胚性愈伤组织

摘要： 探究碳源等主要因素对湿地松胚性愈伤组织增殖的影响,为进一步提高其增殖效率提供技术方法和理论依据。利用优良无性系PEE3-13的胚性愈伤组织,研究不同种类及浓度的碳源、不同pH、有机氮源谷氨酰胺及其替代物丙谷二肽对其增殖的影响。结果发现培养基pH和碳源种类对其增殖的影响显著,实际pH范围为5.68~6.28时,最适宜胚性愈伤组织的生长,使用30 g·L^(-1)白砂糖作为碳源时达到最高增殖率。丙谷二肽不能替代谷氨酰胺,添加450 mg·L^(-1)谷氨酰胺时,胚性愈伤组织的增殖率最高、活力最好。当增殖培养基中使用30 g·L^(-1)白砂糖、添加450 mg·L^(-1)的谷氨酰胺,实际pH为5.68~6.28时,最适宜该无性系胚性愈伤组织的增殖,增殖率最大可达到851.27%。

摘要： 为解决大花蕙兰园艺品种‘黄金小神童’(Cymbidium Golden Elf‘Sundust’)人工繁育周期长、系数低等问题,该研究以其侧芽茎尖为外植体,在1/2MS+1.0 mg·L^(-1)NAA+50 g·L^(-1)香蕉泥+15 g·L^(-1)蔗糖中培养60 d后,以获得的愈伤组织与原球茎混合物为材料,通过L_(9)(3)^(4)正交与完全组合实验研究不同因素及组合对‘黄金小神童’胚性愈伤组织和原球茎发生及增殖的影响,进而建立‘黄金小神童’高效、稳定的丛芽增殖和植株再生体系。结果表明:(1)在MS+2.0 mg·L^(-1)6-BA+150 mL·L^(-1)椰汁+20 g·L^(-1)蔗糖中,培养70 d后增殖系数达8.13,同时可获得桑葚状原球茎团。(2)原球茎团在MS+1.0 mg·L^(-1)6-BA+1.0 mg·L^(-1)NAA中培养70 d后,原球茎发育为幼芽,丛芽发生系数可达5.36;此时,将由原球茎诱导得到的簇状丛芽转接至MS+1.0 mg·L^(-1)6-BA+1.0 mg·L^(-1)NAA中,以“芽繁芽”方式增殖,其增殖系数也达到4.28,此时可建立起稳定的增殖体系。(3)无菌苗生根则在MS+1.0 mg·L^(-1)NAA+150 g·L^(-1)香蕉泥中进行,培养60 d可得到具4~7片真叶、高度为8~10 cm的健壮生根苗,生根率达96.5%;再生苗经露苗后移栽到松树皮和山基土体积比为3∶2的基质中,成活率在85%以上。通过愈伤组织与原球茎-胚性愈伤组织与原球茎-原球茎-丛芽-再生植株途径最终建立了‘黄金小神童’高效、稳定的丛芽快速繁殖体系,该研究结果为进一步开展其人工繁育和遗传转化提供了实验依据,也为兰科其他物种的无性快速繁殖提供了参考。

摘要： [目的]建立和优化火炬松体胚发生技术体系,为火炬松优良基因型体胚繁育及遗传转化体系建立提供技术支撑。[方法]以火炬松优良基因型的未成熟合子胚为材料,从基因型、球果采集期、基本培养基、植物外源激素组合及浓度等方面对胚性愈伤组织诱导条件进行优化;选取增殖效果好、具有胚性胚柄细胞团(ESM)的胚性愈伤组织开展体胚成熟的正交试验,选择发育正常的子叶胚进行萌发,8周后移栽。[结果]基因型、球果采集期、基本培养基和外源激素(PGR)组合及浓度等因子均对胚性愈伤组织诱导有不同程度的影响。火炬松6种基因型中荣山52胚性愈伤组织诱导率最高,达63.33%;处于裂生多胚期的合子胚为外植体的最佳采样期(7月20日左右);6种基本培养基中,在DCR基本培养基上胚性愈伤组织诱导率最高,达40.00%;不同PGR组合及浓度中,以0.5 mg·L^(−1)6-BA+1.0 mg·L^(−1)2,4-D+2.0 mg·L^(−1) NAA+5.0 mg·L^(−1) ABA的胚性愈伤组织诱导率最高,达50.00%。胚性愈伤组织在基本培养基MLP上培养14 d后,转入含有ABA 8.0 mg·L^(−1)、PEG 8000140 g·L^(−1)以及麦芽糖40.0 g·L^(−1)的体胚成熟分化培养基上,体胚发生数平均为411个·g^(−1),体胚萌发率可达93.33%;体胚苗移栽成活率可达86.30%。[结论]本研究优化了火炬松胚性愈伤组织诱导与体胚发生技术体系,体胚诱导率显著提升,为火炬松良种规模化繁育及遗传转化提供技术支撑。

摘要： 以古老月季优质品系的小叶及复叶柄为外植体,探讨了月月粉(Rosa chinensis‘Pink China’)自交后代一优良品系月月红粉(Rosa chinensis‘Red and Pink’)的愈伤组织诱导、体细胞胚胎发生与增殖及植株高效再生的方法。结果表明,2,4-D可能是月月红粉最适宜愈伤诱导的生长激素;最佳外植体为复叶柄;同时添加L-p和AgNO_(3)对体细胞胚发生有促进作用;在MS+(3.0,4.0,5.0,6.0 mg/L)2,4-D+400 mg/L L-p+10 mg/L AgNO_(3)+3%Glucose+3 g/L GEL培养基上,外植体最初形成愈伤组织,经过16周培养后均不同程度发生体细胞胚;适合月月红粉体细胞胚增殖的培养基为:MS+1.0 mg/L 2,4-D+0.05 mg/L BA+3%Glucose+0.3%GEL。体细胞胚在萌发培养基1/2 MS+3%Glucose+0.3%GEL+1.0 mg/L BA+0.01 mg/L NAA上萌发培养,最终建立了以月月红粉体细胞胚发生途径为基础的高效再生体系,为加快蔷薇属植物的功能基因验证及相应月季分子育种进度奠定了基础。

摘要： 【目的】研究新疆海岛棉不同材料愈伤组织培养体系,筛选再生能力强的海岛棉材料,为新疆海岛棉基因工程育种提供参考。【方法】以105份新疆海岛棉为材料,利用改良后的MS培养基对下胚轴共培养,在2,4-D诱导培养基中诱导分化产生愈伤组织,浸染农杆菌介导的红色荧光蛋白,验证转化效果。【结果】海岛棉材料愈伤组织的增殖速率与其基因型有关,改良后的MS共培养基、2,4-D诱导培养基可有效用于新疆海岛棉共培养和胚性愈伤组织增殖;愈伤组织增殖的适宜培养时间为4个月,时间过长不利于其增殖;愈伤增殖速度与转化率呈正相关,增殖快的材料其红色荧光蛋白的转化率较高;筛选出2份增殖快且转化率好的海岛棉材料。【结论】建立了新疆海岛棉胚性愈伤组织培养体系与鉴定方法,筛选出9份愈伤增殖好、且能够有效转化的海岛棉材料。

摘要： 为了解决红松(Pinus koraiensis)胚性愈伤组织增殖过程中生长状态差、体胚产量不高等问题,本研究利用红松胚性愈伤组织1-100细胞系为材料,通过调节红松增殖培养基中激素、碳源和增殖培养周期,探索其对红松体胚发生能力的影响及其生理生化特性变化。结果如下:①红松胚性愈伤组织最佳增殖条件激素浓度为1 mg·L^(-1) NAA+0.25 mg·L^(-1)6-BA,最佳碳源为蔗糖,最佳增殖培养周期为14 d,在此条件下获得的体胚产量最多(166个·g^(-1));②在优化增殖培养过程中,储藏物质为红松体胚发生提供了能量来源;激素种类及其浓度、碳源种类、增殖培养周期之间可溶性蛋白质量分数没有显著差异;③红松愈伤组织中CAT活性过高不利于愈伤组织的体胚发生,可能是H_(2)O_(2)等代谢产物积累过多,产生毒害作用。

摘要： [目的]探究中国板栗主栽品种'燕山红栗'胚性愈伤组织对遗传霉素的耐受力.[方法]以'燕山红栗'(Castanea mollissima Blume'Yanshanhongli')幼胚胚尖诱导出的两种不同状态的胚性愈伤组织为材料,在含有不同质量浓度遗传霉素的固体和液体扩繁培养基上培养,观察其生长状况,并统计其死亡率和鲜质量变化量.[结果]在固体培养基上,遗传霉素对两种胚性愈伤组织的致死质量浓度分别为130 mg/L和80 mg/L;液体悬浮培养中,遗传霉素对两种胚性愈伤组织的致死质量浓度分别为60 mg/L和30 mg/L.[结论]确定在固体和液体悬浮培养条件下,两种板栗胚性愈伤组织对遗传霉素的耐受质量浓度,为板栗转基因过程中遗传霉素的使用提供依据.

摘要： [目的]研究脱落酸(Abscisic acid,ABA)对棉花体细胞胚胎发生过程中下胚轴脱分化和再分化的影响,优化体细胞胚胎发生体系和初步解析脱落酸调控棉花体细胞胚胎发生分子机制.[方法]以棉花品种中棉所24(CCRI 24)下胚轴为外植体,设置5个ABA浓度0、0.02、0.04、0.06、0.08μmol·L-1,分别以A0、A1、A2、A3、A4表示,添加至MSB(MS培养基+B5维生素)培养基诱导愈伤和胚性愈伤,研究ABA对棉花下胚轴初始细胞脱分化、愈伤组织诱导和胚性愈伤组织诱导的影响.[结果]ABA促进下胚轴初始细胞脱分化;显著提高愈伤组织的脱分化率和增殖率;0.02μmol·L-1 ABA显著提高胚性愈伤分化率,0.04～0.08μmol·L-1 ABA显著降低胚性愈伤分化率.ABA处理后胚性愈伤和非胚性愈伤的增殖率均显著提高且质地受到影响.0.02～0.08μmol ABA处理下,LBD和LBD在愈伤起始期上调表达.0.02μmol·L-1 ABA处理下,在愈伤增殖早期和中期BBM、LEC1和AGL15上调表达,愈伤增殖后期FUS3、LEA、ABI3基因上调表达.[结论]脱落酸调控的棉花体细胞胚胎发生与相关标记基因的时空性表达密切相关,这些基因表达水平的增加是ABA调控愈伤和胚性愈伤分化的分子基础.

摘要： 为使速生湿地松良种快速大规模繁殖,对其胚性愈伤组织进行诱导和增殖优化研究.该文以1代湿地松种子园中10个速生湿地松优良无性系(基因型)的未成熟合子胚为外植体,系统研究基因型、合子胚发育阶段、基本培养基、植物生长调节剂种类和浓度等不同因子对胚性愈伤组织诱导效率的影响,探讨胚性愈伤组织的增殖条件.结果表明:基因型、合子胚发育阶段、基本培养基及植物生长调节剂种类和浓度等均对胚性愈伤组织诱导有不同程度的影响.10个基因型均诱导出了胚性愈伤组织,其中以2号基因型诱导率最高,达到25.37％;合子胚发育阶段中,以处于多胚阶段的球果诱导率最高;四种基本培养基中,以在DCR基本培养基上诱导效果最佳;植物生长调节剂浓度及组合中以2,4-D 2.0 mg·L-1+KT 2.5 mg·L-1诱导率最高,达到27.78％.湿地松胚性愈伤组织增殖的最佳培养基为在DCR基本培养基上添加0.5 mg·L-12,4-D、1.0 mg·L-1 KT、500 mg·L-1 CH和300 mg·L-1 L-谷氨酰胺.综上研究结果,为湿地松良种进一步开展成熟胚诱导及植株再生奠定了基础.

摘要： [目的]建立籼稻'中恢161'Oryza sativa subsp.indica'Zhonghui 161'农杆菌Agrobacterium tumefaciens介导的转化体系.[方法]以籼稻'中恢161'的成熟胚为材料,设置了5个草甘膦质量浓度(100、200、300、400和500 mg·L?1)进行胚性愈伤组织的草甘膦敏感性试验.利用农杆菌介导法,将草甘膦抗性基因CP4-EPSPS导入'中恢161'的胚性愈伤组织中,转化后的胚性愈伤组织分别在含有300、350和400 mg·L?1草甘膦的选择培养基上进行抗性筛选.抗性愈伤组织进一步分化、成苗.[结果]草甘膦质量浓度为300～400 mg·L?1时,愈伤组织褐化率约50％,具有很好的选择效果.经统计,300、350和400 mg·L?1草甘膦抗性筛选后,愈伤组织阳性率分别为40.16％、61.72％和84.04％,抗性愈伤组织的分化率为46.43％,成苗率为32.84％.共获得67株再生小苗,经PCR检测,43株成功转入CP4基因,再生植株阳性率为64.18％.[结论]建立了'中恢161'农杆菌介导的转化体系.

摘要： 以玻璃化超低温保存后的龙眼胚性愈伤组织为材料,进行体细胞胚胎发生、成熟和植株再生,建立玻璃化法超低温保存龙眼胚性愈伤组织再生体系.利用RAPD技术从分子水平对玻璃化超低温保存的龙眼胚性愈伤组织进行遗传稳定性检测.结果表明,超低温保存的体细胞无性系遗传稳定性基本得到保持,但也发现存在小量的变异现象,有个别引物扩增的谱带,在超低温保存前和超低温保存后存在一些差异,变异率为3.2％.

摘要： 以安祖花品种'Dakota'(火焰)、'Pink Champion'(粉冠军)嫩叶为外植体,结合胚性愈伤组织发生体系,研究琼脂及植物凝胶(Phytagel)对安祖花胚性愈伤组织诱导的影响.同时,研究了不同Picloram、6-BA浓度对'火焰'胚性愈伤组织增殖的影响.结果表明:Phytagel的诱导效果明显优于琼脂,MS+3mg·L-1Picloram为最佳增殖培养基,增殖系数达2.65,Picloram、6-BA同时使用时不利于愈伤组织增殖,愈伤褐化率高达54.63％.

摘要： 以尾巨桉优良无性系无菌苗茎段为外植体,通过对噻唑基脲类新型分裂素(N-phenyl-N'-[6-(2-chlorobenzothiazol)-yl]urea,PBU)等多种不同浓度生长调节剂组合的优化,进行胚性愈伤组织诱导及再生研究.结果表明,在添加了2mg·L-1PBU和0.05mg·L-1IAA的改良MS培养基上,茎段外植体5d后愈伤组织诱导率达96％以上.将愈伤组织接种在添加1mg·L-16-BA和0.05mg·L-1NAA的MS培养基上,诱芽率达90.8％.随后在添加了0.8mg·L-1PBU与0.05mg·L-1IAA的1/2MS培养基上诱导芽伸长,用1/2MS培养基附加0.5mg·L-1IBA诱导生根,移栽后得到完整再生植株.

摘要： 不同种类柑橘胚性愈伤组织的转化率之间存在较大差异。本研究采用根癌农杆菌介导的遗传转化方法对11种柑橘胚性愈伤组织进行了系统地转化研究。结果表明，有10种愈伤细织均不同程度的获得了GUS阳性材料，柑橘愈伤组织的转化率与其褐化程度存在显著相关性。转化率较高的柑橘种类其愈伤组织表现严重的褐化，而转化率较低的种类其愈伤组织表现轻微褐化或不褐化。其中宽皮橘类愈伤组织的褐化最为严重，转化率最高达80％;甜橙类愈伤组织的褐化表现为褐化、轻微褐化和不褐，转化率在0～20％;金柑和葡萄柚类居于两者之间,转化率分别为20％和6％。进一步研究表明柑橘愈伤组织的褐化程度与其本身的总多酚含量成正相关。因此，多酚含量影响柑橘愈伤组织的褐化，进而影响转化率，其机理可能与农杆菌vir基因的活化、T-DNA的转移有关。

摘要： 唐菖蒲(Gladiolus hybridus Hort)是鸢尾科(Iridaceae)唐菖蒲属(Gladiolus)多年生单子叶球根花卉,又称剑兰、十样锦、十三太保、菖兰等。唐菖蒲花色艳丽是世界四大切花之一。植物胚性愈伤组织在培养基上可诱导产生体细胞胚,通过体细胞胚胎发生途径可形成再生植株,并认为该发生途径是植物体细胞在离体培养条件下的一个基本发育途径。本实验以唐菖蒲“超级红”子球为实验材料,建立唐菖蒲愈伤组织再生体系,从而诱导出愈伤组织,并进行石蜡切片的观察,进行胚性愈伤的区别。以MS+KT0．8mg／L+NAA0．2mg/L+6-BA0．5mg／L为诱导生芽培养基,以MS+2,4-D2．0mg/L+6-BA0．5mg／L为诱导愈伤培养基。

摘要： 本研究以荔枝幼胚来源的胚性愈伤组织作为受体材料,采用基因枪轰击的方法进行gus基因转化,对荔枝胚性愈伤组织基因枪轰击中各影响因素进行了对比研究,确定了进行荔枝基因枪轰击的最佳轰击条件.采用此最佳轰击条件进行稳定表达转化,经50mg/L的潮霉素筛选获得抗性愈伤组织,并通过体胚发生途径获得了再生植株,经GUS组织化学染色初步确定为表达GUS的转基因植株.

摘要： 以椰子成熟合子胚为外植体,研究不同激素配比对椰子胚性愈伤组织诱导及体细胞胚胎发生的影响,并对体细胞胚胎的发生过程进行组织细胞学观察.结果表明:2,4-D对椰子胚性愈伤组织的诱导具有重要作用,诱导椰子胚性愈伤组织的最适合2,4-D浓度为25mg/L;将胚性愈伤组织转接到添加2mg/L 2,4-D和10 mg/L 6-BA的Y3培养基上培养可形成体细胞胚胎.组织细胞学观察表明,体细胞胚胎的形态发生经历了与合子胚形态发生相似的阶段,即经过球形胚、子叶形胚等.

摘要： 本研究以荔枝转基因原生质体再生的胚性愈伤组织(Embryogenic callus derived from transgenic protoplasts,TPEC)细胞系和龙眼红核子品种的松散型胚性愈伤组织(Embryogenic callus EC)为材料,采用PA-4000电融合仪进行原生质体电融合参数的研究.本研究结果表明：荔枝TPEC与龙眼EC原生质体融合的适宜电融合参数为原生质体密度为5×105个·mL-1时,在交流电场的频率为1.0 Mhz、交变电场场强为50V·cm-1,作用时间为60 s,直流脉冲强度为600 V·cm-1、脉冲持续时间为10 ms,脉冲2-3次,融合率可达30%以上.

摘要： 本试验对15个离体保存的龙眼品种的胚性愈伤组织进行体胚诱导、成熟以及植株再生的研究.试验结果表明,15个龙眼品种在体胚发生再生植株上存在一定差异.15个龙眼品种的体胚诱导研究表明：15个龙眼品种、不同蔗糖浓度、有机附加物、生长调节剂、光质对体胚发生的时间、数量以及质量在不同程度上有一定的影响,胚状体在15-35d皆先后形成,多为白色小子叶胚,分化频率为100%,形成数量从2550-13220个/g不等;体胚成熟研究表明：15个龙眼品种、不同蔗糖浓度、有机附加物、光质对胚状体的大小、形态都存在一定的影响,胚状体多白色增大,大小在5-15mm不等;植株再生研究表明：15个龙眼品种、不同成熟时间、不同胚状体、光质对体胚萌发率以及再生苗长势影响显著,多数正常成熟体胚在15d左右就萌发,萌发率从50%-95%不等.

摘要： 以唐菖蒲球茎芽切片为外植体，经体细胞胚发生途径，进行胚性愈伤组织诱导、胚状体的诱导、胚状体发育过程及植株再生的研究。经研究认为胚性愈伤组织诱导培养基为MS+2，4.D4.0mg/L+6.BA0.5mg/L，诱导率为95％；胚状体诱导培养基为MS+2，4-D1.0mg/L+TDZ0.2mg/L，诱导率为68.3％；将产生的胚状体首先接种于MS培养基使其充分发育，之后转入MS+6-BA2.0mg/L，培养基中诱导发芽，在转入MS培养基中使其形成完整植株。采用石蜡切片法和临时压片法对胚状体的发育过程进行了观察发现，首先外植体表层薄壁细胞经脱分化恢复分生能力，形成愈伤组织，随后在愈伤组织表面形成许多瘤状突起即胚性细胞团。胚性细胞团继续发育成球形胚、盾形胚，最后发育成熟形成完整植株。

摘要： 本发明提供了一种白桦胚性愈伤组织诱导培养基、诱导胚性愈伤组织的方法及组培苗的培育方法，属于植物组织培养技术领域。本发明提供的白桦胚性愈伤组织诱导培养基，以MS培养基为基本培养基，还包括以下含量组分：2,4‑D 2mg/L、NAA 0.2mg/L、琼脂5.5g/L和蔗糖40g/L；所述胚性愈伤组织诱导培养基的pH值为5.8。利用本发明的培养基愈伤诱导率高达90％以上，胚性愈伤诱导率达19％以上。

摘要： 本发明提供了橡胶树胚性愈伤组织诱导培养基及橡胶树胚性愈伤组织快速增殖方法，属于组织培养技术领域。所述诱导培养基是包含2,4‑D配合6‑BA、玉米素、TDZ、椰子汁和蔗糖的改良MS培养基，很大程度提高了胚性愈伤组织的诱导率。所述橡胶树胚性愈伤组织快速增殖方法，将花药经初代诱导、胚性愈伤组织诱导和体细胞胚状体分化培养，分别得到胚性愈伤组织和子叶形体细胞胚状体，将两者同步接种到增殖培养基上，以子叶形体细胞胚状体看护哺育，使胚性愈伤组织有效快速增殖。伴随着子叶形体细胞胚的萌发，胚性愈伤组织快速增殖，且同步性很好，皆处于胚性愈伤组织原胚性未分化状态。

摘要： 本发明提供了一种橡胶树胚状体诱导培养基、胚性愈伤组织的诱导方法及抗性愈伤组织植株再生的培育方法，属于植物组织培养技术领域。所述橡胶树胚状体诱导培养基，以改良MS培养基为基本培养基，包括Kt、NAA、6‑BA、水杨酸、亚精胺、酸水解酪蛋白、椰子液体胚乳椰子水、活性炭、蔗糖和植物凝胶。本发明提供的胚状体诱导培养基进行橡胶树花药体细胞胚诱导胚性愈伤组织的体细胞胚诱导率相较于花药脱分化愈伤组织的提高2.04～2.16倍。

摘要： 本发明的目的是恢复和保持长白落叶松胚性愈伤组织的胚性—通过调节胚性愈伤组织继代培养基中激素浓度的方法。胚性愈伤组织在S+0.1mg·L‑12，4‑D+0.04mg·L‑1BA+0.02mg·L‑1KT激素条件下，继代6个月后发现胚性愈伤组织的体胚分化率急剧下降。经去除2，4‑D，逐渐降低NAA的方法恢复胚性：将胚性愈伤组织接种在每2周NAA浓度从0.5、0.4、0.3、0.2、0.1mg·L‑1依次降低的S培养基中进行胚性恢复培养，其中S培养基中激素还包含0.5mg·L‑1BA、0.5mg·L‑1KT。最终在S+0.2mg·L‑1NAA+0.5mg·L‑1BA+0.5mg·L‑1KT+0.5g·L‑1谷氨酰胺+0.5g·L‑1水解酪蛋白+30g·L‑1蔗糖+3g·L‑1植物凝胶培养条件下持续继代2年，胚性仍然保持良好。将胚性恢复的愈伤组织经分化培养后，体胚发生率可达100％。将发育正常的体细胞胚胎转入萌发培养基中，4周后成苗率可达46.2％。

摘要： 本发明涉及一种判断尾巨桉胚性与非胚性愈伤组织的荧光定量PCR方法，属于植物愈伤组织质量鉴定的技术领域，具体包括定量PCR相关引物设计、尾巨桉愈伤组织总RNA的提取、愈伤组织RNA的反转录和荧光定量PCR三个步骤：设计7个定量分析的基因引物并由生物公司合成；使用TaKaRa公司的RNAiso Plus试剂盒提取不同类型愈伤组织总RNA；RNA样品用DNase Ⅰ(Fermentas)消化，除去残余基因组DNA的污染；根据TOYOBO ReverTra Ace®qPCR RT Kit使用方法进行cDNA第一链的合成，作为Real‑time PCR反应的模板；荧光定量PCR 采用SYBR GreenⅠ染料法，在BIO‑RAD Real‑Time PCR System上进行，用Opticon Monitor 3进行数据统计分析分上述基因在尾巨桉不同类型愈伤组织中表达量的差异，以确定尾巨桉胚性与非胚性愈伤组织；该方法准确可靠，操作简便，容易实施，实用性强。

摘要： 本发明提供了一种白桦胚性愈伤组织诱导培养基、诱导胚性愈伤组织的方法及组培苗的培育方法，属于植物组织培养技术领域。本发明提供的白桦胚性愈伤组织诱导培养基，以MS培养基为基本培养基，还包括以下含量组分：2,4‑D 2mg/L、NAA 0.2mg/L、琼脂5.5g/L和蔗糖40g/L；所述胚性愈伤组织诱导培养基的pH值为5.8。利用本发明的培养基愈伤诱导率高达90％以上，胚性愈伤诱导率达19％以上。

摘要： 本发明提供了橡胶树胚性愈伤组织诱导培养基及橡胶树胚性愈伤组织快速增殖方法，属于组织培养技术领域。所述诱导培养基是包含2,4‑D配合6‑BA、玉米素、TDZ、椰子汁和蔗糖的改良MS培养基，很大程度提高了胚性愈伤组织的诱导率。所述橡胶树胚性愈伤组织快速增殖方法，将花药经初代诱导、胚性愈伤组织诱导和体细胞胚状体分化培养，分别得到胚性愈伤组织和子叶形体细胞胚状体，将两者同步接种到增殖培养基上，以子叶形体细胞胚状体看护哺育，使胚性愈伤组织有效快速增殖。伴随着子叶形体细胞胚的萌发，胚性愈伤组织快速增殖，且同步性很好，皆处于胚性愈伤组织原胚性未分化状态。

摘要： 本发明提供了一种橡胶树胚状体诱导培养基、胚性愈伤组织的诱导方法及抗性愈伤组织植株再生的培育方法，属于植物组织培养技术领域。所述橡胶树胚状体诱导培养基，以改良MS培养基为基本培养基，包括Kt、NAA、6‑BA、水杨酸、亚精胺、酸水解酪蛋白、椰子液体胚乳椰子水、活性炭、蔗糖和植物凝胶。本发明提供的胚状体诱导培养基进行橡胶树花药体细胞胚诱导胚性愈伤组织的体细胞胚诱导率相较于花药脱分化愈伤组织的提高2.04～2.16倍。

摘要： 本发明的目的是恢复和保持长白落叶松胚性愈伤组织的胚性—通过调节胚性愈伤组织继代培养基中激素浓度的方法。胚性愈伤组织在S+0.1mg·L‑12，4‑D+0.04mg·L‑1BA+0.02mg·L‑1KT激素条件下，继代6个月后发现胚性愈伤组织的体胚分化率急剧下降。经去除2，4‑D，逐渐降低NAA的方法恢复胚性：将胚性愈伤组织接种在每2周NAA浓度从0.5、0.4、0.3、0.2、0.1mg·L‑1依次降低的S培养基中进行胚性恢复培养，其中S培养基中激素还包含0.5mg·L‑1BA、0.5mg·L‑1KT。最终在S+0.2mg·L‑1NAA+0.5mg·L‑1BA+0.5mg·L‑1KT+0.5g·L‑1谷氨酰胺+0.5g·L‑1水解酪蛋白+30g·L‑1蔗糖+3g·L‑1植物凝胶培养条件下持续继代2年，胚性仍然保持良好。将胚性恢复的愈伤组织经分化培养后，体胚发生率可达100％。将发育正常的体细胞胚胎转入萌发培养基中，4周后成苗率可达46.2％。

摘要： 本发明涉及一种判断尾巨桉胚性与非胚性愈伤组织的荧光定量PCR方法，属于植物愈伤组织质量鉴定的技术领域，具体包括定量PCR相关引物设计、尾巨桉愈伤组织总RNA的提取、愈伤组织RNA的反转录和荧光定量PCR三个步骤：设计7个定量分析的基因引物并由生物公司合成；使用TaKaRa公司的RNAisoPlus试剂盒提取不同类型愈伤组织总RNA；RNA样品用DNaseⅠ(Fermentas)消化，除去残余基因组DNA的污染；根据TOYOBOReverTraAce?qPCRRTKit使用方法进行cDNA第一链的合成，作为Real-timePCR反应的模板；荧光定量PCR采用SYBRGreenⅠ染料法，在BIO-RADReal-TimePCRSystem上进行，用OpticonMonitor3进行数据统计分析分上述基因在尾巨桉不同类型愈伤组织中表达量的差异，以确定尾巨桉胚性与非胚性愈伤组织；该方法准确可靠，操作简便，容易实施，实用性强。