耐药突变

摘要： 目的探索HIV-1低病毒载量(LVL)患者外周血HIV-1前病毒DNA是否携带优势耐药突变位点(DRMs),以及HIV-1前病毒DNA耐药检测在临床中的潜在意义。方法采集2020年5月—2021年5月在某院门诊接受抗病毒治疗6个月以上且连续两次检测HIV-1 RNA血浆病毒载量(viral load,VL)为50~1000 copies/mL的HIV-1感染者的全血标本,进行HIV-1前病毒DNA基因型耐药检测,以巢式PCR扩增HIV-1 pol区基因并进行Sanger测序,使用斯坦福大学HIV耐药数据库等工具对序列信息进行分析。结果对已知pol区序列的26例LVL标本进行HIV-1前病毒DNA优势DRMs分析,发现7例HIV-1前病毒DNA携带优势DRMs,其中1例(3.85%)携核苷类逆转录酶抑制剂(NRTIs)优势DRMs,4例(15.38%)携非核苷类逆转录酶抑制剂(NNRTIs)优势DRMs,1例(3.85%)携蛋白酶抑制剂(PIs)优势DRMs,1例携整合酶抑制剂(INSTIs)优势DRMs。共3例呈现低中度以上耐药,其中1例对于目前使用的抗病毒治疗方案中的药物产生低度耐药,余均为潜在耐药。结论HIV-1 LVL患者外周血HIV-1前病毒DNA中存在优势DRMs,提示HIV-1前病毒DNA耐药检测可为艾滋病治疗方案的制订和调整提供一定的参考。

摘要： 目的分析2016-2019年四川地区接受人类免疫缺陷病毒(HIV)-1抗病毒治疗患者的治疗效果及耐药性。方法选取2016-2019年四川地区接受HIV-1抗病毒治疗半年以上且HIV-1载量检测>1000 cps/mL艾滋病感染者作为研究对象,2016-2019年每年纳入耐药监测的研究对象依次为22552、41628、57745和101599例,对其进行RT-PCR和pol区基因检测,登录美国斯坦福大学HIV耐药数据库,在线分析查找耐药突变位点和突变种类,用Aliview构建基因进化树,并确定基因亚型。采用χ^(2)检验或Fisher精确检验,比较不同年份的耐药性及不同亚型耐药突变位点的差异。结果2016-2019年四川地区艾滋病感染者病毒学失败率依次为24.91%(5617例)、14.02%(5838例)、11.72%(6769例)和11.54%(11725例),呈连续下降趋势(P<0.05),但部分市州如资阳、甘孜病毒学失败率呈上升趋势(P<0.05)。对2016-2019年艾滋病感染者中病毒学失败的样本进行耐药检测,成功获得序列分别为4602、4514、5731和9313例。2016-2019年四川地区艾滋病感染者发生耐药的主要亚型是CRF07_BC、CRF01_AE、CRF08_BC和CRF85_BC亚型,各亚型耐药率平均值为55.25%、27.19%、8.30%、3.74%。结论四川地区HIV-1抗病毒治疗工作总体保持较好水平,全省大部分地区病毒学失败率呈平稳下降趋势,但部分市州呈上升趋势或病毒学失败率高于10%,应注重该地区的抗病毒治疗管理工作,四川地区耐药率总体呈上升趋势,应分析原因并采取相应对策及措施,防止耐药株的产生和传播。

摘要： 结核分枝杆菌耐药基因型的快速精准检测是全球面临的一个挑战,随着近年来分子生物技术的发展,已有多种方法用于结核耐药基因检测,我们将对获得我国注册用于快速检测结核耐药基因型的几种技术进行概述,以为不同地区及不同级别医疗机构选用分子学方法进行结核耐药检测提供参考.

摘要： 目的 掌握淄博市流行的HIV-1感染者基因亚型,了解淄博市耐药病毒株的传播水平,为艾滋病预防控制工作提供依据.方法 收集本地区HIV-1感染者的血浆标本,采用RT-PCR和巢式PCR法扩增env基因区和pol基因区,经DNA纯化及测序后,利用HIV database数据库和Mega 6.0软件分析并确定HIV病毒亚型,使用美国斯坦福大学HIV耐药数据库进行耐药分析.结果 共采集HIV-1感染者血浆标本72份,通过分析发现本地区共存在4种基因亚型,其中CRF01_AE重组亚型占47.22％,CRF07_BC重组亚型占31.94％,B亚型占12.50％,B/C重组亚型占8.33％.耐药分析发现本地区未治疗患者的原发耐药率为6.98％.M184V是核苷类逆转录酶区的主要耐药突变位点,V179D为非核苷类逆转录酶区的主要耐药突变位点.结论 淄博市HIV-1感染者的基因亚型存在多样性,耐药的发生率较高,属于中度流行.亟需加强对HIV-1毒株重组亚型变异监测及耐药监测,从而预防原发性耐药和耐药毒株的传播.

摘要： 目的 探讨慢性HBV相关肝病患者HBV基因型和耐药突变位点检测与疾病进展的关系.方法 选取230例经核苷(酸)类似物(NAs)治疗的慢性HBV相关肝病患者作为研究对象,检测其外周血HBV基因型和RT区氨基酸序列耐药突变情况.结果 230例慢性HBV相关肝病患者中100例(43.47％)检出NAs耐药突变,以LAM/LdT耐药最多见(30.00％,69/230)、ADV耐药次之(7.83％,18/230)、ETV耐药最少(5.65％,13/230),比较差异有统计学意义(χ2=67.392,P0.05).慢性乙型肝炎组、乙型肝炎相关肝硬化组HBV基因型分布差异有统计学意义(χ2=25.012,P0.05).结论 本地区慢性HBV相关肝病患者基因型以B型和C型为主,NAs主要耐药突变点检出率较高,其中不同基因型疾病进展情况和耐药突变情况存在差异,而在不同疾病阶段rt204耐药位点突变率亦存在差异.

摘要： 目的 分析浙江省绍兴市新确证人类免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)感染者传播关系的分子网络特征,为疫情流行趋势和防治提供依据.方法 纳入2018年8月至2019年12月绍兴市新确证未经抗病毒治疗的423份HIV-1感染/艾滋病病例血液样本,获得375份样本序列,采用反转录聚合酶链反应和巢式聚合酶链反应扩增HIV-1的pol基因,采用MEGA 6.0软件构建系统进化树分析亚型,并采用HyPhy软件和Cytoscape 3.7.2.生成不同基因距离的分子网络,通过美国斯坦福大学HIV耐药数据库在线软件工具分析耐药突变位点.结果 375份样本序列中发现8种亚型,优势亚型为流行重组型(circulating recombinant form,CRF)07_BC 215份(57.33％),CRF01_AE 103份(27.47％),其他包括 CRF08_BC、CRF85_BC、CRF55_01B、B、C 和 CRF01_AE/B 亚型.在基因距离为1.50％时,共形成24个分子簇,194条序列入网,入网率为51.73％.在分子簇最多的0.75％基因距离时,共形成30个分子簇,129条序列入网,入网率为34.40％,35例以老年人为主的病例聚集成CL1簇.42份样本存在监测性耐药突变(surveillance drug resistance mutation,SDRM),耐药传播率为11.20％(42/375),其中非核苷类反转录酶抑制剂耐药突变38例,分别为K103N(32/375,8.53％)、K103S(4/375,1.07％)、Y188L(1/375,0.27％)和 G190A(1/375,0.27％),蛋白酶抑制剂耐药突变4例,分别为M46I(3/375,0.80％)和 V82A(1/375,0.27％).分子簇 C2序列携带高比例耐药突变(94.29％,33/35).结论 绍兴市HIV-1亚型丰富多样,CRF07_BC亚型传播迅速;在0.75％基因距离仍聚集的CL1簇老年病例亟待干预,防止该耐药毒株的进一步快速传播.

摘要： 目的:了解江苏省无锡市2014年和2016年调查随访的人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)感染者/艾滋病患者(HIV/AIDS)人群病毒亚型及耐药的变化特征.方法:以2014年无锡市HIV/AIDS未接受抗病毒治疗人群为研究对象,开展HIV分子流行病学调查及随访研究.收集感染者的基本信息,并从其血液样本中提取DNA,通过巢式-PCR扩增HIV的pol、env和gag 3个基因片段并测序,综合判断感染者的HIV基因型.将pol序列提交至HIV耐药数据库进行耐药突变位点分析.2016年随访相同人群并筛选出接受抗病毒治疗人群,再次检测HIV亚型和耐药突变情况,分析两年间亚型及耐药变化情况.结果:共整理收集HIV/AIDS者117例,检测234例样本,检出CRF01_AE、CRF07_BC、B、CRF67_01B、CRF08_BC、CRF55_01B和CRF6801B 7种HIV-1亚型和6种独特重组型.2014年原发性耐药率为4.95％,2016年获得性耐药率为5.75％.5例感染者耐药情况发生变化,其中1例亚型发生变异.结论:无锡市HIV/AIDS人群HIV-1亚型多样且复杂,亚型及耐药变化大,应继续加强对亚型及耐药突变监测.

摘要： 胸部肿瘤,以肺癌多见且在我国高发。病理穿刺活检是早期诊断和治疗的关键。当今,经支气管镜活检、经皮穿刺活检技术(percutaneous transthoracic needle biopsy,PTNB)是最常用活检技术。近年研究结果表明,经支气管镜活检对中心型病灶诊断的敏感度可达80%,对周围型肺癌诊断的敏感度仅为60%左右;而胸部穿刺活检诊断肺癌的总敏感度可高达90%[1]。随着影像导引设备不断更新、穿刺针的改进,PTNB技术进步并得到广泛临床应用;精准医学时代,肿瘤基因组学推动了分子病理学发展,病理组织亚型分类、分子分型及耐药突变检测等不断丰富病理学内容,使临床需求逐年增大。由此,建立PTNB流程,规范技术操作,加强围手术期管理,提高安全医疗意识,至关重要。

摘要： 目的 了解934例山西胃肠病患者幽门螺杆菌感染率及其抗生素耐药基因突变现状,为临床根治幽门螺杆菌提供用药依据.方法 选取就诊于山西省人民医院消化科进行13C-尿素呼气试验及胃镜检查的934例胃肠病患者,分析山西省胃肠病患者的幽门螺杆菌感染率.采集31例胃肠病患者的胃黏膜组织样本,利用荧光定量聚合酶链反应(PCR)方法检测幽门螺杆菌感染及抗生素耐药基因.结果 山西胃肠病患者的幽门螺杆菌感染率为87.2％(814/934).在20例H.pylori阳性标本中,65％(13/20)存在耐药突变,其中50％(10/20)有克拉霉素耐药突变,45％(9/20)有喹诺酮类耐药突变,10％(2/20)有阿莫西林耐药突变,5％(1/20)有四环素耐药突变,5％(1/20)有呋喃唑酮耐药突变,而双重耐药突变占45％(9/20),主要为克拉霉素及喹诺酮类耐药突变.结论 山西为幽门螺杆菌感染的高发地区,且对克拉霉素和喹诺酮类抗生素耐药率极高,在经验性治疗方案的选择中应尽量避免选用克拉霉素和喹诺酮类抗生素.同时建议在临床工作中实施推广荧光定量PCR法检测抗生素耐药基因突变,帮助患者制定个体化治疗方案,进一步提升幽门螺杆菌根除率,避免耐药率的逐步上升.

摘要： 目的 探讨乙型肝炎病毒(HBV)核苷(酸)类药物(NAs)相关基因耐药突变的异质性及其临床意义.方法 收集249例接受NAs治疗且出现病毒学突破的慢性乙型肝炎(CHB)患者的HBV逆转录酶区(RT区)耐药突变位点数据、临床数据及随访数据,根据NAs耐药突变与否分为非耐药组和耐药组.结果 非耐药组和耐药组年龄、治疗后HBVDNA转阴时间差异均有统计学意义(均P＜0.05).HBV-RT区耐药位点的突变发生频率不同,变异最多的位点为204位点,其次为180位点,169位点突变最少发生;其中仅173位点上,女性的突变率高于男性(P＜0.05).结论 耐药突变的CHB患者平均年龄大于非耐药患者,耐药突变给予优化抗病毒治疗后HBV DNA转阴所需时间相对更长,病毒学突破患者应及早进行HBV-RT区耐药突变检测.

摘要： 目的:对比分析慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者阿德福韦酯(ADV)诱导耐药突变与预存耐药突变的临床及分子生物学特点.方法:回顾性分析2008年6月至2010年8月发生ADV耐药突变的慢性HBV感染者88例,采用基因测序的方法对患者的血清标本进行P区耐药基因测序,同时检测HBV基因型、HBV血清学标志物及HBV DNA.结果:88例患者中，发现ADV预存耐药突变9例(10.23%)且部分患者(4/9, 44.44%)曾接受过不规范的抗病毒治疗;诱导耐药组中以rtA181T突变及单个位点突变为主(41/79,51.9%; 61/79, 77.22%)、完全突变株40例、突变株与野生株共存39例，而预存耐药组以rtN238T突变、多位点突变以及突变株与野生株共存为主;诱导耐药组的HBV DNA为5.15±1.23log 10拷贝//ml，预存耐药组为6.45±0.97 log10拷贝/ml (t=-3.05, P=0.003);诱导耐药组中终末期肝病患者占40.51% (32/79)，而预存耐药组均为终末期肝病患者(P=0.001);2组患者在性别、年龄、E抗原状态及HBV基因型构成方面比较差异无显著性意义。结论:在未经ADV抗病毒治疗的慢性HBV感染者中可能存在ADV预存耐药突变;诱导耐药的准种变异经过筛选后变得较单一，而预存耐药的准种变异较复杂;终末期肝病患者中可能存在各种抗病毒药物的预存耐药突变;发生ADV诱导突变后的HBV DNA复制水平常较低;患者应该接受和执行规范的抗病毒治疗和优化治疗，以实现预防耐药，避免挽救治疗。

摘要： 本文概述了耐药的定义，研究了慢性乙型肝炎单药耐药及交叉耐药中HBV感染多聚酶区耐药突变位点，以期有助于对慢乙肝患者耐药的预测以及进一步治疗方案的调整。

摘要： 目的：评估荧光PCR熔解曲线法对结核分枝杆菌异烟肼耐药突变的诊断价值。方法：检测1096株结核临床分离株，并与比例法药敏试验比较，评估荧光PCR熔解曲线法的临床灵敏度和临床特异性。结果：荧光PCR熔解曲线法检测结核分枝杆菌异烟肼耐药突变的临床灵敏度为90.2％(394/437)，临床特异性为96.4％(635/659)，和药敏总符合率为93.9％(1029/1096)。结论：荧光PCR熔解曲线法检测快速、敏感、特异，临床应用前景较好。

摘要： 目的：通过体外药效学模型探讨预测抑制细菌耐药突变的PK/PD参数折点。rn 方法：建立体外药效学模型,受试菌为S.aureus RN450、RN450-A1和临床分离菌99,模拟左氧氟沙星qd给药,连续给药3d。对每一种受试菌,模拟3个不同剂量,使左氧氟沙星的药物浓度完全落在MSW(耐药突变选择窗)中,大部分给药时间落在MSW中,在大部分给药间隔落在MSW上时,体外药效学模型中筛选出的细菌测定MIC观察耐药变迁,通过PCR扩增耐药靶位基因gyrA和grlA,检测其耐药突变位点,比较不同PK/PD参数与细菌耐药突变发生的相关性。rn 结果：体外药效学模型中3株受试菌RN450,RN450-A1和S.aureus 99的MPC/MIC分别为24、64、8。对RN450,AUC为23、43时体外药效学体系中细菌总量在给药后先降低后又恢复生长,而其中耐药菌的数量逐渐增加,在72h后体系中的敏感细菌被清除,细菌已经基本为耐药菌,72h体系中的细菌的MIC(MICf)较初始MIC增加(MICi),MICf/MICi为4～8；当AUC分别为76时,体外药效学体系中敏感菌和耐药菌数量均降低,72h时已观察不到耐药菌的生长,72h体系中的细菌的MIC与初始MIC没有变化。RN450-A1和S.aureus99不同AUC时可以得出类似的结论,RN450-A1的MICf/MICi为32,SA99的MICf/MICi为4。体外药效学体系中筛选出耐药突变菌的靶位变异位点为grlA基因的Glu84→Lys或Ser80→Phe位点突变。Cmax/MIC和AUC/MlC与细菌耐药突变没有相关性,Cmax/MPC和AUC/MPC能准确的细菌耐药。rn 结论：以MPC为基础的PK/PD参数(Cmax/MPC和AUC/MPC)相比以MIC为基础的PK/PD参数(Cmax/MIC和AUC/MIC)更适于预测抗菌药物抑制细菌耐药突变的折点。

摘要： 目的：建立检测微量HIV-1 K103N耐药突变的等位基因特异扩增实时定量PCR(ASPCR)方法，用于微量K103N耐药突变的检测和分析。rn 方法：首先建立检测K103N耐药突变的ASPCR方法，然后对方法进行验证，最后采用ASPCR方法检测对照样本。构建含K103N突变的质粒作为标准品，然后设计特异性引物用以区分野生型和突变型模板，采用SYBR green法进行实时定量PCR，并绘制标准曲线。分别采用特异性和非特异性引物扩增模板，根据二者Ct(Cycle threshold)值结合相应的标准曲线判断是否存在K103N突变及突变比例。对ASPCR检测K103N突变位点的特异性、敏感性、准确性、重复性等进行验证。rn 结果：特异性和非特异性引物扩增等量野生型模板的Ct值之差(△Ct)可达13.56；当突变比例小于0.1%时仍具有良好的准确性；批内变异系数小于0.7%，批间变异系数小于1.6%；检测灵敏度可达0.01%。检测阴性对照样本的△Ct显著高于临界值，阳性对照样本检测结果均为阳性。rn 结论：ASPCR是一种快速、灵敏、准确的检测HIV-1微量耐药突变的方法，可为临床抗病毒治疗提供理论指导。

摘要： 目的：通过体外药效学模型探讨预测抑制细菌耐药突变的PK/PD参数折点。rn 方法：建立体外药效学模型，受试菌S.aureusRN450,RN450-A1和临床分离菌99对左氧沙星的MPC/MIC不同（分别为32，64和8），模拟左氧沙星每日一次给药连续给药3日。对每一种受试菌，模拟三个不同的AUC24/MIC，使左氧沙星的药物浓度在大部分给药时间落在MSW中，在大部分给药间隔在MSW上。对体外药效学模型中筛选出对左氧沙星耐药的细菌测定MIC观察耐药变迁，通过PCR扩增耐药靶位基因gyrA和grlA，检测其耐药突变位点,比较不同PK/PD参数与细菌耐药突变发生的相关性。rn 结果：体外药效学模型中三株受试菌RN450，RN450-A1和99的MPC/MIC分别为24、64、8。对RN450，AUC为23、43时体外药效学体系中总细菌的数量先在给药后降低后又恢复生长，而其中耐药菌的数量逐渐增加，在72h后体系中的敏感细菌被清除，细菌已经基本为耐药菌，72h体系中的细菌的MIC（MICf）较初始MIC增加(MICi)，MICf/MICi为4～8;当AUC分别为76时，体外药效学体系中敏感菌和耐药菌数量均降低，72h时已观察不到耐药菌的生长，72h体系中的细菌的MIC与初始MIC没有变化。RN450-A1和99不同AUC时可以得出类似的结论，RN450-A1的MICf/MICi为32，SA99的MICf/MICi为4。体外药效学体系中筛选出耐药突变菌的靶位变异位点为grlA基因的Glu84→Lys或Ser80→Phe位点突变。Cmax/MIC和AUC/MIC与细菌耐药突变没有相关性，Cmax/MPC和AUC/MPC能准确的细菌耐药。rn 结论：以MPC为基础的PK/PD参数（Cmax/MPC和AUC/MPC）相比以MIC为基础的PK/PD参数(Cmax/MIC和AUC/MIC)更适于预测抗菌药物抑制细菌耐药突变的折点。

摘要： EGFR靶向抑制剂吉非替尼治疗非小细胞肺癌(NSCLC)患者疗效明显,但继发性耐药产生又严重影响治疗效果.引起继发耐药的主要原因是EGFR激酶发生了T790M二次突变,因此研发具有突变选择性的、能克服耐药的小分子抑制剂具有显著的临床意义.海洋微生物来源的新型吲哚卡唑类化合物ZWM026(朱伟明课题组提供),能够选择性靶向EGFR-T790M耐药突变,对EGFR-WT的抑制作用较小.分子水平研究发现ZWM026对EGFR-L858R/T790M激酶的抑制作用要远远强于对EGFR-WT激酶的抑制作用，具有突变选择性。并且对NSCLC的其它肿瘤驱动基因如HER2、HER3、HER4以及RET也有较强的抑制作用，而对PKC激酶没有抑制作用。MTT检测发现ZWM026对含有T790M耐药突变的H1975细胞的增殖抑制作用强于EGFR野生型的细胞，并且对正常的细胞几乎没有增殖抑制作用。在细胞水平上用Western Blot检测发现与A549细胞（EGFR-WT）相比，ZWM026在较低浓度下即可抑制H1975细胞中EGFR及其下游信号分子的磷酸化。进一步以gefitinib、vandetanib、PKC412为对照，Western Blot检测发现在H1975细胞以及构建的EGFR-L858R/T790M-3T3细胞上，ZWM026对p-EGFR的抑制作用强于gefitinib和vandetanib，并且作用强于EGFR野生型的细胞。本文还发现ZWM026与EGFR激酶的结合是可逆性结合，并且ZWM026导致H1975细胞和A549细胞的死亡方式不同。综上，本文阐明了ZWM026能够选择性靶向EGFR-T790M耐药突变，并且具有多靶点激酶抑制作用，为今后开发新型的拮抗NSCLC继发性耐药的药物奠定基础。

摘要： 目的：了解江苏省抗病毒治疗患者HIV-1毒株的的基因亚型及耐药突变特点。方法：以2011年12月底仍在抗病毒治疗的AIDS患者为研究对象,采用横断面调查法和基因型耐药分析法对调查者进行耐药基因变异分析。结果：877名治疗人群共有CRF01_AE、B、C、BC和F五种亚型,其中,CRF01_AE是主要流行的亚型,其次为B亚型。其中对核苷类逆转录酶抑制剂(NRTIs)耐药的44例,对非核苷类逆转录酶抑制剂(NNTRIs)耐药的54例,对NRTIs和NNTRIs的二重耐药有41例,未发现针对蛋白酶抑制剂(PIs)的耐药现象。结论：江苏省抗病毒治疗患者耐药率处于较低水平,但耐药突变多样化,耐药个体NRTIs和NNRTIs双重耐药突出。应增加CD4检测和耐药检测的频率,以尽早发现耐药情况,尽快选择适当的治疗方案,可能有利于降低耐药毒株的发生。

摘要： 目的：对深圳口岸1996年至2008年已确诊的68例Ⅰ型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)感染者进行耐药性突变分析，以了解深圳口岸国际旅行者HIV-1耐药性毒株的流行情况。方法：应用巢式RT-PCR扩增HIV-1聚合酶基因，对所获得的PCR产物直接测序，再将所获得的序列与国际耐药数据库比对，辨别耐药性突变位点。结果：在68例HIV-1感染者中，经RT-PCR扩增并获得聚合酶基因序列68份，耐药分析结果表明，本研究人群未检测到蛋白酶抑制剂(Pls)原发耐药突变;6例感染者(8.8％)发生反转录酶抑制剂(RTIs)耐药基因突变，其中核苷类和非核苷类反转录酶抑制剂的耐药突变率分别为5例和1例(7.4％和1.5％)。结论：本研究分析了深圳国际旅行者HIV-1耐药突变的流行情况，这对于我国的艾滋病预防和控制工作有重要指导意义。

摘要： 耐药突变和依从性欠佳是慢性乙型肝炎核苷类似物抗病毒治疗失败的主要原因。耐药突变伴随着核苷类似物的应用而出现，因此，对于耐药突变的认识也是逐渐发展起来的，随着抗乙型肝炎病毒核苷类似物应用经验的积累和新药的发展，对耐药突变的认识也逐渐加深。最早对慢性乙型肝炎抗病毒中的耐药突变进行系统的规范化命名源于2007年美国、亚太、欧洲等著名专家组成的HBV耐药突变工作组，该工作组对HBV耐药突变的命名进行标准化，并推荐了相应的处理方法(Antiviraldrug-resistant HBV：standardization of nomenclatureand assays and recommendations for management.Hepatology，2007；46：254-65)。此后，对于耐药突变的临床研究所采用的耐药突变概念主要依据此文献。本文探讨了抗病毒耐药突变的临床分类及与检测有关的耐药突变概念。

摘要： 本发明公开了一种基于CRISPR‑Cas技术检测结核分枝杆菌利福平耐药性点突变的crRNA，本发明以MDR‑TB利福平耐药性点突变(rpoBL378D)为检测靶位点，设计并合成靶向该目的序列的crRNA；构建基于CRISPR/Cas的MDR‑TB利福平耐药性点突变检测手段，通过联合等温扩增技术和荧光报告子检测手段，实现快速、简便、低廉、高特异性、高灵敏度和可视化的核酸检测优势。本发明旨在开发结核病耐药性点突变检测平台，为TB的预防和治疗提供帮助，具有推广应用的价值。

摘要： 本发明涉及一种HIV-1耐药突变位点基因检测方法、试剂盒和应用，公开了用于基因突变特别是HIV-1耐药突变位点基因检测的核苷酸引物、探针序列及方法，以及该方法在临床上检测HIV-1耐药突变位点中的应用。本发明的方法具有快速简便、特异性强、敏感性高、可靠性好的特点，适于HIV-1耐药突变位点的快速检测。

摘要： 本发明公开了一种提升痤疮杆菌耐药突变及耐药基因检测准确性和效率的方法及其配套试剂盒，针对痤疮杆菌的23S rRNA基因上的2个位点2058和2059，以及一个耐药基因ermX，设计了ARMS(Amplification Refractory Mutation System)基因分型引物及配套探针。由此建立了提升痤疮杆菌耐药基因检测准确性和效率的方法和配套检测产品，具有高通量、便利、快速、准确、紧密贴合皮肤科的科学研究需求、成本较低的优点，具有非常光明的商业化前景。

摘要： 本发明提供一种套组，其包含检测HIV‑1病毒pol基因突变的引物对与探针。本发明又提供一种方法，使用该套组，以用于侦测HIV‑1病毒耐药突变位点。

摘要： 本发明涉及一种HIV-1耐药突变位点基因检测方法、试剂盒和应用，公开了用于基因突变特别是HIV-1耐药突变位点基因检测的核苷酸引物、探针序列及方法，以及该方法在临床上检测HIV-1耐药突变位点中的应用。本发明的方法具有快速简便、特异性强、敏感性高、可靠性好的特点，适于HIV-1耐药突变位点的快速检测。

摘要： 本发明公开了一种提升痤疮杆菌耐药突变及耐药基因检测准确性和效率的方法及其配套试剂盒，针对痤疮杆菌的23S rRNA基因上的2个位点2058和2059，以及一个耐药基因ermX，设计了ARMS(Amplification Refractory Mutation System)基因分型引物及配套探针。由此建立了提升痤疮杆菌耐药基因检测准确性和效率的方法和配套检测产品，具有高通量、便利、快速、准确、紧密贴合皮肤科的科学研究需求、成本较低的优点，具有非常光明的商业化前景。

摘要： 本发明涉及一种鉴定耐药基因和/或耐药基因突变位点的宏基因组数据分析方法及系统。本发明所述数据分析方法和系统基于blast算法，将样本的宏基因组测序序列与耐药基因数据库的耐药基因或耐药基于突变位点序列信息进行比对，获得耐药基因和/或耐药基因突变位点的初步鉴定结果；之后，过滤可信度不高的初步鉴定结果，获得最终鉴定结果。本发明所述方法和系统能够快速、准确地鉴定耐药基因和耐药突变位点，获得样本的全局耐药性，并结合物种鉴定结果，映射到报告检出物种，获得具体的耐药微生物菌株；进一步地，本发明所述方法和系统在鉴定耐药基因时对耐药基因数据准确性的兼容性强，减少耐药基因数据库序列两端的注释不准确的缺陷。

摘要： 本发明公开了一种检测结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药突变的引物探针，主要是利用热稳定的DNA聚合酶（可具有5’核酸酶活性）和不对称PCR法检测结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药基因多个突变位点检测，本发明的突变设在探针上，为了增加探针的分辨率，对探针上的碱基序列引入部分碱基突变，以更容易区分耐药突变。

摘要： 本发明涉及耐药菌株技术领域，尤其涉及一种同时携带五个喹诺酮药物耐药突变位点的印第安纳沙门菌及其应用。本发明提供了一种同时携带五个喹诺酮耐药突变位点gyrAS83F、gyrAD87G、parCT57S、parCS80R和parEL502F的沙门菌——沙门菌51‑38。多个突变位点同时存在导致该菌株对喹诺酮类药物表现出高水平耐药，萘啶酮酸、环丙沙星、左氧氟沙星和莫西沙星对沙门菌51‑38菌株最小抑菌浓度分别为4096μg/mL、16μg/mL、4μg/mL、4μg/mL。鉴于此，沙门菌51‑38可作为筛选功能微生物/新型抗菌药物的模型材料，具有良好的应用前景。

摘要： 本申请公开了一种结核分枝杆菌链霉素耐药突变检测方法及检测试剂盒。本申请中，所述试剂盒包括用于检测结核分枝杆菌链霉素耐药突变的PCR引物对组和探针的混合液。所述试剂盒基于荧光PCR熔解曲线法设计，检测准确性高，一次性检测的突变位点多，不仅避免交叉污染，而且检测周期短，检测成本低。