蛋白质表达

摘要： 目的:解旋酶样转录因子(HLTF)在人体细胞的DNA复制压力应对中发挥重要作用,对其结构和功能的研究需要大量、高纯度且折叠正确的蛋白质。方法:通过优化HLTF基因的密码子偏好,构建HLTF蛋白的大肠杆菌表达系统;通过亲和层析、离子交换层析、凝胶过滤层析等方法纯化HLTF;采用体外实验研究HLTF的生化活性。结果:成功构建HLTF蛋白的大肠杆菌表达系统,通过一个4步的纯化,获得高纯度的HLTF蛋白质,体外功能实验表明大肠杆菌表达的HLTF具有完整的生化活性,提示蛋白折叠正确。本研究发现HLTF的泛素连接酶活性对底物与泛素的连接方式有较大的容忍度。结论:建立了一种高效制备大量、高纯度且折叠正确的HLTF的方法,为深入理解其泛素连接酶活性提供线索,为其结构和功能研究奠定基础。

摘要： 以具有几丁质降解能力菌株Chitiniphilus sp. LY72的裂解多糖单加氧酶(Cs LPMO)为研究对象,在克隆Cs LPMO全长基因的基础上对其进行生物信息学分析,利用3种表达质粒p ET-22b、pET-28a和pCold,构建Cs LPMO异源表达菌株EBL-22、EBL-28和EBL-Co。重组Cs LPMO蛋白经Ni-NTA亲和层析柱纯化及十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定,筛选最佳表达质粒,对其表达条件进行优化。结果表明,Cs LPMO是一种裂解性多糖单加氧酶,隶属于AA10家族。3株重组菌中,纯化重组酶蛋白相对含量分别为5.9%、4.1%、5.4%,比酶活力分别为155.42 U/mg、80.26 U/mg、148.29 U/mg,因此,确定最佳质粒为pET-22b,菌株EBL-22表达条件为:OD600 nm值至0.4时,添加异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)至终浓度为0.4 mmol/L后,在25°C下诱导表达16 h。在优化条件下,其可溶性蛋白含量为928.32 mg/L,比酶活力为3.34 U/m L。Cs LPMO的加入可使还原糖的产量提高1.67倍。

摘要： Ⅰ型溶菌酶是无脊椎动物免疫系统中一种富含半胱氨酸的重要蛋白质免疫因子,具有良好的抗病原微生物功能。通过反转录PCR自青蛤闭壳肌中克隆到Ⅰ型溶菌酶(CslyⅠ)基因,以pPⅠCZαA为表达载体、毕赤酵母X-33为工程菌,构建重组毕赤酵母菌株X-33/pPⅠCZαA-CslyⅠ,经高质量浓度博莱霉素培养基筛选获得高拷贝重组菌株。该菌株在28°C、250r/min条件下,经1%甲醇诱导表达72h后获得蛋白质类表达产物。Western blot和MALDⅠ-TOF/TOF质谱分析表明,该表达产物为预期的重组青蛤Ⅰ型溶菌酶;进一步的抑菌试验证明,该重组青蛤Ⅰ型溶菌酶具有抗金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和副溶血性弧菌的活性,并且显示良好的热稳定性。本研究可为无脊椎动物来源Ⅰ型溶菌酶的制备提供基于重组毕赤酵母的生物合成技术。

摘要： 为研究红景天苷对运动疲劳大鼠骨骼肌线粒体自由基代谢及呼吸链功能的影响,将健康雄性Wistar大鼠随机分为空白对照组(A组)、运动模型组(B组)、红景天苷低剂量运动组[50 mg·(kg·d)^(-1),C组]、中剂量运动组[100 mg·(kg·d)^(-1),D组]、高剂量运动组[200 mg·(kg·d)^(-1),E组]。除A组外,其余各组大鼠进行递增负荷跑台运动建立运动疲劳模型,记录大鼠体重及末次跑台力竭时间,检测骨骼肌线粒体锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)水平及呼吸链酶复合体Ⅰ—Ⅳ(CⅠ—CⅣ)活性,采用蛋白免疫印迹法检测骨骼肌Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1)、核呼吸因子2(Nrf2)及血氧红素加氧酶(HO-1)表达水平。结果表明:①与A组相比,B组大鼠跑台力竭运动时间,Mn-SOD、GSH-Px、CⅠ—CⅣ活性及Keap1、Nrf2、HO-1蛋白表达均显著降低,MDA含量显著升高(P<0.01)。②与B组相比,D、E组大鼠跑台力竭时间、Mn-SOD活性显著增加(P<0.01),E组大鼠MDA含量显著降低(P<0.01);C、D、E组GSH-Px、CⅢ、CⅣ活性及Keap1、Nrf2、HO-1蛋白表达量显著增加(P<0.01或0.05),D、E组CⅠ活性显著增加(P<0.01或0.05),E组CⅡ活性显著增加(P<0.05)。红景天苷可通过提升机体抗氧化防御能力及线粒体呼吸链中相关酶活性,缓解运动性疲劳的产生,其机制可能是通过激活Keap1-Nrf2-ARE通路来实现的。

摘要： 目的:抑郁症是一种严重影响人们正常生活的疾病,对人们的精神世界和身体健康构成了双重威胁.解郁丸是基于中医理论和长期实践的抗抑郁配方,已被证明具有良好的抗抑郁和抗失眠效果,但解郁丸的药理学作用机制及其化学成分在人体中的作用范围尚不明确,导致其应用受到一定程度的限制,希望通过本研究促进解郁丸的应用.方法:本研究以"TCM语法系统"和实体语法系统为基础,运用网络药理学方法,以获得解郁丸的化学成分作用的抑郁症相关基因;然后根据筛选规则,获得这些基因在细胞中的表达数据、细胞的器官和组织定位数据.结果:笔者得到了解郁丸化学成分通过直接作用于9个和间接作用于11个抑郁症相关基因来治疗抑郁症;随后筛选出了可以表达这些基因的细胞,获得了解郁丸成分作用的组织和器官,给出了解郁丸的化学成分在人体中的作用范围和对免疫组织的特异性作用.结论:总之,通过分析结果,笔者提出解郁丸可以在抗抑郁的同时调节机体的免疫功能,并且具有治疗抑郁症和其他疾病的合并症的潜能.

摘要： [背景]低频电磁场(Low frequency electromagnetic field,LF-EMF)可导致一系列健康效应的事实已被普遍接受.[目的]进一步探究LF-EMF辐射对细胞蛋白质表达及相关酶活性的影响.[方法]以酿酒酵母为研究对象,采用50 Hz LF-EMF对其进行持续暴露辐射,随后对其胞内蛋白质表达、相关酶活性进行分析.[结果]LF-EMF辐射对酿酒酵母超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(Catalase,CAT)和苹果酸脱氢酶(Malate dehydrogenase,MDH)活性的影响存在先促进后抑制的趋势.辐射处理使SOD活性在72 h提高了43.18％,CAT活性在16h提高了12.22％,MDH活性在20 h提高了12.90％ (P＜0.05);而LF-EMF辐射作用对乙醇脱氢酶(Alcoholdehydrogenase,ADH)和乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)的活性并未观察到显著的影响(P＞0.05).此外,蛋白质电泳和蛋白质组学分析的结果表明,LF-EMF可改变酿酒酵母部分胞内蛋白质的表达水平,其中3种蛋白质的表达发生显著上调,9种蛋白质的表达发生显著下调(P＜0.05).[结论]LF-EMF辐射可影响酿酒酵母的部分酶活性,改变其胞内部分蛋白质的表达水平.

摘要： CBX7 (chromobox 7)在细胞寿命延长和癌症发生中起着重要的调控作用.然而,获取足量的全长CBX7蛋白并用于结构研究极为艰难.实验阐述了CBX7功能结构域CBX7 (aa 145～227)重组表达载体构建的详细过程.同时,通过Ni-NTA亲和层析对融合目的蛋白进行了纯化,并利用SDS-PAGE及Western-blot进行了鉴定分析.纯化后的融合蛋白样品通过离子交换和分子筛层析进一步分离剩余杂质.本实验得到的高浓度CBX7蛋白可用于结晶,为后续CBX7的结构和功能研究奠定了基础.

摘要： 为探讨虫草头孢正已烷分离组分Fr.8对高胰岛素诱导的HepG-2细胞胰岛素抵抗的改善作用,作者建立了稳定的胰岛素抵抗细胞模型,并检测了Fr.8组分对胰岛素抵抗细胞(HepG-2/IR)的葡萄糖消耗、葡萄糖摄取及相关基因转录和蛋白质表达的影响.结果 显示,5μmol/L胰岛素是诱导细胞成为HepG-2/IR的最佳作用浓度;Fr.8组分在无细胞毒性范围内可显著增加HepG-2/IR对葡萄糖的消耗及摄取;Fr.8(＞25 μg/mL)可明显上调IR、IRS1、IRS2、Glut2、AMPKαmRNA的表达水平,并上调IR、IRS、Glut2、p-AMPKα、p-AKT蛋白质的表达.研究表明,虫草头孢Fr.8可改善HepG-2胰岛素抵抗,其机制可能与胰岛素受体及底物、葡萄糖转运蛋白2、p-AMPKα和p-AKT蛋白的激活有关.

摘要： 目的：观察健脾化痰汤含药血清对胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞蛋白质表达的影响.方法：采用体外培养细胞方法,利用二维凝胶电泳分离总蛋白,通过PDQuest8.0软件分析2-DE图谱,比较各组间蛋白表达量,然后利用质谱制作差异蛋白点的肽谱,确定各差异蛋白的种类,通过生物信息学分析所得蛋白的功能.结果：在2组凝胶中有12个蛋白质点显著差异表达,与IR组比较,中药组中表达上调有8个,下调有4个,主要涉及能量代谢、氧化应激成、非特异性急性时相反应蛋白等相关蛋白.结论：健脾化痰汤可能主要通过影响细胞能量代谢和氧化应激相关蛋白表达,调节细胞能量代谢和氧化应激功能而改善IR.

摘要： 通过采用双向凝胶电泳(2-DE)串联质谱(MALDI-TOF-MS)技术分析加巴喷丁(GBP)对长春新碱(VCR)致神经病理性疼痛(NPP)大鼠大脑皮层蛋白质的差异表达,探讨和分析GBP 对VCR致NPP的大脑皮层蛋白质表达的影响.36只成年雄性SD 大鼠随机分为3组:①空白对照组(Ns组):奇数日腹腔注射生理盐水、偶数日灌胃生理盐水;②疼痛模型对照组(Pc组):奇数日腹腔注射VCR、偶数日灌胃生理盐水;③GBP治疗组(Gt组):奇数日腹腔注射VCR、偶数日灌胃GBP.共给药16日.给药期问观察大鼠的行为学改变、体重和热痛阑变化;给药完后第二日留取各组坐骨神经和大脑皮层组织，光、电镜观察各组大鼠坐骨神经超微结构;双向凝胶电泳各组大脑皮层蛋白质，质谱鉴定并分析差异表达的蛋白质。加巴喷丁对长春新碱致神经病理性疼痛大鼠大脑皮层蛋白质的表达有影响，可能存在中枢层面蛋白水平的调控机制。

摘要： 目的：rn 应用蛋白质组学技术分析铁必复颗粒对缺铁诱发肾虚耳聋大鼠耳蜗基底膜的蛋白质水平表达的影响.rn 方法：rn 选用体重25～35g的健康、无耳疾、ABR阈值正常的幼龄Wistar大鼠,随机分为两组.正常对照大鼠组,喂以标准饲料16周;缺铁大鼠组,采用缺铁饲料喂养8周后,复制出至少有一耳ABR阈值改变≥15dB的大鼠,再将该组大鼠随机分成肾虚耳聋组、铁必复颗粒治疗组,肾虚耳聋组继续喂以缺铁饲料8周,铁必复颗粒治疗组喂以添加铁必复颗粒的缺铁饲料8周.取大鼠耳蜗膜性组织进行蛋白质组学分析,按功能、组成等进行多级分类,对各组间蛋白质表达的差异进行比较.rn 结果：rn 正常对照组、肾虚耳聋组、铁必复颗粒治疗组分别检测出989、1019、873组(个)蛋白质.肌动蛋白、肌球蛋白、细胞骨架蛋白等在铁必复颗粒治疗组耳蜗膜性组织中高表达,与正常组和肾虚耳聋组相比,蛋白表达都有上调.铁必复颗粒治疗组出现特异性高表达46 kDa protein、48 kDa protein等尚未命名的蛋白.rn 结论：rn 铁必复颗粒可能通过调控耳蜗肌动、肌球、细胞骨架蛋白等蛋白质以及46 kDa protein、48 kDa protein等蛋白的表达水平,参与修复肾虚耳聋模型中大鼠耳蜗结构及功能.

摘要： 目的:探讨眼镜蛇毒神经生长因子(NGF)对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)增殖、凋亡以及蛋白质表达差异的影响,进一步为蛇毒NGF抗肝纤维化提供依据.方法:实验分为对照组(单纯HSC-T6培养)和实验组(NGF进行干预).应用MTT检测眼镜蛇毒NGF对HSC-T6细胞增殖抑制率;流式细胞技术检测眼镜蛇毒NGF对HSC-T6细胞凋亡的影响;双向电泳技术观察HSC-T6细胞蛋白质表达变化.结果:MTT结果显示NGF对HSC-T6细胞增殖具有明显抑制作用(2μg/ml NGF时抑制率为73.5％±10.2％,P＜0.05;5μg/ml NGF时抑制率为58.8％±9.5％,P＜0.05;10ug/mlNGF时抑制率为50.7％±12.1％,P＜0.05);流式细胞仪也有同样的发现,NGF干预组的凋亡率16.12％±3.02％(2ug/ml NGF)和21.15％±3.31％(5μg/ml NGF)明显高于对照组的2.7％±1.55％(P＜0.05);比较分析空白对照组和NGF作用组的2-DE图谱,找到差异蛋白质点47个,其中与对照组相比在NGF作用组表达上调22个,下调25个.结论:蛇毒NGF能抑制大鼠肝星状细胞(HSC-T6)的增殖,诱导其凋亡,并且影响HSC-T6细胞蛋白质的表达.

摘要： 目的：建立高血压肝阳上亢证与出血性中风肝阳化风证及缺血性中风肝阳化风证脾淋巴细胞双向凝胶电泳图谱,并识别鉴定肝阳上亢证与肝阳化风证相同与差异表达的蛋白,探讨二证的本质内涵.rn 方法：将SD大鼠随机分为正常组、高血压肝阳上亢证与出血性中风肝阳化风证及缺血性中风肝阳化风证模型组,从大鼠一般情况、血压测定、旋转时间、行为学与形态学及TTC染色评价模型,分离大鼠脾淋巴细胞,进行双向凝胶电泳,PDQUEST软件分析,目标蛋白质点用基质辅助激光解析电离质谱进行鉴定.rn 结果：肌动蛋白β等4个蛋白在三组模型组中均较正常组表达上调,肝阳化风组较肝阳上亢组表达上调,膜联蛋白Ⅲ等3个蛋白在三组模型组中均较正常组表达下调,肝阳化风组较肝阳上亢组表达下调,膜联蛋白Ⅲ等7个蛋白在出血性肝阳化风组与缺血性肝阳化风组比较表达无明显差异,NADH脱氢酶在缺血性肝阳化风组较出血性肝阳化风组表达下调.rn 结论：肝阳上亢证与肝阳化风证既有相同的蛋白质表达又有差异的蛋白质表达,提示二证既有相同的物质基础又有不同的本质内涵,为肝阳上亢证与肝阳化风证本质研究提供了科学依据.

摘要： HIV-1病毒的潜伏感染可能与HIV-1的入侵、整合以及复制逆转录等多个过程相关,潜伏机制非常复杂.而在HIV-1的入侵、整合及逆转录等过程,细胞质膜蛋白都发挥重要作用.本研究拟采用蛋白质组学的方法,分析HIV-1潜伏感染细胞模型的细胞质膜蛋白质表达谱变化情况,从而为发现HIV-1潜伏机制,了解HIV-1与宿主细胞相互作用的分子机制提供帮助,发现HIV-1潜伏标志物,并为抗HIV-1药物研究提供新药物靶点提供线索.

摘要： 为探讨双孢蘑菇子实体发育不同阶段的蛋白质表达变化,对双孢蘑菇As2796子实体原基期、幼菇期、采收期、开伞期的蛋白质组进行了iTRAQ标记结合二维液相色谱串联质谱(iTRAQ-MS/MS)分析,共计获得不同肽段5869个,鉴定到1059个蛋白质,其中1007个具有相对定量信息.与双孢蘑菇原基期相比,幼菇期、采收期和开伞期分别有差异蛋白质242、200、240个,分别占3鉴定蛋白质总数的24.0％,19.9％和23.8％.对这些蛋白质及不同阶段之间的差异蛋白质进行了系列生物信息学分析,对8个上下调表达具有连续性的差异蛋白质相关基因进行了荧光定量PCR验证,其中3个蛋白质(错配碱基识别蛋白、细胞色素C1及某推定的未知蛋白质)基因的转录与蛋白质的表达具有较为一致的趋势.这些结果为后续双孢蘑菇子实体发育相关基因与机制的研究奠定了良好的基础.

摘要： 目的：克隆、表达恶性疟原虫海南株HN(2)var2csa基因DBL4、DBL5、DBL6区,通过ELISA方法比较其与硫酸软骨素A(CSA)的亲和能力差异,以及人体对恶性疟原虫海南株HN(1)、(2)VAR2CSA不同DBL区的免疫应答差异.方法：根据DBL区序列设计3对引物,PCR扩增目的片段,并与pMD18-T克隆载体连接.经PCR、酶切、测序鉴定正确后克隆至表达载体pET-22b,通过转化、诱导、纯化表达重组蛋白质,SDS-PAGE和Westernblot检测.通过ELISA方法进行重组蛋白质与CSA的粘附实验以及与患者血清的免疫识别实验.结果：酶切及DNA测序结果均表明表达载体构建成功,表达并纯化3个DBL区重组蛋白质,分子量与预计大小相同,Westernblot检测目的蛋白质具有免疫反应性,ELISA显示不同蛋白浓度条件下DBL5区均明显比其它两个DBL区有更高的OD405值,并且DBL5区被妊娠相关疟疾病人血清识别水平显著高.结论：var2csa基因3个DBL区重组蛋白质表达成功,DBL5区与CSA的粘附能力较强,人体对DBL5区的免疫应答反应可能在抗病免疫过程中起到关键作用.

摘要： 目的:建立肝星状细胞(HSC-T6)双向凝胶电泳图谱,初步分析NGF对HSC-T6细胞蛋白质表达的影响.方法:实验设立空白对照组和NGF(4mg·L-1、8mg·L-1、16mg.L-1)处理组,分别作用于HSC-T6细胞,24小时后提取细胞总蛋白;利用2-DE分离空白对照组和NGF处理组细胞总蛋白质后,经图像分析识别差异表达的蛋白点,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定差异蛋白质;生物信息学对差异蛋白质点进行GO分类及信号传导通路分析.结果:比较分析空白对照组和NGF作用组的2-DE图谱,找到差异蛋白质点47个,其中在NGF作用组表达上调22个,下调25个,差异蛋白质点的表达部分随着NGF浓度的增加呈递增性,部分随着NGF浓度的增加呈递减性,对其中18个表达差异1.8倍以上的蛋白质点进行肽质量指纹图分析,鉴定出13个与细胞信号传导、细胞增殖、氧化代谢有关的蛋白质; 结论:眼镜蛇毒NGF能改变HSC-T6细胞信号通路中相关蛋白质的差异表达,为在蛋白质水平研究NGF抗机制提供理论依据.

摘要： 目的:探讨乳腺癌患者临床病理特征与Ki-67表达之间的关系.rn 方法:收集临床资料,采用免疫组化检测原发性乳腺癌251例患者的ER/PR、Her-2、Ki-67的表达情况,与患者病理类型和组织学分级等因素相结合进行比较.rn 结果:组织学分级Ⅰ/Ⅱ级与Ⅲ级之间Ki-67表达存在差异(P=0.038);有淋巴结转移的病例中Ki-67的表达较高(P=0.028);ER/PR的表达与Ki-67的表达呈负相关(P=0.010),Her-2与Ki-67的表达呈正相关(P＜0.001);含有危险因素的乳腺癌患者中Ki-67的表达较高(P＜0.001).rn 结论:Ki-67的表达情况结合其他的病理学特征可提示乳腺癌预后.

摘要： 本发明提供了包含一或多种同种型红细胞生成素(EPO)的组合物，所述红细胞生成素包含与其连接的聚糖，特征在于所述聚糖包含LewisX结构及每个EPO分子平均至少6个唾液酸部分。本发明进一步提供了获得包含一或多种同种型红细胞生成素(EPO)的组合物的方法，所述红细胞生成素包含与其连接的聚糖，其中所述聚糖包含平均每个EPO分子至少6个唾液酸及0-2个Lewis x结构，所述方法包括：a)提供含有可表达形式的编码腺病毒E1A蛋白的核酸序列及进一步含有可表达形式的编码EPO的核酸的真核细胞，其中所述细胞进一步含有在异源启动子控制下的编码唾液酸转移酶、优选α-2，6-唾液酸转移酶或α-2，3-唾液酸转移酶的核酸序列；b)在无血清培养基中培养所述细胞，使得EPO在所述细胞中表达；c)从所述细胞和/或培养基中收获表达的EPO；及d)纯化并分级分离EPO以获得每个EPO分子N联聚糖的平均唾液酸含量增加的级分，获得包含一或多种同种型EPO的组合物，所述EPO包含与其连接的聚糖，其中所述聚糖包含每个EPO分子平均至少6个唾液酸及0-2个Lewis x结构。

摘要： 本发明提供了包含一或多种同种型红细胞生成素(EPO)的组合物，所述红细胞生成素包含与其连接的聚糖，特征在于所述聚糖包含LewisX结构及每个EPO分子平均至少6个唾液酸部分。本发明进一步提供了获得包含一或多种同种型红细胞生成素(EPO)的组合物的方法，所述红细胞生成素包含与其连接的聚糖，其中所述聚糖包含平均每个EPO分子至少6个唾液酸及0—2个Lewis x结构，所述方法包括：a)提供含有可表达形式的编码腺病毒ElA蛋白的核酸序列及进一步含有可表达形式的编码EPO的核酸的真核细胞，其中所述细胞进一步含有在异源启动子控制下的编码唾液酸转移酶、优选α-2，6-唾液酸转移酶或α-2，3-唾液酸转移酶的核酸序列；b)在无血清培养基中培养所述细胞，使得EPO在所述细胞中表达；c)从所述细胞和/或培养基中收获表达的EPO；及d)纯化并分级分离EPO以获得每个EPO分子N联聚糖的平均唾液酸含量增加的级分，获得包含一或多种同种型EPO的组合物，所述EPO包含与其连接的聚糖，其中所述聚糖包含每个EPO分子平均至少6个唾液酸及0—2个Lewis x结构。

摘要： 由下述氟树脂形成了与蛋白质或包含蛋白质的组合物接触的表面的容器及用于制造蛋白质或包含蛋白质的组合物的器材具有显著的低蛋白质吸附性，其中，所述氟树脂为选自四氟乙烯‑六氟丙烯系共聚物及四氟乙烯‑全氟烷基乙烯基醚系共聚物中的至少1种氟树脂，并且，所述氟树脂的熔点为320°C以下，所述氟树脂中的相对于每1×10

摘要： 本发明提供能减小使用了特异性地结合的物质的测定中的由肝型脂肪酸结合蛋白质引起的测定值的变动幅度的肝型脂肪酸结合蛋白质制剂、评价该制剂的方法、制作肝型脂肪酸结合蛋白质的校准曲线的方法、以及定量该蛋白质的方法。一种用使用了用10mM的氧化剂在25°C下进行1小时的氧化处理的肝型脂肪酸结合蛋白质制剂的测定值与使用了未进行上述氧化处理的肝型脂肪酸结合蛋白质制剂的测定值的比表示的氧化变动系数设定为1.4以下的肝型脂肪酸结合蛋白质制剂、用于该制剂的肝型脂肪酸结合蛋白质、编码该蛋白质的DNA、由该DNA转化得到的细胞、该蛋白质的制造方法、评价该制剂的方法、抑制使用该制剂的测定中的测定值的变动幅度的方法、制作该蛋白质的校准曲线的方法、以及定量该蛋白质的方法。

摘要： 本发明提供一种糖化蛋白质测定试剂，其至少包含Trinder’s试剂、4‑氨基安替比林、蛋白酶、蛋白酶的稳定剂以及亚铁氰化物，其中，至少Trinder’s试剂包含在含有Trinder’s试剂的部分组合物中，至少4‑氨基安替比林包含在含有4‑氨基安替比林的部分组合物中，蛋白酶的稳定剂是使亚铁氰化物与该蛋白酶的稳定剂混合后的氧化还原电位大于0.058V的稳定剂，氧化还原电位是包含蛋白酶的稳定剂和亚铁氰化物、不包含糖化蛋白质的反应体系的氧化还原电位。

摘要： 本发明提供了一种应用iTRAQ技术研究弓形虫慢性感染小鼠脑组织差异表达蛋白质组的方法，本发明还提供了一种与大脑发育调节蛋白相互作用的蛋白质或多肽、及其应用，本发明通过CoIP和Pulldown实验发现与大脑发育调节蛋白相互作用6个弓形虫蛋白，并进一步针对TgRPS14、TgH4基因进行基因敲除实验和神经行为学验证。本发明提供了的弓形虫慢性感染小鼠脑组织差异表达蛋白质组的方法能快速有效地进行蛋白质组学研究，有利于快速定位到具有研究价值或商业应用价值的检测靶标、防治药物靶点。

摘要： 本发明提供了包含一或多种同种型红细胞生成素(EPO)的组合物，所述红细胞生成素包含与其连接的聚糖，特征在于所述聚糖包含LewisX结构及每个EPO分子平均至少6个唾液酸部分。本发明进一步提供了获得包含一或多种同种型红细胞生成素(EPO)的组合物的方法，所述红细胞生成素包含与其连接的聚糖，其中所述聚糖包含平均每个EPO分子至少6个唾液酸及0-2个Lewis x结构，所述方法包括：a)提供含有可表达形式的编码腺病毒E1A蛋白的核酸序列及进一步含有可表达形式的编码EPO的核酸的真核细胞，其中所述细胞进一步含有在异源启动子控制下的编码唾液酸转移酶、优选α-2，6-唾液酸转移酶或α-2，3-唾液酸转移酶的核酸序列；b)在无血清培养基中培养所述细胞，使得EPO在所述细胞中表达；c)从所述细胞和/或培养基中收获表达的EPO；及d)纯化并分级分离EPO以获得每个EPO分子N联聚糖的平均唾液酸含量增加的级分，获得包含一或多种同种型EPO的组合物，所述EPO包含与其连接的聚糖，其中所述聚糖包含每个EPO分子平均至少6个唾液酸及0-2个Lewis x结构。

摘要： 本发明提供了包含一或多种同种型红细胞生成素(EPO)的组合物，所述红细胞生成素包含与其连接的聚糖，特征在于所述聚糖包含LewisX结构及每个EPO分子平均至少6个唾液酸部分。本发明进一步提供了获得包含一或多种同种型红细胞生成素(EPO)的组合物的方法，所述红细胞生成素包含与其连接的聚糖，其中所述聚糖包含平均每个EPO分子至少6个唾液酸及0－2个Lewisx结构，所述方法包括：a)提供含有可表达形式的编码腺病毒E1A蛋白的核酸序列及进一步含有可表达形式的编码EPO的核酸的真核细胞，其中所述细胞进一步含有在异源启动子控制下的编码唾液酸转移酶、优选α－2，6－唾液酸转移酶或α－2，3－唾液酸转移酶的核酸序列；b)在无血清培养基中培养所述细胞，使得EPO在所述细胞中表达；c)从所述细胞和/或培养基中收获表达的EPO；及d)纯化并分级分离EPO以获得每个EPO分子N联聚糖的平均唾液酸含量增加的级分，获得包含一或多种同种型EPO的组合物，所述EPO包含与其连接的聚糖，其中所述聚糖包含每个EPO分子平均至少6个唾液酸及0－2个Lewisx结构。

摘要： 本发明提供能够以优异的安全性将蛋白质导入到细胞中的蛋白质导入方法。通过使目标蛋白质承载在由粘土矿物构成的蛋白质导入用载体上并将其添加到细胞中，可以将所述目标蛋白质导入到所述细胞内中。所述粘土矿物优选为层状粘土矿物，可以使用蒙脱石、蛭石、伊利石等。

摘要： 本发明公开了一种蛋白质表达体系的密码子优化方法及蛋白质表达体系，该密码子优化方法基于所述蛋白质表达体系中细胞提取物的来源物种的核糖体蛋白，对编码所述核糖体蛋白的DNA序列的密码子进行统计，获得核糖体蛋白氨基酸序列中每种氨基酸残基对应的同义密码子中各密码子的相对频率，选择相对频率最高的密码子，并将该密码子用作目标蛋白的氨基酸序列中同种氨基酸残基的密码子。本发明的密码子优化方法能在使用较少计算资源的情况下，快速获得一个不含特定位点，且相较于优化前具有较高蛋白表达效率的DNA序列。