细胞体外培养

摘要： 运动基因资源作为人类遗传资源的一部分,为优秀运动员的选拔提供遗传证据.本研究以我国优秀单板滑雪U型场地运动员为实验对象,通过转化由B958细胞培养得到EBV,运用悬浮培养法,提取及保存优秀运动员基因组DNA,成功建立了运动员外周血B细胞永生细胞库,永久保存了我国该项目优秀运动员遗传资源,为以后该项目优秀运动员运动基因的相关研究提供实验材料,为其它雪上项目优秀运动员的永生细胞库的建立提供了理论支持.

摘要： The technology of animal cell culture has a rapid development in the modern biological science. In recent years, this technique from a simple experimental operation has extended to the life sciences, bio-medicine and other research disciplines and production areas, and it has become a widely used technical means. Currently, many biotechnology researches are inseparable from the technology of cell culture. This paper introduces the basic operation of cell culture methods, then mainly introduces the main influencing factors of animal cells culture in vitro, and the strategies of prevention and control in the sterile cell laboratory.%动物细胞培养是现代生物科学中发展十分迅速的一种实验技术.近年来,动物细胞培养技术已从单纯的实验操作扩展到生命科学、生物医药学等多个学科的研究和生产领域,成为广泛采用的技术手段,许多生物技术科学研究都离不开细胞培养.从细胞培养的基本操作方法人手,介绍了影响动物细胞体外培养的主要因素,以及对细胞实验室无菌环境的防控策略.

摘要： To establish in vitro culture system of abdominal fibroblast, ear fibroblast, testicular fibroblast, pulmonary fibroblast and splenic fibroblast, the newborn Bama mini pigs were taken as material, micro-liquid tissue block adhering wall method was used for primary culture and isolation of the above cells, routine subculture, freezing, and recovery procedure were performed; and their growth capacity and proliferation life span were observed in vitro according to cell morphology and growth characteristics. The results showed that the above fibroblasts were successfully isolated and could be used for passage and freezing; the cells could still be cultured and subcultured after freezing-thawing; abdominal fibroblasts immunofluorescence showed that vimentin expression was positive and cytokeratin was negative. The result of this study could provide different types of materials for the micromanipulation, hand - manipulation of nuclear transfer and transgenic related manipulations.%为建立广西巴马小型猪腹部成纤维细胞、耳成纤维细胞、睾丸成纤维细胞、肺部成纤维细胞及脾成纤维细胞体外培养体系,以新生巴马小型猪为试验材料,使用微量液体组织块贴壁法原代培养分离几种成纤维细胞,进行常规传代培养、冷冻和复苏；根据细胞的形态、生长特性等观察其体外生长能力和增殖寿命.结果显示,广西巴马小型猪腹部成纤维细胞、耳成纤维细胞、睾丸成纤维细胞、肺部成纤维细胞及脾成纤维细胞获得成功分离,体外可以传代和冷冻；冷冻复苏后仍可以正常培养和传代；腹部成纤维细胞免疫荧光检测结果显示波形蛋白表达阳性,角形蛋白表达阴性.研究成果可为显微操作核移植、手工核移植和转基因相关操作等提供不同类型的供体材料.

摘要： Objective To establish the model of cultivating and identifying fibroblast from human endometriosis(HEFC)in vitro.Methods The tissues of human endometriotic cysts of ovary were digested by collagenases Ⅰ, Ⅱ and Ⅳ The resulting cells were purified by centrifugation and differential adhesion.HEFC was identified by observing the morphologic changes under an inverted microscope and the expressions of vimentin,α-SMA(α-smooth muscle actin)and keratin were detected by immunocytochemistry.Results Immunohistochemical staining of vimentin Was positive.α-SMA rarely positive and keratin completely negative in cultured fibroblasts.HEFC grew as a confluent monolayer of short fat fusiform,triangular,starshaped and polygonal fiber-like cells.Furthermore HEFC could be well sub-cultured.Conclusion Acquired fibroblast can be cultured in vitro stably.It iS quite important to Study the specificities of HEFC.Sufficient and reliable target cells may be obtained for studying the mechanisms of fibrosis and adhesion in endometriosis at the molecular level.%目的 建立人子宫内膜异位症源性成纤维细胞(HEFC)的体外培养细胞模型.方法 采用Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅳ型胶原酶联合消化法从人卵巢子宫内膜异位症囊肿中分离成纤维细胞,经密度离心和差速贴壁法纯化细胞.光镜和免疫细胞化学染色法对所获得的HEFC进行鉴定.结果 所获得的HEFC在免疫细胞化学染色分析中有成纤维细胞的标志物波形蛋白的强烈表达,肌纤维母细胞的标志物α-SMA偶尔表达,上皮细胞的标志物角蛋白无表达;培养中的成纤维细胞生长状态良好,呈现中等长度的较宽的梭形、三角形、星形和多角形;可良好的传代培养.结论 本研究建立了较理想的人HEFC体外培养体系,对了解人子宫内膜异位症源性成纤维细胞的异质性有重要价值,为从分子水平上研究人子宫内膜异位症中纤维化及纤维粘连的病理发生机制提供了充足、可靠的靶细胞.

摘要： 本研究旨在探讨利用兔骨髓间充质干细胞膜片与两种种植体（钛种植体和锆瓷种植体）复合构建干细胞一种植体复合体的可能性。

摘要： @@ 涎腺多形性腺瘤(salivary pleomorphic adenoma,SPA)又名涎腺混合瘤(salivary mixed tumor),是最常见的涎腺肿瘤,占全部涎腺上皮性肿瘤的50%以上,占其全部良性肿瘤的87%以上.SPA是源于上皮病变的良性肿瘤,但具有交界性肿瘤的特征．"好种植、易复发",多次复发可以癌变,极少数会发生转移[1].这给临床治疗带来极大困难．研究该肿瘤的生物学特性对其治疗和预后有重要意义.SPA组织学形态上表现出"多形性"[2],如富含肿瘤性上皮．粘液样、软骨样基质,少数还有骨组织形成[3],对于此机制尚不是很清楚,因此有必要通过建立SPA细胞体外培养,为研究该肿瘤的细胞生物学特性、癌变机制及其预防和治疗提供极其重要的手段.日本学者通过对SPA细胞转染人端粒酶逆转录酶基因后.在体外成功传代达220代[4].

摘要： 我们通过简单的酸蚀加阳极氧化的方法制备了含氧化钛纳米管的微米纳米梯度形貌以模拟骨组织的梯度结构采用大鼠原代成骨细胞体外培养的方法来评价它们的生物活性。通过酸蚀方法制备的微米形貌对成骨细胞功能的影响作用不一致。虽然早期细胞黏附和成骨相关功能基因的表达受到明显促进，但其他的细胞功能如增殖、细胞内总蛋白合成及碱性磷酸酶活性、胶原分泌和细胞外基质矿化都受到明显抑制。

摘要： 研究显示，人髓核细胞复合人间充质干细胞体外培养2周，在髓核细胞与间充质干细胞比例为75：25和50：50时产生最多的细胞外基质。在健康成年新西兰免体内研究中，给成年新西兰免注射同种异体间充质干细胞，结果间充质干细胞至少在体内成活24周，并成功地融入椎间盘组织。在第24周时，停留在纤维环的间充质干细胞与内层纤维环细胞表现为相同的纺缍状外形。

摘要： 本实验旨在观察不同食管癌患者对药物的敏感性，为食管癌的临床化疗提供个体化用药的实验依据。

摘要： 大黄鱼(Larimichthys crocea)是福建省最重要的经济性鱼类之一,本文以大黄鱼肾脏组织为材料,进行了组织细胞体外培养条件的探索,构建了大黄鱼体细胞体外培养的技术体系,并在此基础上建立了大黄鱼肾组织细胞系YCK.该细胞系的标准培养方法是使用添加10％胎牛血清(FBS)的M-199,在27°C下进行密闭培养.该细胞系主要由上皮样细胞构成,在上述培养条件下生长旺盛,经过400余天的连续培养,已经成功传代超过70次,第65代YCK细胞的群体倍增时间为36.12h.针对常用的鱼类细胞培养基进行了适应性筛选,确认M-199是最适合该细胞系的培养介质,也可适用于其他大黄鱼细胞的培养.对该细胞系的染色体分析表明:虽然出现了异倍化现象,但其依然是符合2n=48的二倍体细胞系.该细胞系的建成为大黄鱼病毒性病原的研究及相关疾病的诊断提供了有力的技术支持.

摘要： 目前世界上有近25%的哺乳动物濒临灭绝.体外细胞培养是有效保存野生物种基因资源的方法之一,体外培养的细胞可以迅速增殖,并通过异种动物核移植途径保存濒危野生动物.本试验培养了野生天山马鹿细胞,观察了其在体外培养过程的形态特征,研究了血清饥饿法诱导G0/G1期的供体核时对马鹿细胞凋亡的影响,为种间体细胞核移植提供了细胞来源.

摘要： 利用Balb/c3T3细胞体外培养技术建立光毒性检测方法,用来筛选光毒性物质具有经济、快速和结果可靠等的优点.方法原理是物质在光照作用下直接或通过代谢产物对细胞产生毒性,利用细胞对生物活性染料中性红的摄取能力,评价物质的光毒作用.本文介绍了方法的建立以及有关的质量控制因素如细胞、光源、参比样品与待测样品制备等.

摘要： 微量元素对酵母积累胞内海藻糖及成骨细胞体外培养均有影响,酵母是微量元素的良好载体,利用酵母生产的生物态微量元素制剂,具有吸收利用率高,毒副作用小的优点.利用生物技术不仅可以生产富含微量元素的肥料和饲料,而且能够控制Cd在食物链中的迁移.

摘要： 本发明涉及一种用于NK细胞体外扩增的培养基体系及NK细胞体外扩增的方法。本发明利用固化的anti‑CD137和RetroNectin直接培养Ficoll分离的PBMC，采用OK‑432作为生物效应剂，在GM‑CSF、IL‑4、IL‑2、IL‑15、IL‑21共同作用下体外活化和扩增自然杀伤细胞，创建了一种高效的NK细胞体外扩增方法；该方法制备的NK细胞CD3‑CD16+/CD56+细胞表达率高达92.5％以上，经过14天培养，NK细胞可扩增1000～2000倍，体外杀瘤活性强。

摘要： 本发明属于干细胞技术领域，尤其涉及一种脐带造血干细胞体外扩增培养体系和脐带造血干细胞体外扩增方法。本发明提供了一种脐带造血干细胞体外扩增培养体系，包括：G1/S‑特异性周期蛋白‑D1和骨形态发生蛋白4。结果表明，在脐带造血干细胞体外扩增培养体系添加G1/S‑特异性周期蛋白‑D1和骨形态发生蛋白4可明显提升脐带造血干细胞的体外扩增效率并维持其干性。

摘要： 本发明涉及一种用于NK细胞体外扩增的培养基体系及NK细胞体外扩增的方法。本发明利用固化的anti‑CD137和RetroNectin直接培养Ficoll分离的PBMC，采用OK‑432作为生物效应剂，在GM‑CSF、IL‑4、IL‑2、IL‑15、IL‑21共同作用下体外活化和扩增自然杀伤细胞，创建了一种高效的NK细胞体外扩增方法；该方法制备的NK细胞CD3‑CD16+/CD56+细胞表达率高达92.5％以上，经过14天培养，NK细胞可扩增1000～2000倍，体外杀瘤活性强。

摘要： 本发明涉及一种用于NK细胞体外扩增的培养基及NK细胞体外扩增的方法，所述培养基按体积百分含量包括淋巴细胞无血清培养基100％或RPMI1640培养基1～90％和淋巴细胞无血清培养基10～99％的混合物，以及血清替代物和白介素2；其中，所述血清替代物的浓度为0.5～4g/L，所述白介素2的浓度为50～500μg/mL。本发明的培养基及制备方法能实现NK细胞在短时间内的爆发性增殖，成本低廉且扩增的细胞杀伤性极高，满足三类医疗技术应用的要求和体细胞治疗药物质量控制的要求。

摘要： 本发明公开了一种细胞培养基添加剂、细胞培养基及细胞体外扩增的方法。其中，所述细胞培养基添加剂包括：10‑40mg/mL人血清白蛋白、0.5‑10ng/mL EGF、0.5‑10ng/mL KGF、0.5‑10ng/mL FGF‑10、0.1‑1.0μg/mL氢化可的松、1‑10μg/mL胰岛素以及1‑10μg/mL转铁蛋白。此外，本发明还公开了一种上述的细胞培养基添加剂在细胞培养中的应用。本发明所述的技术方案可以提高人原代表皮角质细胞体外扩增效率，且所得到的细胞能支持构建结构和功能完好的三维重组人体皮肤模型。

摘要： 本发明涉及生殖医学技术领域，具体是一种含间充质干细胞胞浆提取物的人卵母细胞体外成熟培养液，所述的培养液是在卵母细胞基础培养液的基础上，添加性激素、抗生素和间充质干细胞胞浆提取物。本发明还提供一种人卵母细胞体外成熟培养方法。本发明提供了一种更为实用、有效的措施来改善未成熟卵母细胞体外成熟培养系统，本发明的培养液能显著提高生发泡期未成熟卵母细胞的成熟率、受精率、卵裂率、囊胚形成率。

摘要： 本发明属于生物医药领域，涉及一种适用于毛囊干细胞体外培养的培养基配方和用于体外3D毛囊干细胞的培养方法。该培养基以MEM培养基为基础，含有1‑10 ng/ml EGF,1‑30 ng/ml FGF，1‑30 ng/ml VEGF‑A，1‑10μM Y27632,5‑10μg/ml转铁蛋白。此培养基配方及培养方法克服了毛囊干细胞体外培养时传代代数短，细胞分化严重等问题，大幅提高了毛囊干细胞体外培养的细胞数目和并且有效维持了毛囊干细胞的分化潜能。本发明还提供了其应用和体外培养3D毛囊干细胞的方法。

摘要： 本发明属于生殖生物学领域，具体涉及一种促进未成熟卵母细胞体外成熟的NO微泡制剂及促进卵母细胞体外成熟的方法，其由壳膜层与内层空腔组成，所述内层空腔填充有包含NO的气体；所述壳膜层包括脂质材料、起泡剂、冻干支撑剂，所述脂质材料、起泡剂、冻干支撑混合后加入溶剂进行冷冻干燥后制成冻干粉末，得到壳膜层；所述的脂质材料成分选自天然磷脂、氢化磷脂、合成磷脂及其聚乙二醇修饰衍生物中的一种或多种；所述起泡剂为吐温‑80；所述冻干支撑剂为Poloxamer 188。本发明提供的NO微泡制剂添加进常规卵母细胞体外培养液中可实现NO长效释放，并且生物安全性高，促进了GV期卵母细胞的体外成熟率，具有良好的应用前景。

摘要： 本发明涉及用于人类胚胎干细胞体外培养的饲养细胞层，以及用该饲养细胞层体外培养人类胚胎干细胞的方法。本发明提供的饲养细胞层是由人成纤维细胞构成的。并且用该饲养细胞层体外培养人类胚胎干细胞时的培养液为KNOCK－OUTEMEM+KNOCK－OUTSR。本发明成功采用人成纤维细胞作为饲养细胞，充分解决了原有培养系统中有小鼠细胞参与的不利因素。

摘要： 本发明提供了一种牙鲆卵原干细胞培养液及牙鲆卵原干细胞体外培养方法及应用，涉及生物技术领域。所述培养液包含以下成分：10％‑15％的FBS，0.9％‑1.2％的牙鲆血清，80‑120μmol/L的β‑巯基乙醇，380‑450U/mL的青霉素，0.35‑0.50mg/mL的链霉素，0.8‑1.3μg/mL的两性霉素B，1.5‑2.5ng/mL的bFGF以及1.5‑2.5ng/mL的LIF。本发明通过摸索牙鲆卵原干细胞的体外培养条件，提供了适于卵原干细胞的培养液并建立了卵原干细胞体外稳定传代的培养方法，最终获得了比例较高的卵原干细胞，并提供了全方面鉴定卵原干细胞的方法以及应用。