腹膜间皮细胞

摘要： 目的:通过观察姜黄素对腹膜间皮细胞小凹蛋白1(caveolin-1,cav-1)表达及腹膜间皮细胞间充质转分化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)的影响,探讨姜黄素防治腹膜透析相关腹膜纤维化的作用及机制。方法:体外培养人腹膜间皮细胞株(HMrSV5细胞),将细胞随机分为:对照组(control组)、模型组(PDS组)、干预组(PDS+姜黄素组),采用Western-blot、Real time-qPCR、免疫荧光法检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E钙黏蛋白(E-cadherin)、转化生长因子β_(1)(TGF-β_(1))、及cav-1的表达。然后通过基因siRNA基因沉默的方法构建cav-1低表达的人腹膜间皮细胞系,采用Western-blot、Real time-qPCR法检测α-SMA、E-cadherin、TGF-β_(1)及p-smad2的表达。结果:高糖腹膜透析液诱导可导致α-SMA及TGF-β_(1)表达的上调同时导致E-cadherin、cav-1表达的下调,姜黄素可部分逆转高糖腹膜透析液的这种作用。cav-1 siRNA+PDS组较高糖透析液组明显加重了间皮细胞转分化的程度,且可上调TGF-β_(1)及p-smad2的表达。结论:高糖腹膜透析液可诱导腹膜间皮细胞转分化。姜黄素可通过调节cav-1/TGF-β信号通路抑制高糖腹膜透析液诱导的腹膜间皮细胞转分化。

摘要： 腹膜透析是终末期肾脏病替代治疗的重要方法之一,因其具有居家方便、操作简单、血流动力学影响小、保护残余肾功能等优势,被大量应用于临床。但由于尿毒症毒素、生物不相容性腹透液、腹膜炎等因素长期刺激腹膜,引起腹膜结构重塑,腹膜纤维化超滤功能进行性丧失,致使患者最终退出腹透治疗。中医认为腹透日久,寒湿、痰瘀、浊毒等病理产物堆积,瘀阻三焦,胶结积聚于腹络,形成微型癥瘕,导致腹膜纤维化,微观病理表现为腹膜间皮细胞脱落、进行性致密胶原组织形成.

摘要： 目的:探讨芍药苷对含糖透析液作用下人腹膜间皮细胞的α-SMA和CTGF的影响。方法:使用永生人HMrSV5细胞株,分为空白组、高糖组、芍药苷低剂量组、芍药苷中剂量组、芍药苷高剂量组,观察各组在4.25%含糖透析液作用下α-SMA和CTGF的变化。Western Blot检测各组α-SMA和CTGF的表达,免疫荧光法观察α-SMA表达的变化。其中芍药苷低剂量组浓度为50μg/mL、芍药苷中剂量组浓度为100μg/mL、芍药苷高剂量组浓度为200μg/mL。结果:高糖组的α-SMA的表达高于空白组、芍药苷低剂量组、芍药苷中剂量组和芍药苷高剂量组(P0.05)。结论:芍药苷可以下调高糖作用下腹膜间皮α-SMA和CTGF的表达,可能减缓腹膜纤维化的进展。

摘要： 目的:探讨芍药苷对含糖透析液作用下人腹膜间皮细胞的α-SMA和CTGF的影响.方法:使用永生人HMrSV5细胞株,分为空白组、高糖组、芍药苷低剂量组、芍药苷中剂量组、芍药苷高剂量组,观察各组在4.25％含糖透析液作用下α-SMA和CTGF的变化.Western Blot检测各组α-SMA和CTGF的表达,免疫荧光法观察α-SMA表达的变化.其中芍药苷低剂量组浓度为50μg/mL、芍药苷中剂量组浓度为100μg/mL、芍药苷高剂量组浓度为200μg/mL.结果:高糖组的α-SMA的表达高于空白组、芍药苷低剂量组、芍药苷中剂量组和芍药苷高剂量组(P0.05).结论:芍药苷可以下调高糖作用下腹膜间皮α-SMA和CTGF的表达,可能减缓腹膜纤维化的进展.

摘要： 目的 探讨胰腺炎大鼠腹腔积液中硫氧还蛋白表达与腹膜功能衰竭的关联机制.方法 60只SD大鼠按照随机数字表法分为2组:对照组(n=30,不做任何干预)和实验组(n=30,通过注射牛磺胆酸钠构建大鼠急性胰腺炎模型).模型建立成功后次日,将每组大鼠分为2批,分别采用N-甲酰甲硫氨酰-亮氨酰-苯丙氨酸(fMLP)和硫乙醇酸盐腹腔注射,并于2种炎性介质注射后0.5、2、8.0 h获取免疫球蛋白和腹腔积液.应用组织化学染色法检测β-gal的表达,分析腹膜表面的转基因MCS的面积百分比,测定腹腔积液中硫氧还蛋白表达和二硫化物氧化还原酶的活性,评估腹膜MCS炎症的严重情况.结果 炎症介质注射后0.5～8.0 h,实验组胰腺炎模型大鼠MCSβ-gal阳性面积均显著低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05).炎症介质注射8 h后,实验组胰腺炎模型大鼠腹腔积液中二硫化物氧化还原酶和人硫氧还蛋白活性均较对照组显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05).炎症介质注射8 h后,实验组大鼠脂多糖、白细胞介素-1β和肿瘤坏死因子-α水平较对照组增加,人硫氧还蛋白表达显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 胰腺炎大鼠腹腔积液中硫氧还蛋白表达和二硫化物氧化还原酶活性均显著下降,同时诱发腹膜功能衰竭,因此通过上调腹腔积液中人硫氧还蛋白的水平和二硫化物氧化还原酶活性可能有助于缓解腹膜间皮细胞的炎症.

摘要： 目的:探讨高通量聚砜膜透析器F60对尿毒症晚期患者疗效及Krüppel样因子2(KLF2) mRNA表达的影响.方法:回顾性选择2015年5月至2018年6月宝鸡市中心医院血液净化中心行维持血液透析的尿毒症晚期患者100例,将其分为2组:实验组采用高通量聚砜膜透析器F60,对照组采用聚砜膜透析器F6,每组50例.测定2组患者透析前、后糖基化终末产物(AGEs)、血清各溶质浓度、KLF2的mRNA表达情况以及腹膜间皮细胞衰老情况.结果:实验组患者透析后AGEs、血清各溶质浓度及腹膜间皮细胞衰老率显著降低,而腹膜组织KLF2的mRNA表达显著增加,且实验组高于对照组(P均＜0.05).KLF2的mRNA表达量与腹膜间皮细胞衰老呈负相关(r=-0.789,P=0.021).结论:尿毒症晚期患者采用高通量聚砜膜透析器F60较聚砜膜透析器F6的透析效果更佳,可能与其可提高KLF2的mRNA表达,降低腹膜间皮细胞衰老有关.

摘要： 目的 探讨腹膜间皮细胞转分化中microRNA302c的作用.方法 应用医学样本培养法,选取临沂市人民医院2019年5月至2019年11月择期行腹膜透析置管手术(即终末期肾脏疾病)患者,应用"大网膜血管结扎分离器"分离方法分离腹膜间皮细胞;将腹膜透析液(葡萄糖腹透液、氨基酸腹透液、葡聚糖腹透液等)注入常规腹膜间皮细胞,而后就microRNA302c对样本腹膜间皮细胞传代数、细胞增殖、细胞周期、端粒等影响进行总结.结果 腹膜透析腹膜间皮细胞转分化主要历经上皮细胞向间充质细胞转分化两种过程,这也是肌成纤维细胞的主要来源类型;上皮细胞向间充质细胞作为腹膜纤维化的起始部分,以结缔组织生长下游因子(CTGF)影响TGF-β1信号通路为决定性作用,期间microRNA302c作为CTGF表达起到了关键性作用.结论 microRNA302c在腹膜间皮细胞转分化中起了关键性作用,且随着腹透时间的延长而降低,通过培养出的腹透流出液中CTGF、EMT相关分子标记物与患者的基因突变紧密相关,可作为患者疾病预后的有效监测指标.

摘要： 目的 探讨扶肾方对大鼠腹膜间皮细胞转化生长因子-β受体Ⅰ(TGF-βRⅠ)、TGF-βRⅡ、Smad泛素化相关因子2(Smurf2)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、紧密连接蛋白-1(ZO-1)的影响及抑制上皮-间充质转分化(EMT)的作用机制.方法 原代培养大鼠腹膜间皮细胞,传至第2代并鉴定后,分为空白对照(C)组,含药血清(B)组,模型(T)组(40μg/L TGF-β1),模型+含药血清(T+B)组,模型+MG132(T+M)组.培养24 h后收集细胞和培养液上清液,采用蛋白印迹法检测Smurf2蛋白水平,qPCR检测各组TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ、E-cadherin、ZO-1的mRNA转录水平.结果 与C组比较,T组E-cadherin、ZO-1、TGF-β1RⅡmRNA、Smurf2蛋白表达明显上调(P<0.05);与T组比较,B组E-cadherin、ZO-1 mRNA表达均上调,T+B组E-cadherin、ZO-1、TGF-β1RⅡmRNA表达均上调,Smurf2蛋白表达下调,T+M组E-cadherin、ZO-1、TGF-β1RⅠmRNA、Smurf2蛋白表达均下调,TGF-β1RⅡmRNA表达上调(P<0.05);与B组比较,T+B组和T+M组E-cadherin mRNA表达下调,T+M组ZO-1、TGF-β1RⅠmRNA表达下调(P<0.05);与T+B组比较,T+M组E-cadherin、ZO-1、TGF-β1R,TGF-β1RⅡmRNA表达均下调(P<0.05).结论 扶肾方抑制大鼠腹膜间皮细胞EMT可能与上调TGF-βRⅡmRNA转录,下调Smurf2蛋白含量,促进E-cadherin、ZO-1 mRNA的转录相关.

摘要： 胃癌是最常见的癌症之一,其中50％以上的病例发生在东亚地区,在所有恶性肿瘤中死亡率位居第二.由于易于腹膜扩散,转移是胃癌预后不良的主要原因.现有研究认为外泌体参与了胃癌腹膜转移,外泌体可传达潜在的生物信息到附近或远处,并通过损伤腹膜间皮细胞而破坏间皮屏障,进一步引起腹膜纤维化,形成有利于胃癌腹膜转移的转移环境.目前关于外泌体在胃癌腹膜转移中作用的认识尚有很多不足.本文就胃癌来源的外泌体在腹膜转移细胞机制中的研究进展做简要综述.

摘要： 目的:观察高糖对大鼠腹膜间皮细胞(RPMC)中α-SMA表达的影响及厄贝沙坦干预后,上述指标的变化情况.方法:胰蛋白酶法行RPMC的原代培养和传代.分为:正常对照组;葡萄糖(1.5％,2.5％,4.25％)组作用24小时;2.5％ 高糖(8,12,24,34,48 h)组;2.5％高糖+厄贝沙坦10umol/L组.细胞免疫组织化学法检测α-SMA在细胞上的表达情况,RealTime-RT-PCR技术检测α-SMA、TGF-β1 mRNA的表达.结果:高糖刺激下,α-SMA、TGF-β1表达显著增加,呈剂量依赖性,组间差异具有统计学意义(p<0.05),厄贝沙坦降低高糖作用下α-SMA的表达.结论:高糖通过上调α-SMA的表达,引起腹膜损伤导致腹膜纤维化,厄贝沙坦一定程度上降低高糖导致的上诉过程阻断腹膜纤维化的病理过程.

摘要： 探讨腹膜透析流出液中培养的人腹膜间皮细胞(human peritoneal mesothelial cells,HPMCs)热休克蛋白47(heat shock protein,HSP47)的表达,并分析其与腹膜间皮细胞转分化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)的关系.研究发现，HSP47随着腹膜透析时间的延长表达上调，可能参与腹膜间皮细胞EMT而导致腹膜纤维化。

摘要： 腹膜纤维化是目前慢性肾脏病5期患者退出腹膜透析治疗最主要的原因.腹膜间皮细胞(HPMCs)形态与功能改变是腹膜纤维化发生的起始因素,有效保护HPMCs有助于防止腹膜纤维化的发生发展.腹膜间皮细胞早衰机制的明确和干预间皮细胞早衰的发生将是腹膜纤维化防治研究的重大突破。骨髓间充质干细胞是具有多向分化潜能的干细胞，可作为理想的种子细胞用于衰老和病变引起的组织器官损伤修复。通过本实验探讨腹膜透析液对腹膜间皮细胞周期和周期蛋白的影响及骨髓间充质干细胞的干预作用。

摘要： 探讨长链非编码RNA(lncRNA)H19在人腹膜间皮细胞(HPMCs)高糖损伤导致的腹膜纤维化中的作用.结果表明:H19参与高糖刺激所引起的人腹膜间皮细胞的纤维化过程，并且可以促进腹膜纤维化的发生，抑制H19表达可抑制腹膜纤维化。

摘要： 目的:探讨肾疏宁对体外培养人腹膜间皮细胞水通道蛋白1表达的影响.rn 方法:原代培养人腹膜间皮细胞、鉴定后传至第3代后分为6组:A组(生理盐水组):25ulFBS+50ulNS+RPMI-1640 500ul; B组(1.5％PDS组):25ulFBS+50ulPDS+RPMI-1640 500ul;C组(4.25％PDS组):25ulFBS+50ulPDS+RPMI-1640500ul;D组(1.5PDS+肾疏宁含药血清组):50ul肾疏宁含药血清+50ulPDS+RPMI-1640 500ul;E组(4.25％ PDS+肾疏宁含药血清组):50ul肾疏宁含药血清+50ulPDS+RPMI-1640 500ul.分别采用流式细胞仪、Western Blot检测水通道蛋白1的表达.rn 结果:实验研究证明白对照组与不含药血清组比较无统计学意义(P＞0.05);1.5％PDS组、4.25％PDS组、1.5PDS％+肾疏宁含药血清组、4.25％ PDS+肾疏宁含药血清组各组均与空白对照组比较AQP1表达指数均增高(P＜0.05).rn 结论:本实验研究证明肾疏宁含药血清有上调人腹膜间皮细胞上AQP1的表达的作用.

摘要： 目的：建立简便有效的大鼠腹膜间皮细胞(PMCs)的体外培养方法,以为PD在细胞分子机制研究方面提供有效手段.方法：1,PMCs的原代培养；2,PMCs的传代培养及鉴定。结果及结论：PMCs在倒置相差显微镜下观察，24h后90%以上贴壁，与48-72h后完全展开，细胞形态呈多样性，7-9d细胞生长达融合状态，立即呈现“铺路石样”外观，符合PMC细胞生长特点;免疫组化示角蛋白抗原阳性，波形蛋白抗原阳性，第Ⅷ因子抗原和白细胞抗原阴性，证实本实验培养细胞是PMCs。

摘要： 目的：研究雌、孕激素对内异症腹膜间皮细胞转化生长因子(TGF)-β1及其相关Smad蛋白表达的影响。方法：体外培养内异症肉眼观察正常腹膜组织的腹膜间皮细胞,免疫组化法和流式细胞术进行细胞鉴定;给予不同浓度雌孕激素体外干预后,应用细胞免疫组化法、RT-PCR法、Western blot法检测TGF-β1、Smad3、Smad7的表达、mRNA水平和蛋白水平表达变化.结果：1.不同浓度雌激素促进腹膜间皮细胞TGF -β1和Smad3, Smad7的表达，具有浓度依赖性;2.不同浓度孕激素能抑制正常腹膜间皮细胞TGF-β1表达，促进内异症组腹膜间皮细胞TGF-甲的表达。结论：不同浓度雌孕激素影响TGF-β/Smad相关蛋白表达，雌激素对腹膜间皮细胞TGF -β1和Smad3 , Smad7的表达具有一定的促进作用，而孕激素能够降低正常腹膜间皮细胞TGF-β1的表达，对内异症腹膜间皮细胞TGF-β1的表达具有促进作用，提示激素在内异症粘连形成可能起到重要作用。

摘要： 目的：研究细菌毒素和肿瘤坏死因子-α对人腹膜间皮细胞分泌白细胞介素(IL)-8和纤维连接蛋白(FN)的影响。rn 方法：分离人腹膜间皮细胞(HPMC)做体外培养，采用酶联免疫舣抗夹心法和逆转录聚酶链反应.检测细胞产生IL-8和FN水平的情况，采用Lowry方法检测培养液中细胞内总蛋白。rn 结果：脂多糖(10μg/ml)、金黄色葡萄球菌肠毒素(10μg/ml)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α，1000U/ml)分别刺激HPMC后，培养液内IL-8和FN蛋白质水平显著增高(P<0.01),并上调IL-8和FN的mRNA表达。rn 结论：细菌毒素和TNF-α可引起人腹膜间皮细胞IL-8和FN蛋白水平增加，并上调HPMCIL-8和FN mRNA表达：FN合成增加可能是导致腹膜纤维化原因之一。

摘要： 腹膜透析(Peritoneal Dialysis,PD)作为终末期肾脏病(end-stage renal disease,ESRD)患者重要的透析方式之一,由于其价格低廉、操作简便、对血流动力学影响小、交叉感染率低、能更好的保护残肾功能、对中分子毒素的清除效果好等优点.己成为越来越多ESRD患者首选的肾脏替代治疗方式。但令人遗憾的是随着透析时间的延长，腹膜间皮细胞受损，透析效能逐渐下降，腹膜发生纤维化改变，导致超滤衰竭的发生，最终PD患者不得不转入血液透析，限制了PD的临床应用，阻碍PD的进一步发展。腹膜纤维化(PeritonealFibrosis,PF)严重影响着PD患者的生活质量和长期存活率，且目前临床上尚无有效的治疗方法。近年来大量研究发现上皮间质转化(epithelialMesenchymal transition,EMT)是PF发病进展的中心环节，抑制EMT过程能逆转PF的发生。所以阐明腹膜间皮细胞发生EMT的分子机制对抑制PF进而促进PD的发展具有重要的意义。热休克蛋白27 (Heat shock protein,HSP27)是一种胶原的特异性“分子伴侣”，参与胶原的合成促进纤维化的发生发展。随着研究的深入，发现HSP27在EMT过程中扮演着重要的角色，参与多种细胞组织EMT的发生，但HSP27与腹膜间皮EMT的关系，目前尚未见相关研究。值得注意的是近期有学者发现，HSP27可以通过提高STAT3磷酸化水平，参与细胞内JAK/STAT3信号通路的激活，从而促进前列腺癌细胞EMT的发生。因此，本课题组通过建立腹膜透析动物模型，以靶点蛋白HSP27为切入点，观察HSP27在大鼠腹膜EMT组织中的表达，探讨HSP27与腹膜EMT的关系，并探寻其下游JAK/STAT3/Survivin通路在腹膜EMT过程中的作用，寻找一些参与腹膜间皮EMT的蛋白并对其相关分子机制进行探索。

摘要： 腹膜透析是终末期患者有效替代治疗方式之一,但腹膜长期暴露于非生物相容性透析液以及反复发生腹膜炎均可引起腹膜纤维化,继而导致超滤失败.糖基化终未产物(AGEs)在腹膜纤维化中有着重要作用,其在腹透液中的存在,在腹透病人腹膜组织中的聚集程度与腹膜透析时间长短、腹膜纤维化程度及腹膜功能降低密切相关.故本实验旨在探究RhoA/Rho-kinase信号通路在AGEs刺激腹膜间皮细胞发生上皮细胞向间质细胞转分化（EMT)和大鼠腹膜纤维化模型中的作用，为临床治疗提供新靶点。

摘要： 目的：探讨参芎注射液对腹膜纤维化大鼠腹膜组织CTGF表达的影响及其意义。方法：用4.25％含糖透析液+脂多糖致腹膜纤维化模型。将32只SD雄性大鼠随机分为4组，A正常对照组：大鼠不做任何处理。B模型组：每日直接腹腔注射100ml/kg含糖透析液，C低剂量组：每日直接腹腔注射100ml/kg(含糖透析液+参芎15mg/kg)。D高剂量组：每日直接腹腔注射100ml/kg(含糖透析液+参芎30mg/kg)。于实验第28天处死动物取腹膜组织待检。留取腹膜组织做HE及Masson染色，RT-PCR，间接免疫荧光，western-blot检测CTGFmRNA和蛋白的表达水平。结果：病理形态学观察A组腹膜覆盖一层扁平间皮细胞，B，C，D组可见腹膜间皮细胞变为圆形、柱形，间皮细胞有脱落，间皮下基质增厚，可见成纤维样细胞及单核、巨噬细胞浸润，且有纤维素样物质沉积。上述现象在B组表现尤为明显。Masson染色显示有大量的胶原沉积，与B相比较，C，D组显示有所减轻。与正常对照组相比，B，C，D组的CTGFmRNA和蛋白的表达水平明显上调;与B组相比，C，D明显减轻。结论：参芎可通过抑制腹膜纤维化大鼠腹膜组织的CTGF表达而发挥明显的抗纤维化作用。

摘要： 本发明公开了一种温石棉诱导的人胸膜间皮细胞恶性转化株及其应用，所述人胸膜间皮细胞恶性转化株分类命名为：人胸膜间皮细胞，株号为：AS‑T，保藏号为：CCTCC NO.C201923。本发明人胸膜间皮细胞恶性转化株由人胸膜间皮细胞(MeT‑5A)经温石棉多阶段多次染毒处理后，发生恶性转化获得，在作为致癌物致癌机制研究的细胞模型等多个方面具有良好的应用前景。

摘要： 本发明公开了一种多壁碳纳米管诱导的人胸膜间皮细胞恶性转化株及其应用，所述人胸膜间皮细胞恶性转化株分类命名为：人胸膜间皮细胞，株号为：MCN‑MeT‑5A，保藏号为：C2018124。本发明人胸膜间皮细胞恶性转化株由人胸膜间皮细胞(MeT‑5A)经MWCNT多阶段多次染毒处理后，发生恶性转化获得，在作为致癌物致癌机制研究的细胞模型等多个方面具有良好的应用前景。

摘要： 本发明涉及辅助诊断领域，具体涉及一种用于区分恶性浆膜腔积液中间皮细胞与癌细胞的酸性磷酸酶染色法、相关试剂及其应用。本发明的染色方法能够去除样品中的红细胞，消除背景影响，同时，能够将间皮细胞和恶性肿瘤细胞明显区分，帮助医生迅速准确的找到恶性肿瘤细胞，并借此进一步作出诊断，极大提高了诊断的准确性。

摘要： 本发明公开了一种多壁碳纳米管诱导的人胸膜间皮细胞恶性转化株及其应用，所述人胸膜间皮细胞恶性转化株分类命名为：人胸膜间皮细胞，株号为：MCN‑MeT‑5A，保藏号为：C2018124。本发明人胸膜间皮细胞恶性转化株由人胸膜间皮细胞(MeT‑5A)经MWCNT多阶段多次染毒处理后，发生恶性转化获得，在作为致癌物致癌机制研究的细胞模型等多个方面具有良好的应用前景。

摘要： 本发明公开了一种温石棉诱导的人胸膜间皮细胞恶性转化株及其应用，所述人胸膜间皮细胞恶性转化株分类命名为：人胸膜间皮细胞，株号为：AS‑T，保藏号为：CCTCC NO.C201923。本发明人胸膜间皮细胞恶性转化株由人胸膜间皮细胞(MeT‑5A)经温石棉多阶段多次染毒处理后，发生恶性转化获得，在作为致癌物致癌机制研究的细胞模型等多个方面具有良好的应用前景。

摘要： 本发明公开一种副猪嗜血杆菌感染猪腹膜间皮细胞模型的构建方法，涉及细胞感染模型技术领域。所述副猪嗜血杆菌感染猪腹膜间皮细胞模型的构建方法包括以下步骤：取副猪嗜血杆菌SH0165型标准菌株进行培养，制得细菌悬液；向猪腹膜间皮细胞中加入所述细菌悬液，感染6～12h后，即得副猪嗜血杆菌感染猪腹膜间皮细胞模型，所述细菌悬液中副猪嗜血杆菌感染所述猪腹膜间皮细胞的感染比为(90～110)：1。本发明旨在构建一种副猪嗜血杆菌SH0165型感染猪腹膜间皮细胞的体外感染模型。

摘要： 本发明公开了一种大鼠腹膜间皮细胞的提取与培养方法，包括以下步骤：（1）配制培养液，所述培养液包括基础培养基、胎牛血清及碳酸氢钠；（2）肠系膜提取：将肠系膜平摊在大鼠肝脏表面，提起肠系膜中间部分，剪下小块肠系膜的中央部分放入缓冲液清洗；将清理后的小块肠系膜移至消化液中进行消化，得原代细胞悬液；（3）细胞接种培养。本发明提取与培养方法不仅可以低成本并稳定地获得性状均一、细胞的获得率高、杂细胞含量少且活性较强的腹膜间皮细胞，而且获得的腹膜间皮细胞在使用显微镜明场观察时可以看到呈现经典的铺路石状，且形态稳定、一致性高，培养稳定，在用于后续的相关研究有利于增加实验的准确性和可重复性。

摘要： 本发明公开一种猪腹膜间皮细胞的培养方法，涉及细胞培养技术领域。所述猪腹膜间皮细胞的培养方法包括以下步骤：将清理后的腹膜平铺于培养皿中进行酶解消化，得原代细胞悬液；将所述原代细胞悬液离心，保留沉淀物，并将所述沉淀物用原代培养液重悬，筛选得原代细胞；其中，所述原代培养液包含15％～20％(v/v)胎牛血清、79％～85％(v/v)DMEM/F‑12基础培养基、0.8％～1.1％(v/v)青链霉素混合液、0.03～0.05％(v/v)EGF以及0.05％～0.12％(v/v)ITS。本发明旨在提供一种适用于猪腹膜间皮细胞的培养方法。

摘要： 本发明公开一种副猪嗜血杆菌感染猪腹膜间皮细胞模型的构建方法，涉及细胞感染模型技术领域。所述副猪嗜血杆菌感染猪腹膜间皮细胞模型的构建方法包括以下步骤：取副猪嗜血杆菌SH0165型标准菌株进行培养，制得细菌悬液；向猪腹膜间皮细胞中加入所述细菌悬液，感染6～12h后，即得副猪嗜血杆菌感染猪腹膜间皮细胞模型，所述细菌悬液中副猪嗜血杆菌感染所述猪腹膜间皮细胞的感染比为(90～110)：1。本发明旨在构建一种副猪嗜血杆菌SH0165型感染猪腹膜间皮细胞的体外感染模型。

摘要： 本发明涉及一种原代腹膜间皮细胞的分离方法及分离所得PMCs。本发明所述方法从腹膜透析置管术后2周内的患者的透析液中分离原代PMCs。所述方法步骤简单、无创且易于重复，所得原代PMCs具有纯度高、贴壁性好、传代次数多、融合性好，能直接反映PD患者PMCs在PDS中的生理变化等优点。