人羊膜上皮细胞

摘要： 背景:人羊膜上皮细胞与其他各种干细胞相比,发育更原始,扩增能力更强,特别是具有来源广、获取成本低、可控性强等众多优势,对神经损伤修复过程有着重要的积极影响,是一种具有广泛应用前景的种子细胞.目的:总结人羊膜上皮细胞在神经损伤治疗中的应用效果,为临床神经损伤的治疗提供参考及依据.方法:检索PubMed数据库2000-2020年之间的相关文章,英文检索词为"central nervous system injury,peripheral nerve injury,amniotic epithelial cells,cell therapy,tissue engineering,genetic engineering,repair,regenerate",检索中国知网、维普、万方等数据库2000-2020年之间的相关文章,中文检索词为"中枢神经损伤,周围神经损伤,人羊膜上皮细胞,细胞治疗,组织工程,基因工程,修复,再生".对文献资料及参考文献进行逐一查阅.结果 与结论:人羊膜上皮细胞具有强大的神经组织修复再生和保护能力,可避免其他干细胞移植时出现的免疫排斥、致瘤风险等问题,是治疗神经系统疾病的可靠细胞来源之一,未来的研究不仅仍需在其基本生物学特性方面继续深入,还需在诱导分化能力方面进一步展开.

摘要： 背景:人羊膜上皮细胞具有广泛的生物学作用,可应用于多种疾病的治疗,如结膜损伤、烧伤、肺纤维化及心脏疾病等;人羊膜上皮细胞在妇产科领域研究已进行了动物实验并取得显著成果,有望成为新的疾病治疗方法,值得进行深入研究和探索.目的:综述人羊膜上皮细胞在妇产科领域的研究进展、应用现状及发展前景.方法:以"human amniotic epithelial cells""tumor""obstetrics and gynecology"为英文检索词检索PubMed、Web of Science数据库,以"人羊膜上皮细胞""妇科肿瘤""妇产科"为检索词检索万方、CNKI中文数据库,按纳入排除标准共纳入40篇文献进行归纳总结.结果 与结论:①人羊膜上皮细胞逆转子宫内膜癌异常血管结构和功能并诱导癌细胞凋亡;②人羊膜上皮细胞可抑制化疗诱导的颗粒细胞凋亡,恢复生育能力;③人羊膜上皮细胞可以治疗宫腔粘连,提高生育力;④人羊膜上皮细胞可治疗复发性自然流产.相信随着研究的进一步深入,人羊膜上皮细胞的功能将会得到更广泛的开发和利用.

摘要： 背景:人羊膜上皮细胞具有广泛的生物学作用,可应用于多种疾病的治疗,如结膜损伤、烧伤、肺纤维化及心脏疾病等;人羊膜上皮细胞在妇产科领域研究已进行了动物实验并取得显著成果,有望成为新的疾病治疗方法,值得进行深入研究和探索。目的:综述人羊膜上皮细胞在妇产科领域的研究进展、应用现状及发展前景。方法:以"human amniotic epithelial cells""tumor""obstetrics and gynecology"为英文检索词检索PubMed、Web of Science数据库,以"人羊膜上皮细胞""妇科肿瘤""妇产科"为检索词检索万方、CNKI中文数据库,按纳入排除标准共纳入40篇文献进行归纳总结。结果与结论:①人羊膜上皮细胞逆转子宫内膜癌异常血管结构和功能并诱导癌细胞凋亡;②人羊膜上皮细胞可抑制化疗诱导的颗粒细胞凋亡,恢复生育能力;③人羊膜上皮细胞可以治疗宫腔粘连,提高生育力;④人羊膜上皮细胞可治疗复发性自然流产。相信随着研究的进一步深入,人羊膜上皮细胞的功能将会得到更广泛的开发和利用。

摘要： 器官纤维化是各种疾病最终导致器官硬化、衰竭的主要原因之一,目前尚缺乏特效疗法应对其带来的致残、致死等严重影响.因此,探究有效的抗纤维化方案意义重大.近年来,细胞替代治疗在抗器官纤维化方面显示出巨大潜力.人羊膜上皮细胞(hAECs)作为细胞替代治疗的理想细胞,在抗纤维化方面取得较多进展.该文对hAECs的生物学特性及其在心、肺、肝脏中抗纤维化的研究进展进行了综述.

摘要： 人羊膜上皮细胞和人羊膜间充质干细胞存在于人羊膜组织中,统称为人羊膜细胞.人羊膜细胞可塑性强,具有多向分化的潜能;并且免疫原性低,移植不会发生免疫排斥反应,成为近年来研究的热点.人羊膜上皮细胞和人羊膜间充质干细胞的生物学特性使其符合干细胞药物产品的标准,将其应用于诸多疾病的治疗,如心肌梗死、脑梗死和肾损伤等,均已取得良好的疗效,此外还为许多疑难杂症提供了治疗方向.本文将从羊膜细胞的生物学特性、分离方法、表面标记物、分化潜能和对相关疾病的研究进展等方面进行综述.

摘要： 目的 探讨人羊膜上皮细胞外泌体(hAEC-Exo)对高糖环境下HaCaT增殖和迁移的作用及其相关机制.方法 采用实验研究方法.取2019年1-6月于福建医科大学附属协和医院妇产科10名足月分娩健康孕妇羊膜组织,分离原代人羊膜上皮细胞(hAEC).观察培养第2、4、7天原代hAEC生长状态和形态改变,采用流式细胞术检测细胞表面标志物CD73、CD90、CD29、CD34及人白细胞抗原DR(HLA-DR)的表达,取第2～4代细胞用于后续实验.超速离心法分离hAEC-Exo.将HaCaT与hAEC-Exo共培养3h,采用倒置荧光显微镜观察HaCaT对hAEC-Exo的摄取情况.取HaCaT,分为磷酸盐缓冲液(PBS)组、hAEC-Exo组和二甲基亚砜(DMSO)+PBS组、DMSO+hAEC-Exo组、LY294002+hAEC-Exo组,每组3孔,并进行相应处理,采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测培养0(即刻)、12、24、36、48、60 h细胞增殖活力;划痕试验检测划痕后0、24、48、72 h划痕愈合情况,并计算划痕愈合率;Transwell实验检测培养48 h穿膜细胞数;蛋白质印迹法检测培养24 h后磷脂酰肌醇3-激酶-蛋白激酶B-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K-Akt-mTOR)通路相关的哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化mTOR(p-mTOR)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)的蛋白表达.对数据行重复测量方差分析、单因素方差分析及独立样本t检验.结果 原代hAEC培养第2天多数呈卵圆形,大小均一;培养第4、7天,细胞形态呈典型的鹅卵石样单层排列.原代hAEC高表达间充质干细胞表面标志物CD73、CD90及CD29,不表达或低表达造[血干细胞相关表面标志物CD34及HLA-DR.培养3h,hAEC-Exo成功被HaCaT内吞入细胞质,并聚集于细胞核周围.培养12、24、36、48、60 h,hAEC-Exo组HaCaT增殖活力明显高于PBS组(t=3.691、10.861、12.121、10.531、14.931,P＜0.01).划痕后24、48、72 h,PBS组HaCaT划痕愈合率明显低于hAEC-Exo组(t=3.342、6.427、5.485,P＜0.05或P＜0.01).培养48 h,hAEC-Exo组HaCaT穿膜数显著多于PBS组(t=5.385,P＜0.01).培养24 h,hAEC-Exo组HaCaT中p-mTOR和p-Akt蛋白表达量明显高于PBS组(t=4.240、5.586,P＜0.01),2组HaCaT中mTOR和Akt蛋白表达量相近(P＞0.05).培养24 h,DMSO+hAEC-Exo组HaCaT中p-mTOR和p-Akt的蛋白表达量明显高于DMSO+PBS组(t=6.155、8.338,P＜0.01)和LY294002+hAEC-Exo组(t=5.030、3.960,P＜0.01),3组HaCaT中mTOR和Akt蛋白表达量相近(P＞0.05).DMSO+hAEC-Exo组HaCaT培养12、24、36、48、60 h增殖活力为0.78±0.05、1.23±0.07、1.60±0.09、1.86±0.09、2.03±0.08,明显高于DMSO+PBS组的0.46±0.04、0.69±0.07、0.98±0.08、1.16±0.08、1.26±0.11(t=4.376、7.398、8.488、9.766、10.730,P＜0.01);DMSO+hAEC-Exo组HaCaT培养24、36、48、60 h增殖活力明显高于LY294002+hAEC-Exo组的0.96±0.09、1.20±0.08、1.39±0.08、1.55±0.10(t=3.639、5.447、6.605、6.693,P＜0.05或P＜0.01).DMSO+hAEC-Exo组HaCaT划痕后24、48、72 h划痕愈合率明显高于DMSO+PBS组(t=4.003、6.349、7.714,P＜O.01)和LY294002+hAEC-Exo组(t=3.805、4.676、4.067,P＜0.05或P＜0.01).培养48 h,DMSO+hAEC-Exo组HaCaT穿膜数明显多于DMSO+PBS组和LY294002+hAEC-Exo组(t=7.464、1.232,P＜0.01).结论 PI3K-Akt-mTOR通路介导hAEC-Exo促进高糖环境下HaCaT增殖和迁移.

摘要： 目的探讨苯并[a]芘(BaP)对人羊膜上皮细胞水通道蛋白-8(AQP-8)表达的影响及其作用机制。方法分离培养人羊膜上皮细胞建立细胞模型进行机制研究。Western blot检测BaP处理的细胞中AQPs表达与相关信号通路分子表达。结果与对照组[二甲基亚砜(DMSO)溶剂]相比,人羊膜上皮细胞中AQP-8、蛋白激酶A(PKA)以及环磷酸腺苷(cAMP)随着BaP浓度的增加呈剂量依赖性降低(P均<0.01),细胞色素P4501A1(CYP1A1)随着BaP浓度的增加呈剂量依赖性升高(P均<0.01)。当加入cAMP信号通路激活剂毛喉素(Forskolin),AQP-8、PKA以及cAMP表达与BaP处理组相比均升高(P均<0.01)。结论环境污染物BaP通过cAMP-PKA信号通路影响人羊膜上皮细胞AQP-8表达,可能是羊水平衡失调的机制之一。

摘要： 目的 探讨去上皮人羊膜基底膜支架的制备及其在治疗脊髓损伤方面作用及细胞移植后免疫反应情况.方法 采取大鼠脊髓半横断方法建立动物模型后损伤局部直接注射移植细胞,设羊膜上皮细胞移植组、骨髓源间充质细胞移植组、PBS液对照组三组,每组各7只;利用Basso Beattie Bresnahan运动功能评分(BBB评分)评价运动功能恢复情况,用ELISA法测定大鼠血清L-2和L-10水平、免疫组织化学法标记CD3T细胞浸润情况评价移植免疫情况.结果 各组模型鼠在三周之内均得到有效恢复,细胞移植组恢复更明显且羊膜上皮细胞组(HAECs)优于骨髓源间充质细胞组(BMSCs),差异有统计学意义(P<0.05).HAECs组大鼠血清IL-2的水平较BMSCs组明显偏低,IL-10水平则偏高.CD3免疫组化显示各组切片在早期均有CD3'细胞浸润,移植后3个月羊膜上皮细胞组CD3细胞浸润明显少于骨髓源间充质细胞组(P<0.05).结论 去上皮人羊膜基底膜支架在治疗脊髓损伤方面效果显著,HAECs免疫原性较BMSCs弱.

摘要： 目的:探讨人羊膜上皮细胞(hAECs)对COPD大鼠作用机制.rn 方法:运用烟熏法联合气管内滴注脂多糖的制作方法建立COPD大鼠模型.从新鲜人胎盘中提取hAECs并进行鉴定.将清洁级Wistar大鼠24只(雄性)通过随机数字法分为对照组、模型组、hAECs组共3组.用hAECs气管滴入后,进行血清检验;收集肺泡灌洗液及切取肺组织.光镜下观察COPD大鼠肺组织形态学变化及计数平均内衬间隔(MLI)、平均肺泡数(MAN)进行肺气肿评估.应用放免法测定各组大鼠血中白介素8(IL-8)、肿瘤坏死因子(TNF-a).应用ELISA法测定大鼠血及组织中肺表面活性蛋白-D(SP-D)水平及BALF中血管内皮生长因子(VEGF)水平。Western blot法检测肺组织中VEGF和血管内皮生长因子受体( VEGFR2)的蛋白表达。TUNEL法标记观察各组凋亡细胞数。rn 结果:光镜下模型组较对照组肺气肿征明显。hAECs组较模型组减轻。对照组与模型组MLI、MAN比较有显著性差异P

摘要： 目的:探讨人羊膜上皮细胞(hAECs)对COPD大鼠作用机制.rn 方法:运用烟熏法联合气管内滴注脂多糖的制作方法建立COPD大鼠模型.从新鲜人胎盘中提取hAECs并进行鉴定.将清洁级Wistar大鼠24只(雄性)通过随机数字法分为对照组、模型组、hAECs组共3组.用hAECs气管滴入后,进行血清检验;收集肺泡灌洗液及切取肺组织.光镜下观察COPD大鼠肺组织形态学变化及计数平均内衬间隔(MLI)、平均肺泡数(MAN)进行肺气肿评估.应用放免法测定各组大鼠血中白介素8(IL-8)、肿瘤坏死因子(TNF-a).应用ELISA法测定大鼠血及组织中肺表面活性蛋白-D(SP-D)水平及BALF中血管内皮生长因子(VEGF)水平.Western blot法检测肺组织中VEGF和血管内皮生长因子受体(VEGFR2)的蛋白表达.TUNEL法标记观察各组凋亡细胞数.rn 结果:光镜下模型组较对照组肺气肿征明显.hAECs组较模型组减轻.对照组与模型组MLI、MAN比较有显著性差异P＜0.01. hAECs组与模型组MLI、MAN比较有显著性差异P＜0.05.对照组与模型组血中SP-D、IL-8、TNF-α的比较P＜0.01.模型组与hAECs组血中SP-D、IL-8、TNF-α比较P＜0.05,有统计学意义.TUNEL标记后模型组较对照组有较多细胞凋亡.hAECs组细胞凋亡较模型组减轻.hAECs组较模型组的凋亡指数(AI)明显减少P＜0.05.Western blot法检测肺组织VEGF和VEGFR2蛋白表达模型组较hAECs组低.模型组BALF中的VEGF含量低于对照组P＜0.05.hAECs组较模型组VEGF水平增加P＜0.01.rn 结论:hAECs具有抑制COPD炎症因子、减少细胞凋亡作用.

摘要： 本发明涉及一种诱导人羊膜上皮细胞向视网膜色素上皮细胞分化的方法及其在治疗视网膜退行性疾病中的应用，该方法为向人羊膜上皮细胞中添加含有10‑100mM烟酰胺和1‑10μM曲古抑菌素A的诱导组合物，诱导产生的细胞高表达MITF、PMEL17、RPE65、Bestrophin等视网膜色素上皮细胞的典型基因。将利用该方法诱导产生的细胞注射到RCS大鼠视网膜下腔，通过ERG以及眼底检测发现大鼠眼睛电生理信号明显增强，眼底结构明显改善，眼球切片HE染色显示其视网膜厚度明显增加，经过上述方案诱导分化后的细胞经注射后对大鼠的视力有一定程度的恢复。本发明中的诱导复合物能够用于人羊膜上皮细胞向视网膜色素上皮细胞的分化以及治疗视网膜损伤相关的眼部疾病。

摘要： 本发明涉及从人胎盘羊膜制备人羊膜上皮细胞的方法及其应用。具体地说，涉及从胎盘羊膜制备人羊膜上皮细胞的方法，该方法包括以下步骤：将胎盘用基础平衡盐溶液反复冲洗表面，对胎盘进行消毒；用手术镊撕取胎膜外层羊膜置玻璃皿中，用基础平衡盐溶液清洗表面污血，剪碎成，小块；膜小块均匀贴于培养皿，羊膜上皮层朝下，晾干后，添加完全培养基，培养；2天后补液，继续培养；待能看到上皮细胞爬出，去组织，换液继续培养；待出现多处典型的上皮细胞群，局部融合率达90％时，进行传代培养；收获：用胰酶消化后收集细胞，计数，冻存，即得人羊膜上皮细胞。还涉及所制得的人羊膜上皮细胞以及其用途。本发明方法呈现说明书所述优点。

摘要： 本发明提供了一种抑制人羊膜上皮细胞上皮间质转化的方法。具体地，本发明提供了一种在体外抑制人羊膜上皮细胞上皮间质转化(EMT)的方法，包括步骤：(i)在存在式I化合物的培养体系中，培养人羊膜上皮细胞。本发明所筛选到的方法中，所述化合物在抑制人羊膜上皮细胞上皮间质转化方面的具有显著效果，并且其对细胞的细胞活性和增殖能力没有影响，对细胞毒副作用较小；并且，本发明从基因表达水平和蛋白表达水平验证了式I化合物对于人羊膜上皮细胞有维持上皮表型、干细胞特性和抑制间质细胞特性的作用。

摘要： 本发明涉及一种诱导人羊膜上皮细胞向视网膜感光细胞分化的方法及其在治疗视网膜退行性疾病中的应用。本发明提供了一种诱导人羊膜上皮细胞向视网膜感光细胞分化的方法，在适宜的条件下培养人羊膜上皮细胞，加入诱导组合物后诱导人羊膜上皮细胞向视网膜感光细胞分化，诱导产生的细胞高表达Chx10、Rx、Crx、NRL等视网膜感光细胞的典型基因。收集诱导分化后的细胞进行视网膜下腔注射，通过ERG以及OCT检测发现眼睛电生理信号明显增强，眼底结构明显改善，视网膜厚度明显增加，显示可治疗和/或改善视网膜退行性疾病进展状况，在眼科疾病的临床应用上将具有广泛的前景。

摘要： 本发明涉及一种诱导人羊膜上皮细胞向视网膜色素上皮细胞分化的方法及其在治疗视网膜退行性疾病中的应用，该方法为向人羊膜上皮细胞中添加含有10‑100mM烟酰胺和1‑10μM曲古抑菌素A的诱导组合物，诱导产生的细胞高表达MITF、PMEL17、RPE65、Bestrophin等视网膜色素上皮细胞的典型基因。将利用该方法诱导产生的细胞注射到RCS大鼠视网膜下腔，通过ERG以及眼底检测发现大鼠眼睛电生理信号明显增强，眼底结构明显改善，眼球切片HE染色显示其视网膜厚度明显增加，经过上述方案诱导分化后的细胞经注射后对大鼠的视力有一定程度的恢复。本发明中的诱导复合物能够用于人羊膜上皮细胞向视网膜色素上皮细胞的分化以及治疗视网膜损伤相关的眼部疾病。

摘要： 本发明涉及从人胎盘羊膜制备人羊膜上皮细胞的方法及其应用。具体地说，涉及从胎盘羊膜制备人羊膜上皮细胞的方法，该方法包括以下步骤：将胎盘用基础平衡盐溶液反复冲洗表面，对胎盘进行消毒；用手术镊撕取胎膜外层羊膜置玻璃皿中，用基础平衡盐溶液清洗表面污血，剪碎成，小块；膜小块均匀贴于培养皿，羊膜上皮层朝下，晾干后，添加完全培养基，培养；2天后补液，继续培养；待能看到上皮细胞爬出，去组织，换液继续培养；待出现多处典型的上皮细胞群，局部融合率达90％时，进行传代培养；收获：用胰酶消化后收集细胞，计数，冻存，即得人羊膜上皮细胞。还涉及所制得的人羊膜上皮细胞以及其用途。本发明方法呈现说明书所述优点。

摘要： 本发明提供了一种抑制人羊膜上皮细胞上皮间质转化的方法。具体地，本发明提供了一种在体外抑制人羊膜上皮细胞上皮间质转化(EMT)的方法，包括步骤：(i)在存在式I化合物的培养体系中，培养人羊膜上皮细胞。本发明所筛选到的方法中，所述化合物在抑制人羊膜上皮细胞上皮间质转化方面的具有显著效果，并且其对细胞的细胞活性和增殖能力没有影响，对细胞毒副作用较小；并且，本发明从基因表达水平和蛋白表达水平验证了式I化合物对于人羊膜上皮细胞有维持上皮表型、干细胞特性和抑制间质细胞特性的作用。

摘要： 本发明提供一种将人羊膜上皮细胞重编程为诱导性多能干细胞的新方法：利用非脂阳离子转染试剂NeofectTM将携带OCT4、SOX2、KLF4、LIN28、L‑MYC等5个转基因和1个P53基因shRNA共6个重编程因子的多个oriP/EBNA1游离型质粒载体导入hAECs。该方法过程简单、操作方便、费用低廉，且游离型质粒载体是非基因整合型的重编程方法，减少致瘤性；整个重编程过程耗时较短、效率较高；获得的hAE‑iPSCs克隆在无动物源性的TeSRTM‑E8TM‑人重组玻连蛋白体系中扩大培养，为临床应用奠定基础。

摘要： 本发明涉及淋巴细胞增殖抑制领域，更具体地，本发明涉及一种检测人羊膜上皮细胞体外抑制淋巴细胞增殖抑制方法，其包括：人羊膜上皮细胞与染色后的PBMC细胞在含有游离氨基刺激剂存在的条件下在第一完全培养基中进行共培养后，记录淋巴细胞增殖能力。本申请检测人羊膜上皮细胞体外抑制淋巴细胞增殖抑制方法操作简单，数据稳定，相对标准偏差在5％以内，抑制率高达75％，可应用在免疫调节中。

摘要： 本发明公开了人羊膜上皮细胞在制备修复子宫瘢痕细胞制剂中的应用。本发明以大鼠为研究对象，采用子宫全层组织部分切除的方式建立大鼠子宫瘢痕模型，并通过瘢痕原位注射及腹腔注射hAECs进行细胞移植，并收集移植后的子宫瘢痕，进行组织学实验，免疫组织化学染色与蛋白免疫印记(western blot)实验并对移植后子宫瘢痕大鼠进行生育实验。证明了人羊膜上皮细胞对大鼠子宫瘢痕处的受损内膜与肌层具有修复作用，并且可以改善子宫瘢痕部位的生育结局。为今后临床修复子宫瘢痕提供新的有效选择。