ELISA方法

摘要： 目前狂犬病疫苗的效力检验采用NIH法,需要使用狂犬病毒CVS-24毒株进行攻毒试验,具有一定的生物安全风险。为寻求替代NIH法中脑内攻毒试验的方法,研究扩增狂犬病毒G蛋白基因,并将其克隆至大肠杆菌pET-32a载体上进行表达,以该蛋白作包被抗原,摸索试验条件,建立了检测小鼠血清抗体效价的间接ELISA方法。使用此方法与国际公认的荧光抗体病毒中和试验(FAVN)法比较,两者检测结果曲线相关系数为0.986,表明相关性较好,但ELSIA方法更加快捷、简便。本试验建立的间接ELISA方法可用于检测小鼠血清中狂犬病抗体,为狂犬病毒血清抗体测定和单克隆抗体筛选提供依据。

摘要： 为了尽快地将同步快速检测马铃薯6种病毒试纸条推广应用到全国各地的基层单位、马铃薯的种薯种植企业、合作社、种植大户、种子管理部门,以提高马铃薯的质量和产量,进一步完善马铃薯种薯的质量认证体系;将同步快速检测马铃薯6种病毒试纸条与国内外通用的ELISA检测方法进行比较分析。比较分析表明,任何马铃薯种植者可以利用马铃薯病毒快速检测试纸条在田间地头检测马铃薯病毒的发生情况;可以通过肉眼直接判断出病毒检测结果;5~10min即可完成马铃薯病毒的检测;试纸条的检测成本低,灵敏度高。

摘要： 本研究旨在对免疫原性目的蛋白基因A11R优化表达的基础上建立羊痘血清学检测方法,为羊痘防控提供技术支撑。绵羊痘病毒A11R基因经密码子优化后合成目的基因,连入pET-28a(+)载体,并转化至BL21(DE3)大肠杆菌,pET28a-A11R经鉴定后进行诱导表达。结果显示,经密码子优化后的A11R蛋白的表达量显著增加,更易从转化的大肠杆菌裂解上清液和经过复性的包涵体中大量纯化获得。将该蛋白作为包被抗原,通过优化反应条件,建立检测羊痘抗体的间接ELISA方法,并进行特异性和敏感性试验,用该方法与商业化试剂盒对临床样品进行检测。结果显示,A11R蛋白的最佳包被剂量为0.5μg/孔,待检血清最适稀释度为1∶100,家兔抗羊Ig G最适稀释度为1∶20 000。用建立的间接ELISA方法检测小反刍兽疫、羊口疮、口蹄疫的阳性血清,结果均为阴性,无交叉反应,具有良好的特异性。当羊痘阳性血清稀释到1∶1 600时抗体检测仍为阳性,具有较高的敏感性。用该ELISA方法与商业化试剂盒检测临床样品,符合率为98.71%,具有良好的一致性。上述结果表明,本研究建立了基于A11R蛋白的羊痘血清学免疫诊断方法,同时表明了密码子偏好性的优化可显著提高蛋白表达量。

摘要： 本研究以兔抗EBV的IGM和鼠抗EBV的IgG为包被抗体,通过方阵滴定试验确定各项最佳条件,建立了用于检测EBV的双抗体夹心ELASA方法,并通过方法学评测证实了该方法快速、灵敏、可靠,进而为临床检验提供一种操作简便、成本低廉、灵敏高效的EBV检测技术奠定了试验基础.

摘要： 牛结核病IFN-γ夹心ELISA检测试剂盒的原理是基于细胞免疫建立的牛结核病检测方法。结核病阴性牛淋巴细胞经牛型提纯结核菌素(PPDB)刺激后不产生IFN-γ,结核病阳性牛淋巴细胞经PPDB刺激后,产生大量IFN-γ。通过建立经PPDB刺激后的待检牛全血中IFN-γ的ELISA方法,从而实现对牛结核病的准确、快速和高通量检测。

摘要： 为了解猪血清猪瘟抗体和相应唾液中抗体的关系,从云南省境内9个不同规模的猪场,采集60份唾液和对应的180份血液样本,分离血清.通过ELISA方法对血清和唾液中猪瘟抗体水平进行检测,并分析两者之间的Pearson相关.结果表明,血清和唾液中猪瘟抗体水平之间具有显著的正相关性(r=0.768,P<0.05),因此可通过检测猪唾液抗体水平为规模化猪场相关疫病诊断以及免疫水平评估提供参考.%In order to study the correlation of CSFV antibodies between oral fluid and serum,60 oral fluid samples and 180 serum samples were collected from 9 pig feeding farms in Yunnan. The total samples were detected with indirect ELISA, a significant Pearson correlation was found between them(r=0.768, P<0.05). This study provided an important parameter for the diagnosis of diseases and the evaluation of immune level by detecting the antibody in oral fluid.

摘要： 生猪养殖是陕西省石泉县畜牧养殖的主导产业,为掌握石泉县猪群伪狂犬病免疫抗体的情况,2017年在全县随机抽取生猪养殖户174户,其中年出栏生猪1000头以上的猪场22个,血清样品692份;年出栏生猪1000头以下100头以上的养殖场152个,采集血清样品503份,通过ELISA方法检测免疫抗体并对猪场的消毒情况进行调查.结果显示,年出栏量在1000头以上的猪场,猪伪狂犬病阳性合格率在90％～100％,平均阳性率达到96.3％;年出栏生猪1000头以下100头以上的猪伪狂犬病阳性合格率为0.调查发现,规模场均有完善的猪场消毒制度,7 d消毒2次以上的占调查户的95％,搭配2种以上消毒剂使用的占调查户的100％;散养户消毒制度不完善,7 d消毒1次以上的占调查户的15％,而且均长期选用一种消毒剂.因此,建议要经常性进行抗体水平检测,帮助散养户建立和完善消毒制度,从而改善整个养殖环境,提高牲畜抵御疫病的能力.

摘要： 目的：建立长爪沙鼠淋巴细胞脉络丛炎病毒(LCMV)抗体ELISA检测方法,应用于长爪沙鼠携带LCMV的检测. 方法：培养Vero细胞,接种LCMV毒种,制备Vero正常抗原和LCMV特异抗原,滴定酶结合物、正常抗原及特异抗原最佳工作浓度,并进行方法的特异性、敏感性、精密性、稳定性实验. 结果：正常抗原、特异抗原和酶结合物最佳工作浓度分别为0.4μg/ml、10μg/ml和1∶5000;正常抗原、特异抗原批内变异系数分别为6.8％和8.9％,批间平均变异系数分别为9.3％和8.4％;检测灵敏度达到1∶1280;与小鼠仙台病毒(SV)、小鼠呼肠孤病毒3型(Reo3)均无交叉反应.稳定性试验相对偏差小于25％. 结论：建立的ELISA方法特异性、敏感性强,重复性、稳定性好.可用于长爪沙鼠LCMV抗体的检测.

摘要： 目的：建立长爪沙鼠淋巴细胞脉络丛炎病毒(LCMV)抗体ELISA检测方法,应用于长爪沙鼠携带LCMV的检测. 方法：培养Vero细胞,接种LCMV毒种,制备Vero正常抗原和LCMV特异抗原,滴定酶结合物、正常抗原及特异抗原最佳工作浓度,并进行方法的特异性、敏感性、精密性、稳定性实验. 结果：正常抗原、特异抗原和酶结合物最佳工作浓度分别为0.4μg/ml、10μg/ml和1∶5000;正常抗原、特异抗原批内变异系数分别为6.8％和8.9％,批间平均变异系数分别为9.3％和8.4％;检测灵敏度达到1∶1280;与小鼠仙台病毒(SV)、小鼠呼肠孤病毒3型(Reo3)均无交叉反应.稳定性试验相对偏差小于25％. 结论：建立的ELISA方法特异性、敏感性强,重复性、稳定性好.可用于长爪沙鼠LCMV抗体的检测.

摘要： 目的：建立长爪沙鼠淋巴细胞脉络丛炎病毒(LCMV)抗体ELISA检测方法,应用于长爪沙鼠携带LCMV的检测. 方法：培养Vero细胞,接种LCMV毒种,制备Vero正常抗原和LCMV特异抗原,滴定酶结合物、正常抗原及特异抗原最佳工作浓度,并进行方法的特异性、敏感性、精密性、稳定性实验. 结果：正常抗原、特异抗原和酶结合物最佳工作浓度分别为0.4μg/ml、10μg/ml和1∶5000;正常抗原、特异抗原批内变异系数分别为6.8％和8.9％,批间平均变异系数分别为9.3％和8.4％;检测灵敏度达到1∶1280;与小鼠仙台病毒(SV)、小鼠呼肠孤病毒3型(Reo3)均无交叉反应.稳定性试验相对偏差小于25％. 结论：建立的ELISA方法特异性、敏感性强,重复性、稳定性好.可用于长爪沙鼠LCMV抗体的检测.

摘要： 目的：建立长爪沙鼠淋巴细胞脉络丛炎病毒(LCMV)抗体ELISA检测方法,应用于长爪沙鼠携带LCMV的检测. 方法：培养Vero细胞,接种LCMV毒种,制备Vero正常抗原和LCMV特异抗原,滴定酶结合物、正常抗原及特异抗原最佳工作浓度,并进行方法的特异性、敏感性、精密性、稳定性实验. 结果：正常抗原、特异抗原和酶结合物最佳工作浓度分别为0.4μg/ml、10μg/ml和1∶5000;正常抗原、特异抗原批内变异系数分别为6.8％和8.9％,批间平均变异系数分别为9.3％和8.4％;检测灵敏度达到1∶1280;与小鼠仙台病毒(SV)、小鼠呼肠孤病毒3型(Reo3)均无交叉反应.稳定性试验相对偏差小于25％. 结论：建立的ELISA方法特异性、敏感性强,重复性、稳定性好.可用于长爪沙鼠LCMV抗体的检测.

摘要： 根据GenBank已发表粪肠球菌Ace基因(Genbank NO.AF260879)的核苷酸序列设计l对引物,通过PCR扩增ace基因保守序列A片段部分序列,将其克隆到pET-32a(+)裁体中,构建了原核表达载j-pET-32a(+)-Ace,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,成功表达并纯化了重组蛋白;以此重组蛋白作为抗原建立了检测粪肠球菌Ace抗体的间接ELISA方法.经反复试验,确定该间接ELISA的最佳反应条件为:抗原包被浓度为1μg/mL,被检血清稀释度为1:800,1％BSA为封闭液,血清和二抗的作用时间均为60min,底物TMB反应时间为15min,反应的阳性判定值为0.1260交叉试验、批内重复和批间重复试验证明,所建立的间接ELISA方法具有特异性高、重复性好的特点,可用于粪肠球菌Ace蛋白血清抗体的检测.

摘要： 根据GenBank已发表粪肠球菌Ace基因(Genbank NO.AF260879)的核苷酸序列设计l对引物,通过PCR扩增ace基因保守序列A片段部分序列,将其克隆到pET-32a(+)裁体中,构建了原核表达载j-pET-32a(+)-Ace,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,成功表达并纯化了重组蛋白;以此重组蛋白作为抗原建立了检测粪肠球菌Ace抗体的间接ELISA方法.经反复试验,确定该间接ELISA的最佳反应条件为:抗原包被浓度为1μg/mL,被检血清稀释度为1:800,1％BSA为封闭液,血清和二抗的作用时间均为60min,底物TMB反应时间为15min,反应的阳性判定值为0.1260交叉试验、批内重复和批间重复试验证明,所建立的间接ELISA方法具有特异性高、重复性好的特点,可用于粪肠球菌Ace蛋白血清抗体的检测.

摘要： 根据GenBank已发表粪肠球菌Ace基因(Genbank NO.AF260879)的核苷酸序列设计l对引物,通过PCR扩增ace基因保守序列A片段部分序列,将其克隆到pET-32a(+)裁体中,构建了原核表达载j-pET-32a(+)-Ace,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,成功表达并纯化了重组蛋白;以此重组蛋白作为抗原建立了检测粪肠球菌Ace抗体的间接ELISA方法.经反复试验,确定该间接ELISA的最佳反应条件为:抗原包被浓度为1μg/mL,被检血清稀释度为1:800,1％BSA为封闭液,血清和二抗的作用时间均为60min,底物TMB反应时间为15min,反应的阳性判定值为0.1260交叉试验、批内重复和批间重复试验证明,所建立的间接ELISA方法具有特异性高、重复性好的特点,可用于粪肠球菌Ace蛋白血清抗体的检测.

摘要： 根据GenBank已发表粪肠球菌Ace基因(Genbank NO.AF260879)的核苷酸序列设计l对引物,通过PCR扩增ace基因保守序列A片段部分序列,将其克隆到pET-32a(+)裁体中,构建了原核表达载j-pET-32a(+)-Ace,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,成功表达并纯化了重组蛋白;以此重组蛋白作为抗原建立了检测粪肠球菌Ace抗体的间接ELISA方法.经反复试验,确定该间接ELISA的最佳反应条件为:抗原包被浓度为1μg/mL,被检血清稀释度为1:800,1％BSA为封闭液,血清和二抗的作用时间均为60min,底物TMB反应时间为15min,反应的阳性判定值为0.1260交叉试验、批内重复和批间重复试验证明,所建立的间接ELISA方法具有特异性高、重复性好的特点,可用于粪肠球菌Ace蛋白血清抗体的检测.

摘要： 运用ELISA方法对全国22个省份的19270份血样进行了HCV、PRV、PRRSV、PCV2、FMDV、PPV、JEV等病毒性疾病血清抗体的检测,比较了各种病毒性疾病抗体在不同地区的阳性率以及各种抗体随时间变化的特点,且对7种病毒性疾病抗体水平作出了分析,为规模化猪场主要疫病的防控提供了参考依据。

摘要： 运用ELISA方法对全国22个省份的19270份血样进行了HCV、PRV、PRRSV、PCV2、FMDV、PPV、JEV等病毒性疾病血清抗体的检测,比较了各种病毒性疾病抗体在不同地区的阳性率以及各种抗体随时间变化的特点,且对7种病毒性疾病抗体水平作出了分析,为规模化猪场主要疫病的防控提供了参考依据。

摘要： 本发明涉及一种用于ELISA试验中的稀释液，所述的稀释液包括0.0014-0.0017%的溴粉红指示剂，及余量的基础稀释液生理盐水。所述的稀释液是将小牛血清、指示剂溴粉红加入到基础稀释液中，然后再稀释血清或血浆标本。本发明其显色反应较明显，可完全避免检测标本的漏加和错加现象。

摘要： 本发明公开了可溶性I型鸭肝炎病毒3D蛋白在制备ELISA试剂中的应用及其ELISA试剂盒，ELISA试剂盒含有可溶性I型鸭肝炎病毒3D蛋白包被的反应板、酶标抗体、显色液和终止液，将该试剂盒用于检测I型鸭病毒性肝炎抗体具有特异性强、重现性好、敏感度高，与用全病毒作包被抗原的ELISA试剂盒检测的符合率高，可用于临床样品的检测。

摘要： 本发明涉及用于ELISA检测黄曲霉毒素的标准品通用替代物、其制备方法及黄曲霉毒素ELISA检测方法。用于ELISA检测黄曲霉毒素的标准品通用替代物，其特征在于：它为可识别各鼠源抗黄曲霉毒素单克隆抗体的兔抗鼠抗体。它是以鼠源抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体、抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体和抗黄曲霉毒素G1单克隆抗体作为混合抗原，经免疫新西兰长耳大白兔，颈动脉取血，血清亲和纯化后获得。该标准品通用替代物无毒无害，可分别通过替代黄曲霉毒素

摘要： 本发明提供了杂交瘤细胞、洋葱黄矮病毒抗体及其应用、ELISA检测试剂盒和ELISA检测方法，涉及生物技术领域。本发明提供的杂交瘤细胞分泌单抗4G12、单抗6D7、单抗6E10或单抗10C8，能够用于上述单抗的制备。经发明人研究发现，上述单抗均能够特异性的与洋葱黄矮病毒结合，能够用于构建洋葱黄矮病毒的检测方法。本发明提供的洋葱黄矮病毒的ELISA检测方法，包括采用本发明提供的葱黄矮病毒抗体包被酶标板，然后依次进行待测样本孵育、抗体标记的辣根过氧化酶孵育和显色。该方法检测灵敏度高，特异性强，检测准确性好，方便快捷，为葱属植物病害检测、检疫、脱毒提供关键技术支持。

摘要： 本发明公开了检测植物感染番茄黄化曲叶病毒的dot-ELISA和组织印迹ELISA方法及其试剂盒及应用。利用针对番茄黄化曲叶病毒外壳蛋白制备的单克隆抗体，建立配比最优化的斑点酶联免疫吸附法（dotenzyme-linkedimmunosorbentassay，dot-ELISA）及组织印记ELISA的方法，并研发快速检测试剂盒。该发明适用于番茄、辣椒、茄子、烟草、龙葵、曼陀罗等茄科植物。利用该发明可对田间蔬菜样品番茄黄化曲叶病毒感染情况进行调查，检测病毒病的发病率，评估番茄黄化曲叶病毒在田间的发生分布情况及流行爆发趋势。该检测方法灵敏度高、特异性好、耗时短、成本低，为番茄黄化曲叶病毒的快速、大规模检测提供技术支撑。

摘要： 本发明涉及一种用于ELISA试验中的稀释液，所述的稀释液包括0.0014－0.0017％的指示剂，及余量的基础稀释液。所述的稀释液是将小牛血清、指示剂溴粉红加入到基础稀释液中，然后再稀释血清或血浆标本。本发明其显色反应较明显，可完全避免检测标本的漏加和错加现象。

摘要： 本申请涉及生物检测的技术领域，具体公开了一种疫苗糖蛋白含量的ELISA检测方法以及利用该方法快速评价疫苗效力的方法。上述检测方法包括：利用封闭液将病毒单克隆抗体封闭，再加入待测疫苗，并分别加入一抗、酶标记物、显色液、终止液，测出检测结果并计算得出待测疫苗中糖蛋白的含量；所述封闭液包含以下组分：脱脂乳、硬脂酸钠、丁酸香叶酯、缓冲液。通过建立疫苗糖蛋白含量和疫苗效力的关联关系，从而通过检测疫苗糖蛋白含量来评价疫苗效力。因此，本申请提供的评价疫苗效力的方法能够有效降低疫苗效力检测的试验周期和检测成本，同时减少检测过程中试验动物的利用。

摘要： 本发明涉及微流控芯片ELISA检测技术领域，特别涉及ELISA检测微流控芯片和ELISA检测微流控芯片体系以及它们的应用。芯片包括：进样单元(1)、储液单元(2)、反应单元(3)及废液单元(4)；该微流控芯片还包括用于对待检样本定量的第一定量单元(5)，第一定量单元包括第一狭缝(51)、以及由第一狭缝隔开的第一样本腔室(52)和第二样本腔室(53)；第一样本腔室与所述进样单元相通，第二样本腔室与所述废液单元相通。芯片体系由上中下三层组成；中层为所述芯片；上下层用于覆盖封闭中层；上层有与进样单元连接的进样孔，及对应储液单元的让位孔。所述芯片检测过程简单，可对反应样本进行定量，灵敏度高、重复性强。

摘要： 本发明公开了可溶性I型鸭肝炎病毒3D蛋白在制备ELISA试剂中的应用及其ELISA试剂盒，ELISA试剂盒含有可溶性I型鸭肝炎病毒3D蛋白包被的反应板、酶标抗体、显色液和终止液，将该试剂盒用于检测I型鸭病毒性肝炎抗体具有特异性强、重现性好、敏感度高，与用全病毒作包被抗原的ELISA试剂盒检测的符合率高，可用于临床样品的检测。

摘要： 本实用新型涉及微流控芯片ELISA检测技术领域，特别涉及ELISA检测微流控芯片和ELISA检测微流控芯片体系。芯片包括：进样单元(1)、储液单元(2)、反应单元(3)及废液单元(4)；该微流控芯片还包括用于对待检样本定量的第一定量单元(5)，第一定量单元包括第一狭缝(51)、以及由第一狭缝隔开的第一样本腔室(52)和第二样本腔室(53)；第一样本腔室与所述进样单元相通，第二样本腔室与所述废液单元相通。芯片体系由上中下三层组成；中层为所述芯片；上下层用于覆盖封闭中层；上层有与进样单元连接的进样孔，及对应储液单元的让位孔。所述芯片检测过程简单，可对反应样本进行定量，灵敏度高、重复性强。