D-对羟基苯甘氨酸

摘要： D-对羟基苯甘氨酸(D-HPG)是半合成青霉素的一种必需医药中间体。由于生物酶法属于环境友好的合成技术,酶法逐渐成为工业领域中化学合成法的理想替代方法。为了实现D-HPG酶法生产的工业规模化,首先构建了D-海因酶(DHD)和D-氨甲酰水解酶(DCB)的重组菌,并使目的蛋白可溶性表达。然后,基于单因素实验考察诱导剂浓度、温度、pH、碳源和氮源等条件对DHD与DCB重组菌酶活性的影响,进一步使用响应面法对限速酶DCB培养基成分进行优化。优化后最佳培养基配方为:淀粉和葡萄糖分别为DHD与DCB重组菌的碳源,大豆蛋白胨为氮源,添加阿拉伯糖为诱导剂。5 L发酵罐的发酵结果为:获得DHD菌体(53.4±0.75)g/L,DCB菌体(46.7±0.96)g/L。最后对双酶催化D-HPG条件进行优化,产率可达(92.43±3.76)%,为工业化生产D-对羟基苯甘氨酸提供了理论和技术支持。

摘要： 为了开发一种成本更低、安全可控、环境友好的D-对羟基苯甘氨酸生产工艺,提出了一种以水为溶剂,质量分数为75％的磷酸为拆分剂,水杨醛为消旋催化剂的新方法对DL-对羟基苯甘氨酸进行拆分.考察发现当n(75％磷酸):n(DL-对羟基苯甘氨酸)=1.1时拆分效果最好,当n(水杨醛):n(L-对羟基苯甘氨酸)=0.20且消旋时间为5 h时最适宜,当反应液pH=6.0时产品收率及质量最佳.该工艺制备的产品质量分数为99.6％,比旋光度为-158.9°,酸吸光值为0.009,碱吸光值为0.010,符合工业化生产要求.

摘要： 该文通过生物酶法合成中对酶反应的各项条件比色法的测定,结果表明,在温度40°C、pH值8.5、底物浓度4％、酶浓度80mg/mL条件下,酶活力最高,金属离子Co2+、Mn2+和Ni2+对酶活力有促进作用,从而使酶反应的转化率和产品的收率达到最大化,进而可以运用于其工业化的生产.

摘要： [目的]构建异源D-海因酶和N-氨甲酰水解酶共表达的重组枯草芽孢杆菌,探讨其作为全细胞催化剂合成D-对羟基苯甘氨酸的可行性.[方法]采用Paco表达盒表达D-海因酶基因hyd或sd1,采用PAE表达盒表达N-氨甲酰水解酶基因adc.分别以质粒pHP 13和pUB110为载体,构建D-海因酶和N-氨甲酰水解酶共表达质粒pHCS、pHCY和pUCS.在受体菌中整合表达了acoR和sigL基因,敲除了skf和sdp基因.将共表达质粒分别转化不同的受体菌,通过测定全细胞催化活性,表征D-海因酶和N-氨甲酰水解酶共表达的效果.[结果]带有质粒pHCY和pHCS的重组菌,全细胞催化活性分别为0.21 U/mL和0.31 U/mL.整合表达acoR和sigL基因以及高拷贝质粒pUCS,使全细胞催化活性达到1.0 U/mL.[结论]异源D-海因酶和N-氨甲酰水解酶在枯草芽孢杆菌中能够正确表达.基因拷贝数、acoR和sigL基因表达水平,及Skf和sdp基因缺失对重组菌的催化活性具有显著影响.

摘要： 为获取全新来源并具有潜在高性能的海因酶,本研究通过对海洋沉积物进行以D-对羟基苯海因作为唯一氮源的选择培养基对潜在菌株进行初步筛选,然后通过双层琼脂法和微孔快速筛选法对初筛菌株进行复筛,并结合分子生物学筛选方法进行终筛,最终得到桔橙小单胞菌(Micromonospora aurantiaca,GenBank登录号:FJ547135.1)、金色链霉菌(Streptomnyces aureofaciens,GenBank登录号:AB326923.1)、桑氏链霉菌(Streptomyces sampsonii,GenBank登录号:GU238264.1)和链霉菌7-145(Streptomyces sp.7-145,GenBank登录号:JQ782979.2)4株产D-海因酶的阳性链霉菌.用兼并引物扩增4株阳性菌中的D-海因酶表达序列,转化大肠杆菌(Escherichia coli),并构建表达相应D-海因酶的工程菌株E.coli S1、E.coli S14、E.coli S29和E.coliS 145,提纯4种D-海因酶,并测定酶的酶活和动力学参数.结果显示,链霉菌7-145菌株中表达的海因酶活性最高,比活力为9.7 U/mg,催化速度常数Kcat=3.2x106/s,Km=9.5 mmol/L.最后利用Swiss-model软件对其进行在线同源模建和Caver Analyst软件对链霉菌7-145菌株来源的海因酶的催化通道进行结构模拟分析.模拟分析结果显示,本研究中D-海因酶的主要催化通道Tunnel 1长度为9.1(A),瓶颈氨基酸残基为59位的组氨酸、181位的组氨酸和313位的谷氨酸,瓶颈半径为2.18 (A);潜在的催化通道Tunnel 2长度为13.6(A),瓶颈氨基酸为62位的苏氨酸、93位的天冬酰胺和107位的色氨酸,瓶颈半径为1.52(A).如果对Tunnel 2通道中的62位的苏氨酸、93位的天冬酰胺和107位的色氨酸进行定点突变,有望开发出一种性能更优的D-海因酶.本研究提供了一种全新的海因酶阳性菌筛选体系,通过计算机模拟手段能够更直观了解海因酶的催化机制,为进一步获得性能更优的海因酶奠定基础.

摘要： 从菌中的酶含量和酶活力两方面对微生物酶催化水解的最佳条件进行了探究.结果显示,通过对试验菌种生长曲线的测定,发现该菌在22 h之内为对数期,22～36 h为稳定期,36 h后进入衰退期.在此基础上检测前期诱导培养的菌种内的酶含量为3.6％,然后对该菌破胞后的酶粗提物和不破胞的菌体(全细胞)进行了不同温度和pH值梯度下的水解情况对比,得到两者酶活力最高时的最佳温度和pH值,前者最佳温度为40°C,pH值为8,后者则最佳温度为40°C,pH值为6.最后通过对比得出,酶粗提物的水解效果比全细胞的更佳.

摘要： 目的 对丙二醇头孢曲嗪的杂质进行结构确证.方法 高效液相色谱法(HPLC)对有关物质进行初步定性分析;经制备液相制备杂质Ⅰ,经定向合成及制备液相制备杂质Ⅱ,采用UV、IR、MS、NMR等分析手段对各杂质进行综合结构解析.结果 杂质Ⅰ经结构解析为D-对羟基苯甘氨酸,杂质Ⅱ为头孢曲嗪的差向异构体.结论 头孢曲嗪的杂质结构确证对丙二醇头孢曲嗪的质量控制具有重要意义.

摘要： Through the sieve bacteria get one natural bacteria LLV-6,In inducers induced effect after using the DL-Hydroxyphenyl Hydantoin(DL-HPH) as the substrate by D-hydantoinase(HYD)and N-carbamoylase (CAB)two enzyme hydrolysis of D-p-Hydroxyphenylglycine(D-HPG). Using LB culture medium(containing phosphate buffer solution,pH=7.2)the inoculation quantity was 0.5%(Logarithmic phase),the bacteria cul-tured at 37°C,200r,pH7.2 conditions. In 12 hours after adding 2% inducers and with DMSO as solvent,33 hours after collection of the cell. By measuring the enzyme activity of the cells,the enzyme activity reached a maximum value at this time,Enzyme activity was 0.57U/L,more than 2.6 times before optimiza-tion.%通过筛菌得到一株野生菌 LLV-6，在诱导剂诱导后利用DL-对羟基苯海因（DL-HPH）为底物经D-海因酶（HYD）和N-氨甲酰-D-氨基酸酰胺水解酶（CAB）两酶水解而获得D-对羟基苯甘氨酸。用LB培养基（含磷酸盐缓冲溶液，pH=7.2）接菌量为0.5%（对数期的菌种），在37°C、200r、pH7.2条件下培养菌种。在培养12h后加入2%的诱导剂并以500μLDMSO作为促溶剂，33h后收集细胞。通过对细胞酶活力的测定，此时酶活力达到最大值，酶活力为0.57U/L，比优化前提高了2.6倍。

摘要： D-对羟基苯甘氨酸主要是用来进行合成邓氏钾盐中的阿莫西林的侧链，作为合成的主要原料，D-对羟基苯甘氨酸主要分为酶法和合成法两种生产工艺，在本文中主要讨论的是D-对羟基苯甘氨酸进行合成邓氏钾盐的后续过程中的质量问题，并对其进行了分析比对，发现问题并提出解决方法。

摘要： 利用D-3-溴樟脑-8-磺酸铵盐作为拆分剂，在水杨醛的作用下，拆分外消旋对羟基苯甘氨酸，得到阿莫西林等的侧链D-对羟基苯甘氨酸，收率为72%，光学纯度>99%。

摘要： 通过实验表明以TJS环氧基树脂作为载体对N-氨甲酰基-D-氨基酸酰胺水解酶进行固定化的最佳工艺条件为：1g树脂载体大约对应133U酶液，蛋白质量浓度0.35mg/mL，固定时间15h，温度28°C，pH值7.5，固定化酶活达到58.5U·g-1，蛋白58.5U·g-1固定率可达97.4%，酶活回收率达到49.3%，得到的固定化酶使用半衰期达到26批。

摘要： 通过实验表明以TJS环氧基树脂作为载体对N-氨甲酰基-D-氨基酸酰胺水解酶进行固定化的最佳工艺条件为：1g树脂载体大约对应133U酶液，蛋白质量浓度0.35mg/mL，固定时间15h，温度28°C，pH值7.5，固定化酶活达到58.5U·g-1，蛋白58.5U·g-1固定率可达97.4%，酶活回收率达到49.3%，得到的固定化酶使用半衰期达到26批。

摘要： 通过实验表明以TJS环氧基树脂作为载体对N-氨甲酰基-D-氨基酸酰胺水解酶进行固定化的最佳工艺条件为：1g树脂载体大约对应133U酶液，蛋白质量浓度0.35mg/mL，固定时间15h，温度28°C，pH值7.5，固定化酶活达到58.5U·g-1，蛋白58.5U·g-1固定率可达97.4%，酶活回收率达到49.3%，得到的固定化酶使用半衰期达到26批。

摘要： 通过实验表明以TJS环氧基树脂作为载体对N-氨甲酰基-D-氨基酸酰胺水解酶进行固定化的最佳工艺条件为：1g树脂载体大约对应133U酶液，蛋白质量浓度0.35mg/mL，固定时间15h，温度28°C，pH值7.5，固定化酶活达到58.5U·g-1，蛋白58.5U·g-1固定率可达97.4%，酶活回收率达到49.3%，得到的固定化酶使用半衰期达到26批。

摘要： 通过实验表明以TJS环氧基树脂作为载体对N-氨甲酰基-D-氨基酸酰胺水解酶进行固定化的最佳工艺条件为：1g树脂载体大约对应133U酶液，蛋白质量浓度0.35mg/mL，固定时间15h，温度28°C，pH值7.5，固定化酶活达到58.5U·g-1，蛋白58.5U·g-1固定率可达97.4%，酶活回收率达到49.3%，得到的固定化酶使用半衰期达到26批。

摘要： 本文研究了应用重氮法生产D-对羟基苯甘氨酸的方法,即以N-氨甲酰-D-对羟基苯甘氨酸为底物,经过重氮化、脱氮、脱羧等反应直接生成D-对羟基苯甘氨酸.该方法可作为“一菌双酶法”生产D-对羟基苯甘氨酸工艺中对中间产物进行进一步处理,以提高收率.

摘要： 本文研究了应用重氮法生产D-对羟基苯甘氨酸的方法,即以N-氨甲酰-D-对羟基苯甘氨酸为底物,经过重氮化、脱氮、脱羧等反应直接生成D-对羟基苯甘氨酸.该方法可作为“一菌双酶法”生产D-对羟基苯甘氨酸工艺中对中间产物进行进一步处理,以提高收率.

摘要： 本文研究了应用重氮法生产D-对羟基苯甘氨酸的方法,即以N-氨甲酰-D-对羟基苯甘氨酸为底物,经过重氮化、脱氮、脱羧等反应直接生成D-对羟基苯甘氨酸.该方法可作为“一菌双酶法”生产D-对羟基苯甘氨酸工艺中对中间产物进行进一步处理,以提高收率.

摘要： 采用固定化细胞膜反应技术，以ＤＬ－对羟基苯海因为原料研究了一菌双酶法生产Ｄ－对羟基苯甘氨酸的过程，确定了整细胞在中空纤维膜反应器中的固定化技术，考察了酶解过程的行为，构建了固定化细胞中空纤维膜生物反应系统，实现微生物细胞的多次重复使用和过程的连续批次操作。

摘要： 该文利用ｓｐ．２２６２菌研究了两步酶法生产Ｄ－对羟基苯甘氨酸的反应动力学。

摘要： 本发明公开了一种测定D(‑)对羟基苯甘氨酸甲酯中D(‑)对羟基苯甘氨酸含量的HPLC方法。该方法是将D(‑)对羟基苯甘氨酸甲酯用稀酸溶液配成溶液，采用一种化学键合固定相色谱柱，以缓冲盐加有机碱，用酸调pH至0.8～12为缓冲盐溶液，缓冲盐溶液与有机相改性剂以适当比例进行梯度洗脱，然后在适当的检测波长、流速和柱温下检测，再根据谱图计算样品含量。采用本发明方法可使D(‑)对羟基苯甘氨酸甲酯、D(‑)对羟基苯甘氨酸得到有效的分离，准确测出D(‑)对羟基苯甘氨酸的含量，方法简便、可靠、迅速，灵敏度高，重现性和专属性好，为D(‑)对羟基苯甘氨酸甲酯质量标准的制定建立了基础。

摘要： 本发明公开了一种从甘氨酸母液中分离对羟基苯甘氨酸和硫酸铵的方法，其特征在于，将含有对羟基苯甘氨酸、硫酸铵的甘氨酸母液，调节pH至3.0～8.0，在10～80°C条件下，进入装填强酸型阳离子交换树脂的连续色谱分离系统，以水作洗脱剂洗脱，分别收集洗脱液和残留液，获得对羟基苯甘氨酸和硫酸铵两种产物，实现对羟基苯甘氨酸和硫酸铵的高效分离。本发明的有益效果为：设备紧凑、系统简化、管道缩减和占地面积少；由于非间断操作下的连续运转，产品的成分、浓度保持基本的稳定；具有良好的操作弹性，可根据生产负荷的变化自动调节旋转速度；降低运行成本和设备投资；分离效果好，分离后的对羟基苯甘氨酸纯度高。

摘要： 本发明涉及酶法合成D‑对羟基苯甘氨酸结晶母液中D‑对羟基苯甘氨酸的回收方法。该方法包括如下步骤：(1)采用大孔吸附树脂吸附D‑对羟基苯甘氨酸；(2)从树脂上解析D‑对羟基苯甘氨酸；(3)从余液中回收氯化铵；(4)D‑对羟基苯甘氨酸结晶。本发明的方法工艺设计简便、可操作性强、回收效果好、产品质量优异，回收的D‑对羟基苯甘氨酸的纯度为99.2％以上，同时回收得到氯化铵。

摘要： 本发明公开了一种测定D(‑)对羟基苯甘氨酸甲酯中D(‑)对羟基苯甘氨酸含量的HPLC方法。该方法是将D(‑)对羟基苯甘氨酸甲酯用稀酸溶液配成溶液，采用一种化学键合固定相色谱柱，以缓冲盐加有机碱，用酸调pH至0.8～12为缓冲盐溶液，缓冲盐溶液与有机相改性剂以适当比例进行梯度洗脱，然后在适当的检测波长、流速和柱温下检测，再根据谱图计算样品含量。采用本发明方法可使D(‑)对羟基苯甘氨酸甲酯、D(‑)对羟基苯甘氨酸得到有效的分离，准确测出D(‑)对羟基苯甘氨酸的含量，方法简便、可靠、迅速，灵敏度高，重现性和专属性好，为D(‑)对羟基苯甘氨酸甲酯质量标准的制定建立了基础。

摘要： 本发明公开了一种从甘氨酸母液中分离对羟基苯甘氨酸和硫酸铵的方法，其特征在于，将含有对羟基苯甘氨酸、硫酸铵的甘氨酸母液，调节pH至3.0～8.0，在10～80°C条件下，进入装填强酸型阳离子交换树脂的连续色谱分离系统，以水作洗脱剂洗脱，分别收集洗脱液和残留液，获得对羟基苯甘氨酸和硫酸铵两种产物，实现对羟基苯甘氨酸和硫酸铵的高效分离。本发明的有益效果为：设备紧凑、系统简化、管道缩减和占地面积少；由于非间断操作下的连续运转，产品的成分、浓度保持基本的稳定；具有良好的操作弹性，可根据生产负荷的变化自动调节旋转速度；降低运行成本和设备投资；分离效果好，分离后的对羟基苯甘氨酸纯度高。

摘要： 本发明属医药化工中间体生产领域，是关于L-(+)-对羟基苯甘氨酸对甲基苯磺酸盐的消旋方法，步骤是：经拆分处理过的旋光≥+55°L盐和醋酸投料在高压密闭反应釜中，在110°C-115°C下保温10小时；将上述混合料降温至80-90°C保温2小时；用活性炭脱色趁热过滤；滤后母液降温到30°C保温2小时，过滤得到经消旋处理过的混旋对羟基苯甘氨酸对甲基苯磺酸盐。具有工艺简单，成本低，所生产的混旋对羟基苯甘氨酸对甲基苯磺酸盐旋光小于+5°，可以满足继续拆分的需要。

摘要： 本发明L-(+)-对羟基苯甘氨酸对甲基苯磺酸盐纯化技术属医药化工中间体生产领域。本发明之前的得到的L-(+)-对羟基苯甘氨酸对甲基苯磺酸盐需要经两次纯化方能满足水解的要求，这样既增加了成本，也使工艺操作复杂，增加了劳动量。且之前方法成本高，并产生了大量的污水，其污水较难处理。本发明克服了上述缺点，一步纯化即可得到符合水解要求的产品。降低了生产成本，使操作简单易行，减少污水排放量且污水易于处理，符合国家环保要求。

摘要： 本发明D-(-)-对羟基苯甘氨酸对甲基苯磺酸盐消旋技术所属领域为医药化工中间体生产领域，是关于具有下述结构的化合物的技术：

摘要： 本发明DL-对羟基苯甘氨酸对甲基苯磺酸盐拆分淘汰母液处理技术属化工生产淘汰母液处理技术领域。DL-对羟基苯甘氨酸对甲基苯磺酸盐拆分母液经过一段时间的应用之后(一般是套用200次以上)，内含有大量的杂质，必须予以淘汰，若不及时淘汰而继续使，将会严重影响产品品质同时不易拆分出合格的产品，以前淘汰的母液直接淘汰到污水站处理，母液的陶汰使内含的一些物料造成损失，影响总体收率，增加生产成本。本发明通过深结晶和分步减压浓缩回收其中的物料，有效的解决了这些问题，同时减少了污水排放量，减轻了污水处理的压力。

摘要： 本发明D-(-)-对羟基苯甘氨酸对甲基苯磺酸盐水解技术所属领域为医药化工中间体生产领域，是关于具有下述结构的化合物的水解技术：