草鱼出血病

摘要： 1草鱼出血病的流行病学1.1草鱼出血病的发现1980年发现病毒颗粒并确认为草鱼出血病病原,1991年国际病毒分类委员会将其命名为草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV)。GCRV是中国分离鉴定的第一株鱼类病毒,是水生呼肠孤病毒属中致病力最强的毒株,不仅能感染草鱼,而且还能感染青鱼、麦穗鱼、布氏鳖条鱼等,并能使这几种鱼发生出血病症状而死亡。

摘要： 近些年,草鱼因肉质紧实且鲜嫩,得到了广大消费者的喜爱,已成为我国目前养殖数量较多的淡水鱼种之一。草鱼在鱼苗时期通常以浮游动物为食。幼鱼可以采食水中的昆虫,当发育达到50厘米以上后转为草食。成年时期的草鱼身长可达到100厘米。随着草鱼需求量的增加,养殖面积也随之增加,草鱼病害的问题日趋严重,尤其是草鱼出血病。草鱼出血病是一类传染性高。

摘要： 对养殖鱼类各种疾病的防控主要三种途径:即生态防控、免疫防控和药物防控。我国通过农业农村部评审而允许使用的鱼用疫苗,至今已经有8种。其中专门用于预防养殖草鱼(Ctenopharyngodonidella)病毒性疾病的疫苗就有2种,即草鱼出血病细胞灭活疫苗和草鱼出血病活疫苗。有些地方的养殖业者也将鱼嗜水气单胞菌败血症灭活疫苗用于接种养殖草鱼,据说目的是为了预防其细菌性败血症。

摘要： 5月气温将逐步升高,全国普遍进入生产旺季。根据近年同期全国水产养殖病情测报数据和今年天气情况,我们对5月易发疾病进行了预测,供参考。5月水产养殖应该重点关注草鱼出血病、鲫造血器官坏死病、刺激隐核虫病、病毒性神经坏死病、锦鲤疱疹病毒病、白斑综合征、十足目虹彩病毒病、虾肝肠胞虫病及传染性皮下和造血组织坏死病等。

摘要： 4月气温起伏较大,也是水产养殖大量投苗、进入生产旺季的关键时期。根据近年同期全国水产养殖病情测报数据和今年天气情况,我们对4月易发疾病进行了预测,供参考。4月水产养殖应该重点关注草鱼出血病、鲫造血器官坏死病、传染性造血器官坏死病、刺激隐核虫病、白斑综合征和虾肝肠胞虫病等。

摘要： 目的对一例典型草鱼出血病的病原进行分离、鉴定和全基因组序列分析。方法采用细胞培养分离病毒、PCR检测和测序分析、电镜观察、间接免疫荧光(IFA)分析、全基因组序列测定及回归感染鉴定对采集的草鱼出血病样品进行病原分析。结果接种病毒的细胞没有产生CPE,但电镜观察可见大量呈典型呼肠孤病毒特点的病毒粒子,PCR检测并测序分析和IFA鉴定表明该分离株为II型GCRV;分离的病毒感染草鱼可出现典型的草鱼出血病症状,最终死亡率为96.7%,暂命名为GD20-08株;全基因组测序表明,GD20-08的基因组结构Ⅱ型GCRV分离株的相似,其核苷酸和氨基酸序列其他Ⅱ型GCRV分离株的同源性分别在94%~99%和96%~100%不等。结论从患草鱼出血病的草鱼体内分离到一株Ⅱ型GCRV的变异强毒株。

摘要： 1工作任务(一)随机抽检样品650个(二)监测鲤春病毒血症、白斑综合征、草鱼出血病、锦鲤疤疹病毒病、传染性造血器官坏死病、病毒性神经坏死病、鲫造血器官坏死病、鲤浮肿病、虾肝肠胞虫病、十足目虹彩病毒病等(三)加强水生动物疫病风险评估、监测预警和应急处置工作。

摘要： 7月伴随着气温以及水温升高,水产养殖也进入疾病高发季。同时多地陆续进入雨季,极易造成洪涝灾害,引发多种疾病。根据近年同期全国水产养殖疾病测报数据和今年天气情况,我们对7月易发疾病进行了预测,提出雨季水产养殖防病措施建议,供参考。◎易发疾病7月水产养殖应该重点关注草鱼出血病、鲤浮肿病、锦鲤疱疹病毒病、鲫造血器官坏死病、病毒性神经坏死病、刺激隐核虫病、白斑综合征、十足目虹彩病毒病、急性肝胰腺坏死病和虾肝肠胞虫病等疾病。

摘要： 8月为高温季节,加上部分地区受雷雨天气和台风的影响,水体环境变化较大,养殖生产管理的难度加大,易发多种疾病。根据近年同期全国水产养殖疾病测报数据和今年天气情况,我们对8月易发疾病进行了预测,提出防病措施建议,供参考。 易发疾病8月水产养殖应该重点关注草鱼出血病、鲤浮肿病、锦鲤疱疹病毒病、鲫造血器官坏死病、刺激隐核虫病、白斑综合征、十足目虹彩病毒病、急性肝胰腺坏死病、传染性皮下和造血组织坏死病和虾肝肠胞虫病等疾病。

摘要： 为探索赤眼鳟信号转导与转录激活因子1 (signal transduction and activator of transcription 1,STATl)的免疫功能,实验利用cDNA末端快速扩增(RACE)技术获得了赤眼鳟STAT1(命名为ScSTAT1),ScSTA T1的cDNA全长为2 922 bp,共编码718个氨基酸.ScSTAT1含STAT_ int、STAT_alpha、STAT-bind和SH2 4个保守功能域.系统进化分析显示,ScSTAT1先与草鱼STAT1聚为一支,再与青鱼、鲫以及黄颡鱼等聚为一支.相对于哺乳类和爬行类物种而言,ScSTAT1缺少含丝氨酸磷酸化位点的C-末端转录激活功能结构域(transcriptional activation domain,TAD).基因表达分析显示,脾脏ScSTAT1表达量极显著高于其他组织,而肝脏中表达量最低.经细菌类似物脂多糖(LPS)、双链RNA类似物聚肌胞苷酸(Poly I:C)及草鱼呼肠孤病毒(GCRV)刺激后,赤眼鳟脾脏和体肾组织中ScSTA T1表达水平总体上调.GCRV感染后12h脾脏组织ScSTAT1表达先显著下降,随后极显著上升;GCRV刺激后12和72 h,体肾组织ScSTA T1表达量显著高于对照组;赤眼鳟鳍条细胞系(ScF) ScSTAT1经RNA干扰后基因表达水平极显著下调,且IRF-3、IRF9以及Mx均在GCRV刺激48 h时极显著下调.本研究为进一步深入探索ScSTA T1的抗病功能奠定了基础.

摘要： 探讨草鱼出血病灭活疫苗对草鱼脾脏中免疫球蛋白(IgM)、主要组织相容性复合体Ⅰ(MHCⅠ)、1型干扰素(IFN1)、补体3(C3)、白细胞介素-1β(IL-1β)、内凝集素(intelectin)主要免疫相关基因表达的影响.用草鱼肾细胞系(CIK)培养草鱼出血病病原草鱼呼肠孤病毒(GCRV),并制备草鱼出血病灭活疫苗,用生理盐水稀释成50倍和100倍,包括未稀释组及生理盐水对照共4组.分别腹腔免疫注射健康草鱼,各组分别于免疫后0、6、12、24、72 h,取脾脏并抽提总RNA,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测上述6种免疫相关基因mRNA表达.与生理盐水注射对照组相比,免疫注射不同剂量的草鱼出血病灭活疫苗均能刺激草鱼脾脏中6种主要免疫分子不同程度的表达上调,表明疫苗刺激草鱼机体启动了非特异性和特异性免疫应答.在3个疫苗免疫组中,基因intelectin、MHCⅠ、IL-1β、C3的相对表达量都随着时间的推移出现了先表达上调,后表达下调;基因IFN1的相对表达量在免疫后6 h时达到峰值,之后下降至正常水平;IgM的相对表达量在所检测时间内呈逐渐上调的趋势.草鱼出血病灭活疫苗均能诱导草鱼脾脏中免疫相关分子基因的表达上调.

摘要： 草鱼呼肠孤病毒(GCRV)是呼肠孤病毒科、水生呼肠孤病毒属的病毒中毒力最强的病毒,严重危害着中国淡水渔业的养殖。本文对草鱼出血病的流行病学、病原学,病理特征及诊断方法进行了综述,以期为以后更好的草鱼出血病的发生做出指导。

摘要： 流行病学调查显示Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒是目前引起我国草鱼出血病的主要基因型,草鱼出血病严重危害了草鱼养殖业的健康发展,因而针对草鱼出血病病原的研究亟待深入、关于草鱼出血病的有效疫苗防控产品有待开发.本研究使用Ⅱ型GCRV强弱毒株感染草鱼,采集肝脏、脾脏、肾脏、肠道、肌肉组织样品制作切片进行病理变化观察,并对其血液生理生化指标进行比较分析,结果显示强毒株感染组肝脏、脾脏、肾脏、肌肉、肠道组织病变程度均明显强于弱毒株感染组,血液生理生化指标结果显示强弱毒株感染组间存在显著差异.

摘要： 2013年7月份,从湖南株洲市采集的具有典型草鱼出血病症状的草鱼样品,取临床症状明显病鱼肝、脾和肾组织,经研磨、过滤除菌处理后接种草鱼吻端成纤维细胞(PSF).接种后,PSF细胞未出现明显细胞病变;感染细胞固定后经电镜观察发现,细胞质内有大量病毒聚集或散在分布,病毒无囊膜,双层衣壳,呈正廿面体对称,直接70nm左右,为典型的呼肠孤病毒特点,将新分离的病毒暂命名为GCRV-HuNan1307.将病料组织和感染细胞采用三重PCR方法进行检测,均扩增出200bp左右大小的特异性条带,进一步测序分析表明该分离株与HZ08、GD108等Ⅱ型GCRV的序列同源性较高;HuNan1307和HZ08分离株感染细胞经IFA分析表明,细胞内可观察到荧光信号,而JX0901和104感染细胞及阴性对照细胞没有检测到荧光信号;将病毒提纯后提取基因组进行SDS-PAGE凝胶电泳带型分析显示,具有草鱼呼肠孤病毒11个节段的特征,各节段的迁移率与HZ08株的相似,与JX0901和104带型分布差异较大;经PSF细胞分离的病毒液分别感染健康草鱼和稀有鮈鲫,能使感染草鱼和稀有鮈鲫出现典型的草鱼出血病症状,最终死亡率分别为96.7％和100％,表明新分离株HuNan1307为一株强毒株;采用单引物扩增技术获得了HuNan1307分离株基因组全长序列(各基因节段GenBank登录号为:KU254567～KU254576),基因组序列全长为24703bp,G+C含量为52.32％,11基因节段共7个结构蛋白和5个非结构蛋白.该分离株的基因组各节段基因序列长度与HZ08株的一致,S1-S11基因长度为3928nt至1024nt,且所有节段末端都有相同的保守序列:5'GUAA/UUUU}}UU CAUC3'.同源性分析表明HuNan1307的核苷酸序列与HZ08、GD108等Ⅱ型毒株的同源性在94％至99％不等,氨基酸序列同源性在96％至100％不等,而与873,104等Ⅰ和Ⅲ型毒株的同源性较低.基于RdRp基因编码的氨基酸序列构建的遗传进化树显示,所有的GCRV聚为3大类,HuNan1307和GD108、HZ08、106、109等草鱼呼肠孤病毒聚为一支;GCRV873、GZ1208、GCHV和AGCRV聚为另外一支;GCRV104则单独聚为一支,与前面报道的草鱼呼肠孤病毒分为三个基因型结果一致.

摘要： 由草鱼呼肠孤病毒(,GCRV)引起的草鱼出血病给我国的草鱼养殖业造成了巨大的经济损失,早期诊断是防控草鱼出血病的关键.本研究基于NASBA及ELISA试验建立了一种分子水平上快速检测GCRV的方法.根据Ⅱ型GCRV的S6节段基因保守区域设计一对扩增引物及相应的捕获探针和检测探针,对NASBA反应体系中的K+离子浓度、引物浓度、RnaseH和T7RNA polymerase酶用量进行优化,然后采用ELISA方法检测NASBA扩增产物,建立了NASBA-ELISA方法,最后评价NASBA-ELISA方法的特异性、敏感性、重复性及对临床样品检测的可靠性.结果表明,本研究建立的NASBA-ELISA方法,可以在5个小时内检测出只有14拷贝/μL病毒含量的样本,对临床样品的诊断灵敏度和诊断特异性均为100％,具有很好的特异性,对其它非特异性核酸模板没有交叉反应.因此,本研究建立的NASBA-ELISA是一种快速、高效和敏感的病原检测方法,可用于草鱼养殖生产中GCRV病毒的快速检测.

摘要： 从草鱼出血病发病地区提取病料,感染草鱼肾细胞(CIK)并提取病毒基因组(dsRNA),电泳显示出水生呼肠孤病毒基因组的典型特征。应用简化的FLAC技术(Full-length amplification of cDNAs)扩增得到病毒的4个全长基因片段,对其测序与核酸序列BLAST分析,结果表明该样本中存在两种不同株型的草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV),与GCRV-873和GCRV-HZ08高度同源,分别命名为GCRV-JX01和GCRV-JX02。利用无限稀释法分离这两种病毒，并构建qRT-PCR方法，从草鱼血液中成功检测出其他发病地区也存在这两种GCRV毒株的混合感染。本文首次运用dsRNA测序法检测出了GCRV病毒的混合感染，并利用高效灵敏的荧光定量扩增方法从鱼体血液检测草鱼呼肠孤病毒，为草鱼呼肠孤病毒的流行病学研究和免疫防控提供了一种新的技术选择。

摘要： 由草鱼呼肠孤病毒引起的草鱼出血病给我国淡水鱼养殖造成了巨大的经济损失。变异迅速和复杂的病原学是导致其流行的主要原因，根据已发表的全基因组或部分节段基因序列信息，总体上可以将草鱼呼肠孤病毒分为Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ三个类型。本研究针对各类型毒株的保守区域分别设计三对引物，优化反应条件和体系，建立了草鱼呼肠孤病毒三重RT-PCR检测方法，通过PCR扩增获得大小约为530bp、297bp和196bp的DNA片段。进一步分析表明该检测方法具有良好的扩增效率、特异性和稳定性，该方法的建立对草鱼出血病的快速诊断和分子流行病学调查具有重要意义。用建立的多重RT-PCR方法对2008-2011年采集自江西、广东、湖北、浙江、重庆、四川、福建等草鱼主养区的86份草鱼出血病样品进行检测和初步流行病学分析。结果表明，Ⅰ型阳性率为9_3%，Ⅱ型阳性率为45_3%，Ⅲ型阳性率为2-3%，Ⅰ型和Ⅱ型混合感染阳性率为5.8%，Ⅱ和Ⅲ型混合感染阳性率为2.3%，其它类型的混合感染未检测到，表明目前主要流行的草鱼呼肠孤病毒为Ⅱ型。

摘要： 本研究旨在从先天性免疫途径入手寻找与GCRV抗性相关的主效基因和多态性位点,从分子遗传学的角度为水产疾病的控制提供新的思路.

摘要： Mx基因是一种重要的干扰素激活基因，在干扰素诱导下表达并发挥抗病毒作用。在鱼类中对Mx基因的研究主要集中在克隆和表达上，本研究获得了草鱼Mx2基因结构，发现了5个多态位点。草鱼Mx2基因1191C/A和1205G/A两个多态位点可以在草鱼选育抗GCRV时作为遗传标记。

摘要： 本研究拟从机体本身的抗病毒免疫系统出发,克隆识别病毒单链RNA的模式识别受体TLR7基因,研究其在病毒感染条件下的表达模式,为草鱼出血病的抗病机理及抗病育种奠定基础,从分子水平为上草鱼出血病的防治提供思路.

摘要： 一种核酸适配体，包括如下核苷酸序列：TGAACCCACCTCAGGGCATCTTACATTTCTTCTAAGTTGTTACCATGTTT。本发明提供的核酸适配体的分子量较小，制备周期短，重现性好，便于体外化学合成，便于标记，序列稳定易于运输和保存。该核酸适配体对草鱼呼肠孤Ⅰ型病毒具有较高的特异性和亲和力，并且无免疫原性。

摘要： 一种核酸适配体，包括如下核苷酸序列：TGAACCCACCTCAGGGCATCTTACATTTCTTCTAAGTTGTTACCATGTTT。本发明提供的核酸适配体的分子量较小，制备周期短，重现性好，便于体外化学合成，便于标记，序列稳定易于运输和保存。该核酸适配体对草鱼呼肠孤Ⅰ型病毒具有较高的特异性和亲和力，并且无免疫原性。

摘要： 本发明属于鱼类遗传标记筛选与制备技术领域，具体涉及一种草鱼出血病免疫性状相关的遗传标记。所述的遗传标记从C7N1基因中筛选得到。所述的遗传标记由草鱼个体水平抗性群体和易感群体的转录组测序、细胞水平抗性和易感细胞的转录组测序、关联分析、感染验证得到，所述遗传标记如SEQ ID NO：1所示：在C7N1基因的第2145位碱基处有一个碱基的替换突变，造成草鱼C7N1蛋白第715位氨基酸的改变。草鱼呼肠孤病毒感染试验表明：杂合基因型草鱼死亡率显著低于纯合型草鱼死亡率，由此说明草鱼C7N1基因这个碱基突变与草鱼出血病性状相关。本发明为草鱼出血病免疫相关性状的选育提供了新的遗传标记资源。

摘要： 本发明属于水产动物疾病免疫领域，具体公开了一种草鱼出血病酵母口服疫苗及应用，所述的口服疫苗是表达有融合蛋白LTB‑VP4酿酒酵母，所述融合蛋白LTB‑VP4的氨基酸序列为SEQ ID NO.9所示。该蛋白的免疫原性好，在草鱼体内的稳定性好，疫苗保护力高，攻毒后草鱼的存活率达到了73.3%，制成口服疫苗后，操作简单，适合大规模推广。

摘要： 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种草鱼出血病口服疫苗及其制备与应用。本发明首先提供了提供一种融合蛋白，含有枯草芽孢杆菌芽孢衣壳蛋白CotC和草鱼呼肠孤病毒VP4蛋白。所述融合蛋白，制备成草鱼出血病口服疫苗，能够在鱼体肠道内成功定植，免疫效果良好，能够使得鱼体攻毒感染后死亡率较阴性组降低30%~45%。

摘要： 本发明涉及草鱼出血病的病原草鱼呼肠孤病毒RT-PCR快速检测试剂盒及检测方法。本发明所述的草鱼出血病的病原草鱼呼肠孤病毒的RT-PCR快速检测试剂盒，包括：2×反应混合缓冲液1.0ml，包含优选设计的上游引物和下游引物；酶混合液；无RNA酶的去离子水；阳性对照液；阴性对照液。本发明克服了现有草鱼出血病RT-PCR检测方法无法检测当前流行毒株的不足，提供了一种新型的RT-PCR快速检测试剂盒及其检测方法，能快速、高效地适用于目前多数流行毒株的检测。

摘要： 本发明公开了一种草鱼出血病二价核酸菌蜕疫苗的制备方法，属于基因工程疫苗技术领域。本发明公开的一种草鱼出血病二价核酸菌蜕疫苗的制备方法，首先以GCRV‑I、II S10基因为靶基因，构建融合表达GCRV‑I、II衣壳蛋白的真核表达载体，并进行体外表达鉴定；第二阶段制备大肠杆菌DH5α菌蜕，将裂解质粒pHH43导入大肠杆菌DH5α，制备出具有完好外膜的大肠杆菌菌蜕；第三阶段进行大肠杆菌菌蜕装载重组质粒研制二价核酸菌蜕疫苗，并进行实验室免疫效果评价研究，初步确定了免疫方案并进行了免疫示范应用。

摘要： 本发明公开了一种草鱼出血病I型病毒（GCRV‑I）RAA恒温荧光检测方法和检测试剂盒。检测试剂盒包括一条正向引物SEQ ID NO.1、一条反向引物SEQ ID NO.2、一条特异性荧光探针SEQ ID NO.3、反应液、逆转录酶、重组聚合酶和对照品。本发明的试剂盒特异性强；检测灵敏度高，可达到1.89fg/μL；准确度高、可靠；操作简便快捷，适合现场检测，具有广泛的应用场景。

摘要： 本发明公开了一种防止草鱼出血病的饲料添加剂，包括以下重量组分的成分：大黄10‑20份、地锦草8‑12份、大蓟15～25份、香薷12～18份、平地木10～20份、浙贝母12～18份、蔓荆子12～18份、苦地丁10～20份、面粉40‑80份，粘合剂10‑20份、水40‑60份。本发明通过将常见的中草药以及食材借助常规的处理方式来得到预防草鱼出血病的饲料添加剂，具有成本低，生产方便，便于推广的优点；且生产出的饲料添加剂能够较好的在水中粘合，不易于分散，从而减小对水体环境的损伤，进而保护渔场的水体生态环境，更好地方便后续水产的养殖。

摘要： 本发明属于水产动物疾病免疫领域，具体公开了一种草鱼出血病酵母口服疫苗及应用，所述的口服疫苗是表达有融合蛋白LTB‑VP4酿酒酵母，所述融合蛋白LTB‑VP4的氨基酸序列为SEQ ID NO.9所示。该蛋白的免疫原性好，在草鱼体内的稳定性好，疫苗保护力高，攻毒后草鱼的存活率达到了73.3%，制成口服疫苗后，操作简单，适合大规模推广。