钙黄绿素

摘要： 为建立检测猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)的可视化环介导等温扩增(LAMP)方法,对比猪APP主要流行毒株的ApxⅣA基因序列,选择高度保守区域设计LAMP引物,以钙黄绿素(Calcein)为指示剂,对反应体系和反应条件优化后建立了一种快速检测猪APP的可视化LAMP方法。采用建立的方法在63°C水浴锅中扩增40 min后,85°C作用10 min即可完成检测。用该方法检测大肠杆菌、绿脓杆菌、多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、猪霍乱沙门菌、猪链球菌、猪肺炎支原体、副猪嗜血杆菌等,均不发生交叉反应。以10倍稀释的APP基因组DNA为模板,评价方法的敏感性,结果最低检出量为1.67×10^(-5)ng/μL,比普通PCR方法的最低检出量1.67×10^(-2)ng/μL高1000倍;在反应体系中加入钙黄绿素,反应结束后阳性反应管颜色从橘黄色变为黄绿色且在紫外光下有绿色荧光。采用建立的方法检测312份临床样品,共检出阳性样品46份,而采用普通PCR方法仅检出阳性样品10份。该方法的建立为快速诊断猪传染性胸膜肺炎提供了技术支持。

摘要： 目的:探讨激光共聚焦显微镜不同参数对活细胞荧光漂白的影响.方法:采用不同的激光共聚焦显微镜拍摄参数对钙黄绿素标记的骨肉瘤细胞进行时间序列成像,分析随拍摄帧数增多荧光强度的变化.结果:激光功率增大、激光驻留时间延长都会增加荧光漂白,当保持激光驻留时间与激光强度的乘积(即照射在样品上的总能量)不变时,驻留时间最长的组荧光漂白率最高(P<0.05),驻留时间最短的组荧光漂白率最低(P<0.05);NA值相似的情况下,20倍物镜结合ZOOM=2的模式比直接用40倍物镜拍摄荧光漂白率更高;细胞在氧含量3％的培养条件中预处理1 h,与常规培养条件比,在拍摄早期加剧光漂白,在拍摄后期延缓光漂白.结论:对活细胞进行三维重建或时间序列成像时,建议先通过预试验找到光漂白率最小且同时满足分辨率需求的拍摄参数组合,可以考虑高激光功率、短驻留时间的组合;非必须情况,尽量避免使用ZOOM模式;如何利用低氧条件缓解对活细胞的光漂白尚需进一步探索.

摘要： 利用金纳米粒子-钙黄绿素荧光共振能量转移体系,建立了一种简单、灵敏、快速测定药物青霉胺的方法.初步探讨了方法机理,并对体系pH、反应时间、AuNPs和钙黄绿素的浓度等实验条件进行了优化.优化实验条件下,方法的线性范围为1.87×10-7～1.68×10-5 mol·L-1,检出限(3S/N)为6.87×10-8 mol·L-1.该法用于青霉胺药品中青霉胺的测定,结果满意.

摘要： 本研究拟建立一种能在基层实时、便捷诊断鹅新城疫病毒(goose Newcastle disease virus,GNDV)的检测方法.根据GenBank中公布的GNDV F基因的高度同源保守序列设计特异性引物,并在反应体系中添加钙黄绿素/氯化锰指示剂,建立可视化RT-LAMP检测方法.结果显示,建立的方法能特异地检测出GNDV及NDV Lasota疫苗株,而小鹅瘟病毒(GPV)、禽流感病毒(AIV)、鸭坦布苏病毒(DTMUV)等其他病毒均为阴性.所建立的GNDV可视化RT-LAMP检测方法对RNA的最低检测限为10 pg,反应过程不需PCR仪等复杂的仪器,50 min即可完成反应,可经肉眼观察反应体系颜色判定结果.该方法特异性强、灵敏度高,且操作安全、简便、快捷,可满足基层筛查GNDV的需求.

摘要： 钙黄绿素(R)能发射强而稳定的荧光,在H2O2的氧化下,R被氧化为无荧光化合物(R′)使R的荧光信号猝灭.实验以鼠李糖(Rha)催化H2O2氧化R,发现体系的荧光信号剧烈猝灭,表明催化反应对荧光信号有显著的放大效应.据此,开发了一种测定痕量鼠李糖的催化生物传感器.这种传感器(检出限(LD)为1.9x10-17 gmL-1),灵敏度高,使用方便,检测结果与HPLC相吻合.同时,文章对钙黄绿素与鼠李糖反应缩合物(R-Rha)的组成和痕量鼠李糖(Rha)检测的反应机理进行了探讨.

摘要： 钙黄绿素(R)能发射强而稳定的荧光,在H2O2的氧化下,R被氧化为无荧光化合物(R')使R的荧光信号猝灭.实验以鼠李糖(Rha)催化H2O2氧化R,发现体系的荧光信号剧烈猝灭,表明催化反应对荧光信号有显著的放大效应.据此,开发了一种测定痕量鼠李糖的催化生物传感器.这种传感器(检出限(LD)为1.9×10?17 g mL?1),灵敏度高,使用方便,检测结果与HPLC相吻合.同时,文章对钙黄绿素与鼠李糖反应缩合物(R-Rha)的组成和痕量鼠李糖(Rha)检测的反应机理进行了探讨.

摘要： 钙黄绿素（R）能发射强而稳定的荧光,在H2O2的氧化下,R被氧化为无荧光化合物（R＇）使R的荧光信号猝灭.实验以鼠李糖（Rha）催化H2O2氧化R,发现体系的荧光信号剧烈猝灭,表明催化反应对荧光信号有显著的放大效应.据此,开发了一种测定痕量鼠李糖的催化生物传感器.这种传感器（检出限（LD）为1.9×10-17g mL-1）,灵敏度高,使用方便,检测结果与HPLC相吻合.同时,文章对钙黄绿素与鼠李糖反应缩合物（R-Rha）的组成和痕量鼠李糖（Rha）检测的反应机理进行了探讨.

摘要： 以大豆磷脂和聚乙二醇单甲醚2000为原料,制备了大豆磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇单甲醚2000(SPE-MPEG2000),产物结构经1H NMR和IR进行了表征.采用薄膜分散法制备了含SPE-MPEG2000的空间稳定脂质体(SSL),同时制备不含SPE -MPEG2000的普通脂质体(CLs).通过TEM考察了两种脂质体的形态及粒度分布,测定了粒径及Zeta电位变化,采用紫外分光光度法测定了脂质体加乙醇后的吸光度变化及包封钙黄绿素后的包封率.结果表明:SSL粒子呈类球形,粒径分布较CLs均一且分散性较好;放置前后SSL的粒径及吸光度变化较小,包封率高于CLs,从而说明SPE-MPEG2000对脂质体有良好的稳定作用.%Soybean phosphatidylethanolamine -polyethylene glycol monomethyl ether 2000(SPE -MPEG2000)was synthesized from soybean phospholipid and polyethylene glycol monomethyl ether 2000, and its structure was characterized by 1H NMR and IR.Liposomes with or without SPE -MPEG2000 were prepared by thin film dispersed method.The morphology and particle distribution of the two lipo-somes were observed by TEM.The changes of particle size and Zeta potential were determined.The in-fluence of adding ethanol on absorbance of liposomes and encapsulation efficiency of calcein were meas-ured by UV Spectrophotometry.The results showed that the liposomes prepared with SPE -MPEG2000 (SSL)were globular in appearance,distributed evenly and dispersed well compared with liposomes with-out SPE-MPEG2000(CLs)in TEM.The particle size and absorbance of SSL changed little after place-ment.The encapsulation efficiency of calcein by SSL was higher than by CLs.It indicated that SPE -MPEG2000 had a good stabilizing effect on liposomes.

摘要： 在pH=7.0的醋酸铵缓冲液中,刚果红与钙黄绿素能够发生有效的能量转移,使钙黄绿素荧光猝灭,环丙沙星的加入可使体系的荧光强度增强,由此建立了荧光光度法测定环丙沙星的分析方法.钙黄绿素—刚果红—环丙沙星荧光体系的激发与发射波长分别为492 nm与512 nm,环丙沙星在2.0～15.0mg/L质量浓度范围内与体系的荧光增强呈良好线性关系,线性方程为 ΔF=5.56ρ+35.6,线性相关系数为0.9989.将该法用于市售胶囊中环丙沙星的测定,结果满意.

摘要： 采用茜素红(ARS)和钙黄绿素(CAL)以浸染方式对大、小2种规格的黑鲷(Acanthopagrus schlegelii)幼鱼进行荧光标记技术研究.急性染色实验结果显示,2种染料对2种规格黑鲷幼鱼成活率无显著影响;后续养殖实验结果表明,两者对2种规格黑鲷幼鱼生长率亦无显著影响.ARS和CAL对黑鲷幼鱼硬组织的标记效果随着染料浓度的增加而提高,ARS标记效果优于CAL.比较2种规格的黑鲷幼鱼荧光标记结果,ARS未见显著性差异,CAL小规格标记效果优于大规格.比较各取样组织标记效果,ARS对鳍棘标记取得了最好的标记效果,鳞片和鳍条次之,耳石标记效果最差;CAL对鳍棘、鳍条、鳞片的标记效果相似或等级相同,耳石次之.ARS标志技术更具应用和研究价值.

摘要： 目的：通过比较荧光物质钙黄绿素脂质体在不同温度下的释放行为测定不同磷脂组成脂质体膜的相变温度。方法：采用薄膜-超声法制备不同磷脂组成的钙黄绿素脂质体，利用荧光自淬灭法比较不同磷脂组成(二棕榈酰磷脂酰胆碱 DPPC、氢化大豆磷脂HSPC、二硬脂酰磷脂酰胆碱DSPC)脂质体中钙黄绿素的释放行为，考察脂质体膜的稳定性并测定相变温度，通过差示扫描量热法(DSC)验证相变温度测定的准确性。结果：通过比较不同温度下的钙黄绿素的释放行为确定DPPC、HSPC、DSPC脂质体膜的相变温度分别为40、53和55°C，通过DSC测定上述不同磷脂组成脂质体膜的相变温度分别为42.37、53.72和55.61°C。在37°C下，HSPC和DSPC脂质体膜的稳定性显著优于DPPC；在各自的相变温度下，脂质体膜的通透性的排序与其相变温度成负相关。结论：应用钙黄绿素释放行为可以预测脂质体膜的相变温度；脂质体膜的稳定性取决于其相变温度。

摘要： 使用茜素络合物、钙黄绿素和盐酸四环素溶液分别对草鱼仔鱼进行浸泡标记,结果表明,50-150mg/1的茜素络合物溶液对草鱼仔鱼耳石均有较好的标记效果,50mg/l和100mg/l的钙黄绿素溶液对草鱼仔鱼耳石标记效果较差，浓度为150-400mg/l时，标记效果明显，微耳石对钙黄绿素反应强烈，而矢耳石和星耳石反应较弱。盐酸四环素浓度为50mg/l和100mg/l时，三对耳石上荧光反应均较弱，超过100mg/l时，草鱼仔鱼开始出现死亡情况。因此，可以使用茜素络合物和钙黄绿素对草鱼仔鱼进行标记实验，盐酸四环素不适合作为草鱼的标记物质。草鱼仔鱼微耳石是进行荧光检测最合适的材料。

摘要： 该文对一些药物的电致孔法透皮给药分别进行讨论。

摘要： 本发明公开了曼氏无针乌贼耳石的钙黄绿素标记方法及其检测手段，标记方法为：将钙黄绿素加入养殖水中，制成浓度为200‑400mg/L的溶液，暴晒，再加入米赛林，混合均匀得标记浸泡液，将待标记的曼氏无针乌贼饥饿后置于标记浸泡液中浸泡，结束后用新鲜海水浸泡，即完成对曼氏无针乌贼耳石的标记。有益效果为：本发明标记方法简单，能达到无损标记的目的，能够一次性实现大规模的放流标记活动；该标记方法能形成具有高强度荧光的混合配合物，方便观察结果及对比，且标记时间持久长；该标记方法对不同阶段曼氏无针乌贼都可行，为曼氏无针乌贼的增殖放流效果评价提供有效的手段。

摘要： 本发明公开了一种基于钙黄绿素‑罗丹明B‑金离子体系检测S2‑的方法，向钙黄绿素‑罗丹明B‑金离子的水溶液中加入不同体积的S2‑溶液，在450nm激发波长下，测试体系的荧光强度，通过S2‑离子淬灭钙黄绿素‑罗丹明B‑金离子的水溶液的荧光来实现对S2‑的检测。该方法操作简单、检测限低，能够快速准确的实现对S2‑的检测，并且能够排除其他离子的干扰。

摘要： 钙黄绿素在制备甲型流感病毒药物中的应用，属于药物应用领域，本发明是通过以下技术方案实施的：首先将钙黄绿素与取自H1N1，H3N2，安徽H7N9和上海H7N9病毒的神经氨酸酶液在37°C培养箱中孵育30分钟，然后加入荧光底物缓冲溶液进行检测，随后发现钙黄绿素对这几种流感病毒的神经氨酸酶均有抑制作用，然后我们检测了钙黄绿素在细胞水平上的抗甲型流感病毒的作用，发现钙黄绿素也能对感染甲型流感病毒的细胞起到防治作用，最后，我们检测了钙黄绿素对小鼠流感模型的影响，发现加入钙黄绿素后，可以明显抑制甲型流感病毒感染小鼠体重的减轻程度，使小鼠逐渐恢复到健康水平，并且能显著降低流感小鼠的肺指数。

摘要： 钙黄绿素和奥司他韦联合在防治H7N9型流感药物中的应用，是通过以下技术方案实施的：首先将H7N9野生型或突变型流感病毒神经氨酸酶液和钙黄绿素以及奥司他韦得混合液孵育30分钟，再加入底物进行检测，实验结果表明两种药物联合使用对H7N9野生型和突变型流感病毒神经氨酸酶活性的均有抑制作用，而后检测了钙黄绿素与奥司他韦联合使用在细胞水平上的抗流感作用，发现两者联合使用能对感染H7N9野生型和突变型流感病毒的细胞起到治疗作用，最后，检测了两者联合使用对小鼠流感模型的影响，发现加入钙黄绿素与奥司他韦混合物后，可以明显缓解流感小鼠体重的减轻，使小鼠逐渐恢复到健康水平，并且能显著降低流感小鼠的肺指数。

摘要： 本发明涉及一种采用钙黄绿素标记斑马鱼胃肠道的方法。该方法步骤如下：(1)挑选发育正常的斑马鱼胚胎，放入含有培养液的培养容器中，加入钙黄绿素溶液；(2)恒温条件下避光孵育斑马鱼胚胎，然后用培养液清洗，制得标记后的斑马鱼胚胎；(3)将标记后的斑马鱼胚胎麻醉，利用图像采集工具，对斑马鱼胚胎中显示黄绿荧光的胃肠道部分进行影像采集并保存。本发明首次对钙黄绿素标记斑马鱼胃肠道的影响因素进行了研究，发现对钙黄绿素标记斑马鱼胃肠道的影响因素与在骨骼沉积等方式进行染色的影响因素不相同，通过对相关条件进行优化后，获得了能够得到胃肠道轮廓清晰、清楚可见、易于辨识的结果的标记方法。

摘要： 本发明提供了一种基于金属离子和其纳米粒子选择性调控QDs和钙黄绿素荧光信号的分析方法及应用，涉及生物医学诊断分析方法技术领域，该分析方法包括基于金属离子和其对应的纳米粒子选择性调控QDs和钙黄绿素的荧光信号，金属离子和其对应的纳米粒子有效改变QDs的荧光信号和钙黄绿素的荧光信号，并基于QDs的荧光信号和钙黄绿素的荧光信号定量单一目标物，目标物为结核分歧杆菌LAM。本发明通过利用金属离子和其对应的纳米粒子作为桥梁，将钙黄绿素和QDs对于两者的选择性识别用于结核分枝杆菌LAM的双荧光和二元可视化分析，为临床诊断提供更多选择，为发展多种生物化学和医学检验方法提供指导和奠定基础。

摘要： 本发明公开了一种钙黄绿素可视化LAMP检测肺炎克雷伯菌的检测反应体系，在25μL的反应体积中包括试剂：10×thermosol Buffer，dNTPs，甜菜碱，MgSO4，内引物对，环引物对，外引物对，钙黄绿素，MnCl2，Bst聚合酶，DNA模板，RNase‑free water。该检测反应体系具有良好的特异性，且与LAMP琼脂糖凝胶电泳检测方法的敏感性一致，但比PCR方法敏感100倍；在反应前加入钙黄绿素和锰离子，反应产物直接肉眼观察颜色变化即可判断反应结果，无需经过琼脂糖凝胶电泳检测。可以看出，钙黄绿素可视化LAMP方法具有特异性强、灵敏高、操作简单、产物易检测等优点，反应只需要一个恒温水浴锅即可完成检测，适用于基层养殖场对病原菌的快速检测。

摘要： 本发明涉及用阳离子脂质体包裹负载钙黄绿素的介孔二氧化硅纳米颗粒的制备方法。将钙黄绿素负载到介孔二氧化硅中；制备粒径均一的阳离子脂质体将阳离子脂质体包裹到负载钙黄绿素的介孔二氧化硅纳米颗粒外。本发明制备的阳离子脂质体包裹负载钙黄绿素的介孔二氧化硅纳米颗粒，制备出的阳离子脂质体包裹负载钙黄绿素的介孔二氧化硅纳米颗粒的粒径在80～130纳米之间，加入细胞后细胞存活率为80％～90％，用倒置荧光显微镜观察活细胞标记的效率约占90％～95％，通过观察纳米颗粒内钙黄绿素的分布情况来判断活细胞的位置，可实现高效的活细胞标记。

摘要： 本发明公开了曼氏无针乌贼耳石的钙黄绿素标记方法及其检测手段，标记方法为：将钙黄绿素加入养殖水中，制成浓度为200‑400mg/L的溶液，暴晒，再加入米赛林，混合均匀得标记浸泡液，将待标记的曼氏无针乌贼饥饿后置于标记浸泡液中浸泡，结束后用新鲜海水浸泡，即完成对曼氏无针乌贼耳石的标记。有益效果为：本发明标记方法简单，能达到无损标记的目的，能够一次性实现大规模的放流标记活动；该标记方法能形成具有高强度荧光的混合配合物，方便观察结果及对比，且标记时间持久长；该标记方法对不同阶段曼氏无针乌贼都可行，为曼氏无针乌贼的增殖放流效果评价提供有效的手段。

摘要： 本发明公开一种钙黄绿素可视化RT‑LAMP试剂盒及其应用，其特征在于，包括引物组、钙黄绿素、氯化锰、新型鸭呼肠孤病毒RNA模板、RNase‑free water、10倍反应缓冲液、dNTPs、甜菜碱、MgSO