许旺细胞

摘要： 背景:周围神经损伤是临床上的常见创伤。目前短距离神经损伤可以进行端-端吻合,长距离神经损伤常需要移植物桥接。许旺细胞源性外泌体可以提高神经元存活率、改善再生微环境、促进轴突再生,在周围神经损伤与修复领域具有很好的应用前景。目的:综述许旺细胞源性外泌体在周围神经损伤后再生修复中的研究进展。方法:检索PubMed数据库、万方数据库和中国知网(CNKI)2000-2022年的相关文章。中文检索词:“许旺细胞,雪旺细胞,施万细胞,外泌体,细胞外囊泡,周围神经,外周神经,坐骨神经”;英文检索词:“Schwann cell,exosomes,vesicles,peripheral nerve,sciatic nerve”,对初步检索的文献根据纳入、排除标准进行筛选,共纳入52篇文献进行深度分析。结果与结论:①许旺细胞的增殖和迁移对周围神经损伤后的再生修复发挥重要作用,有多种信号通路介入受损周围神经的再生修复;②外泌体可以通过转移生物活性物质介导细胞间通讯以维持正常的生理过程,在周围神经损伤的修复治疗方面具有很大的潜力;③许旺细胞源性外泌体可以通过参与轴突再生和生长调节,发挥促进损伤神经再生修复的作用,为周围神经损伤的临床治疗提供理论依据。

摘要： 背景:脊髓损伤可以导致轴突严重受损和神经元死亡,从而导致运动和/或感觉功能永久丧失。目前对于脊髓损伤的治疗手段仍然十分局限,外泌体作为一种非细胞疗法,因其强大的生物学活性而备受关注,有可能成为脊髓损伤的一种新兴治疗方案。目的:观察许旺细胞来源外泌体对小鼠脊髓损伤后神经轴突的修复作用。方法:将30只C57小鼠随机分成假手术组、许旺细胞来源外泌体组和PBS对照组,每组10只,对许旺细胞来源外泌体组和PBS对照组小鼠进行脊髓钳夹损伤,损伤24 h后,许旺细胞来源外泌体组小鼠尾静脉注射许旺细胞来源外泌体,PBS对照组小鼠尾静脉注射PBS,每周3次,持续4周,每次每只注射25μL (0.1 g/L)。最后一次注射后24 h后处死小鼠,取出脊柱并分离出损伤部位上下各1 cm范围内的脊髓进行固定、脱水、包埋和切片。免疫荧光染色观察损伤区域CD31阳性血管内皮细胞和FSP1阳性成纤维细胞的募集,以及NF200阳性神经轴突存活情况。结果与结论:与PBS对照组相比,许旺细胞来源外泌体组小鼠损伤区域中CD31阳性细胞数量减少(P <0.01),FSP1阳性细胞数量减少(P <0.05),以及NF200阳性轴突数量增加(P <0.01)。结果表明,许旺细胞来源外泌体可以减少脊髓损伤区域内血管生成和瘢痕形成,并促进神经轴突的修复。

摘要： 背景:既往研究发现许旺细胞及骨髓间充质干细胞诱导的类许旺细胞可以促进外周神经损伤后轴突的再生及功能恢复,而由于许旺细胞来源有限而限制了其应用,而且类许旺细胞外基质用于周围神经损伤的治疗鲜有报道。目的:探讨类许旺细胞外基质是否有助于周围神经损伤后的神经修复。方法:提取SD大鼠许旺细胞和骨髓间充质干细胞,将骨髓间充质干细胞诱导分化为类许旺细胞,并进行细胞鉴定和制备细胞外基质,在体外环境下将背根神经节神经元和背根神经节组织块接种于细胞外基质上,观察神经轴突生长情况。制备SD大鼠坐骨神经缺损模型,分别用自体神经、类许旺细胞外基质复合聚ε-己内酯导管(诱导组)、许旺细胞外基质复合聚ε-己内酯导管(许旺组)桥接,观察坐骨神经轴突再生及腓肠肌恢复情况。结果与结论:①与骨髓间充质干细胞比较,类许旺细胞p75^(NTR)明显表达(P<0.05),许旺细胞纯度为(95.20±4.63)%;②类许旺细胞外基质和许旺细胞外基质能够在体外环境下促进背根神经节神经元与组织块神经轴突的生长;③体内实验中自体神经组再生神经纤维连贯且排列有序;诱导组和许旺组再生神经纤维贯通缺损区域,与自体神经组类似;④结果表明,类许旺细胞和许旺细胞的细胞外基质能够促进周围神经损伤后轴突再生及修复,为周围神经损伤提供了一种新的来源方便的无细胞疗法。

摘要： 背景:肌源性干细胞具有强大的自我更新和多向分化潜能,在神经损伤修复领域具有广泛应用前景.目的:文章就周围神经损伤的治疗现状和肌源干细胞治疗周围神经损伤的研究进展进行综述.方法:以"肌源干细胞,周围神经损伤,组织工程,许旺细胞,移植,再生,神经导管"或"muscle-derived stem cell,peripheral nerve injury,tissue engineering,Schwann cells,transplant,regeneration,nerve conduit"为检索词,检索PubMed、CNKI、万方数据库,排除重复性研究以及内容不相关的文献,最后纳入100篇文献进行综述.结果 与结论:肌源干细胞通过分化为神经再生所需要的各种支持细胞和强大的旁分泌作用,在修复神经损伤等方面表现出良好的再生潜力.

摘要： 背景:临床上广泛采用自体神经移植来达到神经修复的目的,但应用效果欠佳,而聚乙二醇的应用从细胞融合剂到水凝胶生物黏合剂再到促轴突融合神经修复新型材料等,因此若能联合聚乙二醇探索出加快神经功能重建的方法,可以更好地应用于临床,并且对神经再生与功能重建也具有重要意义.目的:阐述聚乙二醇在神经功能重建领域的应用进展.方法:利用PubMed和中国知网数据库,检索有关聚乙二醇促细胞融合以及聚乙二醇作用于神经修复的文献,检索时间为2020年10月至2021年3月,英文检索词为"PEG,polyethylene glycol,cell-fusion,nerve function reconstruction,nerve repair",中文检索词为"聚乙二醇、细胞融合、功能重建、神经修复".根据纳入与排除标准对所有文章进行初筛后,保留相关性较高的61篇文章进行综述.结果 与结论:①在一定条件下,70％聚乙二醇加入少量腺苷5'-三磷酸可加快损伤神经轴突快速生长,有效促进膜的融合,实现神经细胞结构和功能重建.②聚乙二醇自身浓度是促进体细胞融合的主要影响因素,当聚乙二醇浓度为35％,相对分子质量为4000,或者聚乙二醇浓度为50％,其相对分子质量为1000时,对细胞融合效率影响最大;其他次要影响因素包括融合细胞个数、反应温度和时间等.③进一步分析聚乙二醇促神经修复的机制发现,聚乙二醇可促进轴突融合,表现出恢复轴突形态的连续性和电生理功能的作用,但是否能在瓦勒氏变性之前实现轴突的有效连接还需进一步研究证明.④聚乙二醇应用前景较为广泛,未来可考虑将其应用在新型生物黏合剂的研发、神经修复支架改良、复合物水凝胶研制相关研究中,但关于聚乙二醇在神经功能重建领域的应用还有诸多问题未解决,如聚乙二醇诱导神经细胞融合对人体的长期影响、最大延迟治疗时间等问题,还需后续研究不断完善.

摘要： 背景:临床上广泛采用自体神经移植来达到神经修复的目的,但应用效果欠佳,而聚乙二醇的应用从细胞融合剂到水凝胶生物黏合剂再到促轴突融合神经修复新型材料等,因此若能联合聚乙二醇探索出加快神经功能重建的方法,可以更好地应用于临床,并且对神经再生与功能重建也具有重要意义。目的:阐述聚乙二醇在神经功能重建领域的应用进展。方法:利用PubMed和中国知网数据库,检索有关聚乙二醇促细胞融合以及聚乙二醇作用于神经修复的文献,检索时间为2020年10月至2021年3月,英文检索词为"PEG,polyethylene glycol,cell-fusion,nerve function reconstruction,nerve repair",中文检索词为"聚乙二醇、细胞融合、功能重建、神经修复"。根据纳入与排除标准对所有文章进行初筛后,保留相关性较高的61篇文章进行综述。结果与结论:(1)在一定条件下,70%聚乙二醇加入少量腺苷5’-三磷酸可加快损伤神经轴突快速生长,有效促进膜的融合,实现神经细胞结构和功能重建。(2)聚乙二醇自身浓度是促进体细胞融合的主要影响因素,当聚乙二醇浓度为35%,相对分子质量为4000,或者聚乙二醇浓度为50%,其相对分子质量为1000时,对细胞融合效率影响最大;其他次要影响因素包括融合细胞个数、反应温度和时间等。(3)进一步分析聚乙二醇促神经修复的机制发现,聚乙二醇可促进轴突融合,表现出恢复轴突形态的连续性和电生理功能的作用,但是否能在瓦勒氏变性之前实现轴突的有效连接还需进一步研究证明。(4)聚乙二醇应用前景较为广泛,未来可考虑将其应用在新型生物黏合剂的研发、神经修复支架改良、复合物水凝胶研制相关研究中,但关于聚乙二醇在神经功能重建领域的应用还有诸多问题未解决,如聚乙二醇诱导神经细胞融合对人体的长期影响、最大延迟治疗时间等问题,还需后续研究不断完善。

摘要： 背景:肌源性干细胞具有强大的自我更新和多向分化潜能,在神经损伤修复领域具有广泛应用前景。目的:文章就周围神经损伤的治疗现状和肌源干细胞治疗周围神经损伤的研究进展进行综述。方法:以"肌源干细胞,周围神经损伤,组织工程,许旺细胞,移植,再生,神经导管"或"muscle-derived stem cell,peripheral nerve injury,tissue engineering,Schwann cells,transplant,regeneration,nerve conduit"为检索词,检索PubMed、CNKI、万方数据库,排除重复性研究以及内容不相关的文献,最后纳入100篇文献进行综述。结果与结论:肌源干细胞通过分化为神经再生所需要的各种支持细胞和强大的旁分泌作用,在修复神经损伤等方面表现出良好的再生潜力。

摘要： 背景:许旺细胞是周围神经组织工程最理想的种子细胞,但许旺细胞存在诸多缺陷,因此目前的研究主要集中在具有许旺细胞特性的其他细胞上,并且许旺细胞样细胞已成为周围神经损伤修复的理想细胞来源.目的:探讨睫状神经营养因子复合毛喉素和3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(Fsk-IBMX)诱导肌源性干细胞分化为许旺细胞表型的方法及该诱导过程与环磷酸腺苷信号通路的相关性,以期为进一步将肌源性干细胞应用于周围神经损伤修复奠定基础.方法:采用混合消化酶从1周龄SD乳鼠中提取肌源性干细胞,以睫状神经营养因子诱导肌源性干细胞去分化,再用Fsk-IBMX对去分化肌源性干细胞进行诱导.通过细胞形态学、细胞免疫荧光、CCK-8、Western blot、RT-qPCR等技术对肌源性干细胞、去分化细胞和许旺细胞样细胞进行鉴定及相关分析,同时检测去分化过程和许旺细胞样细胞分化过程中环磷酸腺苷信号通路相关蛋白的表达.结果 与结论:①细胞免疫荧光染色显示取自SD乳鼠的原代细胞能够被肌源性干细胞特异性标志物Desmin标记;②CCK-8结果显示第1-3代肌源性干细胞增殖活性逐渐增加,第3-8代肌源性干细胞增殖活性趋于稳定;③Western blot结果显示睫状神经营养因子诱导后成肌分化相关蛋白p21和MyoG表达降低,环磷酸腺苷信号通路相关蛋白p-CREB表达增加,Fsk-IBMX诱导后许旺细胞标志物S100β、GFAP和p75以及p-CREB表达均增加,而环磷酸腺苷抑制剂SQ22536可以抑制睫状神经营养因子和Fsk-IBMX的作用;④RT-qPCR结果与Western blot结果一致,即Fsk-IBMX诱导后S100β、GFAP和p75 mRNA表达水平增加,而SQ22536可以抑制这一效应;CCK-8结果显示Fsk-IBMX诱导后细胞活性有所降低;⑤结果显示:睫状神经营养因子复合Fsk-IBMX可以诱导肌源性干细胞分化为许旺细胞表型,并且诱导过程激活了环磷酸腺苷信号通路.

摘要： 背景:既往研究发现许旺细胞及骨髓间充质干细胞诱导的类许旺细胞可以促进外周神经损伤后轴突的再生及功能恢复,而由于许旺细胞来源有限而限制了其应用,而且类许旺细胞外基质用于周围神经损伤的治疗鲜有报道.目的:探讨类许旺细胞外基质是否有助于周围神经损伤后的神经修复.方法:提取SD大鼠许旺细胞和骨髓间充质干细胞,将骨髓间充质干细胞诱导分化为类许旺细胞,并进行细胞鉴定和制备细胞外基质,在体外环境下将背根神经节神经元和背根神经节组织块接种于细胞外基质上,观察神经轴突生长情况.制备SD大鼠坐骨神经缺损模型,分别用自体神经、类许旺细胞外基质复合聚ε-己内酯导管(诱导组)、许旺细胞外基质复合聚ε-己内酯导管(许旺组)桥接,观察坐骨神经轴突再生及腓肠肌恢复情况.结果与结论:①与骨髓间充质干细胞比较,类许旺细胞p75NTR明显表达(P ＜ 0.05),许旺细胞纯度为(95.20±4.63)%;②类许旺细胞外基质和许旺细胞外基质能够在体外环境下促进背根神经节神经元与组织块神经轴突的生长;③体内实验中自体神经组再生神经纤维连贯且排列有序;诱导组和许旺组再生神经纤维贯通缺损区域,与自体神经组类似;④结果表明,类许旺细胞和许旺细胞的细胞外基质能够促进周围神经损伤后轴突再生及修复,为周围神经损伤提供了一种新的来源方便的无细胞疗法.

摘要： 目的:许旺细胞能够促进损伤的周围神经再生,可在周围神经组织工程修复中充当种子细胞,其大量高效的培养及纯化是临床治疗周围神经损伤的基础.文章总结近10年许旺细胞体外培养的相关文献,对许旺细胞培养及纯化的研究进展作一描述性综述,以期为许旺细胞的体外培养提供参考.方法:检索有关许旺细胞分离、培养及纯化的文献,以"schwann cells;isolation;culture;purification"为关键词,在PubMed、Web of Science和Medline等数据库进行检索,以"许旺细胞,分离,培养,纯化"为关键词,在CNKI、万方、维普等数据库进行检索.对检索获得的全部文献阅读、分析、判断,最终纳入符合标准的62篇文献进行归纳总结.结果:许旺细胞培养的经典方法为组织块培养法、酶消化法.纯化方法包括抗有丝分裂法、免疫选择法、特异黏附法、预变性、冷喷射、差速贴壁法、层粘连蛋白包被法、低血清法、刺激因子法、荧光激活细胞分选或磁激活细胞分选、免疫抗体包被筛选法、体外冲击波刺激等.结论:许旺细胞体外培养及纯化方法多样,每种方法均有其优缺点,如何快速、高效地得到高纯度许旺细胞仍具挑战,可联合多种方法纯化,尽可能控制许旺细胞增殖的影响因素.

摘要： 本文通过观察不同浓度甲泼尼龙琥珀酸钠对许旺细胞分泌功能影响的实验，得出高浓度的甲泼尼龙琥珀酸钠抑制许旺细胞分泌神经生长因子，长时间、低浓度的甲泼尼龙琥珀酸钠则促进许旺细胞分泌神经生长因子。

摘要： 本发明公开了一种许旺细胞的培养方法，其包括：培养过程中应用了环黄芪醇和异氟醚。其培养步骤如下：（1）许旺细胞的分离、纯化及原代培养；（2）许旺细胞的传代培养；（3）许旺细胞内神经生长因子的表达：当第3代细胞快长满细胞瓶底时，传代接种于25mL培养瓶中振荡培养5d，培养液为：质量分数为0.5‑0.8%的环黄芪醇的培养液，分开2次通入3小时含有3.0%异氟醚的混合空气。

摘要： 本发明属于细胞生物学领域，涉及一种分离、纯化许旺细胞的方法。该方法依次由下述步骤组成：首先，无菌情况下取神经段，去除神经外膜；然后用复合胶原酶NB4和dispase混合消化酶溶液消化神经束，弃溶液；再置于胰蛋白酶和EDTA中作用5～10分钟，得到去除神经束膜的神经纤维；随后将得到的神经纤维置于混合酶溶液中，振荡得到细胞混悬液；最后离心，重悬。利用本发明能够低成本、高效率的获得大量高纯度的许旺细胞，为损伤神经修复提供丰富优质许旺细胞。

摘要： 本发明属于细胞生物学领域，涉及一种从利用脂肪组织分离、纯化许旺细胞的方法及其应用。该方法步骤包括：(1)无菌情况下剥离脂肪组织，切碎并清洗；(2)用3-20倍组织量的消化酶溶液消化脂肪组织碎块；所述的消化酶是酵素酶、胶原酶NB4或者两者的混合液；(3)将得到的混悬液用吸管反复吹打3～5分钟；(4)对解离的细胞在600-1500g离心3-10分钟，得到细胞团块；(5)用许旺细胞培养液重悬步骤(4)得到的细胞接种于纤维粘连蛋白包被的培养皿。许旺细胞的纯度就可以接近95％。利用本发明能够低成本、高效率的获得大量高纯度的优质许旺细胞。

摘要： 本发明公开了一种刺激许旺细胞分泌细胞因子的培养方法，其包括：培养过程中应用了炭角菌素E。其培养步骤如下：（1）许旺细胞的分离、纯化及原代培养；（2）许旺细胞的传代培养；（3）在含有炭角菌素E的细胞培养及中刺激许旺细胞内神经生长因子的表达。

摘要： 本发明属于细胞生物学领域，涉及一种诱导人脐带间充质干细胞分化为类许旺细胞的方法。其包括步骤为：(1)将脐带间充质干细胞培养至亚融合状态后，弃去旧的培养液，加入含有1mM β-巯基乙醇培养液诱导过夜；(2)弃去诱导液，用DMEM培养基清洗，加入全反式维甲酸诱导60-84小时；(3)弃去诱导液，用DMEM培养基清洗，加入含有5ng/ml-6ng/ml血小板源生长因子、9-10ng/ml碱性成纤维细胞生长因子、13μM-15μM福司柯林以及250-260ng/ml胶质细胞生长因子或200-210ng/ml神经生长因子的复合诱导液，诱导10-16天，每72小时换一次液。本发明的方法诱导率可达到90％以上。

摘要： 本发明公开了一种许旺细胞的培养方法，其包括：培养过程中应用了环黄芪醇和异氟醚。其培养步骤如下：（1）许旺细胞的分离、纯化及原代培养；（2）许旺细胞的传代培养；（3）许旺细胞内神经生长因子的表达：当第3代细胞快长满细胞瓶底时，传代接种于25mL培养瓶中振荡培养5d，培养液为：质量分数为0.5‑0.8%的环黄芪醇的培养液，分开2次通入3小时含有3.0%异氟醚的混合空气。

摘要： 本发明属于细胞生物学领域，涉及一种培养成年小鼠坐骨神经许旺细胞的方法。本发明还包括经过纯化过程获得更高的纯度的许旺细胞的方法。获得的许旺细胞纯度达到91％，再纯化后其纯度高达98％，结果表明，由于体外的预变性促进了许旺细胞的增殖从而抑制了成纤维的增值，能获得有较高的纯度的许旺细胞。本发明方法通过体外预变性的坐骨神经培养及纯化步骤，能简单、有效的获取大量、高纯度的许旺细胞，为损伤神经修复提供了丰富、优质的许旺细胞，可用于在组织工程中作为神经种子细胞。

摘要： 本发明属于细胞生物学领域，涉及一种从利用脂肪组织分离、纯化许旺细胞的方法及其应用。该方法步骤包括：(1)无菌情况下剥离脂肪组织，切碎并清洗；(2)用3-20倍组织量的消化酶溶液消化脂肪组织碎块；所述的消化酶是酵素酶、胶原酶NB4或者两者的混合液；(3)将得到的混悬液用吸管反复吹打3～5分钟；(4)对解离的细胞在600-1500g离心3-10分钟，得到细胞团块；(5)用许旺细胞培养液重悬步骤(4)得到的细胞接种于纤维粘连蛋白包被的培养皿。许旺细胞的纯度就可以接近95％。利用本发明能够低成本、高效率的获得大量高纯度的优质许旺细胞。

摘要： 本发明属于细胞生物学领域，涉及一种分离、纯化许旺细胞的方法。该方法依次由下述步骤组成：首先，无菌情况下取神经段，去除神经外膜；然后用复合胶原酶NB4和dispase混合消化酶溶液消化神经束，弃溶液；再置于胰蛋白酶和EDTA中作用5～10分钟，得到去除神经束膜的神经纤维；随后将得到的神经纤维置于混合酶溶液中，振荡得到细胞混悬液；最后离心，重悬。利用本发明能够低成本、高效率的获得大量高纯度的许旺细胞，为损伤神经修复提供丰富优质许旺细胞。

摘要： 本发明属于细胞生物学领域，涉及一种利用胶原酶和酵素酶分离、纯化许旺细胞的方法及其应用。首先，在无菌情况下剥离神经段的神经外膜，切碎、清洗，离心弃上清；然后用酵素酶、胶原酶NB4或者两者的混合液消化神经碎块30～60分钟，反复吹打，然后离心、弃上清，得到细胞团块；最后用许旺细胞培养液重悬，即可。本发明使用复合胶原酶和酵素酶分离纯化许旺细胞，经过第一次纯化后，许旺细胞的纯度就可达到98％。再次纯化扩增后，许旺细胞的纯度就可以接近100％。利用本发明能够低成本、高效率的获得大量高纯度的许旺细胞，为损伤神经修复提供丰富优质许旺细胞。