人工抗原

摘要： 目的 通过化学方法制备麦角酸二乙基酰胺人工抗原并初步应用到胶体金试剂条上。方法 利用碳二亚胺法把化学修饰后的麦角酸二乙基酰胺与载体蛋白连接成为完全抗原,使用质谱法和紫外全波长扫描法验证制备效果,并作为包被原应用于胶体金检测试剂条上。结果 经过330例临床样本测试、60种常用药物交叉反应测试、尿pH和尿比重干扰测试,该抗原能与麦角酸二乙基酰胺抗体在胶体金试剂条上表现出良好的特异性与敏感性。其灵敏度在10ng/ml,特异性为99.06%,敏感性为100%,可在5 min内实现现场尿液快速检测。结论 该方法制备的麦角酸二乙基酰胺人工抗原可用于麦角酸二乙基酰胺胶体金免疫检测方法中。

摘要： 建立检测十二烷基苯磺酸钠(SDBS)鉴别地沟油的荧光免疫检测试纸条,以P-磺基苯甲酸为半抗原合成免疫抗原,免疫家兔获得针对苯磺酸基团的抗体,以P-氨基苯磺酸为半抗原合成成检测抗原,构建荧光免疫层析方法。酶免疫法检测SDBS的50%抑制浓度是55.2 ng/mL,荧光免疫层析法对SDBS的检测限为50 ng/mL,检测油脂中SDBS检测限为20μg/kg,能够胜任鉴别地沟油的检测任务。

摘要： 制备了呋喃唑酮代谢物3-氨基-2-[XCZ1.tif,JZ]唑烷酮(AOZ)的人工抗原,再采用重氮法将AOZ衍生物2-NP-AOZ与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联,制备免疫原2-NP-AOZ-BSA和包被原2-NP-AOZ-OVA,通过SDS-PAGE、MALDI-TOF-MS分析其偶联效果。以2-NP-AOZ-BSA皮下注射免疫SPF级BALB/c小鼠,分别于3次免疫和5次免疫后制备血清,以间接ELISA检测血清中2-NP-AOZ抗体效价,间接竞争ELISA检测血清敏感性,鉴定其免疫原性。发现2-NP-AOZ分别与BSA和OVA偶联成功,获得免疫原2-NP-AOZ-BSA和包被原2-NP-AOZ-OVA;MALDI-TOF-MS分析测得偶联率分别为7.1∶1、3.8∶1;BCA试剂盒检测2-NP-AOZ-BSA、2-NP-AOZ-OVA的浓度分别为4.9、5.2 mg/mL。间接ELISA检测3次免疫后小鼠血清抗体效价均达1∶16000及以上,5次免疫后血清抗体效价均达1∶32000及以上;半数抑制浓度(IC_(50))为34.43 ng/mL,人工抗原2-NP-AOZ-BSA免疫原性优良。本研究成功合成了AOZ完全抗原,为AOZ单克隆抗体制备及快速检测方法的建立奠定了基础。

摘要： 建立筛查苯磺酸表面活性剂的荧光免疫检测卡;以对磺基苯甲酸合成免疫抗原,免疫家兔获得针对苯磺酸基团的多克隆抗体,纯化后标记量子点荧光微球;以对氨基苯磺酸合成检测抗原,构建荧光免疫层析卡(FIAC)。在酶免疫分析中对十二烷基苯磺酸钠的IC_(50)值为55.2 ng/mL,优化的FIAC对十二烷基苯磺酸钠的检测限为100 ng/mL。本方法灵敏、特异、简便,是筛查餐具中残留烷基苯磺酸表面活性剂的有效工具。

摘要： 为制备洛美沙星(LMF)多克隆抗体,采用碳二亚胺(EDC)法,将洛美沙星(LMF)与BSA/OVA进行偶联制备了人工免疫抗原LMF-BSA和包被抗原LMF-OVA。用紫外分光光度法对人工抗原LMF-BSA和LMF-OVA进行鉴定,判断人工抗原合成成功。用LMF-BSA免疫小鼠后,制备多克隆抗体,用方阵滴定法检测包被原在ELISA试验中的最佳工作浓度。选用6种封闭液,进行间接ELISA试验,以P/N大小为标准,选出最佳封闭液,使用建立的ELISA方法检测多抗血清的效价和灵敏度。紫外分光光度法测得LMF-BSA和LMF-OVA相对于BSA和OVA的最大吸收峰均发生偏移,表明人工抗原合成成功。方阵滴定法确定包被原最佳工作浓度为2μg/mL,最佳封闭液为5%猪阴性血清。3只小鼠多抗血清效价和敏感性均较好,多抗血清效价达到1∶12800,半数抑制浓度(IC50)为23.69 ng/mL。表明洛美沙星多克隆抗体制备成功,为洛美沙星单克隆抗体的制备和ELISA检测试剂盒研制等后续试验奠定基础。

摘要： 为制备6-苄基腺嘌呤(6-benzylaminopurine,6-BA)的抗体,利用高碘酸盐法将6-BA的代谢产物6-苄基腺苷(6-benzylaminopurine riboside,6-BAR)分别与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联,制备出免疫抗原6-BAR-BSA和包被抗原6-BAR-OVA.采用紫外扫描(UV)和凝胶电泳(SDS-PAGE)对人工抗原进行初步鉴定.用6-BAR-BSA以背部皮下多点注射的方式免疫4只BALB/c小鼠(编号1—4),免疫剂量50μg/只,间隔21 d,4免后10 d断尾采血制备鼠源多克隆抗体血清.间接ELISA测定血清效价,间接竞争ELISA测定血清敏感性及特异性.结果显示,6-B A人工抗原制备成功,免疫小鼠血清效价均达到1:51200以上,2号小鼠血清效价最高为1:204800,且其对6-BA的半数抑制浓度(IC50)为13.48μg/L,线性范围为0.26～701.45μg/L,与激动素、赤霉素、4-氯苯氧乙酸钠、腐霉利、呋喃苯烯酸钠、BSA、OVA交叉反应率均小于0.01％.综上,成功制备了6-BA人工抗原,并通过动物免疫得到高敏感性、高特异性鼠源多克隆抗体.

摘要： 目的:通过化学方法设计合成得到唑吡坦的半抗原及其人工抗原.方法:唑吡坦小分子连接上经化学修饰的连接臂,并使用碳二亚胺法与载体蛋白偶联合成唑吡坦人工抗原,并通过质谱分析、紫外吸收光光谱扫描技术、SDS-PAGE电泳法及胶体金免疫层析法对抗原进行偶联效果和抗原活性的鉴定.结果:通过上述分析测试,方案中唑吡坦半抗原结构合成成功,并与载体蛋白偶联得到人工抗原;通过临床样本验证,该抗原具有较高的活性,与唑吡坦抗体反应表现出较高的特异性.结论:该方法合成的唑吡坦抗原可用于免疫检测方法,也可作免疫原制备相关抗体.

摘要： 以合成沙丁胺醇(SAL)完全抗原为基础获得针对SAL的多克隆抗体,建立检测SAL的间接竞争ELISA(ic-ELISA)检测方法,为进一步开发SAL快速检测试剂盒奠定基础.为此,分别用混合酸酐法和活化酯法制备SAL-BSA免疫原和SAL-OVA检测原,免疫新西兰大白兔获得SAL多抗血清,建立检测SAL ic-ELISA检测方法.结果显示,成功合成了 SAL-BSA和SAL-OVA,其偶联比分别为17 ∶ 1和6.4 ∶ 1;免疫后兔血清抗体效价为1 ∶ 102 400,所建立ic-ELISA的半数抑制浓度(IC50)为24.84 μg/L,最低检测限(IC10)为0.78 μg/L,线性范围IC20～IC80为 3.16μg/L～80.1 μg/L;精密度(CV)％＜10％,回收率在98％～110％之间.特异性鉴定结果显示,SAL多抗血清除与侧链上含有叔丁基官能团的结构类似物具有较强的交叉反应外,不存在与其他同类分子的交叉反应.以上结果表明,成功建立了检测SAL的ic-ELISA检测方法,为进一步开发SAL快速检测试剂盒奠定了基础.

摘要： 目的:获得敏感性高,特异性强的新型瘦肉精盐酸可乐定(Clonidine hydrochloride,CLO)鼠源多抗血清.方法:以CLO的衍生物盐酸阿可乐定(Apraclonidine hydrochloride,ACLO)为半抗原,采用戊二醛法将ACLO分别与牛血清白蛋白(Bovine serum albumin,BSA)和鸡卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)偶联,合成免疫抗原CLO-BSA和包被抗原CLO-OVA.采用紫外扫描和聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定其偶联效果后,免疫BALB/c小鼠,制备多抗血清.利用间接ELISA和间接竞争ELISA鉴定其免疫学特性.结果:合成的人工抗原免疫效果较好,所获小鼠多抗血清效价均达到1 ∶ 12 800以上,其中3号小鼠敏感性最好,半数抑制质量浓度(IC50)为82.75 ng/mL,与其他几种常见的瘦肉精类药物的交叉反应率均小于0.9％,特异性良好.结论:通过戊二醛法成功合成了高免疫原性的CLO人工抗原,并获得敏感性高,特异性强的CLO鼠源多抗血清.

摘要： 为制备及鉴定1-芘丁酸(1-pyrenebutyric acid)人工抗原.采用碳化二亚胺(EDC)法将1-芘丁酸与牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清白蛋白(OVA)进行偶联,合成人工免疫原PBA-BSA和人工检测抗原PBA-OVA;紫外扫描及SDS-聚丙烯凝胶电泳(SDS-PAGE)结果显示抗原制备成功;鼠源多抗血清的效价均已超过1000,IC50=14.31 ng/mL;与多环芳烃1-芘甲醇、1-芘甲醛、芘的交叉反应率小于14.40％,与菲、萘、苯并芘、BSA以及OVA交叉反应率均小于0.05％.作者成功制备出了PBA-BSA抗原,并且得到了敏感性良好的鼠源多抗血清,为后期单克隆抗体的制备及免疫学快速检测方法的建立奠定基础.

摘要： 目的：建立人工合成柴胡皂苷a的方法,为其进一步的研究奠定基础.方法：通过高碘酸钠法合成SSa-BSA和SSa-PLL,利用薄层色谱法鉴定抗原是否合成成功,ELISA法鉴别抗原是否有免疫原性.结果：经薄层色谱鉴定,SSa抗原合成成功,ELISA法测得合成的人工SSa抗原效价达1:80000.结论：高碘酸钠法合成SSa人工抗原,操作简单,利用合成的抗原可用于进一步建立免疫分析方法.

摘要： 醚菊酯农药被广泛用于防治油菜等十字花科作物害虫,醚菊酯农药人工抗原是研究建立其农残免疫快速检测技术的关键前提.本文利用琥珀酸酐和3-苯氧基苯甲醇,通过酯化反应合成了醚菊酯半抗原4-氧代-4-(3-苯氧基苄氧基)丁酸,并用活泼酯法将其与胎牛血清(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联合成免疫原和检测抗原.用BSA偶联物免疫Balb/c小鼠获得的抗血清,间接非竞争ELISA测得其效价为1∶60000,间接竞争ELISA测得IC50值为4.01μg/mL.为醚菊酯单克隆抗体的制备以及免疫检测技术提供了关键的试剂并奠定了良好的基础.

摘要： 甲萘威农药分子的人工抗原合成是荧光免疫分析技术的关键,用对硝基苯氯甲酸酯活化萘酚并分别与6-氨基己酸、4-氨基丁酸及3-氨基丙酸反应,分别合成了完全保留氨基甲酸酯结构的半抗原6-(1-萘氧基甲酰胺基)己酸(CNH)、4-(1-萘氧基甲酰胺基)丁酸(CNB)、3-(1-萘氧基甲酰胺基)丙酸(CNA),并采用改良的活化酯法与载体蛋白共价连接制备了突出甲萘威结构特征的抗原.通过紫外扫描初步确证偶联成功,并开发MALDI-TOF/MS条件准确地测定了其偶联结合比.测得它们的偶联比分别为15∶1、17∶1和19∶1,得到较好的免疫偶联比.本实验采用的超滤法纯化人工抗原较为高效简捷.

摘要： 本研究以4-硝基邻苯二甲酸和异辛醇为起始原料，经过酯化、还原等步骤合成具有邻苯二甲酸二异辛酯酯(DEHP)结构特征的4-氨基邻苯二甲酸二异辛酯(4-NH2-DEHP)，在加热条件下，将4-NH2-DEHP与丁二酸酐反应生成中间物4-丁二酸单酰氨基-DEHP，然后将其与牛血清白蛋白(BSA)偶联，制备DEHP-BSA人工抗原。利用SDS-PAGE检测，DEHP-BSA蛋白分子量明显大于BSA蛋白，证明偶联成功。利用紫外分光光度法检测DEHP在BSA蛋白上的偶联率为16.8:1。制备的抗原用快速免疫方法免疫小白鼠获得多克隆抗体，经ELISA检测，血清效价可达1:62500,DEHP的最低抑制浓度为5ug/mL。该人工抗原可以用于制备DEHP单克隆抗体。

摘要： 建立灵敏快速的ELISA检测方法对保护人及动物健康意义重大。OTA为小分子物质，其自身无免疫原性，因此合成OTA人工抗原是建立ELISA检测的关键步骤。本研究成功合成了OTA人工抗原，并免疫小鼠得到高效、敏感、特异的多克隆抗体，为进一步筛选OTA单克隆抗体及建立OTA的免疫学检测体系打下了良好的基础。

摘要： 目的：合成中药活性成分芦丁的人工抗原并进行鉴定，为制备芦丁的单克隆抗体，并建立快速检测芦丁的酶联免疫吸附(ELISA)提供技术基础。方法：采用高碘酸钠法，将芦丁与牛血清蛋白(BSA)偶联，用紫外扫描和SDS-PAGE的方法对其进行鉴定。结果：合成的人工抗原芦丁一牛血清蛋白的偶联比为11.27：1，SDS-PAGE显示人工抗原与牛血清蛋白相比后移了。结论：成功的合成了芦丁的人工抗原，可用于建立芦丁的免疫分析方法。

摘要： 以甘胆酸多克隆抗体为基础,建立了一种简便,灵敏的荧光偏振免疫分析方法来检测肝脏疾病患者血清中甘胆酸的含量.其中半抗原通过胆酸与4-氨基丁酸反应合成.成功合成了免疫抗原和荧光标记物,示踪物通过TLC纯化.在最优的实验条件下,荧光偏振免疫分析法的检测范围是0.2-2.8μg mL-1,在缓存溶液中的检测限是0.16μg mL-1.IC50值是0.68μg mL-1,并和九种结构和功能相似的类似物进行了交叉反应实验.通过检测慢性乙型病毒性肝炎,肝硬化,肝硬化失代偿期这三种肝脏疾病患者和健康人血清甘胆酸的含量,其检测结果同时与均相酶联免疫法和ELISA试剂盒进行了比较.实验结果表明荧光偏振免疫分析法是一种快速,便捷的方法来检测血清甘胆酸的含量.

摘要： 异氰酸酯类化合物是重要的职业性致喘物之一,通过体外制备人工抗原,并应用质谱技术对人工抗原进行分析鉴定,从而进一步对异氰酸酯职业暴露人群血清中的特异性抗体进行识别,为异氰酸酯类化合物的免疫检测方法的建立提供基础.本文对异氰酸酯人工制备抗原的方法以及分析鉴定方法进行了综述.

摘要： 选用螯合剂Isothiocyanobenzy-EDTA(ITCBE)络合重金属镉离子,再分别与载体蛋白BSA和KLH相连接,初步制备免疫抗原Cd-ITCBE-KLH和检测抗原Cd-ITCBE-BSA.通过BCA法测定完全抗原浓度,并利用SDS-PAGE电泳、紫外分光光度法及石墨炉原子吸收法对所合成抗原进行初步鉴定;BCA法测出Cd-ITCBE-BSA、Cd-ITCBE-KLH及ITCBE-BSA的实际蛋白浓度依次为:1.426、1.504、0.890mg/ml.SDS-PAGE电泳和紫外分光光度法定性的说明抗原合成成功,石墨炉原子吸收法测得完全抗原中镉离子含量最高可达44.56μg/ml,其他无金属抗原、载体蛋白和HEPES中镉离子含量几乎为零,定量的说明了抗原合成成功.

摘要： 选用螯合剂Isothiocyanobenzy-EDTA(ITCBE)络合重金属镉离子,再分别与载体蛋白BSA和KLH相连接,初步制备免疫抗原Cd-ITCBE-KLH和检测抗原Cd-ITCBE-BSA.通过BCA法测定完全抗原浓度,并利用SDS-PAGE电泳、紫外分光光度法及石墨炉原子吸收法对所合成抗原进行初步鉴定;BCA法测出Cd-ITCBE-BSA、Cd-ITCBE-KLH及ITCBE-BSA的实际蛋白浓度依次为:1.426、1.504、0890mg/ml.SDS-PAGE电泳和紫外分光光度法定性的说明抗原合成成功,石墨炉原子吸收法测得完全抗原中镉离子含量最高可达44.56μg/ml,其他无金属抗原、载体蛋白和HEPES中镉离子含量几乎为零,定量的说明了抗原合成成功.

摘要： 本发明公开了一种普瑞巴林人工半抗原、人工抗原及其制备方法和应用。普瑞巴林人工半抗原的分子结构式如式(Ⅰ)，普瑞巴林人工抗原的分子结构式如式(Ⅱ)。所述应用是所述普瑞巴林人工抗原在制备抗普瑞巴林抗体中的应用。本发明的普瑞巴林人工半抗原最大程度地保留了普瑞巴林的特征结构，且具有可以与载体蛋白发生偶联的活性基团，可作为抗原决定簇；进一步制备获得的普瑞巴林人工抗原可免疫获得亲和力高、灵敏度高、特异性强的抗普瑞巴林抗体，经免疫新西兰白兔获得的免疫血清的效价高达1:90000，可用于对普瑞巴林进行快速、准确的免疫检测和免疫分析。

摘要： 本发明公开了一种巴氯芬人工半抗原、人工抗原及其制备方法和应用。巴氯芬人工半抗原的分子结构式如式(Ⅰ)，巴氯芬人工抗原的分子结构式如式(Ⅱ)。本发明的巴氯芬人工半抗原最大程度地保留了巴氯芬的特征结构，且具有可以与载体蛋白发生偶联的活性基团，可作为抗原决定簇；进一步制备获得的巴氯芬人工抗原可免疫获得亲和力高、灵敏度高、特异性强的抗巴氯芬抗体，经免疫新西兰白兔获得的免疫血清的效价高达1∶80000，可用于对巴氯芬进行快速、准确的免疫检测和免疫分析。

摘要： 本发明公开了一种喹硫平人工半抗原、人工抗原及其制备方法和应用。喹硫平人工半抗原的分子结构式如式(Ⅰ)，喹硫平人工抗原的分子结构式如式(Ⅱ)。本发明的喹硫平人工半抗原最大程度地保留了喹硫平的特征结构，且具有可以与载体蛋白发生偶联的活性基团，可作为抗原决定簇；进一步制备获得的喹硫平人工抗原可免疫获得亲和力高、灵敏度高、特异性强的抗喹硫平抗体，经免疫Balb/c小鼠获得的免疫腹水的效价高达1∶78000，可用于对喹硫平进行快速、准确的免疫检测和免疫分析。

摘要： 本发明提供了一种制备基于新型双功能螯合剂DOTA的重金属铅的人工抗原的合成方法，以2‑S‑(4‑氨基苯）‑1,4,7,10四氮杂环壬烷‑1,4,7,10‑四乙酸为螯合剂，将铅离子螯合剂复合物与载体蛋白牛血清白蛋白BSA或人血清白蛋白KHL偶联，制备人工抗原。该方法在原来传统基础上增加了采用硼氢化钠还原步骤，提高了偶联效率。本发明还提供DOTA在制备重金属铅的人工抗原上的应用。

摘要： 本发明公开了一种重金属镉人工抗原的制备方法，以2‑S‑(4‑氨基苯）‑1，4，7三氮杂环壬烷‑1，4，7‑三乙酸（p‑NH2‑Bn‑NOTA，简称NOTA）为螯合剂，将镉离子螯合剂复合物与载体蛋白牛血清白蛋白BSA或鸡卵清蛋白OVA偶联，制备人工抗原，该方法在原来传统基础上增加了丙二酸二乙酯处理步骤，提高了偶联效率与抗血清效价。本发明还公开了NOTA在制备重金属镉人工抗原试剂中的应用。

摘要： 本发明公开了一种重金属汞人工抗原的制备方法，以2‑S‑(4‑氨基苯）‑1，4，7，10四氮杂环壬烷‑1，4，7，10‑四乙酸（p‑NH2‑Bn‑DOTA，简称DOTA）为螯合剂，将汞离子螯合剂复合物与载体蛋白牛血清白蛋白BSA或鸡卵清蛋白OVA偶联，制备人工抗原，该方法在原来传统基础上增加了丙二酸二乙酯处理步骤，提高了偶联效率与抗血清效价。本发明还公开了DOTA在制备重金属汞人工抗原试剂中的应用。

摘要： 本发明属于生物化工技术领域，具体涉及一种氟胺酮人工半抗原、人工抗原及其制备方法和应用。本发明的氟胺酮人工半抗原最大程度地保留了氟胺酮的特征结构，且经过化学修饰具有可以与载体蛋白发生偶联的活性基团，可获得氟氨酮人工抗原；进一步制备获得的氟胺酮人工抗原可免疫获得亲和力高、灵敏度高、特异性强的抗氟胺酮抗体；该抗原抗体可用于免疫层析技术，具有灵敏度高、特异性强、易于操作、经济快速等优点，可用于氟氨酮滥用的初筛。

摘要： 本发明公开了一种利他林人工半抗原、人工抗原及其制备方法和应用。利他林人工半抗原的分子结构式如式（Ⅰ），利他林人工抗原的分子结构式如式（Ⅱ）。所述应用是所述利他林人工抗原在制备抗利他林抗体中的应用。本发明的利他林人工半抗原最大程度地保留了利他林的特征结构，且具有可以与载体蛋白发生偶联的活性基团，可作为抗原决定簇；进一步制备获得的利他林人工抗原可免疫获得亲和力高、灵敏度高、特异性强的抗利他林抗体，经免疫新西兰白兔获得的多克隆抗体，可用于对利他林进行快速、准确的免疫检测和免疫分析。

摘要： 本发明公开了一种东莨菪碱人工半抗原、人工抗原及其制备方法和应用。东莨菪碱人工半抗原的分子结构如式（Ⅰ），东莨菪碱人工抗原的分子结构如式（Ⅱ）。本发明的东莨菪碱人工半抗原最大程度的保留了东莨菪碱的特征结构，且在远离这些主要特征结构的端位上引入了能与载体蛋白发生偶联的活性基团，可作为抗原决定簇；进一步制备获得的东莨菪碱人工抗原可进行小鼠免疫获得高亲和力、高灵敏度、强特异性的抗东莨菪碱单克隆抗体，可用于对东莨菪碱进行快速、准确的免疫检测和免疫分析。

摘要： 发明公开了一种曲唑酮人工半抗原、人工抗原及其制备方法和应用。曲唑酮人工半抗原的分子结构式如式（Ⅰ），曲唑酮人工抗原的分子结构式如式（Ⅱ）。所述应用是所述曲唑酮人工抗原在制备抗曲唑酮抗体中的应用。本发明的曲唑酮人工半抗原最大程度地保留了曲唑酮的特征结构，且具有可以与载体蛋白发生偶联的活性基团，可作为抗原决定簇；进一步制备获得的曲唑酮人工抗原可免疫获得亲和力高、灵敏度高、特异性强的抗曲唑酮抗体，经免疫新西兰白兔获得的免疫血清的效价很高，可用于对曲唑酮进行快速、准确的免疫检测和免疫分析。