产前基因诊断

摘要： 目的 明确2个杜氏肌营养不良症(DMD)家系的致病因素,指导优生实现健康生育.方法 采用一代测序和肌肉组织mRNA水平测序分析2个家庭受检者基因型,对有再生育需求的2个家庭进行产前基因诊断.结果 一代测序发现1号家庭孕妇在DMD基因上存在c.2717-2721dupTCCTG杂合性突变,该孕妇为DMD的携带者,男性胎儿存在同样的致病性突变,发病风险较高,随访胎儿引产未出生.对2号家庭先证者肌肉组织进行mRNA水平的检测,发现先证者DMD基因在外显子38和39之间插入了66个核苷酸(r.5448-5449insMW025259:r124-189),该插入序列来源于DMD基因的内含子38(NG-012232.1:g.996205-g.996271),产生一个额外的"外显子"且提早出现终止密码子,可能与DMD发生密切相关.男性胎儿肌肉组织样本DMD基因未见异常,随访该男孩出生后一切正常.结论 对曾经生育过DMD患儿的家庭应当行基因诊断明确该家系的致病因素,对有再生育需求的DMD家庭起到优生指导作用,有效避免了DMD患儿的出生.

摘要： 目的 对两个婴儿型多囊肾家系进行PKHD1致病基因突变位点分析,进一步为家系提供遗传咨询和产前诊断.方法 采集先证者及其父母的临床资料及血样,以及胎儿的羊水细胞,提取基因组DNA,PCR扩增PKHD1基因第32,第61外显子,扩增产物纯化后测序,突变位点再进行Sanger测序验证.结果 家系1先证者PKHD1基因存在第32外显子c.4274T＞G(p.Leu1425Arg)与第61外显子c.10445G＞C(p.Arg3482Pro)的复合杂合突变,分别来自其父亲及母亲;本次妊娠胎儿羊水细胞染色体核型未发现异常,胎儿携带PKHD1基因第32外显子c.4274T＞G(p.Leu1425Arg)杂合突变,出生后表型正常.家系2为有2次胎儿型多囊肾不良妊娠史夫妇,妻子携带PKHD1基因c.5979_5981delTGG杂合突变,丈夫携带PKHD1基因c.9455delA杂合突变,本次妊娠胎儿脐血染色体核型未发现异常,基因检测因DNA含量低导致失败.根据突变类型及生物信息学软件预测可能均为致病性突变.结论 PKHD1基因的c.4274T＞G(p.Leu1425Arg)、c.10445G＞C(p.Arg3482Pro)、c.5979_5981delTGG及c.9455delA可能为研究家系的致病性基因突变,本研究结果有助于两个家系行遗传咨询和产前诊断.

摘要： 目的:分析地中海贫血产前筛查及产前基因诊断结果.方法:以2018年1月至2018年12月在我中心例行孕期地贫筛查的129例孕妇进行血液学检查,对其检查结果呈阳性的孕妇实施基因检查,并且孕妇的配偶也需要接受筛查.对夫妻双方都属于地中海贫血的需要实施产前诊断,对地中海贫血诊断的结果展开全面分析.结果:129例孕妇中,血液学检查阳性有31例,携带α型地中海贫血基因的有22例,携带β型地中海贫血基因的有7例,携带α+β型基因的有2例.结论:对地中海贫血夫妇实施产前基因诊断,能够有效降低重型β地中海贫血患儿和水肿胎患儿的出生比例,可有效促进我国优生优育政策的实施,并且能够降低孕妇和胎儿在围生期发生的并发症.

摘要： 目的 针对致死性侏儒症Ⅰ型(thanatophoric dysplasia type Ⅰ,TD-Ⅰ)FGFR3基因的突变热点“p.R248C”,建立快速特异的酶切鉴定法(restriction endonuelease testing,RE)和扩增受阻突变系统(amplification refractory mutation system,ARMS)/RE法,并应用于后续3例疑似TD-Ⅰ高危胎儿的快速产前诊断,以及时防止患胎出生,同时为今后的胚胎植入前遗传学诊断(preimplantation genetic diagnosis,PGD)打下良好基础.方法 首先,针对突变热点p.R248C突变前后的序列特点,选择合适的内切酶“AfeI”,建立酶切鉴定法.其次,没计双错配碱基特异引物结合Apa LI酶切,建立ARMS/RE双重特异鉴定法.对阴性和阳性结果均再用普通引物扩、测的结果进行验证. 结果 用AfeI酶切FGFR3基因exons (6-7)普通引物的PCR产物(535 bp),正常对照及非p.R248C突变的TD病例均能被切成255 bp和280 bp 2个片段,而胎1～胎3均切出255 bp、280 bp和535 bp 3个片段.用特异引物E7(p.R248C)扩增,正常对照和非p.R248C突变的TD病例均扩增阴性,无法进一步做酶切鉴定;而p.R248C突变均扩增阳性,当再用Apa LI酶切PCR产物(365 bp)时,胎1～胎3均切出22 bp和343 bp 2个片段.通过引物扩、测结果显示:胎1～胎3均是p.R248C杂合突变. 结论 该法快速特异、准确可靠,可用于p.R248C突变热点的快速检测及含该突变高危胎儿的快速产前诊断.该法还可用于含p.R248C突变TD-Ⅰ型家系的PGD.胎1～胎3都是TD-Ⅰ患胎,建议尽早终止妊娠.

摘要： 地中海贫血是全球广为流行的遗传性溶血性疾病,是最常见的单基因遗传病之一.因缺乏理想的治疗手段,在高发地区通过对高风险夫妇进行产前基因诊断以避免重症地中海贫血患儿的出生,是国际上公认的首选预防措施.目前,临床广泛应用侵入性手术取得胎儿DNA并采用多种分子检测技术进行基因诊断,但有一定胎儿流产和宫内感染的风险.以胎儿游离DNA为检测标靶的无创产前诊断技术的迅速发展,为建立一种安全快速、简便准确的早期地中海贫血产前基因诊断方法带来可能.本文就目前应用于地中海贫血产前基因诊断的多种技术作一述评.

摘要： Objective To explore the application value of triplet repeat-primed (TP)-PCR and methylation specific multiplex ligation-dependent probe amplification (MS-MLPA) for prenatal diagnosis of Fragile X syndrome.Methods The CGG repeat number and AGG interruption pattern were analyzed using TP-PCR and methylation status of CpG islands was detected by MS-MLPA from 2 FXS family members and 30 unrelated fetuses.Results The range of alleles was 23-40 CGG repeats in fetuses,and the most frequent allele and AGG interruption pattern were 29 CGG repeats and 9A9A9,respectively.CGG expansion was observed in both of the two permutation alleles during transmission.CpG islands ofFMR 1 were observed hypermethylated in patients with full mutation,while 30 controls and premature carders were hypomethylation.Conclusion TP-PCR,in combination with MS-MLPA,represents a reliable diagnostic protocol in the prenatal diagnosis of FXS.%目的 探讨脆性X综合征(FXS)产前基因诊断的方法.方法 采用三核苷酸重复引物PCR法(TP-PCR)及甲基化特异性多重连接探针扩增技术(MS-MLPA)检测2个FXS家系及30例正常对照胎儿样本FMR1基因CGG重复数、AGG排布及FMR1基因CpG岛甲基化状态.结果 正常对照FMR1基因(CGG)n重复数介于23～40之间,频数最大的重复数为29,AGG排布式以9A9A9最为常见.2个FXS家系中前突变等位基因向子代遗传过程中均发生了CGG扩展.正常对照及前突变携带者FMR1基因CpG岛均为低甲基化状态,全突变患者CpG岛为高甲基化状态.结论 TP-PCR和MS-PCR联合应用能够检出胎儿FMR1基因CGG重复数和CpG岛甲基化状态,从而判断胎儿是否为脆性X综合征患儿,为优生干预提供可靠的依据.

摘要： 地中海贫血疾病对人体危害大,需强化临床疾病诊断方法,早发现、早治疗才可降低地中海贫血对患者的危害.临床地中海贫血患者表现各异,对于少见类型和各种类型重叠所致的复合体诊断则非常复杂,若是仅根据临床特点和常规实验室血液学检查是无法诊断地中海贫血的.对此,本文研究综述在地中海贫血诊断中应用产前基因诊断的价值,确保可以进一步为优化制定诊断地中海贫血疾病的方案提供理论研究基础.

摘要： 地中海贫血(Thalassemia)是我国南方地区最常见的单基因遗传病，广东省生育人群α地贫的基因携带率为12.96%，β地贫的基因携带率为4.51%。重型α地贫胎儿，又称Bart's水肿胎，多于怀孕晚期死于宫内，即使能怀孕至足月，也多于出生后数分钟内死亡，而且孕妇常合并妊高征，胎盘早剥，子痈抽搐，产时或产后大出血等产科危重并发症。重型β地贫患儿多于生后6个月左右开始发病，表现为进行性溶血性贫血，需要依靠输血维持生命，由于极易发生各种并发症，多于青少年期死亡，给家庭和社会带来沉重的负担。因此进行产前诊断预防重型地中海贫血患儿的出生是目前降低出生缺陷、减轻疾病负担的重要手段。对2010年1月-2014年4月期间我院医学遗传中心4504例地中海贫血产前基因诊断病例进行回顾性分析。产前基因诊断取材，根据孕周的不同于11-14周行绒毛穿刺活检，16周之后行羊水穿刺或脐带血穿刺。应用复合荧光标记STR-PCR方法排除绒毛、羊水和脐血样本母体组织的污染，排除母体组织污染之后才能进行基因诊断。对α地中海贫血产前基因诊断采取裂隙PCR以及PCR结合反向点杂交(RDB)方法，β地中海贫血产前基因诊断采取PCR结合反向点杂交(RDB)方法，若夫妇一方携带少见突变则加用DNA测序方法。在3218例α地贫产前基因诊断病例中共检测出588例水肿胎，209例血红蛋白H病，其中缺失型血红蛋白H病169例，非缺失型血红蛋白H病40例，有一对夫妇其中一方为α珠蛋白基因突变引起异常血红蛋白，产前诊断结果为异常血红蛋白合并东南亚型α地贫。1286例β地贫产前基因诊断病例中共检测到274例重型β地中海贫血，60例中间型β地中海贫血。有3对夫妇其中一方β地贫基因为罕见突变，产前诊断需要DNA测序完成，测序结果检测到一例IVS-Ⅱ-2(delete T)突变携带胎儿和一例CD6(G→A)突变携带胎儿。地中海贫血产前基因诊断有效减少了水肿胎和重型β地贫患儿的出生，对于优生优育、减少围产期并发症具有重要意义。地中海贫血产前基因诊断是一项高技术、高风险的工作，质量控制是实验室检测的灵魂，要从试剂的验收、家系标本的收集、母血污染鉴定、双人平行独立检测、双平台验证等方面进行质量控制，期待可以与大家分享一些经验。

摘要： 本文筛查FH纯合患儿核心家系LDL-R基因突变,生物信息学方法预测新突变蛋白三级结构变化,初步阐明致病机制,进而对该家系再次妊娠母亲在孕早期取胎儿绒毛膜,提取胎儿DNA,检测胎儿LDL-R基因,并与家系纯合患儿及其父母比对,明确胎儿携带致病突变位点及数目,推断是否为纯合患儿,实现产前诊断.研究表明，①入选家系符合FH的临床诊断;②该家系含有2个不同的LDL-R基因突变,且均为终止突变,在国内外为首次发现,其中1个为新突变;③新突变位点导致的LDL-R蛋白三级结构改变可能为致使LDL-R表达降低,进而影响LDL-R功能缺失的机制;④该核心家系成员的临床诊断与基因表型相符;⑤根据胎儿产前基因诊断结果推断该胎儿为杂合.本研究将基础研究成果大胆尝试于临床实践,实现基础遗传学研究到临床应用的转化,弥补基础实验与临床应用之间的鸿沟.

摘要： 采用PCR扩增PAH基因所有13个编码外显子,直接测序进行突变检测;未检测到致病突变的家系则进行PAH基因内部短串联重复片段(STR)多态连锁分析,对9个经典型苯丙酮尿症先证者及家系成员进行基因型分析并在此基础上行产前基因诊断，为PKU家系提供可靠的产前诊断服务，有效避免PKU患儿的出生。

摘要： 目的:为避免FH重症患儿出生，探讨羊水细胞LDLR基因突变分析在产前基因诊断中的应用价值。方法:对4例生育过FH重症患儿并再次妊娠的妇女，收集其核心家系成员基本临床资料，初步确立其遗传模式;提取家系先证者外周血基因组DNA，在排除ApoBlo。基因突变后，聚合酶链式反应及核营酸序列分析筛查LDLR基因突变;并将突变位点在其父母身上验证以确定遗传来源;于妇女妊娠16-20周时在超声引导下行羊膜腔穿刺术抽取羊水，提取胎儿脱落细胞DNA，分别对家系存在的LDLR基因突变进行检测，并与其家系成员比对，判断胎儿是否为重症。结果:4个家系均符合FH临床诊断，并分别检测到LDLR基因2个互不相同的杂合突变位点;妇女羊膜腔穿刺术均一次性成功;胎儿LDLR基因核苷酸序列分析证实，1例胎儿携带其家系两个突变位点判断为复合杂合(重症)，2例胎儿仅携带其所在家系的1个突变位点判断为杂合(轻症)，1例胎儿未检到该家系的突变位点推测为正常个体。结论:本文4个FH孕妇羊水脱落细胞LDLR基因分析安全有效，为产前诊断避免FH重症患儿出生提供了宝贵经验。

摘要： 对三家疑似黏多糖贮积症ⅢA或ⅢB型的4名患者的相关基因和分子机制进行研究，以达到确诊的目的；在查清病因后，对一高危家系先后两次怀孕的两胎高危胎儿进行产前基因诊断，防止患胎出生。研究结果，来自3个家系的4名患者均是MPSⅢB患者，检测到的6种突变是这4名患者发病的根本原因。所诊断的两例高危胎儿中，一例为患病胎儿，另一例为MPSⅢB携带者。

摘要： 对新收集的6例疑似MPSIVA的先证者进行GALNS基因突变检测并对所发现的新突变进行致病性鉴定，以揭示患者发病的分子机制，为今后实施孕早期诊断和植入前诊断打下基础。另外，对一已孕10周的MPSIVA高危胎儿实施快速产前基因诊断，从而高效防止患胎出生，实现优生。结果，(1)该高危胎儿是一MPSIVA病胎，应及时终止妊娠。(2)临床诊断和尿GAG定性检测只能初诊，确诊需靠酶检和基因诊断。

摘要： 对广东一疑似致死性侏儒症或成骨不全Ⅱ型的高危胎儿实施产前基因诊断，以阐明胎儿骨发育异常的真实病因，防止患胎出生。介绍了诊断方法，结果显示，此高危胎儿为成骨不全Ⅱ型患胎，应及时终止妊娠。

摘要： 目的：了解中国眼皮肤白化病基因座遗传异质性和致病基因突变类型，为遗传咨询和建立针对我国患者的适于广泛应用的基因诊断方法奠定基础。同时，开展产前基因诊断研究，探索预防白化病患儿出生的可行途径。rn 方法：应用聚合酶链反应(PCR)、变性高效液相层析(DHPLC)和DNA序列测定等技术方法，对来自中国大陆8个省份的20个家庭中的22例眼皮肤白化病患者进行了相关基因的突变筛查，确定患者的眼皮肤白化病分型和基因型;应用以上方法对5例OCA1高风险胎儿进行了研究性产前基因诊断。rn 结果：22例OCA患者中有16例在OCA1基因内检测到1对突变，5例在OCA2基因内检测到1对或1个突变，1例在OCA1和OCA2基因内未检测到任何突变，而在OCA4基因内检测到1对突变。本研究共检出TYR基因12种突变、P基因4种突变及MATP基因2种突变，其中OCA1基因的P301L、IVS4+3A>T、K142M、S264I、Y173C，OCA2基因的A787T、T450M、R455G以及OCA4基因的D160H、IVS5+3delAAGT共计10种突变为国际上首次发现的OCA致病性突变。5例OCA1高风险胎儿产前基因诊断结果为：1例基因型正常，3例为携带者，1例为复合杂合子患者。现胎儿都已出生，结果与产前诊断结果相符。rn 结论：首次开展了中国大陆眼皮肤白化病基因座遗传异质型研究，并证实我国存在眼皮肤白化病Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅳ型，其中Ⅰ型和Ⅱ型较常见。在国际上首次确定华人中存在OCA4患者。中国大陆OCA存在基因座遗传异质性和高度等位基因遗传异质性。本研究为我国OCA遗传咨询、产前基因诊断奠定了良好基础。

摘要： 本文通过对孕期夫妇进行β地中海贫血的筛查与基因分析,并对双方都为β地中海贫血携带者的夫妇在孕18~22周通过产前基因诊断可有效降低β地中海贫血的出生率.

摘要： 本发明公开了lncRNA组合物及制备诊断预示Luminal B型乳腺癌骨转移试剂盒的用途。本发明发现，血清lncRNAXLOC_004122、SUMO1P3和NBAT‑1可联合用于诊断预示Luminal A型乳腺癌骨转移，血清lncRNAXLOC_004122、Linc00467和lncRNAAl049452可联合用于诊断预示Luminal B型乳腺癌骨转移，血清lncRNAAK043773和EXOC7可联合用于诊断预示Her‑2过表达型乳腺癌骨转移，lncRNA Lnc01089和HOTAIR可联合用于诊断预示三阴性型乳腺癌骨转移，准确度高(90％以上)，检测成本低、非介入性、方便快捷。

摘要： 本发明公开了甲基化基因组合物及制备诊断预示三阴性型乳腺癌骨转移试剂盒的用途。本发明发现，血清甲基化PITX1和甲基化AMOT可联合用于诊断预示LuminalA型乳腺癌骨转移，血清甲基化PTPN1和甲基化SLIT2可联合用于诊断预示LuminalB型乳腺癌骨转移，血清甲基化MYLK2、甲基化EFEMP1和甲基化SOSTDC1可联合用于诊断预示Her‑2过表达型乳腺癌骨转移，血清甲基化MYLK3和甲基化SCARA5可联合用于诊断预示三阴性型乳腺癌骨转移，准确度达90％以上，检测成本低、非介入性、方便快捷。

摘要： 本发明公开了甲基化基因组合物及制备诊断预示Luminal A型乳腺癌骨转移试剂盒的用途。本发明发现，血清甲基化PITX1和甲基化AMOT可联合用于诊断预示LuminalA型乳腺癌骨转移，血清甲基化PTPN1和甲基化SLIT2可联合用于诊断预示Luminal B型乳腺癌骨转移，血清甲基化MYLK2、甲基化EFEMP1和甲基化SOSTDC1可联合用于诊断预示Her‑2过表达型乳腺癌骨转移，血清甲基化MYLK3和甲基化SCARA5可联合用于诊断预示三阴性型乳腺癌骨转移，准确度达90％以上，检测成本低、非介入性、方便快捷。

摘要： 本发明公开了lncRNA组合物及制备诊断预示三阴性型乳腺癌骨转移试剂盒的用途。本发明发现，血清lncRNAXLOC_004122、SUMO1P3和NBAT‑1可联合用于诊断预示Luminal A型乳腺癌骨转移，血清lncRNAXLOC_004122、Linc00467和lncRNAAl049452可联合用于诊断预示Luminal B型乳腺癌骨转移，血清lncRNAAK043773和EXOC7可联合用于诊断预示Her‑2过表达型乳腺癌骨转移，lncRNALnc01089和HOTAIR可联合用于诊断预示三阴性型乳腺癌骨转移，准确度高(90％以上)，检测成本低、非介入性、方便快捷。

摘要： 本发明涉及高原病高危人群的基因筛查方法及其相关基因诊断产品。本发明提供通过检测解偶联蛋白基因的-866A/G、45bpI/D和转铁蛋白基因的-740G/A、-552G/A和-35T/G的核苷酸类型对高原肺水肿高危人群进行基因筛查的方法。本发明还提供了检测发生高原肺水肿危险性的组合物、基因芯片、试剂盒等。本发明的方法、组合物、基因芯片、试剂盒等特异性高，应用范围广泛。

摘要： 通过给予内啡肽酶抑制剂或内啡肽酶抑制剂和选择性地一种多巴胺前体或者一种5－羟色胺前体、一种GABA前体或者一种内啡肽或内啡肽酶释放剂或者包括Rhodiola rosea提取物(Pharmaline)和/或石杉碱的某些草药化合物获得了注意力过程的加强。这些成分促进正常神经递质功能的恢复而且联合的成分提高多巴胺在伏核处的释放,而且是非成瘾性的。利用多巴胺前体L－苯丙氨酸、或L－酪氨酸、内啡肽酶抑制剂D－苯丙氨酸、和/或5－羟色胺前体5－羟色氨酸以及天然的乙酰胆碱酯酶抑制剂和铬盐(如吡啶甲酸盐、烟酸盐等)特别优选地,但并不限于,帮助缓解与大脑苯丙氨酸缺陷相关的症状。

摘要： 本发明公开了肿瘤基因诊断标志物、诊断试剂盒。本发明发现，LINC02154与miR‑3147联合用于原发性肝癌的诊断具有较高的准确率，显著优于LINC02154或miR‑3147单独用于原发性肝癌诊断的诊断准确率。因此，二者可以联合用于制备原发性肝癌诊断的血清检测试剂盒。

摘要： 本发明公开了与眼皮肤白化病1型相关的突变后的TYR基因及其在基因诊断中的用途。本发明通过对一个4代眼皮肤白化病1型家系采集，判断其疾病在家系中为常染色体隐性遗传方式传递。通过阅读文献和在线数据库，选取可能致病的候选基因，然后对先证者及家系其他成员进行PCR扩增和Sanger测序，确认突变基因位点。其中发现TYR致病基因突变c.107G>C为一种新的致病性突变。该新的TYR致病基因突变位点的发现，丰富了致病基因突变谱，可以作为眼皮肤白化病1型这种严重的隐性遗传病的产前诊断筛查位点，用于群体的优生优育的指导。本发明的提出为开发针对该突变类型的产前诊断性芯片的设计提供了数据支持，尤其对严重危害的罕见遗传病的产前基因诊断筛查具有重要意义。

摘要： 本发明公开了与眼皮肤白化病1型相关的突变后的TYR基因及其在基因诊断中的用途。本发明通过对一个4代眼皮肤白化病1型家系采集，判断其疾病在家系中为常染色体隐性遗传方式传递。通过阅读文献和在线数据库，选取可能致病的候选基因，然后对先证者及家系其他成员进行PCR扩增和Sanger测序，确认突变基因位点。其中发现TYR致病基因突变c.107G>C为一种新的致病性突变。该新的TYR致病基因突变位点的发现，丰富了致病基因突变谱，可以作为眼皮肤白化病1型这种严重的隐性遗传病的产前诊断筛查位点，用于群体的优生优育的指导。本发明的提出为开发针对该突变类型的产前诊断性芯片的设计提供了数据支持，尤其对严重危害的罕见遗传病的产前基因诊断筛查具有重要意义。

摘要： 本实用新型涉及医疗器械领域，具体为遗传性多囊肾病(APKD)产前基因诊断试剂盒。遗传性多囊肾病(APKD)产前基因诊断试剂盒，包括电泳槽(1)、外槽盖(2)、装有标准试剂的试管(3)、凝胶(4)、电源正极(5)、电源负极(6)、提手(7)和中间槽盖(8)，其特征在于：在电泳槽(1)的中间设置了中间槽盖(8)，装有标准试剂的试管(3)放置在电泳槽(1)内的中间槽盖(8)上，粉状凝胶(4)放置在电泳槽(1)内等。遗传性多囊肾病(APKD)产前基因诊断试剂盒是通过发病前基因检测来预防多肾囊病的遗传，诊断时间小于160分钟，诊断准确率达到90％以上。