黄瓜绿斑驳花叶病毒

摘要： 近日,中国农业科学院植物保护研究所作物病原生物功能基因组创新团队与浙江大学生物技术研究所等单位联合研制了针对1种农作物一类病毒(南方水稻黑条矮缩病毒)和3种检疫性植物病毒(玉米褪绿斑驳病毒、番茄褐色皱纹果病毒和黄瓜绿斑驳花叶病毒)的dot ELISA(斑点酶联免疫吸附测定)快速检测试剂盒。

摘要： 黄瓜绿斑驳花叶病毒(cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)在世界范围内分布广泛,主要侵染葫芦科作物,给葫芦科作物的商品化种植、生产带来难以估量的经济损失。本文分析了影响CGMMV快速扩散流行的主要因素,总结了以种子消毒为主的疫区和以防传入为重点的非疫区CGMMV防治策略,介绍了血清学和分子生物学等主要CGMMV检测方法,比较了现有各种防治方法的优劣,展望了新型抗病毒药剂与基因工程技术在CGMMV防治上的应用前景。

摘要： 黄瓜绿斑驳花叶病毒(CGMMV)是一种检疫性植物病毒,种传和农事操作是其主要传播途径,因此种子和种苗的早期检测尤为重要。鉴于种子检测的特殊性及幼苗病毒含量低的特点,本试验通过制备CGMMV单克隆抗体,结合特异性引物,建立了黄瓜绿斑驳花叶病毒的IC-RT-PCR早期检测方法,比较了IC-RT-PCR与DAS-ELISA和RT-PCR方法的特异性、灵敏度,并对实际检测效果进行了评价。在操作程序上,IC-RT-PCR法与DAS-ELISA法一样简便,但灵敏度远大于DAS-ELISA。IC-RT-PCR与RT-PCR均可检出20~25 ng种子上的病毒,且特异性相当,而DAS-ELISA法只可检出10μg种子上的病毒。综上所述,IC-RT-PCR法可简便有效地应用于种子和种苗上CGMMV的检测,为病毒防治的早期干预提供技术支撑。

摘要： 日前,农业农村部批准发布一批植保农药类国家农业行业标准,包括新制定的《草地贪夜蛾测报技术规范》《草地贪夜蛾防控技术规范》《猕猴桃主要病虫害防治技术规程》,新修订的《稻水象甲防治技术规范》《黄瓜绿斑驳花叶病毒检疫检测与鉴定方法》等,均将自2021年11月1日起实施。

摘要： 以不同种类葫芦科瓜菜(葫芦、南瓜、黄瓜和西瓜)为材料,研究了干热处理对不同种类葫芦科瓜菜种子活力的影响.结果表明,干热处理会降低种子的活力,温度越高,影响越大,其影响程度会因种类不同、品种不同而存在差异;干热处理会缩短种子的保存时间,处理后的种子不宜长时间保存.

摘要： 近曰,广东省农业农村厅植保植检处公告2019年农业植物检疫性有害生物年报。2019年,广东省发生全国农业植物检疫性有害生物有8种,包括红火蚁、柑橘黄龙病、柑橘溃疡病、香蕉枯萎病4号小种、水稻细菌性条斑病、稻水象甲、黄瓜绿斑驳花叶病毒和扶桑绵粉蚧;省补充检疫性有害生物2种,分别是花生黑腐病和黄瓜花叶病毒香蕉株系。

摘要： 黄瓜绿斑驳花叶病毒Cucumber green mottle mosaic virus (CGMMV)是葫芦科作物的重要检疫性病毒.本研究以田间自然感病的西瓜叶片为试材,采用RT-PCR获得该病毒(CGMMV-LNYK)基因组全长(登录号MG745849),以pBluescript Ⅱ SK(-)为载体,分别克隆其所编码的4段基因,并采用人工接种验证它们的体外侵染活性.结果 表明:该病毒与韩国分离物KW(登录号AF417242)亲缘关系最近,相似度达99.8％,并成功克隆了CGMMV-LNYK编码的4段基因,分别记为RNA1～RNA4.经人工接种,发现RNA1和RNA4能侵染葫芦,表现明显花叶症状,与该病毒接种葫芦症状一致,且接种RNA1后的症状较RNA4明显,4种RNA混合接种症状最为明显,经RT-PCR检测,发病植株可扩增到与接种的RNA大小相等的片段.

摘要： 黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)是我国重要的检疫性病毒.2018年宁夏回族自治区中卫市种植的西瓜部分发生了严重倒瓤,通过实地调研,对发病西瓜植株的叶片和果实症状进行现场观察,初步怀疑为CGMMV侵染所致.对采集的3份西瓜病样采用ELISA(Enzyme Linked Immuno-Sorbnent Assay)和RT-PCR (Reverse Transcription PCR)检测,以及克隆的外壳蛋白基因(CP)序列分析,结果表明,3份样品均感染了CGMMV,证实宁夏回族自治区西瓜发生倒瓤是由CGMMV引起,这也是首次发现CGMMV在宁夏发生.

摘要： 随着西甜瓜等高效经济作物种植面积进一步扩大,黄瓜绿斑驳花叶病毒、瓜类果斑病菌随西甜瓜等葫芦科作物种苗调运传入和扩散危害的风险加大,必须采取有效综合防控措施。一、种子处理,一是干热处理。将西甜瓜等作物及其砧木种子(含水量4%以下)置于72~80°C干热条件下恒温处理72小时,降温时需在干燥箱中回温到50°C和35°C,分别放置24小时。

摘要： 用磁性纳米颗粒标记黄瓜绿斑驳花叶病毒的兔多克隆抗体建立了简便快速的磁免疫层析试纸条检测方法.该方法检测提纯病毒的灵敏度为0.1μg/mL,检测葫芦病汁液可稀释10000倍(重量/体积).试纸条和黄瓜绿斑驳花叶病毒具有特异性反应,和同属的烟草花叶病毒、番茄花叶病毒、辣椒轻斑驳病毒和齿兰环斑病毒,未出现交叉反应.该试纸条可用于田间病害检测和诊断.

摘要： 根据黄瓜绿斑驳花叶病毒不同分离物外壳蛋白基因(CP)的保守序列，设计合成引物和TaqMan荧光探针，并与纳米磁珠(MNP)提取植物病毒RNA方法相结合，建立了黄瓜绿斑驳花叶病毒的MNP Real-time RT-PCR检测方法。结果表明，MNP Real-time RT-PCR方法检测灵敏度比传统RT-PCR高约1000倍，比MNP RT-PCR高约100倍，比传统Real-time RT-PCR高约10倍，并且具有快速、简便、准确的优点，适合于CGMMV的快速、高效检测。

摘要： 根据黄瓜绿斑驳花叶病毒不同分离物外壳蛋白基因(CP)的保守序列,设计合成引物和TaqMan荧光探针,并与纳米磁珠(MNP)提取植物病毒RNA方法相结合,建立了黄瓜绿斑驳花叶病毒的MNP Real-time RT-PCR检测方法。结果表明,MNP Real-time RT-PCR方法检测灵敏度比传统RT-PCR高约1000倍,比MNP RT-PCR高约100倍,比传统Real-time RT-PCR高约10倍,并且具有快速、简便、准确的优点,适合于CGMMV的快速、高效检测。

摘要： 本文对辽宁省CGMMV有代表性的各分离物进行了全序列分析,同时将其与GeneBank里已知序列进行了同源性比较.通过构建TMV组病毒核昔酸的多聚系统发育树，结果表明辽宁省各分离物同源性高，与韩国该病毒的西瓜分离物亲缘关系最近。据了解，辽宁盖州地区曾经大量使用从韩国进口的葫芦种子作为西瓜生产的砧木。因此辽宁CGMMV盖州分离物极有可能来自于韩国，在盖州大面积发生后又传至省内其他西瓜种植区。与日本的SH株系、韩国的甜瓜分离物及印度delhi地区的分离物从系统发育树来看，也有极近的亲缘关系。但与俄罗斯及西班牙的该病毒的分离物亲缘关系稍远。

摘要： 本文对辽宁省CGMMV有代表性的各分离物进行了全序列分析,同时将其与GeneBank里已知序列进行了同源性比较.通过构建TMV组病毒核昔酸的多聚系统发育树，结果表明辽宁省各分离物同源性高，与韩国该病毒的西瓜分离物亲缘关系最近。据了解，辽宁盖州地区曾经大量使用从韩国进口的葫芦种子作为西瓜生产的砧木。因此辽宁CGMMV盖州分离物极有可能来自于韩国，在盖州大面积发生后又传至省内其他西瓜种植区。与日本的SH株系、韩国的甜瓜分离物及印度delhi地区的分离物从系统发育树来看，也有极近的亲缘关系。但与俄罗斯及西班牙的该病毒的分离物亲缘关系稍远。

摘要： 本文对辽宁省CGMMV有代表性的各分离物进行了全序列分析,同时将其与GeneBank里已知序列进行了同源性比较.通过构建TMV组病毒核昔酸的多聚系统发育树，结果表明辽宁省各分离物同源性高，与韩国该病毒的西瓜分离物亲缘关系最近。据了解，辽宁盖州地区曾经大量使用从韩国进口的葫芦种子作为西瓜生产的砧木。因此辽宁CGMMV盖州分离物极有可能来自于韩国，在盖州大面积发生后又传至省内其他西瓜种植区。与日本的SH株系、韩国的甜瓜分离物及印度delhi地区的分离物从系统发育树来看，也有极近的亲缘关系。但与俄罗斯及西班牙的该病毒的分离物亲缘关系稍远。

摘要： 本文对辽宁省CGMMV有代表性的各分离物进行了全序列分析,同时将其与GeneBank里已知序列进行了同源性比较.通过构建TMV组病毒核昔酸的多聚系统发育树，结果表明辽宁省各分离物同源性高，与韩国该病毒的西瓜分离物亲缘关系最近。据了解，辽宁盖州地区曾经大量使用从韩国进口的葫芦种子作为西瓜生产的砧木。因此辽宁CGMMV盖州分离物极有可能来自于韩国，在盖州大面积发生后又传至省内其他西瓜种植区。与日本的SH株系、韩国的甜瓜分离物及印度delhi地区的分离物从系统发育树来看，也有极近的亲缘关系。但与俄罗斯及西班牙的该病毒的分离物亲缘关系稍远。

摘要： 本文于西瓜定植期对西瓜苗人工接种,于授粉后7～35d每隔7d取样一次,系统研究了大棚西瓜感染CGMMV后对其果实内丙酮酸含量极其代谢积累的有毒物质含量的影响.研究结果表明:接种CGMMV后可导致西瓜果实内丙酮酸含量大量积累，授粉后21d时接种处理丙酮酸含量达健康对照的2.51倍。授粉后35d时达健康对照4.09倍，且授粉后35d丙酮酸含量仍直线上升。也就是说接种CGMMV对西瓜植株果实均造成了不可逆的伤害。一方面丙酮酸本身就会对果实的品质造成伤害，另一方面丙酮酸可为乳酸、乙醇、乙醛的合成提供原料，给果实带来更大伤害。

摘要： 本文于西瓜定植期对西瓜苗人工接种,于授粉后7～35d每隔7d取样一次,系统研究了大棚西瓜感染CGMMV后对其果实内丙酮酸含量极其代谢积累的有毒物质含量的影响.研究结果表明:接种CGMMV后可导致西瓜果实内丙酮酸含量大量积累，授粉后21d时接种处理丙酮酸含量达健康对照的2.51倍。授粉后35d时达健康对照4.09倍，且授粉后35d丙酮酸含量仍直线上升。也就是说接种CGMMV对西瓜植株果实均造成了不可逆的伤害。一方面丙酮酸本身就会对果实的品质造成伤害，另一方面丙酮酸可为乳酸、乙醇、乙醛的合成提供原料，给果实带来更大伤害。

摘要： 本文于西瓜定植期对西瓜苗人工接种,于授粉后7～35d每隔7d取样一次,系统研究了大棚西瓜感染CGMMV后对其果实内丙酮酸含量极其代谢积累的有毒物质含量的影响.研究结果表明:接种CGMMV后可导致西瓜果实内丙酮酸含量大量积累，授粉后21d时接种处理丙酮酸含量达健康对照的2.51倍。授粉后35d时达健康对照4.09倍，且授粉后35d丙酮酸含量仍直线上升。也就是说接种CGMMV对西瓜植株果实均造成了不可逆的伤害。一方面丙酮酸本身就会对果实的品质造成伤害，另一方面丙酮酸可为乳酸、乙醇、乙醛的合成提供原料，给果实带来更大伤害。

摘要： 提供对ToBRFV具有抗性的番茄植物。本发明的烟草花叶病毒组抗性番茄植物中，SlTOM1a基因、SlTOM1c基因和SlTOM1d已丧失功能。

摘要： 本发明公开CGMMV基因介导转基因烟草方法。针对现有技术不能利用重组质粒构建含CGMMV来源基因片段的具有发卡结构的ihpRNAi植物表达载体并能成功获得抗性烟草的方法的缺陷，本发明首先提供重组质粒pHellsgate2‑N及其构建方法。该重组载体是将CGMMV基因片段与干涉载体pHellsgate2进行重组反应构建获得。本发明还由该重组质粒转化得到的烟草干涉表达ihpRNAi载体及其构建方法。发明还提供CGMMV Helicase基因、完整外壳基因在病毒基因介导抗性烟草培育中的应用，以及经筛选得到的目的片段He1、He2、He3。

摘要： 本发明涉及一种基于单克隆抗体的黄瓜绿斑驳花叶病毒快速检测试纸条，可用于甜瓜、黄瓜等作物上黄瓜绿斑驳病的田间快速筛查。其包括底板，底板的一面自上而下依次黏贴吸水板、检测垫、金标垫和样品垫，相邻各垫在连接处交叠连接。所述检测垫为硝酸纤维素膜，该膜自上而下设计1条质控线和1条检测线；所述质控线包被有兔抗鼠IgG；所述检测线包被有用于捕获黄瓜绿斑驳花叶病毒的单克隆抗体2C9；所述金标垫为玻璃纤维素膜，喷涂有纳米金标记的用于识别被检测线捕获的黄瓜绿斑驳花叶病毒的单克隆抗体4D4。试纸条操作简单，灵敏度高，稳定性强。

摘要： 本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及LsWD基因在黄瓜绿斑驳花叶病毒侵染下瓠瓜叶片或果实qRT‑PCR分析中作为内参基因的用途。本发明利用瓠瓜转录组数据，在全基因组水平上比较了基因的表达水平和稳定性，并通过使用LsIPT或LsDdRP基因进行验证，确定所揭示的LsWD基因在黄瓜绿斑驳花叶病毒侵染下瓠瓜叶片和果实中均能稳定表达，是瓠瓜在黄瓜绿斑驳花叶病毒侵染下利用qRT‑PCR技术检测基因表达分析的可靠内参基因。本发明首次将LsWD基因作为内参基因用于瓠瓜基因表达分析，解决了现有瓠瓜定量PCR检测中没有内参基因的现状。

摘要： 本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及LsH3基因在黄瓜绿斑驳花叶病毒侵染下瓠瓜叶片或果实qRT‑PCR分析中作为内参基因的用途。本发明利用瓠瓜转录组数据，在全基因组水平上比较了基因的表达水平和稳定性，并通过使用LsIPT或LsDdRP基因进行验证，确定所揭示的LsH3基因在黄瓜绿斑驳花叶病毒侵染下瓠瓜叶片和果实中均能稳定表达，是瓠瓜在黄瓜绿斑驳花叶病毒侵染下利用qRT‑PCR技术检测基因表达分析的可靠内参基因。本发明首次将LsH3基因作为内参基因用于瓠瓜基因表达分析，解决了现有瓠瓜定量PCR检测中没有内参基因的现状。

摘要： 本发明公开了一种黄瓜绿斑驳花叶病毒的检测方法和引物对。其采用SYBR Green I实时荧光RT‑PCR检测。所述引物对为CGMMV‑194F：5’‑GTTTTCGGTAGTCTGGTCAGAGGCTA‑3’和CGMMV‑194R：5’‑GGATTCGAACCCCTTGCAGAATTAC‑3’组成的引物对。本发明采用SYBR Green I实时荧光RT‑PCR方法检测CGMMV，使得检测灵敏度达到阿克级，比Taqman探针实时荧光RT‑PCR法的灵敏度提高了2个量级，且无需电泳和测序确认，可用于基层实验室黄瓜绿斑驳花叶病毒快速鉴定。

摘要： 本发明公开黄瓜绿斑驳花叶病毒基因间隔区域在抗性烟草培育中的应用。针对现有技术未公开对CGMMV基因间隔区域的注释，也没有构思过从间隔区域筛选目的片段用于抗性烟草培育，本发明提供CGMMV基因间隔区域在介导抗性烟草培育中的应用。本发明筛选出三条CGMMV基因间隔区域片段IR1、IR2、IR3，同时构建嵌合结构IMC，均能成功用于植物干涉载体实现抗性烟草培育。本发明还提供利用这些目的片段介导转基因抗性烟草的完整技术方案。

摘要： 本发明提供了一种基于CRISPR技术检测黄瓜绿斑驳花叶病毒或黄瓜绿斑驳花叶病毒病的方法，所述方法包括利用gRNA、Cas蛋白和单链核酸检测器进行检测的步骤；本发明通过对gRNA的筛选和优化，提高了检测效率，具有广阔的应用前景。

摘要： 本发明属于植物保护领域，涉及防治黄瓜绿斑驳花叶病毒的方法，特别是指褪黑素在防治黄瓜绿斑驳花叶病毒中的应用及协同褪黑素增强其防治效果的方法。实施步骤为：在植物幼苗，根部浇灌或叶面喷施褪黑素溶液，每天一次，共处理3天。本申请还公开了一种协同褪黑素增强对黄瓜绿斑驳花叶病毒防治效果的方法，通过沉默基因NbCRISP1实现显著增强褪黑素对黄瓜绿斑驳花叶病毒的防治作用。本申请以无毒大分子褪黑素和CGMMV之间的关系为研究对象，明确了褪黑素在防治CGMMV中的作用，拓展了褪黑素在防治植物病害中的应用。

摘要： 本发明属于植物检疫鉴定领域，公开了一种用于检疫鉴定黄瓜绿斑驳花叶病毒的种子粉基体标准样品制备方法，先后经过种子批中感染的CGMMV野生株鉴定、确定原料重量、低温研磨、筛分处理、搅拌混匀、分装储存及性能评价、溯源性描述及联合定值，得到的CGMMV种子粉基体标准样品的均匀性、稳定性及不确定度适中，在一定的时间内CGMMV特性量值不会随着时间的变化而产生变化，样品的均匀性和稳定性符合国家标准样品的要求，填补了我国目前没有该类种子粉基体标准样品的空白，可以用于种子及制品中CGMMV检疫鉴定方法验证、检测试剂盒评价、实验室检测过程质量控制、实验室能力验证和比对、人员能力考核，提高植物检疫鉴定实验室的检疫检测水平。