传染性胃肠炎病毒

摘要： 1猪病毒性腹泻的临床特征猪病毒性腹泻的病原主要是病毒,如传染性胃肠炎病毒、流行性腹泻病毒等,发病猪常表现为呕吐、腹泻、脱水等,尤其是仔猪,腹泻严重的时候会极度消瘦,每一根肋骨都很容易看出来。该病具有极强的传染性,所有年龄段的猪群都可以感染该病,其中仔猪发病率和死亡率最高。随着日龄的增加,发病率和死亡率不断下降。发病猪只无体温升高的症状,濒临死亡的猪只体温会降低。猪病毒性腹泻没有严格的季节性,其中冬春季节发生的稍微多一些。近些年夏季暴发的猪病毒性腹泻病的案例也越来越多,且成为猪场一个新常态的疾病。目前,猪场常用的抗菌药物治疗该病的效果并不理想,甚至是无效治疗。

摘要： 猪传染性胃肠炎是由冠状病毒科冠状病毒属的传染性胃肠炎病毒感染引发的一类病毒性传染性疾病,它是生猪养殖管理过程中发生流行率相对较高的一类接触性传染性疾病,具有较高的发病率和致死率,需要养殖户提高对该种疾病的重视程度。一般情况下,传染性胃肠炎在不同年龄的猪群中都可以传播流行,其中对哺乳阶段的仔猪造成的危害最为严重,10日龄以下的新生仔猪发病率较高,造成的死亡率较高,有时高达100%。

摘要： 为了获得猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的单链抗体,首先利用噬菌体展示技术,构建猪源噬菌体单链抗体库,然后,通过微孔板筛选法对抗体库进行3轮富集淘筛,并用ELISA检测单链抗体与TGEV的亲和力,对亲和性较高的单链抗体进行基因测序与分析。结果表明,成功构建了猪源噬菌体单链抗体库,其库容为1.89×107 CFU/mL,通过Phage ELISA和Fab ELISA筛选得到4株与TGEV具有高亲和力的单链抗体,并通过桑格测序获得了与TGEV亲和性最佳的2株抗体的基因序列。利用在线生物信息学工具对所获得的抗体基因序列进行分析,结果表明,这2株单链抗体基因序列分别由猪源IgG的重链可变区基因(V_(H))和κ型轻链可变区基因(V_(L))构成,V_(H)和V_(L)均由3个CDR区和4个FR区构成,说明上述基因序列为完整的猪源TGEV抗体可变区。本研究的结果将为TGEV抗体药物的开发提供必要材料,为TGEV感染仔猪的临床治疗提供新的思路。

摘要： 为了解湘西州猪病毒性腹泻的主要病原及流行情况,文章利用荧光定量PCR技术对湘西州部分猪场的420份粪便样品进行猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(PoRV)的检测.结果 显示,RV的阳性率最高,为36.9％;其次为PEDV,阳性率14.3％,未检测到TGEV;PEDV+RV混合感染率为4.8％;不同日龄的猪均可感染.

摘要： 猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)感染仔猪能够引起仔猪肠道损伤,导致仔猪腹泻脱水甚至死亡,其致病机制主要在于破坏猪小肠黏膜,引起肠道黏膜上皮屏障功能受损,具体主要表现为:TGEV破坏仔猪肠道上皮机械屏障完整和电解质平衡,扰乱生物菌群结构,降低局部免疫功能。TGEV诱导炎症及先天免疫反应的作用机制主要通过激活维甲酸诱导基因Ⅰ样受体(RLR)和Toll样受体(TLR),使核转录因子(NF-κB)活化,进一步诱导细胞因子和干扰素表达。通过饲粮中添加氨基酸、维生素和中草药等营养调控措施可以达到缓解TGEV损伤肠道屏障功能的目的,为预防及治疗TGEV感染对仔猪肠道屏障功能的影响提供参考。

摘要： 分析2014-2016年间猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪轮状病毒(RV)在闽西地区的流行情况,以便更好地实施防控工作.采用RT-PCR对闽西地区规模化猪场的135份疑似病毒性腹泻样品进行检测.结果表明,PEDV的阳性检出率为30.37％,TGEV的阳性检出率为13.33％,RV的阳性检出率为11.11％.因此,闽西地区仔猪病毒性腹泻疾病的流行情况须要引起足够重视,采取积极的措施进行预防.

摘要： 为了临床上能够快速检测出猪流行性腹泻病毒(PEDV)以及传染性胃肠炎病毒(TGEV),本研究根据GenBank中收录的PEDV和TGEV的基因序列,分别设计两对特异性引物,针对本实验室保存的毒株进行了双重RT-PCR检测方法的建立及条件的优化,结果特异性良好,表明该研究建立的双重RT-PCR检测方法操作简单、特异性好,具有较高的检测灵敏性,为PEDV和TGEV的快速鉴别诊断和流行病学调查研究提供了更为敏感、快捷、可靠的技术手段.

摘要： 本研究开展了猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因的B、C抗原位点区域的原核表达与免疫活性研究。根据S基因的B、C抗原位点区序列设计一对引物,从S基因克隆质粒19T-S1扩增了含B、C抗原位点的基因片段(以SBC表示).将SBC插入pMD19-T载体构建了19T-SBC,再用EcoRⅠ/HindⅢ酶切SBC亚克隆至pET-32a(+)构建了重组质粒pET-32a-SBC.将pET-32a-SBC转入BL21进行诱导表达,并确定其最佳表达条件。亲和层析纯化重组SBC蛋白,分别免疫兔和猪制备阳性血清,并测定了抗体效价和抗体活性。结果表明的SBC基因片段大小为549bp,pET-32a-SBC在大肠杆菌中的最佳表达条件为IPTG诱导浓度为0.6mmol/L、最佳诱导时间为4h,最佳诱导温度为32°C,重组SBC蛋白约为20.1KDa,主要以包涵体形式存在于细胞质中。琼脂扩散试验测定兔抗SBC蛋白血清和猪抗SBC蛋白分别为1:16和1:8,间接ELISA测定效价分别为1:1280和1:640.Western blot结果证实重组SBC蛋白与兔抗SBC蛋白血清、猪抗SBC蛋白血清以及猪抗TGEV阳性血清均发生特异性反应。本研究建立了SBC的原核表达系统并证实重组SBC蛋白具有良好的免疫活性,为开展SBC的应用研究奠定了基础。

摘要： 本研究对猪传染性胃肠炎病毒(porcine transmissible gastroenteritis virus，TGEV)福建分离株(17GEV—FT株)M基因进行克隆、测序并利用生物信息学技术分析TGEV—FJ株M蛋白基因的同源性、信号肽、糖基化位点、磷酸化位点及其二级结构。结果显示，成功扩增出M基因完整目的片段(789bp)，编码262个氨基酸，构建了M基因的克隆重组质粒pGEM—T—M。序列分析与遗传进化树显示，TGEV M基因属高度保守的基因，TGEV-FJ株与HN2002株亲缘较近。TGEV-FJ株M蛋白具有一个潜在信号肽剪切位点(ACG16—17ER)，存在3个潜在的N-糖基化位点，丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸磷酸化位点分别有6个、1个和5个；TGEV-FJ株M蛋白二级结构α-螺旋区域占11.59％，β折叠区域占44.93％，无规则卷曲区域占43.48％。本研究结果为TGEV-FJ株M蛋白原核表达提供依据，并为TGEV分子诊断试剂及基因工程疫苗研究奠定基础。

摘要： 为原核表达猪传染性胃肠炎病毒(TGEV-FJ)的重组核衣壳(N)蛋白，本研究根据GenBank中的TGEV全基因序列，设计合成一对引物扩增其N基因。通过RT-PCR方法扩增N基因，克隆于原核表达载体pET-32α中，并转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达。SDS—PAGE分析表明，重组蛋白约为68ku，与预期分子量一致。Western blot分析表明，重组蛋白能与抗TGEV阳性血清反应出现特异性条带。

摘要： 以猪传染性胃肠炎病毒标准华毒株H的n基因重组质粒pMD1-TN为模板，通过PCR扩增出1149bp大小的n基因，然后将其亚克隆到pET-30a原核表达载体，成功地构建了TGEV n基因的原核表达载体pET30a-N，重组质粒转化E.coli BL21感受态细胞,用IPTG进行诱导表达，经SDS2PAGE分析表明TGEV N蛋白在大肠杆菌中获得了融合表达。通过Western blot试验检测表明：重组N蛋白与TGEV阳性血清具有很强反应性重组N蛋白的高免血清能够识别TGEV的N蛋白，说明利用大肠杆菌表达的TGEV N蛋白具有良好的免疫活性。

摘要： 本发明公开了一种用于猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒以及猪轮状病毒检测的DPO引物组及其应用。本发明针对TGEV‑N基因、PEDV‑N基因和PRoV‑VP7基因分别设计了一对DPO引物，建立了猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒和猪轮状病毒的多重DPO real‑time RT‑PCR检测方法。结果显示，该方法的检测限为5.3×100copies/μL，在40°C‑65°C退火温度范围内均可高效扩增靶基因片段，表明该方法退火温度范围宽，同时DPO引物特异性强，PCR反应过程中未产生非特异性扩增。本发明多重DPO real‑time RT‑PCR检测方法设计简单、特异性强、灵敏度高，为TGEV、PEDV和PRoV三种致猪病毒性腹泻病病原的快速准确检测提供了新的技术手段。

摘要： 本发明公开了一种猪德尔塔冠状病毒、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒多重RT‑PCR检测引物。本发明多重RT‑PCR对这3种病毒的最低检测量分别是4.05×101拷贝/μL、4.52×103拷贝/μL和5.47×103拷贝/μL，而对猪细小病毒（PPV），猪伪狂犬病毒（PRV）的扩增结果均为阴性。57份临床样品的多重RT‑PCR检测结果显示，有1份同时感染这3种病毒，11份样品感染PDCoV，15份样品感染PEDV，1份样品感染TGEV，5份样品感染PDCoV和PEDV，1份样品感染PDCoV和TGEV。

摘要： 本发明公开了一套用于同时检测猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒以及猪轮状病毒的多重PCR引物组。本发明的引物组由三对引物组成，其中，用于猪流行性腹泻病毒检测的引物序列为SEQ？ID？NO：1和2所示；用于猪传染性胃肠炎病毒检测的引物序列为SEQ？ID？NO：3和4所示；用于猪轮状病毒检测的引物序列为SEQ？ID？NO：5和6所示。应用本发明引物序列通过多重PCR方法可同时对猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒以及猪轮状病毒的不同毒株进行检测，结果均为阳性，而对其他常见猪源病毒检测结果均为阴性，说明本发明的引物组特异性强、重复性好；对病毒cDNA梯度稀释后进行PCR检测，说明该引物灵敏度高。

摘要： 本发明公开了一种检测猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪轮状病毒的基因芯片和试剂盒。本发明基因芯片包括它包括固相载体以及固定在固相载体上的探针；所述探针包括SEQ ID NO：1或2所示任意一个或者两个寡核苷酸片段，SEQ ID NO：3或4所示任意一个或者两个寡核苷酸片段，以及SEQ ID NO：5或6所示任意一个或者两个寡核苷酸片段。本发明试剂盒包括前述基因芯片与扩增猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪轮状病毒的基因的试剂。本发明基因芯片和检测试剂盒可以准确、有效的检测猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪轮状病毒，且特异性强、灵敏度高、耗时短，检测快速，应用前景良好。

摘要： 本发明公开了一种猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪轮状病毒的试剂盒。本发明基检测试剂盒可以准确、有效的检测猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪轮状病毒，且特异性强、灵敏度高、耗时短，检测快速，应用前景良好。

摘要： 本发明提供了一种猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒和猪轮状病毒的三联活疫苗及其制备方法，其中，三种病毒的含量≥107.5TCID50/mL，体积比为1∶1∶1。本发明的三联活疫苗解决了目前市场上缺少的有效的防治猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻和猪轮状病毒三种疾病的多联疫苗的问题，尤其是对猪轮状病毒的防控。和现有的打三针单疫苗才能预防这三种传染病比较，该发明经济使用，简化了免疫程序，降低了防疫成本，为国内养殖场提供了一种简单方便的新的免疫途径。

摘要： 本发明公开了一种用于猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒以及猪轮状病毒检测的DPO引物组及其应用。本发明针对TGEV‑N基因、PEDV‑N基因和PRoV‑VP7基因分别设计了一对DPO引物，建立了猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒和猪轮状病毒的多重DPO real‑time RT‑PCR检测方法。结果显示，该方法的检测限为5.3×100copies/μL，在40°C‑65°C退火温度范围内均可高效扩增靶基因片段，表明该方法退火温度范围宽，同时DPO引物特异性强，PCR反应过程中未产生非特异性扩增。本发明多重DPO real‑time RT‑PCR检测方法设计简单、特异性强、灵敏度高，为TGEV、PEDV和PRoV三种致猪病毒性腹泻病病原的快速准确检测提供了新的技术手段。

摘要： 本发明公开了一种猪德尔塔冠状病毒、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒多重RT-PCR检测引物。本发明多重RT-PCR对这3种病毒的最低检测量分别是4.05×101拷贝/μL、4.52×103拷贝/μL和5.47×103拷贝/μL，而对猪细小病毒（PPV），猪伪狂犬病毒（PRV）的扩增结果均为阴性。57份临床样品的多重RT-PCR检测结果显示，有1份同时感染这3种病毒，11份样品感染PDCoV，15份样品感染PEDV，1份样品感染TGEV，5份样品感染PDCoV和PEDV，1份样品感染PDCoV和TGEV。

摘要： 本发明公开了一种检测猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪轮状病毒的基因芯片和试剂盒。本发明基因芯片包括它包括固相载体以及固定在固相载体上的探针；所述探针包括SEQ ID NO：1或2所示任意一个或者两个寡核苷酸片段，SEQ ID NO：3或4所示任意一个或者两个寡核苷酸片段，以及SEQ ID NO：5或6所示任意一个或者两个寡核苷酸片段。本发明试剂盒包括前述基因芯片与扩增猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪轮状病毒的基因的试剂。本发明基因芯片和检测试剂盒可以准确、有效的检测猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪轮状病毒，且特异性强、灵敏度高、耗时短，检测快速，应用前景良好。

摘要： 本发明公开了一种猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪轮状病毒的试剂盒。本发明基检测试剂盒可以准确、有效的检测猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪轮状病毒，且特异性强、灵敏度高、耗时短，检测快速，应用前景良好。