体外分化

摘要： 目的:探讨新型人参皂苷衍生物AD-1对体外分化CD4~+T细胞亚群的影响及对DSS诱导的实验性结肠炎小鼠CD4~+T细胞亚群的调控作用。方法:采用磁珠阴性选择法获得正常小鼠幼稚CD4~+T细胞,定向分化为Th1、Th2、Th17细胞、Treg,流式细胞术检测AD-1对其分化的影响。3%DSS三次循环法建立小鼠实验性结肠炎模型,AD-1药物干预后,流式细胞术、HE染色检测结肠、脾脏、肠系膜淋巴结中Th1、Th2、Th17细胞、Treg所分泌的细胞因子和特异性转录因子。结果:细胞活化后,早期标志物CD69无显著变化;AD-1下调Th1和Th17细胞分泌的细胞因子IFN-γ和IL-17A表达,上调Th2细胞分泌的细胞因子IL-4和Treg转录因子Foxp3及表面标志物CD25表达。AD-1可通过下调脾脏和肠系膜淋巴结中Th1和Th17细胞表达及上调Th2和Treg表达改善DSS诱导的小鼠实验性结肠炎。结论:AD-1对CD4~+T细胞活化无影响,但可抑制Th1和Th17细胞分化,促进Th2细胞和Treg分化,同时通过调节CD4~+T细胞亚群改善DSS诱导的小鼠实验性结肠炎。

摘要： 目的·探讨葡萄糖对小鼠CD4+T细胞分化的影响.方法·小鼠初始CD4+T细胞在调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)、Th1、Th17和Th2分化条件下,经不同浓度的葡萄糖处理5 d后,利用流式细胞术检测细胞分化的比例,实时荧光定量PCR检测相关细胞因子和转录因子的基因表达水平.结果·与无糖组相比,在Treg和Th2分化的条件下,随着葡萄糖浓度升高,Treg和Th2比例增高,其关键转录因子Foxp3(forkhead box P3)、Gata3(GATA binding protein 3)与主要细胞因子转化生长因子-β、白介素-4(interleukin-4,IL-4)和IL-13的基因水平增加;而随着葡萄糖浓度升高,Th1和Th17细胞比例则降低,其相关转录因子Tbx21(T-box transcription factor 21)和RORC(RAR related orphan receptor C),以及细胞因子干扰素-γ、IL-17A、IL-17F、IL-22和细胞因子受体IL-23R的基因表达下降.结论·葡萄糖能促进Treg和Th2体外分化,而抑制Th1与Th17分化.

摘要： 目的·探讨葡萄糖对小鼠CD4^+T细胞分化的影响。方法·小鼠初始CD4^+T细胞在调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)、Th1、Th17和Th2分化条件下,经不同浓度的葡萄糖处理5 d后,利用流式细胞术检测细胞分化的比例,实时荧光定量PCR检测相关细胞因子和转录因子的基因表达水平。结果·与无糖组相比,在Treg和Th2分化的条件下,随着葡萄糖浓度升高,Treg和Th2比例增高,其关键转录因子Foxp3(forkhead box P3)、Gata3(GATA binding protein 3)与主要细胞因子转化生长因子-β、白介素-4(interleukin-4,IL-4)和IL-13的基因水平增加;而随着葡萄糖浓度升高,Th1和Th17细胞比例则降低,其相关转录因子Tbx21(T-box transcription factor 21)和RORC(RAR related orphan receptor C),以及细胞因子干扰素-γ、IL-17A、IL-17F、IL-22和细胞因子受体IL-23R的基因表达下降。结论·葡萄糖能促进Treg和Th2体外分化,而抑制Th1与Th17分化。

摘要： 目的:研究人鼻咽癌细胞株中肿瘤干细胞分离鉴定方法及对肿瘤多药耐药机制.方法:取鼻咽癌细胞株(SUNE),进行细胞的培养、传代及鉴定,采用免疫荧光细胞化学技术联合流式细胞仪检测SUNE中CD133及CD13+细胞体外分化能力.利用免疫磁珠分选技术完成CD133+肿瘤细胞纯化,测定CD133+细胞体外增殖能力,将其与未分选及CD133-细胞进行比较.取顺铂、紫杉醇化疗药物,采用CCK-8法测定CD133+细胞耐药性.取10只4周龄ICR小鼠,皮下注射人鼻咽癌细胞株和普通细胞株,分析耐药性.结果:分离培养的SUNE在含有血清的培养基中呈贴壁生长,并且生长活跃,培养2～3 d后倒置显微镜下显示细胞呈梭形、扁平状,光泽度良好,培养2周左右细胞融合瓶底80.00％;流式细胞仪检测结果显示:约0.35％细胞表面膜存在抗原CD133.免疫细胞化学显示:SUNE细胞贴壁爬行,部分细胞能与SUNE中的CD133-相互结合,荧光显微镜下显示呈现橙红色,球状;向经免疫磁珠分选后的细胞中加入培养基,细胞呈单细胞,球形,悬浮生长.随着培养时间的不断延长,细胞开始出现团状生长,体积增加,细胞数量增多,培养24h后细胞开始贴壁生长,培养7d后呈串状生长;CD133+肿瘤细胞、CD133-肿瘤细胞及未分选细胞随着时间的延长细胞均出现增长,且CD133+肿瘤细胞增殖能力显著高于CD133-肿瘤细胞及未分选细胞(P＜0.05).10只小鼠均可见瘤体形成,种植人鼻咽癌细胞株组的瘤体体积显著大于普通细胞株组(P＜0.05).结论:鼻咽癌干细胞中CD133+对化疗药物的耐药性强.

摘要： 目的:探索人源诱导多能干细胞(human induced pluripotent stem cells,hiPSCs)在体外二维条件下诱导分化生成肝细胞的条件,并初步探讨三维条件下hiPSCs的肝细胞诱导分化.方法:通过测定4种诱导培养基中白蛋白和甲胎蛋白含量,筛选诱导分化的最佳方案.用筛选出的最优培养基对hiPSCs进行二维培养,采用免疫荧光法、蛋白质印迹法检测诱导后的细胞中肝脏标志蛋白的表达,采用酶联免疫吸附法检测肝细胞功能相关蛋白的含量;对hiPSCs进行三维培养,用酶联免疫吸附法对比二维与三维条件下肝细胞功能,并用HE染色法观察三维条件下形成细胞的形态.结果:二维条件下诱导分化23 d,倒置显微镜下细胞呈典型的肝细胞形态;免疫荧光法、蛋白质印迹法检测到诱导分化后的细胞阳性表达肝脏特征蛋白(甲胎蛋白、白蛋白、角蛋白CK8、角蛋白CK18、SOX17),且与胚胎干细胞来源肝细胞(hESCs-HEPs)内含量相近;酶联免疫吸附法测定结果显示,诱导形成的肝细胞具有正常肝细胞功能,表明hiPSCs已分化为肝细胞;HE染色结果显示三维条件下诱导形成的细胞具有明显双核,呈现典型肝细胞形态;酶联免疫法测定结果显示,三维条件下,诱导形成的肝细胞功能没有受到损伤,仍具有正常肝细胞功能.结论:在二维与三维培养体系下,采用最佳诱导分化方案,hiPSCs能够被诱导分化为肝细胞,且表达肝脏相关蛋白,并具有正常肝细胞功能.%Objective:Exploring the optimal conditions of human induced pluripotent stem cells ( hiP-SCs) committed differentiation into hepatocytes under two-dimensional condition in vitro, and differentia-tion under three-dimensional condition .Methods: The hepatocyte-induced differentiation medium was screened and optimized , and the optimal scheme was obtained by measuring the expression of albumin and AFP under four different differentiation medium .The hiPSCs were cultured under two-dimensional condition .The expressions of liver marker protein were detected by immunofluorescence and Western -blot-ting.ELISA was used to investigate the function of hepatocytes .The hiPSCs were cultured under three-di-mensional condition .Cell morphological changes were observed by HE staining , and compared the func-tion of hepatocytes by ELISA under two and three-dimensional condition .Results:After 23 days of dif-ferentiation under two dimensional condition , the cells observed in inverted microscope showed typical hepatocyte-like morphology, and positive expression of AFP, albumin, CK8, CK18 and SOX17 by im-munofluorescence and Western-blotting , which was similar to that of embryonic stem-derived hepatocytes ( hESCs-HEPs) .The result of ELISA showed that cells differentiated from hiPSCs had normal function ,indicating that hiPSCs had differentiated into hepatocytes .The results of HE staining showed that cells differentiated from hiPSCs had obvious dual nuclei under three-dimensional condition , and it was the morphology of typical hepatocyte .The results of ELISA showed that the function of cells were not abnor-mal .Conclusion:In the two and three-dimensional conditions ,hiPSCs can be induced to differentiate in-to hepatocytes, expressing liver-related proteins, and had normal function .

摘要： 为深入研究滤泡辅助性T细胞(Tfh)的分化调控机制,比较并建立了人Tfh细胞体外诱导分化的模型:分别采用外周血淋巴细胞直接分离以及磁珠分选后的细胞诱导分化,比较不同来源Na6ve T细胞的分化结果,同时探究了TCR刺激信号anti-h CD3e的固相包被与可溶性刺激对分化效率的影响,并考察极化因子IL-12不同浓度诱导Tfh细胞分化效果,利用流式细胞术检测Tfh分化效率(CD4+CXCR5+ICOS+PD-1+),结合ELISA法检测Tfh标志细胞因子IL-21的表达水平,最终确定了5μg/m L anti-h CD3e抗体预包被4°C过夜,磁珠分选后的T细胞在IL-12终浓度为1 ng/m L时与其他极化因子诱导分化6 d后,分化水平可达20.4%,初步建立了人Tfh细胞体外诱导分化最佳条件,为探讨人Tfh细胞分化机制及相关的靶向Tfh的分子药效、毒性与细胞水平的代谢实验提供了有效的检测平台。

摘要： 神通广大的孙悟空在紧要关头常常拔一撮猴毛，吹口仙气，就能变出一群活灵活现的小孙悟空，《西游记》里的这个场景在未来或许将不再是神话。青岛农业大学生殖科学研究院教授沈伟课题组近日在实验室成功地将人的皮肤来源干细胞体外分化，得到了类单倍体生殖细胞样细胞，标志着皮肤来源干细胞在体外培养条件下，具有向生殖细胞分化的潜能。

摘要： 肌源性干细胞(muscle-derived stem cells,MDSC)是具有多胚层分化潜能和自我更新能力的成体干细胞群,在造血微环境的诱导下可分化为造血细胞,其造血能力是骨髓造血干细胞的10-14倍,有望成为替代造血干细胞治疗某些骨髓疾患或肿瘤的备选干细胞之一,但在造血微环境下MDSC向造血细胞转化的机制还不十分清晰.MDSC与造血干细胞在生物学特性、蛋白表达和细胞增殖方面有明显差别.此外,MDSC中存在不同分化潜能的干细胞群,但其中具有造血分化潜能较少,而且与造血干细胞起源是否相同还有待进一步研究.本文主要就MDSC中有造血分化潜能的细胞群的分子表型、MDSC与造血干细胞区别、MDSC的起源及其应用前景做一综述.

摘要： 目的：检测人脐带血造血干细胞（HSCs）体外分化为自然杀伤（NK）细胞的效率及功能。方法从人脐带血中分离CD34+HSCs，接种于含20μg/L FMS样酪氨酸激酶3配体（Flt3L）、干细胞生长因子（SCF）、白细胞介素（IL）-7、IL-15及IL-21的SCGM培养基中，定向诱导CD34+HSCs分化为NK细胞。观察细胞生长状态，在分化的第7、14、21及28天，采用流式细胞术检测各阶段CD56、NKG2D、NKp46、CD3、CD19及CD34等细胞免疫表型的表达变化；分化的第21、28天，以分化得到细胞为效应细胞，K562细胞作为靶细胞，设置8∶1、4∶1、2∶1和1∶14组效靶细胞比，分别采用乳酸脱氢酶（LDH）细胞毒性检测法和7AAD/CFSE标记法，检测分化得到的细胞杀伤功能。结果脐带血来源的CD34+HSCs在体外适宜的条件下可大量增殖；整个分化进程的不同阶段中，CD3和CD19表达量差异无统计学意义，CD56、NKG2D及NKp46的表达量逐渐增加，最高达（72.57±1.60）%、（32.83±1.29）%和（29.53±2.40）%，CD34的表达量逐渐降低，最低为（12.13±2.01）%。LDH毒性检测法和7AAD/CFSE标记法测得最大杀伤效率可达（49.91±2.76）%和（40.87±1.12）%，8∶1、4∶1、2∶1和1∶1组NK细胞杀伤能力均依次降低（P0.05). The expressions of CD56, NKG2D and NKp46 were significantly different (P<0.05), and the ultimate expression amount was (72.57±1.60)%, (32.83±1.29)%and (29.53±2.40)%. The expression of CD34 decreased gradually, and the lowest was (12.13 ± 2.01)%. The maximum killing activity detected by LDH cell toxicity assay and 7AAD/CFSE labeling method reached(49.91±2.76)%and (40.87±1.12)%.The killing activity of NK cells was decreased in the order of 8∶1, 4∶1, 2∶1 and 1∶1 groups (P<0.05). There was no significant difference in the killing activity between NK cells of 28 d and 21 d. Conclusion Human umbilical cord hematopoietic stem cells can differentiate into NK cells un⁃ der appropriate conditions in vitro, and the NK cells induced from differentiation are with killing activity.

摘要： 本研究目的在于寻求更有效的成肌细胞体外增殖分化调控因子,解决成肌细胞易于分化、难于扩增的问题,以促进成肌细胞移植修复受损骨骼肌的临床应用,对于骨骼肌运动性损伤的治疗具有深远意义.同时,本研究创新性的在红景天苷对骨骼肌成肌细胞体外增殖分化的影响中展开研究,通过探讨不同浓度红景天苷对成肌细胞株C2C12体外分化的影响及可能机制,期望为进一步开展红景天苷在体内骨骼肌损伤中的作用及机制研究奠定基础.红景天苷能显著抑制骨骼肌成肌细胞体外成肌分化，并促进骨骼肌成肌细胞激活增殖，促进卫星细胞库储备增加；红景天苷对骨骼肌成肌细胞体外分化增殖的影响存在剂量依赖性，以50ug红景天苷干预能达到显著效果；红景天苷可能是通过促进TGF-β/Smad通路的关键介导子Smad2和Smad3（尤其是Smad3）磷酸化来发挥作用。

摘要： 目的:观察含右归丸鼠血清对人早孕流产胚胎脐带血管周围干细胞(FTM-PVCs)体外分化为类卵细胞的影响.rn 方法:制备含右归丸鼠血清;取人早孕流产胚胎脐带组织分离纯化后加入不同浓度鼠血清诱导分化,设空白组、空白鼠血清组和人卵泡液组为对照;检测诱导分化后培养液中相关激素和细胞因子浓度、检测细胞诱导分化后卵细胞相关特异性标志物及其mRNA表达.rn 结果:含右归丸鼠血清诱导人FTM-PVCs分化后,出现类卵细胞结构,表达GDF-9,减数分裂、卵细胞和透明带标志物mRNA表达升高(P＜0.05),培养液中E2、SCP2、MPF、F-T升高(P＜0.05).rn 结论:以人FTM-PVCs为研究平台,证实补肾中药能在体外诱导人FTM-PVCs向类卵细胞分化;含右归丸鼠血清能激活干细胞从休眠转为分化,说明温肾阳可唤醒肾精化气成形,机制可能与E2、SCP2、MPF、F-T相关.

摘要： 目的：利用维甲酸(RA)和二甲基亚砜(DMSO)诱导猪胚胎生殖细胞(EG 细胞)分化,证明猪胚胎生殖细胞能够在体外分化为多种组织细胞。rn 方法：利用悬浮培养和无饲养层培养,将猪胚胎生殖细胞分化为拟胚体,再将拟胚体分别培养于添加RA和DMSO诱导剂的培养基中培养,诱导胚胎干细胞分化。rn 结果：当悬浮培养时猪EG细胞形成拟胚体,再经RA和DMSO诱导分化为类桑椹胚体、类ES样细胞集落、神经样细胞和滋养层样细胞。rn 结论：猪胚胎生殖细胞能够在体外分化为多种组织细胞,证明猪EG细胞具有多能性。

摘要： 背景:补肾活血方能够调控骨质疏松症患者体内TGF-β1含量及相关骨代谢指标的表达,并且补肾活血方能较好地改善早期股骨头缺血性坏死患者的临床症状.rn 目的:探讨补肾活血方含药血清对激素性股骨头坏死大鼠股骨近端骨髓间充质细胞体外分化的影响.rn 方法:建立激素性股骨头坏死大鼠模型后,提取股骨近端骨髓单个核细胞,随机分为4组培养,空白血清对照组(A组)、补肾活血方含药血清低(B组)、中(C组)、高(D组)浓度组,分别加入重组入骨形态发生蛋白2(rhBMP2)诱导下的骨髓间充质细胞的培养体系,通过细胞形态学、MTT法、细胞内ALP含量及TGF-β1基因表达等指标,与普通血清组进行对比.rn 结果:补肾活血方含药血清能增强rhBMP2的活性,促进股骨近端骨髓体外成骨细胞的分化增殖(P＜0.01),促进分化中的胃髓间充质细胞表达TGF-β1mRNA(P＜0.01).rn 结论:补肾活血方通过增强rhBMP2活性及TGF-β1 mRNA的表达在骨坏死的修复中起关键作用.

摘要： 补肾活血方能够调控骨质疏松症患者体内TGF-β1含量及相关骨代谢指标的表达,并且补肾活血方能较好地改善早期股骨头缺血性坏死患者的临床症状. 目的:探讨补肾活血方含药血清对激素性股骨头坏死大鼠股骨近端骨髓间充质细胞体外分化的影响. 方法:建立激素性股骨头坏死大鼠模型后,提取股骨近端骨髓单个核细胞,随机分为4组培养,空白血清对照组(A组)、补肾活血方含药血清低(B组)、中(C组)、高(D组)浓度组,分别加入重组入骨形态发生蛋白2(rhBMP2)诱导下的骨髓间充质细胞的培养体系,通过细胞形态学、MTT法、细胞内ALP含量及TGF-β1基因表达等指标,与普通血清组进行对比. 结果:补肾活血方含药血清能增强rhBMP2的活性,促进股骨近端骨髓体外成骨细胞的分化增殖(p＜0.0l),促进分化中的骨髓间充质细胞表达TGF-β1mRNA(p＜0.01). 结论:补肾活血方通过增强rhBMP2活性及TGF-β1mRNA的表达在骨坏死的修复中起关键作用.

摘要： 肝实质细胞是肝脏内最主要的实质细胞,承担着肝脏合成、代谢、解毒等重要的功能.明确调控肝实质细胞成熟分化的分子机制对于研究肝实质细胞正常及疾病状态下功能形成及变化具有重要的意义.本文通过体外采用肝细胞生长因子,致瘤素M及地塞米松联合、顺序诱导的程序将人胚肝脏前体细胞(hFHPCs)分化成为具有成熟肝实质细胞功能样的细胞(HLCs).分别提取诱导前后两种细胞的mRNA,通过基因芯片技术检测肝实质细胞成熟分化过程中基因表达的变化,并利用DAVID软件分析差异表达基因与细胞结构、功能的相关关系.

摘要： 本文构建了含有胰腺十二指肠同源框-1（PDX-1）基因的真核表达载体—pEGFP-PDX-1,观察其在MSCs体外分化为胰岛素分泌细胞中的作用，为胰岛移植和胰岛发育机制研究奠定基础。

摘要： 在哺乳动物胚胎发生过程中滋养层细胞的分化是首次分化事件,对胎盘的形态和生理起着重要作用.利用含有两个小分子抑制剂的培养系统，成功地从牛体外受精囊胚获得牛滋养层干细胞样细胞.这些细胞可以在添加B27,N2,Glutamax和2inhibitors(PD0325901,CHIR99021)的DMEM/F12和NeuralBasal培养液的培养体系中连续增殖,形成圆顶形囊泡结构,碱性磷酸酶染色呈阳性,表达OCT4,SOX2,NANOG,CDX2,CK18,SSEA-1,SSEA-4,TRA-1-60和TRA-1-81等胚胎干细胞和滋养层干细胞标志因子,注射到NonScid小鼠体内可以形成包含外胚层,中胚层和成熟滋养层细胞的畸胎瘤.基因表达谱芯片分析显示,这些细胞表达滋养层干细胞和滋养层细胞标记基因如,ETS2,ELF5,SMARCA4,HSD17B1,CYP11A1,PPARG,Id2,GCM1,HAND1和THAP11.但是典型的多能基因如OCT4,SOX2和NANOG表现明显的下调,而滋养层干细胞标志基因CDX2等表现明显的上调.

摘要： 在哺乳动物胚胎发生过程中滋养层细胞的分化是首次分化事件,对胎盘的形态和生理起着重要作用.利用含有两个小分子抑制剂的培养系统，成功地从牛体外受精囊胚获得牛滋养层干细胞样细胞.这些细胞可以在添加B27,N2,Glutamax和2inhibitors(PD0325901,CHIR99021)的DMEM/F12和NeuralBasal培养液的培养体系中连续增殖,形成圆顶形囊泡结构,碱性磷酸酶染色呈阳性,表达OCT4,SOX2,NANOG,CDX2,CK18,SSEA-1,SSEA-4,TRA-1-60和TRA-1-81等胚胎干细胞和滋养层干细胞标志因子,注射到NonScid小鼠体内可以形成包含外胚层,中胚层和成熟滋养层细胞的畸胎瘤.基因表达谱芯片分析显示,这些细胞表达滋养层干细胞和滋养层细胞标记基因如,ETS2,ELF5,SMARCA4,HSD17B1,CYP11A1,PPARG,Id2,GCM1,HAND1和THAP11.但是典型的多能基因如OCT4,SOX2和NANOG表现明显的下调,而滋养层干细胞标志基因CDX2等表现明显的上调.

摘要： 在哺乳动物胚胎发生过程中滋养层细胞的分化是首次分化事件,对胎盘的形态和生理起着重要作用.利用含有两个小分子抑制剂的培养系统，成功地从牛体外受精囊胚获得牛滋养层干细胞样细胞.这些细胞可以在添加B27,N2,Glutamax和2inhibitors(PD0325901,CHIR99021)的DMEM/F12和NeuralBasal培养液的培养体系中连续增殖,形成圆顶形囊泡结构,碱性磷酸酶染色呈阳性,表达OCT4,SOX2,NANOG,CDX2,CK18,SSEA-1,SSEA-4,TRA-1-60和TRA-1-81等胚胎干细胞和滋养层干细胞标志因子,注射到NonScid小鼠体内可以形成包含外胚层,中胚层和成熟滋养层细胞的畸胎瘤.基因表达谱芯片分析显示,这些细胞表达滋养层干细胞和滋养层细胞标记基因如,ETS2,ELF5,SMARCA4,HSD17B1,CYP11A1,PPARG,Id2,GCM1,HAND1和THAP11.但是典型的多能基因如OCT4,SOX2和NANOG表现明显的下调,而滋养层干细胞标志基因CDX2等表现明显的上调.

摘要： 本发明涉及miR‑10b在体外促进间充质干细胞分化为成骨细胞和抑制其分化为成脂细胞的用途。具体地，本发明涉及体外诱导间充质干细胞分化为成骨细胞的方法，所述方法包括向间充质干细胞内转染miR‑10b的步骤，其中所述转染的miR‑10b促进间充质干细胞向成骨分化，抑制间充质干细胞向成脂分化。

摘要： 本发明涉及miR‑10b在体外促进间充质干细胞分化为成骨细胞和抑制其分化为成脂细胞的用途。具体地，本发明涉及体外诱导间充质干细胞分化为成骨细胞的方法，所述方法包括向间充质干细胞内转染miR‑10b的步骤，其中所述转染的miR‑10b促进间充质干细胞向成骨分化，抑制间充质干细胞向成脂分化。

摘要： 描述了用于通过施加射频电磁场处理干细胞或已分化的细胞的方法，其借助于电磁场发生器（10），电磁场发生器（10）包括电源（11）、至少一个适应于辐射具有小于100mW的功率的散射电磁场（13）的天线（12）、与所述发生器（10）相关联并且适应于调制其发射的调制器（14）、以及至少一个适应于导向被所述电磁场（13）诱导的射频电流并且在所述干细胞或已分化的细胞的紧邻处施用的对流器电极（15）。

摘要： 本发明涉及金纳米粒子在诱导间充质干细胞（MSC）体外定向分化方面的用途，利用纳米材料对间充质干细胞进行体外诱导分化，以不同粒径及浓度的金纳米粒子材料对间充质干细胞进行体外诱导定向分化为成骨细胞。

摘要： 本发明提供了间充质干细胞体外成骨诱导分化的支架材料及其应用，所述支架材料由石墨烯纳米颗粒、多孔隙丝素蛋白支架和陶瓷植入段组成，所述石墨烯纳米颗粒均匀负载于多孔隙丝素蛋白支架，所述陶瓷植入段与多孔隙丝素蛋白支架通过纤连蛋白连接。本发明通过优化的Hummers法合成石墨烯纳米颗粒，再通过天然粘土为粘合剂，以丝素蛋白为原料形成多孔隙丝素蛋白支架，通过纤连蛋白连接陶瓷植入段，组间充质干细胞体外成骨诱导分化的成支架材料，其特有的生物相容性、机械强度特征及生物降解特性，同时添加细胞所需的微量元素和营养活性物质，促进人骨髓间充质干细胞成骨分化，有助于干细胞成骨分化的成型。

摘要： 本发明涉及细胞诱导分化技术领域，尤其涉及一种DC体外诱导扩增体系及诱导造血干细胞分化为树突状细胞的方法。本发明DC体外诱导扩增体系包括I型干细胞培养基和II型干细胞培养基，I型干细胞培养基含有IL‑4、GM‑CSF和FLT‑3，II型干细胞培养基含有毛地黄黄酮、GM‑CSF和TNF‑α。I型干细胞培养基中GM‑CSF和IL‑4等因子的组合可在诱导分化的初期促进造血干细胞向淋巴系祖细胞分化；含有毛地黄黄酮的II型干细胞培养基可在淋巴系祖细胞向DC分化阶段进一步激活JAK‑STAT信号通道活性，提高造血干细胞向DC诱导分化的效率。本发明诱导造血干细胞分化为树突状细胞的方法使用DC体外诱导扩增体系，即含不同成分的培养基组合使得DC定向分化操作更简便安全和高效。

摘要： 本发明公开一种诱导MC3T3‑E1细胞体外成骨分化的缓释微囊及其制备，制备过程包括：Alg接枝PBA、Alg‑PBA‑ICA的制备、SiO2‑NH2微球的制备、Alg‑PBA‑ICA囊泡的制备和Alg‑PBA‑ICA/BMP‑2缓释微囊的制备；对于成骨细胞MC3T3‑E1，淫羊藿苷ICA以及骨形态发生蛋白BMP‑2都有诱导其进行成骨分化的能力，当在最佳组合浓度即ICA为10‑8mol/L、BMP‑2为100ng/mL时，缓释微囊诱导成骨的能力大于直接给药，且BMP包埋在内层、ICA在外层，可先促增殖、后促分化，实现最大化成骨需求；该设计为中医药联合生长因子促进骨组织修复与再生提供实验室依据。

摘要： 本发明公开了一种诱导人多能干细胞体外分化为停滞在减数分裂II期的卵母细胞的方法，该方法分为三步，首先将细胞密度为80％的多能干细胞更换PGC‑m培养基，于35～40°C、3％～6％CO2下培养10天，得原始生殖细胞样细胞；然后将形成的原始生殖细胞样细胞转移至PF‑m培养基中，于35～40°C、8％～12％CO2下培养5天，得卵泡样结构；最后将形成的卵泡样结构转移至OLC‑m培养基中孵育10～15天，得到停止在减数分裂II期的卵母细胞样细胞。采用本发明中的方法，效率高、时间短，而且诱导出的卵母细胞样细胞可排除第一极体，形成次级卵母细胞。该方法为研究人类雌性生殖细胞的形成和卵子发生提供了新的手段。

摘要： 本发明公开了一种利用孤雌激活的孤雌胚胎干细胞体外分化形成卵子的方法，该方法用锶离子和细胞松弛素D处理获得孤雌激活胚胎并建立孤雌胚胎干细胞细胞系，进一步分化形成原始生殖细胞样细胞，将所述原始生殖细胞样细胞与小鼠雌性胚胎性腺体细胞聚合移植到联合免疫缺陷型小鼠体内获得卵子；通过该技术可以产生无限多的正常功能性卵子，该技术无论对于临床治疗不孕不育或卵巢早衰，还是科学研究过程中获得足量的高质量卵子均具有重要的意义。

摘要： 本申请提供了一种体外分化和扩增T细胞的方法，包括以下步骤：从组织或外周血样本中分离T细胞；将所述T细胞转移至表面铺设有微纳米结构涂层的培养皿中培养，以刺激所述T细胞分化和扩增；其中，所述微纳米结构涂层包括第一胶体颗粒、第二胶体颗粒和界面活性剂，所述第一胶体颗粒与所述第二胶体颗粒的粒径尺寸比值大于2；检测和收集所述培养后的T细胞。该体外分化和扩增T细胞的方法，工艺精简，能够将培养皿上微纳米结构涂层与T细胞接触所产生的物理信号转换成生化信号，促进T细胞在体外的分化和扩增；解决现有方法中存在的成本高、操作过程复杂的问题。本申请还提供了该方法的应用。