H9亚型禽流感病毒

摘要： 1鸡病原检测结果统计分析2022年4~6月共收到鸡病料样品1350余份。检测结果显示,以免疫抑制性病原、呼吸道疾病病原和肝损伤性病原检出率相对较高。其中,在免疫抑制性病原中,以鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)居多,其次是马立克氏病病毒(MDV)和鸡传染性贫血病毒(CAV)。IBDV疑似病例的阳性检出率是33.33%,MDV疑似病例的阳性检出率是29.41%,CAV疑似病例的阳性检出率是24.44%。在呼吸道疾病病原中,以鸡毒支原体(MG)感染居多,其次为H9亚型禽流感病毒(AIV-H9)和鸡传染性支气管炎病毒(IBV)。

摘要： 为了解云南省玉溪市活禽交易市场禽流感病毒污染情况,2021年对该市8个县(市、区)活禽市场进行采样检测。全年共采集63场次1 455份棉拭子样品(禽咽喉/泄殖腔双拭子860份、环境拭子317份、运输工具拭子278份),采用荧光RT-PCR方法进行流感病毒A型、H5/H7/H9亚型流感病毒核酸检测。共检出A型流感病毒核酸阳性435份,未检测到H5和H7亚型病毒核酸阳性;除检出7份未分型阳性样品外,在44场次检出H9亚型病毒核酸阳性428份,场次阳性率为69.84%,样品阳性率为29.42%,其中活禽、环境、运输工具样品阳性率分别为32.56%、25.87%、23.74%,差异具有统计学意义(P 0.05)。结果表明:玉溪市活禽市场H5、H7亚型高致病性禽流感病毒的污染状况得到有效控制,但H9亚型禽流感病毒污染面依然广,污染率较高;不同月份间阳性率差异明显,但季节性差异缩小。结果提示,应继续加强活禽市场H9亚型禽流感病毒污染监测,同时强化活禽市场的检疫监管,严格执行消毒和休市制度,防止活禽市场禽流感病毒传入养殖环节。

摘要： 目的 分析中山市H9亚型禽流感病毒外环境监测情况及人感染H9N2禽流感病例特征,指导H9N2禽流感防控工作.方法 2014-2019年采集监测镇区内的禽类批发市场、活禽销售市场和生鲜禽销售市场3类交易场所的外环境标本进行禽流感病毒核酸检测,并对人感染H9N2禽流感报告病例进行流行病学分析.结果 共采集和检测外环境标本9 015份,检出H9亚型禽流感病毒阳性标本2 171份,阳性率为24.08％.阳性率自2015年起呈逐年上升的趋势(趋势x2=785.258,P＜0.001),不同季节均有一定程度流行.监测镇区均有阳性检出,总体阳性率较高的是五桂山、东升、沙溪、东凤、神湾和小榄等镇区.由不具备独立集中屠宰场供货的生鲜禽销售市场的阳性率最高(36.84％,231/627).鸡与其它禽类混养阳性率增高(28.91％,920/3 182).采样部位为冰箱等生鲜禽存放器的阳性率最高(32.71％0,105/321),其次是笼具(31.27％,491/1 570).期间报告3例人感染H9N2禽流感病例,均为常规监测所发现.病例发病时间在冬季或夏季,均有活禽暴露史.结论 中山市涉禽环境中普遍存在H9亚型禽流感病毒,不同季节均有流行风险.生鲜上市设置独立屠宰区,禽类单独存养,注重冰箱、鸡笼等的消毒清洁,有助于提高防控效果.强化监测有利于及早发现感染病例.

摘要： 为了解浦东新区活禽交易市场中H9亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)的流行情况及鸡群的免疫情况,于2019年11月和2020年6月对浦东新区的18个活禽交易市场进行了2次采样,共采集了360份血样和360份口咽泄殖腔棉拭子及180份环境棉拭子,分别用血凝抑制实验(Hemagglution inhibition test,HI)和荧光逆转录PCR(Reverse transcription PCR,RT-PCR)实验检测H9 AIV抗体水平和H9 AIV感染情况.结果显示:2次抽检中,被检鸡只的H9 AIV抗体合格率分别为65.00％ 和78.89％,抗体合格率低于70％ 的市场数分别为3个和1个;被检口咽泄殖腔棉拭子的H9 AIV阳性率分别为15.56％ 和10.00％;被检环境棉拭子的H9 AIV阳性率分别为10.00％ 和4.44％.本次调查结果表明,浦东新区活禽交易市场存在较严重的H9 AIV污染情况,需采取有效的防控措施,切实降低市场的污染水平.

摘要： 为准确掌握河南省H9亚型禽流感病毒(AIV)流行情况,本研究于2019年12月在河南全省108个养殖场、7个屠宰场、12个活禽市场和3个野鸟栖息地共采集3887份拭子样品,采用荧光定量PCR方法检测H9亚型AIV,并统计H9亚型AIV的阳性率.结果 显示,H9亚型AIV的阳性率为2.75％ (107/3887),其中,豫南、豫北、豫西、豫东和豫中地区样品中H9亚型AIV的阳性率分别为0(0/706)、6.04％ (80/1325)、0.49％ (3/607)、2.81％(16/570)和1.18％ (8/679),其中豫北地区样品阳性率最高;种禽场、商品代养殖场、屠宰场、活禽市场和野鸟栖息地样品中H9亚型AIV的阳性率分别为0(0/803)、1.37％(34/2477)、17.93％(33/184)、10.05％ (40/398)和0(0/25),其中屠宰场样品阳性率最高;鸡样品、水禽样品和野鸟样品中H9亚型AIV的阳性率分别为3.03％(107/3532)、0(0/330)和0(0/25),其中鸡样品阳性率最高;喉头及泄殖腔拭子样品、环境拭子样品和粪便样品中H9亚型AIV的阳性率分别为2.58％ (99/3830)、15％(8/32)和0(0/25),其中环境样品阳性率最高.结果 表明,河南省H9亚型AIV具有一定的区域分布特征,豫北地区H9亚型AIV阳性率较高,主要来源于鸡,同时活禽市场是H9亚型AI防控的重要区域.本研究首次系统调查了河南省H9亚型AIV的流行情况,为河南及我国中部H9亚型AI的防控提供科学依据.

摘要： 鸭肠炎病毒(Duck enteritis virus,DEV),又名鸭瘟病毒,可感染鸭、鹅及其它雁形目禽类,引起血管损伤、组织出血、消化道粘膜损伤、淋巴器官受损和实质性器官退行性病变的一种急性、接触性、败血性传染病——鸭病毒性肠炎或称鸭瘟.疱疹病毒基因组很大,可表达外源基因作为活载体疫苗,如表达鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒(HVT)活疫苗,免疫效果良好.DEV基因组为158-162kb,宿主范围小,且具有良好的免疫原性,免疫成年鸭后第3天即可产生一定的免疫力,第4天就能抵抗强毒攻击(内部资料),因此是很有前景的水禽疫苗病毒载体.本研究以DEV细胞适应株DNA为模板，利用PCR扩增出UL2基因上下游序列并克隆入pMD-18T载体；以UL2基因作为外源基因插入靶点及同源重组臂，将CMV启动子控制的含有GFPPgpt基因表达盒克隆入DEV UL2基因中，构建含GFP基因的转移质粒载体pT-UL2-GFP-gpt;用脂质体将其与DEV细胞适应株共转染鸡胚成纤维细胞，经过8轮蚀斑筛选，获以鸭源的H9N2亚型禽流感病毒HA基因替换GFP-gpt基因表达盒，构建含有HA基因表达盒的转移载体pT-UL2-HA，将其与重组病毒rDEV-△UL2-GFP共转染CEF细胞，进行反向蚀斑筛选，获得表达HA基因的重组鸭肠炎病毒rDEV-△UL2-HA。通过测序、间接免疫荧光方法（IFA）证明rDEV-△UL2-HA在CEF上连续传代20代，HA基因在重组病毒中稳定表达。动物试验结果表明，以1000 TCID50的rDEV-△UL2-HA免疫4周龄SPF鸭，可以诱导产生与DEV亲本毒相当的中和抗体效价，并能够抵抗致死性DEV的攻击；在免疫后28天，H9 HI抗体为1:512，能完全阻止免疫鸭排毒。以1000 TCIDso免疫3周龄SPF鸡，免瘦后14天，HI抗体效价为1:128，免疫后21天，HI抗体效价达1:1024。综上所述，本研究构建的DEV-UL2-HA对鸡和鸭均有良好的免疫原性，是一株理想的H9亚型禽流感-鸭病毒性肠炎重组活载体疫苗候选毒株。

摘要： 鸭肠炎病毒(Duck enteritis virus,DEV),又名鸭瘟病毒,可感染鸭、鹅及其它雁形目禽类,引起血管损伤、组织出血、消化道粘膜损伤、淋巴器官受损和实质性器官退行性病变的一种急性、接触性、败血性传染病——鸭病毒性肠炎或称鸭瘟.疱疹病毒基因组很大,可表达外源基因作为活载体疫苗,如表达鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒(HVT)活疫苗,免疫效果良好.DEV基因组为158-162kb,宿主范围小,且具有良好的免疫原性,免疫成年鸭后第3天即可产生一定的免疫力,第4天就能抵抗强毒攻击(内部资料),因此是很有前景的水禽疫苗病毒载体.本研究以DEV细胞适应株DNA为模板，利用PCR扩增出UL2基因上下游序列并克隆入pMD-18T载体；以UL2基因作为外源基因插入靶点及同源重组臂，将CMV启动子控制的含有GFPPgpt基因表达盒克隆入DEV UL2基因中，构建含GFP基因的转移质粒载体pT-UL2-GFP-gpt;用脂质体将其与DEV细胞适应株共转染鸡胚成纤维细胞，经过8轮蚀斑筛选，获以鸭源的H9N2亚型禽流感病毒HA基因替换GFP-gpt基因表达盒，构建含有HA基因表达盒的转移载体pT-UL2-HA，将其与重组病毒rDEV-△UL2-GFP共转染CEF细胞，进行反向蚀斑筛选，获得表达HA基因的重组鸭肠炎病毒rDEV-△UL2-HA。通过测序、间接免疫荧光方法（IFA）证明rDEV-△UL2-HA在CEF上连续传代20代，HA基因在重组病毒中稳定表达。动物试验结果表明，以1000 TCID50的rDEV-△UL2-HA免疫4周龄SPF鸭，可以诱导产生与DEV亲本毒相当的中和抗体效价，并能够抵抗致死性DEV的攻击；在免疫后28天，H9 HI抗体为1:512，能完全阻止免疫鸭排毒。以1000 TCIDso免疫3周龄SPF鸡，免瘦后14天，HI抗体效价为1:128，免疫后21天，HI抗体效价达1:1024。综上所述，本研究构建的DEV-UL2-HA对鸡和鸭均有良好的免疫原性，是一株理想的H9亚型禽流感-鸭病毒性肠炎重组活载体疫苗候选毒株。

摘要： 鸭肠炎病毒(Duck enteritis virus,DEV),又名鸭瘟病毒,可感染鸭、鹅及其它雁形目禽类,引起血管损伤、组织出血、消化道粘膜损伤、淋巴器官受损和实质性器官退行性病变的一种急性、接触性、败血性传染病——鸭病毒性肠炎或称鸭瘟.疱疹病毒基因组很大,可表达外源基因作为活载体疫苗,如表达鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒(HVT)活疫苗,免疫效果良好.DEV基因组为158-162kb,宿主范围小,且具有良好的免疫原性,免疫成年鸭后第3天即可产生一定的免疫力,第4天就能抵抗强毒攻击(内部资料),因此是很有前景的水禽疫苗病毒载体.本研究以DEV细胞适应株DNA为模板，利用PCR扩增出UL2基因上下游序列并克隆入pMD-18T载体；以UL2基因作为外源基因插入靶点及同源重组臂，将CMV启动子控制的含有GFPPgpt基因表达盒克隆入DEV UL2基因中，构建含GFP基因的转移质粒载体pT-UL2-GFP-gpt;用脂质体将其与DEV细胞适应株共转染鸡胚成纤维细胞，经过8轮蚀斑筛选，获以鸭源的H9N2亚型禽流感病毒HA基因替换GFP-gpt基因表达盒，构建含有HA基因表达盒的转移载体pT-UL2-HA，将其与重组病毒rDEV-△UL2-GFP共转染CEF细胞，进行反向蚀斑筛选，获得表达HA基因的重组鸭肠炎病毒rDEV-△UL2-HA。通过测序、间接免疫荧光方法（IFA）证明rDEV-△UL2-HA在CEF上连续传代20代，HA基因在重组病毒中稳定表达。动物试验结果表明，以1000 TCID50的rDEV-△UL2-HA免疫4周龄SPF鸭，可以诱导产生与DEV亲本毒相当的中和抗体效价，并能够抵抗致死性DEV的攻击；在免疫后28天，H9 HI抗体为1:512，能完全阻止免疫鸭排毒。以1000 TCIDso免疫3周龄SPF鸡，免瘦后14天，HI抗体效价为1:128，免疫后21天，HI抗体效价达1:1024。综上所述，本研究构建的DEV-UL2-HA对鸡和鸭均有良好的免疫原性，是一株理想的H9亚型禽流感-鸭病毒性肠炎重组活载体疫苗候选毒株。

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摘要： 鸭肠炎病毒(Duck enteritis virus,DEV),又名鸭瘟病毒,可感染鸭、鹅及其它雁形目禽类,引起血管损伤、组织出血、消化道粘膜损伤、淋巴器官受损和实质性器官退行性病变的一种急性、接触性、败血性传染病——鸭病毒性肠炎或称鸭瘟.疱疹病毒基因组很大,可表达外源基因作为活载体疫苗,如表达鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒(HVT)活疫苗,免疫效果良好.DEV基因组为158-162kb,宿主范围小,且具有良好的免疫原性,免疫成年鸭后第3天即可产生一定的免疫力,第4天就能抵抗强毒攻击(内部资料),因此是很有前景的水禽疫苗病毒载体.本研究以DEV细胞适应株DNA为模板，利用PCR扩增出UL2基因上下游序列并克隆入pMD-18T载体；以UL2基因作为外源基因插入靶点及同源重组臂，将CMV启动子控制的含有GFPPgpt基因表达盒克隆入DEV UL2基因中，构建含GFP基因的转移质粒载体pT-UL2-GFP-gpt;用脂质体将其与DEV细胞适应株共转染鸡胚成纤维细胞，经过8轮蚀斑筛选，获以鸭源的H9N2亚型禽流感病毒HA基因替换GFP-gpt基因表达盒，构建含有HA基因表达盒的转移载体pT-UL2-HA，将其与重组病毒rDEV-△UL2-GFP共转染CEF细胞，进行反向蚀斑筛选，获得表达HA基因的重组鸭肠炎病毒rDEV-△UL2-HA。通过测序、间接免疫荧光方法（IFA）证明rDEV-△UL2-HA在CEF上连续传代20代，HA基因在重组病毒中稳定表达。动物试验结果表明，以1000 TCID50的rDEV-△UL2-HA免疫4周龄SPF鸭，可以诱导产生与DEV亲本毒相当的中和抗体效价，并能够抵抗致死性DEV的攻击；在免疫后28天，H9 HI抗体为1:512，能完全阻止免疫鸭排毒。以1000 TCIDso免疫3周龄SPF鸡，免瘦后14天，HI抗体效价为1:128，免疫后21天，HI抗体效价达1:1024。综上所述，本研究构建的DEV-UL2-HA对鸡和鸭均有良好的免疫原性，是一株理想的H9亚型禽流感-鸭病毒性肠炎重组活载体疫苗候选毒株。

摘要： 目前制备H9亚型禽流感疫苗大多是采用鸡胚接种的方法进行病毒培养和扩增,这种传统的方法存在诸多缺陷,如劳动强度大,鸡胚用量大,工艺废弃物处理难度大,疫苗质量难以控制,而采用细胞培养技术可有效克服这些缺点,因而成为目前禽流感疫苗研制工作的主要方向之一.本文将从H9亚型禽流感病毒及其危害、MDCK细胞制备H9亚型禽流感疫苗现状以及利用生物反应器规模化培养细胞制备禽流感疫苗的前景和展望等方面做一一综述.

摘要： 目前制备H9亚型禽流感疫苗大多是采用鸡胚接种的方法进行病毒培养和扩增,这种传统的方法存在诸多缺陷,如劳动强度大,鸡胚用量大,工艺废弃物处理难度大,疫苗质量难以控制,而采用细胞培养技术可有效克服这些缺点,因而成为目前禽流感疫苗研制工作的主要方向之一.本文将从H9亚型禽流感病毒及其危害、MDCK细胞制备H9亚型禽流感疫苗现状以及利用生物反应器规模化培养细胞制备禽流感疫苗的前景和展望等方面做一一综述.

摘要： 目前制备H9亚型禽流感疫苗大多是采用鸡胚接种的方法进行病毒培养和扩增,这种传统的方法存在诸多缺陷,如劳动强度大,鸡胚用量大,工艺废弃物处理难度大,疫苗质量难以控制,而采用细胞培养技术可有效克服这些缺点,因而成为目前禽流感疫苗研制工作的主要方向之一.本文将从H9亚型禽流感病毒及其危害、MDCK细胞制备H9亚型禽流感疫苗现状以及利用生物反应器规模化培养细胞制备禽流感疫苗的前景和展望等方面做一一综述.

摘要： 目前制备H9亚型禽流感疫苗大多是采用鸡胚接种的方法进行病毒培养和扩增,这种传统的方法存在诸多缺陷,如劳动强度大,鸡胚用量大,工艺废弃物处理难度大,疫苗质量难以控制,而采用细胞培养技术可有效克服这些缺点,因而成为目前禽流感疫苗研制工作的主要方向之一.本文将从H9亚型禽流感病毒及其危害、MDCK细胞制备H9亚型禽流感疫苗现状以及利用生物反应器规模化培养细胞制备禽流感疫苗的前景和展望等方面做一一综述.

摘要： 本发明提供一种同时检测和区分H5和H7N9亚型高致病性禽流感病毒以及H9亚型禽流感病毒的快速检测方法，通过分析近年来分离到的H5亚型高致病性禽流感病毒、H7N9亚型高致病性禽流感病毒、H9亚型禽流感病毒HA基因核苷酸序列，在其保守区设计了引物和探针，建立了针对H5和H7N9亚型高致病性禽流感病毒以及H9亚型禽流感病毒实时荧光定量RT‑PCR核酸快速检测方法。本发明所提供的H5和H7N9亚型高致病性禽流感病毒以及H9亚型禽流感病毒实时荧光RT‑PCR方法具有灵敏度高、检测时间短，不需要电泳等开放环节，只需一台荧光PCR仪即可在一个密闭反应管中完成三种亚型禽流感病毒的检测，且在检测过程中可实时查看反应曲线，对结果作出快速判断。

摘要： 本公开涉及一种用于检测禽流感病毒和/或禽流感病毒耐药性的核酸试剂、试剂盒、系统及方法，所述核酸试剂包括分别彼此独立存放或互相任意混合存放的SEQ ID NO.1‑8所示的引物和SEQ ID NO.11‑15所示的探针。本公开通过以上所述的引物和探针建立了检测禽流感病毒及其携带的常见耐药基因的核酸试剂、试剂盒、系统及方法，能够实现快速、全面、敏感、特异、自动的检测结果判定，显著提高了对禽流感病毒及其耐药性进行检测的敏感性、特异性和简便性。

摘要： 本发明公开了一种适应在无血清全悬浮培养的MDCK细胞系生长的禽流感病毒的制备方法及通过该方法获得的禽流感病毒，包括以下步骤：1)制备待接种的MDCK细胞；2)准备毒种：准备鸡胚源禽流感病毒；3)F1代病毒驯化：4)F2代病毒驯化：取F1代中禽流感病毒血凝效价最高的时间点所留取的上清液样本，重复步骤3)；5)F3代病毒驯化：培养F3代病毒的温度为35°C；6)F4～F10代病毒驯化：重复步骤5)，得到驯化完成的禽流感病毒；本发明的驯化方法将禽流感病毒从使用鸡胚培养直接驯化到完全适应在无血清悬浮培养的MDCK细胞上高效繁殖，驯化效率高，禽流感病毒可在MDCK细胞中高效感染复制，病毒特性稳定。

摘要： 一种禽流感病毒及用于检测、预防禽流感病毒的试剂盒和疫苗。本发明属于生物技术领域，涉及分离的禽流感病毒新毒株，本发明公开了三种H9N2禽流感病毒。本发明还公开了三种检测H9N2禽流感病毒的试剂盒，以及三种用于预防的H9N2禽流感病毒的疫苗，以及抗H9N2禽流感病毒的抗体。通过本发明的试剂盒，可以迅速的检测或者排除是否是由本发明的三种基因型的H9N2禽流感病毒所致的禽流感，从而尽快的控制禽流感疫情。同时，接种本发明的疫苗，可以预防本发明的三种基因型的H9N2禽流感病毒的感染。并且本发明还可以为禽流感病毒监测系统提供生物信息。

摘要： 一种抗禽流感病毒剂，含有作为活性成分的组分，所述组分使用主要由水和亲水性有机溶剂的至少一种的组成的萃取溶剂从番石榴中萃取的番石榴提取物经过高效液相色谱(HPLC)在特定条件下分离而获得。所述特定条件包括使用ODS柱，所述番石榴提取物施加至ODS柱后的15分钟内以甲醇的浓度为20％的水-甲醇混合物作为流动相洗脱，随后的15到30分钟期间使用甲醇浓度为40％的水-甲醇混合物作为流动相。供选地，特定条件还包括所述番石榴提取物施加至ODS柱后的第30到45分钟时间内使用甲醇浓度为60％的水-甲醇混合物作为流动相。包含在抗禽流感病毒剂中的组分在番石榴提取物施加到ODS柱后第20分钟内或在随后的第20到35分钟期间内从该柱洗脱。

摘要： 本发明属于生物技术领域，提供了一种检测H7亚型禽流感病毒的引物对及其引用、检测H7亚型禽流感病毒的方法。本发明提供的引物对包括序列为SEQ ID NO.1所示的上游引物和序列为SEQ ID NO.2所示的下游引物，能够快速检测H7亚型禽流感病毒，可以用于H7亚型禽流感病毒的科学研究，也可以用于动物或人的临床诊断检测。

摘要： 本发明提供一种同时检测和区分H5和H7N9亚型高致病性禽流感病毒以及H9亚型禽流感病毒的快速检测方法，通过分析近年来分离到的H5亚型高致病性禽流感病毒、H7N9亚型高致病性禽流感病毒、H9亚型禽流感病毒HA基因核苷酸序列，在其保守区设计了引物和探针，建立了针对H5和H7N9亚型高致病性禽流感病毒以及H9亚型禽流感病毒实时荧光定量RT‑PCR核酸快速检测方法。本发明所提供的H5和H7N9亚型高致病性禽流感病毒以及H9亚型禽流感病毒实时荧光RT‑PCR方法具有灵敏度高、检测时间短，不需要电泳等开放环节，只需一台荧光PCR仪即可在一个密闭反应管中完成三种亚型禽流感病毒的检测，且在检测过程中可实时查看反应曲线，对结果作出快速判断。

摘要： 本发明公开了用于鉴定或辅助鉴定H9亚型禽流感病毒和/或H6亚型禽流感病毒的引物对组。利用本发明所提供的用于鉴定或辅助鉴定H9亚型禽流感病毒和/或H6亚型禽流感病毒的引物对组建立的二重RT‑PCR，可准确鉴定H9亚型禽流感病毒和/或H6亚型禽流感病毒，且特异性好，灵敏度高，对H9亚型禽流感病毒和H6亚型AIV的最小检出限均达到5×10

摘要： 本公开涉及一种用于检测禽流感病毒和/或禽流感病毒耐药性的核酸试剂、试剂盒、系统及方法，所述核酸试剂包括分别彼此独立存放或互相任意混合存放的SEQ ID NO.1‑8所示的引物和SEQ ID NO.11‑15所示的探针。本公开通过以上所述的引物和探针建立了检测禽流感病毒及其携带的常见耐药基因的核酸试剂、试剂盒、系统及方法，能够实现快速、全面、敏感、特异、自动的检测结果判定，显著提高了对禽流感病毒及其耐药性进行检测的敏感性、特异性和简便性。

摘要： 本发明公开了一种适应在无血清全悬浮培养的MDCK细胞系生长的禽流感病毒的制备方法及通过该方法获得的禽流感病毒，包括以下步骤：1)制备待接种的MDCK细胞；2)准备毒种：准备鸡胚源禽流感病毒；3)F1代病毒驯化：4)F2代病毒驯化：取F1代中禽流感病毒血凝效价最高的时间点所留取的上清液样本，重复步骤3)；5)F3代病毒驯化：培养F3代病毒的温度为35°C；6)F4～F10代病毒驯化：重复步骤5)，得到驯化完成的禽流感病毒；本发明的驯化方法将禽流感病毒从使用鸡胚培养直接驯化到完全适应在无血清悬浮培养的MDCK细胞上高效繁殖，驯化效率高，禽流感病毒可在MDCK细胞中高效感染复制，病毒特性稳定。