仙台病毒

摘要： 目的 取线粒体基因(mtDNA)8993T>G突变患者子宫内膜组织建立诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)系,获得Leigh综合征线粒体疾病细胞模型.方法 通过取患者子宫内膜组织,经组织块原代培养方法培养,传代至3～5代转染仙台病毒,待细胞增殖满后转移至饲养层细胞上继续培养,第20天挑取克隆,建立iPSCs系,并通过碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AP)染色、免疫荧光、小鼠体内畸胎瘤实验对其多能性和分化能力进行鉴定.结果 iPSCs系成功建立,稳定传代后AP染色呈强阳性,八聚体结合转录因子4(octamer binding transcription factor 4,OCT4)、性别决定基因相关蛋白2(sex determination gene-associated protein 2,SOX2)、阶段特异性胚胎抗原-4(phase specific embryonic antigen-4,SSEA-4)、肿瘤排斥抗原-1-60(tumor rejection antigen,TRA-1-60)等多能性标记蛋白均为强阳性表达,小鼠体内畸胎瘤实验表明该iPSCs具有分化为内胚层、中胚层、外胚层的潜能,iPSC系成功建立.结论 本研究用仙台病毒非基因整合诱导Leigh综合征患者子宫内膜组织获得iPSCs系,为Leigh综合征致病机制中生化、分子特征以及药物筛选、毒理学研究提供了细胞模型.

摘要： 目的 建立敏感特异的仙台病毒(SeV)荧光定量PCR检测方法,并初步应用.方法 将不同株SeV病毒序列进行比对,选择对保守区域设计合成引物.人工合成SeV基因组12181～12480 DNA序列,转入质粒中,作为仙台病毒质粒标准品,建立SYBR染料法荧光定量PCR方法,并对样本进行SeV测定.结果 建立了特异性的检测SeV的SYBR荧光定量PCR方法,该方法对SeV最低检测限度为10 copies/μL.将所建立的实时荧光定量PCR方法用于40只SPF小鼠和58只裸鼹鼠的肺组织样本的检测,检测结果为仙台病毒核酸阴性;检测4只成年屏障环境饲养黄鼠肺组织和5只清洁级小鼠肺组织,检测结果为仙台病毒核酸阳性率100％.结论 该研究建立的SYBR Green染料法荧光定量PCR方法能特异敏感地检测仙台病毒.

摘要： 目的 研究仙台病毒(Sendai virus,SeV)预存免疫对基于仙台病毒载体开发的Ⅱ型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus 2,HSV-2)疫苗 SeV-dF/HSV-2 ICP27和 SeV-dF/HSV-2 gD 免疫效果的影响,为克服预存免疫的影响提供数据参考.方法 使用不同剂量(31g、41g、51g、61g、71g、81g CIU)仙台病毒免疫小鼠,建立不同程度预存免疫模型.对建立了预存免疫的小鼠分别免疫SeV-dF/HSV-2 ICP27和SeV-dF/HSV-2 gD,采用酶联免疫斑点检测(ELISPOT)法测定小鼠脾淋巴细胞分泌的ICP27特异性IFN-γ活性,蚀斑减少中和试验(PRNT50)测定小鼠血清中HSV-2中和抗体效价.结果 小鼠经不同剂量仙台病毒免疫后建立了预存免疫,且仙台病毒中和抗体效价随着免疫剂量的增加而升高,呈现剂量依赖效应.31g～81gCIU仙台病毒免疫小鼠所建立的预存免疫均可对SeV-dF/HSV-2 ICP27诱导的细胞免疫产生显著抑制作用,但对SeV-dF/HSV-2 gD诱导的体液免疫未产生显著抑制作用.结论 预存免疫对基于仙台病毒载体开发的疫苗的影响需要考虑预存病毒中和抗体是否存在,同时病毒载体表达何种外源蛋白也是需要考虑的因素之一.

摘要： 目的 建立快速检测实验大鼠冠状病毒和仙台病毒的双重PCR方法.方法 根据大鼠冠状病毒N基因、仙台病毒L基因设计特异性引物;经过双重PCR优化,特异性和敏感性的检测,建立双重PCR体系.应用该PCR体系检测人工感染仙台病毒组织DNA样本和实验动物组织样本,并与ELISA方法比对.结果 双重PCR扩增出大鼠冠状病毒(168 bp)和仙台病毒(262 bp)目的条带,PCR扩增产物测序结果利用核酸BLAST功能进行同源序列对比,仙台病毒和大鼠冠状病毒同源性分别为100％和99％.仙台病毒和大鼠冠状病毒的检测下限为1.56×102 copies/μL.特异性检测对小鼠肝炎病毒扩增,产生片段大小近似大鼠冠状病毒产物.应用建立的双重PCR体系检测人工感染仙台病毒组织DNA样本,30份DNA标本均被检出;检测94份实验动物肺组织样本,结果均阴性.结论 建立的双重PCR方法操作简单、快速、特异性强、灵敏度高,能够实现对实验动物仙台病毒和大鼠冠状病毒病原体的快速检测.

摘要： 目的 比较两种人牙源性iPSCs的重编程效应及其生物学特性.方法 原代培养人牙髓干细胞(DPSCs)和根尖乳头干细胞(SCAP),仙台病毒重编程系统将两种细胞诱导为诱导性多潜能干细胞(iPSCs),比较两种iPSCs的形态、重编程效率及时间,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测SeV及外源性转录基因的表达.结果 人DPSCs、SCAP均重编程为iPSCs,具有典型ES样克隆形态,重编程效率分别为(0.68 ± 0.02)%、(0.7 ± 0.01)%,差异无统计学意义(P> 0.05);重编程时间分别为(26.0 ± 2.1)、(27.0 ± 1.4)d,差异无统计学意义(P>0.05).RT-PCR结果显示,两种iPSCs无外源性病毒或转录基因序列的表达.结论 人DPSCs和SCAP可重编程为无病毒、无转录基因iPSCs,是iPSCs的理想来源.%Objective To compare the reprogramming effects and biological characteristics of two types of human odontogen-ic induced pluripotent stem cells(iPSCs).Methods Human dental pulp stem cells(DPSCs)and stem cells from apical papilla (SCAP)were isolated and primarily cultured.The Sendai reprogramming system was utilized to induce DPSCs and SCAP into iP-SCs.The morphology,reprogramming efficiency,reprogramming and time were compared between human DPSCs-iPSCs and SCAP-iPSCs.The SeV and exogenous transcriptional gene expression were detected by RT-PCR.Results Human DPSCs and SCAP were reprogrammed as iPSCs with classical ES-like clonal morphology.The reprogramming efficiencies were(0.68 ± 0.02)% and(0.7 ± 0.01)% respectively,the difference was not statistically significant(P>0.05).The reprogramming time was(26.0 ± 2.1)d and (27.0 ± 1.4)d respectively,the difference was not statistically significant(P>0.05).The RT-PCR results showed that no expres-sion of exogenous virus or transcriptional gene sequence in both iPSCs.Conclusion Human DPSCs and SCAP can be reprogrammed as virus-free and transgene-free iPSCs,which are the ideal sources of iPSCs.

摘要： 目的：建立快速检测实验大鼠冠状病毒和仙台病毒的双重PCR方法. 方法：根据大鼠冠状病毒N基因、仙台病毒L基因设计特异性引物;经过双重PCR优化,特异性和敏感性的检测,建立双重PCR体系.应用该PCR体系检测人工感染样本和实验动物组织样本,并与ELISA方法比对. 结果：双重PCR扩增出大鼠冠状病毒(168bp)和仙台病毒(262bp)目的条带.仙台病毒和大鼠冠状病毒的检测下限为1.56×102copies/μL.应用建立的双重PCR体系检测人工感染样本,30份仙台病毒核酸阳性标本均被检出. 结论：建立的双重PCR方法操作简单、快速、特异性强、灵敏度高,能够实现对实验动物仙台病毒和大鼠冠状病毒病原体的快速检测.

摘要： 目的：了解全国实验动物检测相关实验室在大鼠仙台病毒抗体检测项目的技术水平,发现并解决检验中存在的问题,促进各实验室加强质量管理,提高检测水平. 方法：制备大鼠血清样品,经过标定后分装,按照CNAS的要求进行均一性和稳定性验证,标定好的样品随机编号并随机发放给各参加实验室,每个实验室3个样本,在规定时间内反馈结果,结果以阳性或阴性表示,与预期结果均一致判为满意结果,不完全一致或逾期未反馈结果判为不满意. 结果：来自18个省市自治区的28家单位报名参加本次比对实验,均在规定时间反馈了结果,其中25家单位获得满意结果,占参加比对实验室的89.3％;结果不满意的3家单位,其中1家有1个样品与预期结果不符,另外2家均有2个样品与结果不符.28家单位中有27家采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测,另外1家用免疫荧光法(IFA)检测.反馈的原始记录总体真实可信,个别参加单位存在检测试剂来源不清、操作过程不详及阳性结果未进行复检等问题. 结论：各实验动物检测机构大鼠仙台病毒总体检测能力较高,本次能力验证计划的实施能够反映实验室的检测水平.

摘要： @@仙台病毒（Sendai virus SeV），又称乙型副流感病毒Ⅰ型，日本凝血病毒（hemagglutinating virus of Japan, HVJ），是单负链的的RNA病毒，属副粘病毒科，呼吸道病毒属。早在上世纪80 年代，人们已经发现仙台病毒具有包膜融合作用并将其用于细胞融合实验及脂质体混合转染。随着反相遗传学技术的发展，仙台病毒被开发为胞质表达传播缺陷型的病毒载体，临床前研究已证实其携带外源基因对某些疾病，如呼吸道疾病，缺血性损伤，肿瘤的治疗作用。另外，仙台病毒载体已成为活载体疫苗的候选载体用于新型疫苗的研究，其作为病毒载体的优势主要在于：Ⅰ迅速感染细胞，摄取时间短，Ⅱ感染不受细胞周期的影响，Ⅲ表达外源基因高效且可调控，Ⅳ生活周期完全在胞质中进行，无DNA相，无整合风险，安全性高，Ⅴ单负链RNA基因组且不分节段，重组几率大大降低，Ⅵ可高效在各种组织中表达，应用范围广。目前，仙台病毒载体被定义为高效的基因转导工具。本文从仙台病毒的基因组分子结构，致病性，载体的构建和类型以及其应用等方面进行详细论述。

摘要： 根据GenBank发表的SeV的基因组序列，设计合成2对特异性引物扩增Sev片段，通过PCR反应体系的优化，选取1对引物建立了仙台病毒PCR检测技术。经敏感性和特异性试验，本方法对仙台病毒核酸的最小检出量为1.1pg，对副粘病毒属的其他病毒以及其他啃齿类病原体均为阴性。本实验建立的方法方法将用于仙台病毒的检测。

摘要： 本文论述了为说明仙台病毒与婴幼儿呼吸道感染的关系需进一步扩大婴幼儿血清学的调在此基础上为今后疫苗的研制提供一定的理论依据.

摘要： 目的:从F基因的氨基酸序列上分析仙台病毒天津株的种系发生进化地位.方法:以仙台病毒天津株的基因组RNA为模板,根据GenBank中仙台病毒全基因组序列用GeneRunner设计出两对引物,通过RT-PCR方法扩增出包括F基因全长的两段首尾相连的序列,并进行测序,根据测序结果推导出F基因氨基酸序列,与GenBank中公布的15株仙台病毒相应序列进行同源性比较,并绘制系统发生树.结果:F基因核苷酸和氨基酸序列同源性分析表明,仙台病毒天津株与BB1株同源性最高,分别为94.5％和95.4％,与其他仙台病毒株相比较,核苷酸序列同源性在85.3％～90.5％,氨基酸序列同源性在90.4％～94.5％,均有较大差异.从系统发生树来看,仙台病毒天津株与BB1株亲缘关系比较接近,而与其他仙台病毒株距离比较远.结论:从F基因氨基酸序列分析来看,仙台病毒天津株很可能不属于Ohita株和Z株分别代表的两个进化分支,而是和BB1株一起属于独立于这两个分支之外的第三个分支.

摘要： 目的:研究阳离子膜融合脂质体包裹DNA的体外稳定性以及体外细胞转染.方法:采用表达E.coilβ-半乳糖苷酶的pSV40β报告基因质粒及组化染色评价阳离子膜融合脂质体的转染效率.用DNase1考察阳离子膜融合脂质体的体外稳定性.结果:当阳离子膜融合脂质体(CFL)及阳离子脂质体(CL)与DNA电荷比为(2:1)时,CFL的转染效率为(42.3±4.3)﹪,明显高于CL的转染效率(23.9±2.1)﹪,且有较高的稳定性.结论:阳离子膜融合脂质体(CFL)可作为药物载体有待进一步研究.

摘要： 目的:研究阳离子膜融合脂质体包裹DNA的体外稳定性以及体外细胞转染.方法:采用表达E.coilβ-半乳糖苷酶的pSV40β报告基因质粒及组化染色评价阳离子膜融合脂质体的转染效率.用DNase1考察阳离子膜融合脂质体的体外稳定性.结果:当阳离子膜融合脂质体(CFL)及阳离子脂质体(CL)与DNA电荷比为(2:1)时,CFL的转染效率为(42.3±4.3)﹪,明显高于CL的转染效率(23.9±2.1)﹪,且有较高的稳定性.结论:阳离子膜融合脂质体(CFL)可作为药物载体有待进一步研究.

摘要： 目的:研究阳离子膜融合脂质体包裹DNA的体外稳定性以及体外细胞转染.方法:采用表达E.coilβ-半乳糖苷酶的pSV40β报告基因质粒及组化染色评价阳离子膜融合脂质体的转染效率.用DNase1考察阳离子膜融合脂质体的体外稳定性.结果:当阳离子膜融合脂质体(CFL)及阳离子脂质体(CL)与DNA电荷比为(2:1)时,CFL的转染效率为(42.3±4.3)﹪,明显高于CL的转染效率(23.9±2.1)﹪,且有较高的稳定性.结论:阳离子膜融合脂质体(CFL)可作为药物载体有待进一步研究.

摘要： 目的:研究阳离子膜融合脂质体包裹DNA的体外稳定性以及体外细胞转染.方法:采用表达E.coilβ-半乳糖苷酶的pSV40β报告基因质粒及组化染色评价阳离子膜融合脂质体的转染效率.用DNase1考察阳离子膜融合脂质体的体外稳定性.结果:当阳离子膜融合脂质体(CFL)及阳离子脂质体(CL)与DNA电荷比为(2:1)时,CFL的转染效率为(42.3±4.3)﹪,明显高于CL的转染效率(23.9±2.1)﹪,且有较高的稳定性.结论:阳离子膜融合脂质体(CFL)可作为药物载体有待进一步研究.

摘要： 本发明涉及生物医药技术领域，尤其涉及仙台病毒抗原肽组合物及其在仙台病毒感染检测中的应用。本发明提供的仙台病毒抗原肽组合物包括具有SEQ ID NO:1所示序列的多肽、SEQ ID NO:2所示序列的多肽和SEQ ID NO:3所示序列的多肽，或包括在具有如SEQ ID NO:1所示序列中取代、缺失或添加一个或多个氨基酸残基的多肽、在具有如SEQ ID NO:2所示序列中取代、缺失或添加一个或多个氨基酸残基的多肽和在具有如SEQ ID NO:3所示序列中取代、缺失或添加一个或多个氨基酸残基的多肽。本发明提供的仙台病毒抗原肽组合物分子量小，降低了与其他分子发生交叉反应的可能性，提高了检测准确性。

摘要： 本发明涉及生物医药技术领域，尤其涉及一种仙台病毒抗原肽及其在仙台病毒感染检测中的应用。本发明提供的仙台病毒抗原肽，具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列或在具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列中取代、缺失或添加一个或多个氨基酸残基得到的氨基酸序列。由于本发明提供的仙台病毒抗原肽分子量较小，降低了与其他分子发生交叉反应的可能性，因此提高了多肽组合的特异性和针对性，从而提高了实验动物微生物检测的准确性。

摘要： 本发明提供了一种本发明涉及生物医药技术领域，尤其涉及一种仙台病毒抗原肽及其在仙台病毒感染检测中的应用。本发明提供的仙台病毒抗原肽，具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列或在具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列中取代、缺失或添加一个或多个氨基酸残基得到的氨基酸序列。由于本发明提供的仙台病毒抗原肽分子量较小，降低了与其他分子发生交叉反应的可能性，因此提高了多肽组合的特异性和针对性，从而提高了实验动物微生物检测的准确性。

摘要： 本发明涉及生物医药技术领域，尤其涉及一种仙台病毒抗原肽及其在仙台病毒感染检测中的应用。本发明提供的仙台病毒抗原肽，具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列或在具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列中取代、缺失或添加一个或多个氨基酸残基得到的氨基酸序列。由于本发明提供的仙台病毒抗原肽分子量较小，降低了与其他分子发生交叉反应的可能性，因此提高了多肽组合的特异性和针对性，从而提高了实验动物微生物检测的准确性。

摘要： 本发明公开了一种快速区分兔瘟病毒、仙台病毒和兔轮状病毒的多重荧光免疫分析方法及试剂。本发明操作简单，通过PCR获得目标扩增片段，然后将扩增产物、荧光编码微球和链霉亲和素‑藻红蛋白进行杂交，然后通过检测仪读取MFI值，分辩不同类型的病毒。本发明方法，能够同时对兔瘟病毒、兔轮状病毒和仙台病毒进行准确检测，而且特异性强，灵敏度高，重复性好。与传统检测方法相比，本发明方法实现了对同一样本中的多种不同目的分子同时进行检测，样本用量少，操作简单、快速，可大大降低检测成本。

摘要： 本发明提供了一种本发明涉及生物医药技术领域，尤其涉及一种仙台病毒抗原肽及其在仙台病毒感染检测中的应用。本发明提供的仙台病毒抗原肽，具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列或在具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列中取代、缺失或添加一个或多个氨基酸残基得到的氨基酸序列。由于本发明提供的仙台病毒抗原肽分子量较小，降低了与其他分子发生交叉反应的可能性，因此提高了多肽组合的特异性和针对性，从而提高了实验动物微生物检测的准确性。

摘要： 本发明提供了一种本发明涉及生物医药技术领域，尤其涉及一种仙台病毒抗原肽及其在仙台病毒感染检测中的应用。本发明提供的仙台病毒抗原肽，具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列或在具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列中取代、缺失或添加一个或多个氨基酸残基得到的氨基酸序列。由于本发明提供的仙台病毒抗原肽分子量较小，降低了与其他分子发生交叉反应的可能性，因此提高了多肽组合的特异性和针对性，从而提高了实验动物微生物检测的准确性。

摘要： 本发明涉及生物医药技术领域，尤其涉及仙台病毒抗原肽组合物及其在仙台病毒感染检测中的应用。本发明提供的仙台病毒抗原肽组合物包括具有SEQ ID NO:1所示序列的多肽、SEQ ID NO:2所示序列的多肽和SEQ ID NO:3所示序列的多肽，或包括在具有如SEQ ID NO:1所示序列中取代、缺失或添加一个或多个氨基酸残基的多肽、在具有如SEQ ID NO:2所示序列中取代、缺失或添加一个或多个氨基酸残基的多肽和在具有如SEQ ID NO:3所示序列中取代、缺失或添加一个或多个氨基酸残基的多肽。本发明提供的仙台病毒抗原肽组合物分子量小，降低了与其他分子发生交叉反应的可能性，提高了检测准确性。

摘要： 本发明涉及生物医药技术领域，尤其涉及一种仙台病毒抗原肽及其在仙台病毒感染检测中的应用。本发明提供的仙台病毒抗原肽，具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列或在具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列中取代、缺失或添加一个或多个氨基酸残基得到的氨基酸序列。由于本发明提供的仙台病毒抗原肽分子量较小，降低了与其他分子发生交叉反应的可能性，因此提高了多肽组合的特异性和针对性，从而提高了实验动物微生物检测的准确性。

摘要： 本发明公开了一种快速区分兔瘟病毒、仙台病毒和兔轮状病毒的多重荧光免疫分析方法及试剂。本发明操作简单，通过PCR获得目标扩增片段，然后将扩增产物、荧光编码微球和链霉亲和素‑藻红蛋白进行杂交，然后通过检测仪读取MFI值，分辩不同类型的病毒。本发明方法，能够同时对兔瘟病毒、兔轮状病毒和仙台病毒进行准确检测，而且特异性强，灵敏度高，重复性好。与传统检测方法相比，本发明方法实现了对同一样本中的多种不同目的分子同时进行检测，样本用量少，操作简单、快速，可大大降低检测成本。