H5N1禽流感病毒,病毒对小鼠也有极高致病性,感染动物死亡率为100％.病毒基因序列分析符合高致病性禽流感毒株特点.结论：H5N1毒株仍存在于青海湖迁徙的野生禽类中,野生禽类作为病毒的"传播器"需要有效监控,病毒对禽类及哺乳动物致病性需要进一步研究.

摘要： 目的：2005年5月我国青海湖发生H5N1型禽流感,导致6 345只野生禽类死亡.一年后,对2 006年5月青海疫区内死亡的斑头雁等禽类样本进行实验室分离与鉴定,以探索禽流感病毒在野生禽类中的存亡规律、序列及致病性变化.方法：应用鸡胚接种、血细胞凝集、RT-PCR等实验技术分离、鉴定病原,应用接种收获的鸡胚尿囊液对SPF鸡及Balb/c小鼠进行致病性实验,并应用DNAstar MegAlign及GenBank Blaster对测得的病毒序列进行分析.结果：6份样本中分离得到4株病毒,经实验确定为高致病性H5N1禽流感病毒,病毒对小鼠也有极高致病性,感染动物死亡率为100％.病毒基因序列分析符合高致病性禽流感毒株特点.结论：H5N1毒株仍存在于青海湖迁徙的野生禽类中,野生禽类作为病毒的"传播器"需要有效监控,病毒对禽类及哺乳动物致病性需要进一步研究.

摘要： 目的：2005年5月我国青海湖发生H5N1型禽流感,导致6 345只野生禽类死亡.一年后,对2 006年5月青海疫区内死亡的斑头雁等禽类样本进行实验室分离与鉴定,以探索禽流感病毒在野生禽类中的存亡规律、序列及致病性变化.方法：应用鸡胚接种、血细胞凝集、RT-PCR等实验技术分离、鉴定病原,应用接种收获的鸡胚尿囊液对SPF鸡及Balb/c小鼠进行致病性实验,并应用DNAstar MegAlign及GenBank Blaster对测得的病毒序列进行分析.结果：6份样本中分离得到4株病毒,经实验确定为高致病性H5N1禽流感病毒,病毒对小鼠也有极高致病性,感染动物死亡率为100％.病毒基因序列分析符合高致病性禽流感毒株特点.结论：H5N1毒株仍存在于青海湖迁徙的野生禽类中,野生禽类作为病毒的"传播器"需要有效监控,病毒对禽类及哺乳动物致病性需要进一步研究.

摘要： 本研究对中国2004年发生高致病性禽流感疫情的38个疫点的H5N1亚型病毒分离株进行HA基因序列测定和分析发现,HA基因的裂解位点有部分毒株比其他毒株少1了一个碱性氨基酸,其编码的可能糖基化位点有较大差异,除了有7个共有的糖基化位点以外,还有16个毒株在170位多了一个潜在的糖基化位点,DK/HuNYY/7004毒株在156多了一个糖基化位点,但是所有毒株的受体结合位点完全一致,而在受体结合部的两侧有一定的差异.从遗传进化树上来看,我国2004年H5亚型禽流感病毒分离株的HA基因和我国早期毒株CKNX/48/02,DKHUN/40/02和DKZJ/52/00有较为密切关系,而与香港以及东南亚国家毒株的基因有着较大的差异.

摘要： 本研究对中国2004年发生高致病性禽流感疫情的38个疫点的H5N1亚型病毒分离株进行HA基因序列测定和分析发现,HA基因的裂解位点有部分毒株比其他毒株少1了一个碱性氨基酸,其编码的可能糖基化位点有较大差异,除了有7个共有的糖基化位点以外,还有16个毒株在170位多了一个潜在的糖基化位点,DK/HuNYY/7004毒株在156多了一个糖基化位点,但是所有毒株的受体结合位点完全一致,而在受体结合部的两侧有一定的差异.从遗传进化树上来看,我国2004年H5亚型禽流感病毒分离株的HA基因和我国早期毒株CKNX/48/02,DKHUN/40/02和DKZJ/52/00有较为密切关系,而与香港以及东南亚国家毒株的基因有着较大的差异.

摘要： 本研究对中国2004年发生高致病性禽流感疫情的38个疫点的H5N1亚型病毒分离株进行HA基因序列测定和分析发现,HA基因的裂解位点有部分毒株比其他毒株少1了一个碱性氨基酸,其编码的可能糖基化位点有较大差异,除了有7个共有的糖基化位点以外,还有16个毒株在170位多了一个潜在的糖基化位点,DK/HuNYY/7004毒株在156多了一个糖基化位点,但是所有毒株的受体结合位点完全一致,而在受体结合部的两侧有一定的差异.从遗传进化树上来看,我国2004年H5亚型禽流感病毒分离株的HA基因和我国早期毒株CKNX/48/02,DKHUN/40/02和DKZJ/52/00有较为密切关系,而与香港以及东南亚国家毒株的基因有着较大的差异.

摘要： 本研究对中国2004年发生高致病性禽流感疫情的38个疫点的H5N1亚型病毒分离株进行HA基因序列测定和分析发现,HA基因的裂解位点有部分毒株比其他毒株少1了一个碱性氨基酸,其编码的可能糖基化位点有较大差异,除了有7个共有的糖基化位点以外,还有16个毒株在170位多了一个潜在的糖基化位点,DK/HuNYY/7004毒株在156多了一个糖基化位点,但是所有毒株的受体结合位点完全一致,而在受体结合部的两侧有一定的差异.从遗传进化树上来看,我国2004年H5亚型禽流感病毒分离株的HA基因和我国早期毒株CKNX/48/02,DKHUN/40/02和DKZJ/52/00有较为密切关系,而与香港以及东南亚国家毒株的基因有着较大的差异.

摘要： 本研究对中国2004年发生高致病性禽流感疫情的38个疫点的H5N1亚型病毒分离株进行NP基因序列测定和分析发现,我国2004年分离株可以分为两个大的类群,其中四个毒株与其它毒株之间的同源性差异较大,而其余毒株的核苷酸序列的同源性都在96﹪以上,但是和1996年广东分离株GSGD/1/1996的同源性在90.7﹪~93.8﹪之间,有较大的差异性.从编码氨基酸的同源性来看,不同毒株间的同源性都在91.6﹪~99.6﹪之间,不同毒株在遗传进化树中所处的位置不同,可以分为2个相对独立的大进化分支.

摘要： 本研究对中国2004年发生高致病性禽流感疫情的38个疫点的H5N1亚型病毒分离株进行NP基因序列测定和分析发现,我国2004年分离株可以分为两个大的类群,其中四个毒株与其它毒株之间的同源性差异较大,而其余毒株的核苷酸序列的同源性都在96﹪以上,但是和1996年广东分离株GSGD/1/1996的同源性在90.7﹪~93.8﹪之间,有较大的差异性.从编码氨基酸的同源性来看,不同毒株间的同源性都在91.6﹪~99.6﹪之间,不同毒株在遗传进化树中所处的位置不同,可以分为2个相对独立的大进化分支.

摘要： 本研究对中国2004年发生高致病性禽流感疫情的38个疫点的H5N1亚型病毒分离株进行NP基因序列测定和分析发现,我国2004年分离株可以分为两个大的类群,其中四个毒株与其它毒株之间的同源性差异较大,而其余毒株的核苷酸序列的同源性都在96﹪以上,但是和1996年广东分离株GSGD/1/1996的同源性在90.7﹪~93.8﹪之间,有较大的差异性.从编码氨基酸的同源性来看,不同毒株间的同源性都在91.6﹪~99.6﹪之间,不同毒株在遗传进化树中所处的位置不同,可以分为2个相对独立的大进化分支.

摘要： 本发明提供一种同时检测和区分H5和H7N9亚型高致病性禽流感病毒以及H9亚型禽流感病毒的快速检测方法，通过分析近年来分离到的H5亚型高致病性禽流感病毒、H7N9亚型高致病性禽流感病毒、H9亚型禽流感病毒HA基因核苷酸序列，在其保守区设计了引物和探针，建立了针对H5和H7N9亚型高致病性禽流感病毒以及H9亚型禽流感病毒实时荧光定量RT‑PCR核酸快速检测方法。本发明所提供的H5和H7N9亚型高致病性禽流感病毒以及H9亚型禽流感病毒实时荧光RT‑PCR方法具有灵敏度高、检测时间短，不需要电泳等开放环节，只需一台荧光PCR仪即可在一个密闭反应管中完成三种亚型禽流感病毒的检测，且在检测过程中可实时查看反应曲线，对结果作出快速判断。

摘要： 本公开涉及一种用于检测禽流感病毒和/或禽流感病毒耐药性的核酸试剂、试剂盒、系统及方法，所述核酸试剂包括分别彼此独立存放或互相任意混合存放的SEQ ID NO.1‑8所示的引物和SEQ ID NO.11‑15所示的探针。本公开通过以上所述的引物和探针建立了检测禽流感病毒及其携带的常见耐药基因的核酸试剂、试剂盒、系统及方法，能够实现快速、全面、敏感、特异、自动的检测结果判定，显著提高了对禽流感病毒及其耐药性进行检测的敏感性、特异性和简便性。

摘要： 本发明公开了一种适应在无血清全悬浮培养的MDCK细胞系生长的禽流感病毒的制备方法及通过该方法获得的禽流感病毒，包括以下步骤：1)制备待接种的MDCK细胞；2)准备毒种：准备鸡胚源禽流感病毒；3)F1代病毒驯化：4)F2代病毒驯化：取F1代中禽流感病毒血凝效价最高的时间点所留取的上清液样本，重复步骤3)；5)F3代病毒驯化：培养F3代病毒的温度为35°C；6)F4～F10代病毒驯化：重复步骤5)，得到驯化完成的禽流感病毒；本发明的驯化方法将禽流感病毒从使用鸡胚培养直接驯化到完全适应在无血清悬浮培养的MDCK细胞上高效繁殖，驯化效率高，禽流感病毒可在MDCK细胞中高效感染复制，病毒特性稳定。

摘要： 一种禽流感病毒及用于检测、预防禽流感病毒的试剂盒和疫苗。本发明属于生物技术领域，涉及分离的禽流感病毒新毒株，本发明公开了三种H9N2禽流感病毒。本发明还公开了三种检测H9N2禽流感病毒的试剂盒，以及三种用于预防的H9N2禽流感病毒的疫苗，以及抗H9N2禽流感病毒的抗体。通过本发明的试剂盒，可以迅速的检测或者排除是否是由本发明的三种基因型的H9N2禽流感病毒所致的禽流感，从而尽快的控制禽流感疫情。同时，接种本发明的疫苗，可以预防本发明的三种基因型的H9N2禽流感病毒的感染。并且本发明还可以为禽流感病毒监测系统提供生物信息。

摘要： 一种抗禽流感病毒剂，含有作为活性成分的组分，所述组分使用主要由水和亲水性有机溶剂的至少一种的组成的萃取溶剂从番石榴中萃取的番石榴提取物经过高效液相色谱(HPLC)在特定条件下分离而获得。所述特定条件包括使用ODS柱，所述番石榴提取物施加至ODS柱后的15分钟内以甲醇的浓度为20％的水-甲醇混合物作为流动相洗脱，随后的15到30分钟期间使用甲醇浓度为40％的水-甲醇混合物作为流动相。供选地，特定条件还包括所述番石榴提取物施加至ODS柱后的第30到45分钟时间内使用甲醇浓度为60％的水-甲醇混合物作为流动相。包含在抗禽流感病毒剂中的组分在番石榴提取物施加到ODS柱后第20分钟内或在随后的第20到35分钟期间内从该柱洗脱。

摘要： 本发明属于生物技术领域，提供了一种检测H7亚型禽流感病毒的引物对及其引用、检测H7亚型禽流感病毒的方法。本发明提供的引物对包括序列为SEQ ID NO.1所示的上游引物和序列为SEQ ID NO.2所示的下游引物，能够快速检测H7亚型禽流感病毒，可以用于H7亚型禽流感病毒的科学研究，也可以用于动物或人的临床诊断检测。

摘要： 本公开涉及一种用于检测禽流感病毒和/或禽流感病毒耐药性的核酸试剂、试剂盒、系统及方法，所述核酸试剂包括分别彼此独立存放或互相任意混合存放的SEQ ID NO.1‑8所示的引物和SEQ ID NO.11‑15所示的探针。本公开通过以上所述的引物和探针建立了检测禽流感病毒及其携带的常见耐药基因的核酸试剂、试剂盒、系统及方法，能够实现快速、全面、敏感、特异、自动的检测结果判定，显著提高了对禽流感病毒及其耐药性进行检测的敏感性、特异性和简便性。

摘要： 本发明提供一种同时检测和区分H5和H7N9亚型高致病性禽流感病毒以及H9亚型禽流感病毒的快速检测方法，通过分析近年来分离到的H5亚型高致病性禽流感病毒、H7N9亚型高致病性禽流感病毒、H9亚型禽流感病毒HA基因核苷酸序列，在其保守区设计了引物和探针，建立了针对H5和H7N9亚型高致病性禽流感病毒以及H9亚型禽流感病毒实时荧光定量RT‑PCR核酸快速检测方法。本发明所提供的H5和H7N9亚型高致病性禽流感病毒以及H9亚型禽流感病毒实时荧光RT‑PCR方法具有灵敏度高、检测时间短，不需要电泳等开放环节，只需一台荧光PCR仪即可在一个密闭反应管中完成三种亚型禽流感病毒的检测，且在检测过程中可实时查看反应曲线，对结果作出快速判断。

摘要： 本发明公开了一种适应在无血清全悬浮培养的MDCK细胞系生长的禽流感病毒的制备方法及通过该方法获得的禽流感病毒，包括以下步骤：1)制备待接种的MDCK细胞；2)准备毒种：准备鸡胚源禽流感病毒；3)F1代病毒驯化：4)F2代病毒驯化：取F1代中禽流感病毒血凝效价最高的时间点所留取的上清液样本，重复步骤3)；5)F3代病毒驯化：培养F3代病毒的温度为35°C；6)F4～F10代病毒驯化：重复步骤5)，得到驯化完成的禽流感病毒；本发明的驯化方法将禽流感病毒从使用鸡胚培养直接驯化到完全适应在无血清悬浮培养的MDCK细胞上高效繁殖，驯化效率高，禽流感病毒可在MDCK细胞中高效感染复制，病毒特性稳定。

摘要： 本发明公开了用于鉴定或辅助鉴定H9亚型禽流感病毒和/或H6亚型禽流感病毒的引物对组。利用本发明所提供的用于鉴定或辅助鉴定H9亚型禽流感病毒和/或H6亚型禽流感病毒的引物对组建立的二重RT‑PCR，可准确鉴定H9亚型禽流感病毒和/或H6亚型禽流感病毒，且特异性好，灵敏度高，对H9亚型禽流感病毒和H6亚型AIV的最小检出限均达到5×10