米氏常数

摘要： 许多国内外高校的本科教学缺乏对米氏方程的深入推衍,这对学生了解酶促反应的动态过程及在实际科研工作中的应用是极为不利的.从酶促反应方程出发对米氏方程进行推导,继之采用双倒数法、单倒数法、直接隐函数法、间接隐函数法以及积分法对米氏方程进行线性化,得到适用于不同情况的衍生方程.从数学和酶学角度出发指出了不同方程的优势和缺点,并针对其缺陷提出了若干解决方案以及在实际应用过程中的注意事项.希对高校中有志于科研事业的相关专业的教师学生有所助益.

摘要： 许多国内外高校的本科教学缺乏对米氏方程的深入推衍,这对学生了解酶促反应的动态过程及在实际科研工作中的应用是极为不利的。从酶促反应方程出发对米氏方程进行推导,继之采用双倒数法、单倒数法、直接隐函数法、间接隐函数法以及积分法对米氏方程进行线性化,得到适用于不同情况的衍生方程。从数学和酶学角度出发指出了不同方程的优势和缺点,并针对其缺陷提出了若干解决方案以及在实际应用过程中的注意事项。希对高校中有志于科研事业的相关专业的教师学生有所助益。

摘要： 设计了一个使用不同方法测定酶催化反应动力学参数的综合性实验,即分别使用紫外-可见分光光度法和计时电流法测定固载在天然高分子衍生物包覆磁性纳米粒子上的漆酶催化酚类氧化反应的米氏常数KM.实验结果表明,2种方法测定所得的KM没有显著性差异,但计时电流法操作更简便、更迅速,测定结果具有更高的精密度.更重要的是,相对于紫外-可见分光光度法,计时电流法测定酚类浓度具有更为良好的重现性和更小的误差,是一种在线测定酚类含量的便捷方法.

摘要： 设计了一个使用不同方法测定酶催化反应动力学参数的综合性实验，即分别使用紫外一可见分光光度法和计时电流法测定固载在天然高分子衍生物包覆磁性纳米粒子上的漆酶催化酚类氧化反应的米氏常数KM。实验结果表明，2种方法测定所得的KM没有显著性差异，但计时电流法操作更简便、更迅速，测定结果具有更高的精密度。更重要的是，相对于紫外一可见分光光度法，计时电流法测定酚类浓度具有更为良好的重现性和更小的误差，是一种在线测定酚类含量的便捷方法。

摘要： 用四种修饰纤维素酶Cell-MAL(5,10,20K)和Cell-SPA 5 K和天然纤维素酶在pH=13.63,T-=45°C反应时间为1h的7％(wt) NaOH/12％(wt)尿素溶液中降解羧甲基纤维素.得到四种修饰纤维素酶的活性均比天然纤维素酶的活性高.其中Cell-MAL 5 K的活性最高.然后浓度分别为1/100、1/300、1/500和1/700的7％(wt)NaOH/12％(wt)尿素水溶液中分别测定了天然纤维素酶和四种修饰纤维素酶的米氏常数分别为2.853、1.735、1.777、4.622和10.01 mg/L.

摘要： 选用酸性纤维素酶处理未染色和经过C.I.硫化黑1染料染色的纯棉针织物,通过测定处理后织物的毛羽去除率、质量损失率、织物上的酶吸附量及处理残液中的还原糖含量,分析纤维素酶与织物之间的相互作用并建立动力学方程.结果表明:织物上染料的存在对纤维素酶的吸附具有促进作用,但降低了毛羽去除率;纤维素酶处理染色织物与未染色织物具有相近的米氏常数,分别为51.81和49.97,但未染色织物的最大反应速率约为染色织物的10倍.

摘要： 以食品与生物工程实验中心酶工程实验室保藏的黑曲霉菌种作为菌源,利用黑曲霉细胞深层发酵法生产内切型菊粉酶.通过测定发酵液酶活,从20株黑曲霉菌株中筛选得到产菊粉酶活力最高的编号为E133131的一株黑曲霉菌株,酶活为0.66U/mL.对黑曲霉E133131号菌株所产内切型菊粉酶进行了酶学性质的研究,得到以下结论:最适pH为4.5;最适温度为60°C;最佳底物浓度为4mmol/L;米氏常数(Km)为1.434mmol/L; Ca2+对内切型菊粉酶有激活作用,当加入浓度为1.5mmol/L的Ca2+时,使酶活从0.66U/mL提高到1.09U/mL; Mn2+、Cu2+和Mg2+对内切型菊粉酶有抑制作用,其中Cu2+的抑制作用最大,使酶活从0.66U/mL降低到0.095U/mL; Na+、K+、Zn2+、Fe2+、Mg2+对内切型菊粉酶的酶活影响不大;pH在4.5 ～ 8.0范围内,温度在50 ～ 60°C之间,内切型菊粉酶的酶活力较稳定.

摘要： 目的：研究硼酸-硼砂缓冲液制备的尿酸酶-过氧化氢酶脂质体（BUCLP）中尿酸酶的体外特性。方法采用逆向蒸发法制备BUCLP，并考察其部分理化性质特性。结果 BUCLP中尿酸酶最适温度保持在40°C，最适pH值由8.5降为8.0，而Km值也由14.207μmol/L降为13.623μmol/L；尿酸酶-过氧化氢酶（UAC）与空白纳米脂质体作用后，再与FITC结合，其荧光强度高于游离UAC与FITC结合的荧光强度，且BUCLP在280 nm处的荧光强度高于游离UAC。结论尿酸酶和过氧化氢酶联合制备成BUCLP后尿酸酶的活性增加。%Objective To characterize the property of uricase loaded in uricase-catalase liposomes (BUCLPs) prepared using borate buffer. Methods BUCLPs were prepared using reverse-phase evaporation, and the physicochemical properties of uricase in the prepared BUCLPs were examined. Results The optimal temperature of BUCLP and URI was 40 ºC, their optimal pH values were 8.0 and 8.5, and their Michaelis-Menten constants were 14.207 μmol/L and 13.623 μmol/L, respectively. Fluorescence intensity of nanoliposome-loaded uricase-catalase that bound to FITC was higher than that of uricase-catalase binding directly with FITC; the fluorescence intensity of BUCLP was higher than that of free uricase-catalase at 280 nm. Conclusion Uricase activity is enhanced after loading in uricase and catalase liposomes.

摘要： 介绍了蔗糖酶米氏常数测定的新方法，采用旋光仪测定蔗糖在蔗糖酶作用下分解为果糖和葡萄糖过程中溶液旋光度的变化，通过测定一系列不同初始浓度蔗糖溶液转化过程的动力学曲线，采用计算机软件处理数据，得到蔗糖酶的米氏常数值。采用成熟的物理化学实验技术，原理清晰，配合计算机数据拟合方法，实验方法简便、快速。用于该校材料、化学等专业本科物理化学实验教学，取得良好的教学效果。%A new experimental method for measuring Michaelis constant of invertase is described . The inversion of cane sucrose to glucose and fructose is catalyzed by a crude-extract from the the autolysis of a dried baker's yeast ,and the angle of rotation of polarized light passing through the solution is measured with a polarimeter .The kinetic curves of a series of solutions with varied initial concentration of cane sucrose are investigated .The data are treated with computer software and the Michaelis constant of invertase is calculated . By means of conventional experimental technology of physical chemistry and computer data fitting ,the enzyme-catalysis experiment becomes convenient and quick . The experiment is applied in the laboratory physical chemistry curriculum for the undergraduates majored in material and chemistry ,in which good effects of teaching are achieved .

摘要： 目的：探讨龙葵碱对HepG2细胞NAT酶米氏常数Km及最大反应速率Vmax的影响.方法：采用高效液相色谱(HPLC)法,以2-AF为底物,以2-AF的浓度为底物浓度,在HepG2完整细胞及细胞质内2-AF被NAT酶乙酰化为2-AAF的速度为NAT酶的反应速率,采用双倒数作图法,以底物2-AF浓度的倒数1/s对NAT反应速率的倒数1/v作直线,得出回归方程,计算Km和Vmax.结果：统计学表明对于HepG2完整细胞和细胞质,阴性对照组和龙葵碱组的Km没有差异,而Vmax统计学差异显著(完整细胞p＜0.001,细胞质p＜0.05);结论：龙葵碱是NAT酶2-AF底物的非竞争性抑制剂.

摘要： 研究了固定化果胶酶相对游离果胶酶性质的变化和固定化果胶酶在苹果汁中应用,研究对酶活、酶促动力学和苹果汁的理化性质,得出以下结论:1)果胶酶经固定化后其最适温度提高,最适pH值下降且对pH值有更宽的适应范围均发生了变化.2)固定化酶的米氏常数Km略大于游离酶,在相同条件下固定化酶反应所需底物比游离酶反应所需的底物浓度要略高.3)经固定化果胶酶处理后的苹果汁透光率较高、色值较小,所得苹果汁更为澄清透明.苹果汁经不同温度加热处理、其透光率未发生显著变化,具有良好的热稳定性.

摘要： 以酪蛋白为底物,考察了时间、温度、底物浓度及缓冲液pH值对木瓜蛋白酶酶活的影响,并探讨了Hg2+对木瓜蛋白酶的米氏常数、活化能的影响.研究表明: 木瓜蛋白酶的最优酶解条件为温度45°C,底物浓度2.0 mg/mL,pH 7.0,酶解30min.与对照组相比,10-6 mol/L的Hg2+处理的木瓜蛋白酶与底物的亲和力变大,Ea 降低.Km值分别为1.8462和1.75mg/mL;Ea分别为14.468和12.9133 KJ/mol.荧光光谱和FTIR 光谱均证明Hg2+处理后的木瓜蛋白酶结构发生改变.

摘要： 目的：探讨龙葵碱对HepG2细胞NAT酶米氏常数Km及最大反应速率Vmax的影响.方法：MTT法测定龙葵碱对消化系统SGC-7901人胃癌、HepG2人肝癌、Ls-174人大肠癌三种肿瘤细胞株的细胞毒作用,高效液相色谱(HPLC)法,以2-AF为底物,以2-AF的浓度为底物浓度,在HepG2完整细胞及细胞质内2-AF被NAT酶乙酰化为2-AAF的速度为NAT酶的反应速率,采用双倒数作图法.以底物2-AF浓度的倒数1/S对NAT反应速率的倒数1/V作直线,得出回归方程.计算Km和Vmax.结果：MTT法测定表明龙葵碱对HepG2人肝癌细胞比较敏感,酶动力学研究表明,以2-AF为底物,对于HepG2完整细胞,阴性对照组的Km和Vmax分别为2.37x10-3±8.37×10-5 mM,9.16×10-4±7.54×10-5 nmol·106 cells-1,龙葵碱组的Km和Vmax分别为2.22×10-3±9.05×10-5 mM和5.14×10-4±3.72×10-5 nmol·106 cells-1.对于HepG2细胞质,阴性对照组的Km和Vmax分别为8.95×10-3±2.61×10-4 mM,2.55×10-6±1.92×10-8 nmol·min-1mgprotein-1,龙葵碱组的Km和Vmax分别为9.48×10-3±3.63×10-4 mM和2.43×10-6±1.32×10-8 nmol·min-1 mg protein-1,统计学表明对于HepG2完整细胞和细胞质,阴性对照组和龙葵碱组的Km没有差异,而Vmax统计学差异显著(完整细胞p<0.01,细胞质p<0.05).结论：龙葵碱是HepG2人肝癌细胞NAT酶2-AF底物的非竞争性抑制剂.

摘要： (目的)研究异柠檬酸脱氢酶(ICD)的酶动力学特点并确定异柠檬酸脱氢酶活性测定技术。rn (方法)建立异柠檬酸脱氢酶(ICD)测定异柠檬酸盐的方法，通过研究ICD的反应曲线、最适PH及在最适PH下测定的米氏常数(Km)，确定其酶动力学特点。rn (结果)观察ICD酶反应曲线，未见明显的延迟现象；配置Tris-HCL缓冲液，可见反应在PH=8.43时，ICD反应速度达到顶峰，为最适PH；并在此最适PH下多次以异柠檬酸钠为底物时测得米氏常数值为0.297±0.042 mmol/L。rn (结论)所建立的异柠檬酸脱氢酶活性测定技术，能成功地在检验科大生化仪(AU400)应用，该技术可用于今后涉及生物氧化-三羧酸循环中柠檬酸到异柠檬酸的代谢步骤各物质的检测，具有一定的实用价值。

摘要： 本文基于谷氨酸脱氢酶(GLDH)对以还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)作为辅酶的α-酮戊二酸(α-KG)还原性胺化反应的生物催化作用,用电化学分析技术研究了烟草特有亚硝胺之一4-(N-亚硝基甲氨基)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮(NNK)对GLDH催化活性的影响,测定了NNK存在与否时GLDH酶促反应的最大反应速率及米氏常数或表观米氏常数.实验结果表明NNK对GLDH的催化活性有明显的抑制作用,而且属于可逆竞争性抑制机理,测得在25°C,pH8.0时抑制常数K为176μmol 1.

摘要： 本发明公开了一种米氏肉孢子虫抗原、编码基因、重组抗原、间接ELISA抗体检测试剂盒及其应用，属于动物疫病检测技术领域。本发明的米氏肉孢子虫抗原为表面抗原SAG3，其编码基因来自首次通过RT‑PCR和分子克隆技术从米氏肉孢子虫孢子囊中克隆得到的完整的SAG3表面抗原基因，开放阅读框序列长度为849bp，编码282个氨基酸。本发明的米氏肉孢子虫抗原具有很强的抗原性和特异性，作为检测抗原能与米氏肉孢子虫抗体发生有效的抗原抗体反应，而不能与刚地弓形虫和犬新孢子虫阳性血清产生交叉免疫反应，是检测米氏肉孢子虫抗体的理想抗原，具有良好的应用前景。

摘要： 该发明为一种基于米氏理论的多层壳球形纳米粒子米氏系数的递推算法，属于微波光子学领域。采用一种基于米氏理论的多层壳球形纳米粒子米氏系数的递推算法可以分析不同外壳层数的球形纳米粒子的米氏系数。首先，通过整理化简推广米氏理论，通过递推算法，可以准确地找到不同外壳层数的球形纳米粒子计算米氏系数所需要相对大小参数与对应的贝塞尔方程。同时在计算过程中同样需要递推算法来计算得到关键系数从而得到米氏系数。通过这种方法，可以确保无遗漏和错误，使实验结果准确。

摘要： 本发明公开了一种用于直径10米以上大型半自磨机的贝氏体钢衬板的制备方法，属于金属铸件制造技术领域。该贝氏体钢衬板，包括以下重量百分比的成分：C为0.30～0.60％、Si为1.20～2.00％、Mn为0.80～1.00％、Ni为0.40～0.80％、Cr为1.50～1.80％、Mo为0.20～0.40％、Cu为0.40～0.80％、Al为0.10～0.70％、Ti为0.002～0.005％、Re为0.010～0.050％、S≤0.025％、P≤0.025％，余量为Fe与不可避免的杂质。本发明制备得到贝氏体钢衬板耐磨性能优异，综合力学性能良好。

摘要： 根据本发明的电池组通过使用米氏散射来检测气体的产生，由此能够快速地检测所述电池组的异常。另外，通过不仅考虑到气体产生而且还考虑气体产生时间来确定单体中是否存在异常，从而可以准确地检测所述单体中是否存在异常。

摘要： 本发明公开了一种米氏散射计算方法及应用，属于光学散射传感技术领域，包括：基于任意波长下散射光强的拟合表达式计算得到待测颗粒物粒径所对应的散射光强；其中，任意波长λ下散射光强拟合表达式的获取方法为：对预获取的波长λ0下的不同粒径颗粒物的散射光强曲线进行拟合，得到波长λ0下散射光强的拟合表达式ISf(d)，进而得到波长λ0下散射光强与无因次粒径α之间的映射关系ISf(λ0α)；计算任意波长λ下的无因次粒径，带入ISf(λ0α)中，得到任意波长λ下散射光强的拟合表达式。本发明运算开销小、运算效率高，能够用于嵌入式芯片，极大地降低了硬件成本。

摘要： 本发明公开了一种重载铁路用百米定尺75kg/m在线热处理贝氏体钢轨的生产方法，包括：铁水预处理→复吹转炉冶炼→LF精炼→VD真空脱气→大方坯连铸→钢坯缓冷→钢坯加热→百米钢轨轧制→百米在线热处理→复合矫直→探伤→百米回火→500米焊接；本发明结合280mm×380mm大断面连铸、水风交替钢轨控制冷却机组、百米钢轨回火处理炉等设备，生产的百米75kg/m在线热处理贝氏体钢轨具有良好的强韧性、耐磨性、抗接触疲劳性能、焊接性、抗裂纹萌生和扩展能力。

摘要： 本发明公开了一种基于米氏旋回的三级层序划分方法，包括获取目标区域中的自然伽马测井曲线；基于频谱分析确定自然伽马测井曲线的信号能量与旋回数量，进而判断其是否包含米氏旋回；选择具有确定年代和深度的时间锚点；选择斜率轨道参数作为目标曲线；基于时间锚点确定自然伽马测井曲线与目标曲线的初始对应位置，并以初始对应位置为起点，将自然伽马测井曲线调谐至目标曲线，以获得时深转换表，进而确定天文年代标尺；对天文年代标尺进行滤波得到滤波曲线，基于滤波曲线的包络线进行三级层序划分。本发明对天文年代标尺进行滤波得到能够反映海平面变化特征的滤波曲线的包络线，基于包络线进行三级层序的划分，三级层序划分结论更准确。

摘要： 本发明公开了一种基于米氏旋回的地震界面年代测定方法，包括：获取自然伽马测井曲线；基于频谱分析确定自然伽马测井曲线包含米氏旋回信号的能量、数量；选定具有确定年代和深度的地震界面为时间锚点；从天文轨道模型中选择轨道参数作为代表时间域的目标曲线；基于时间锚点确定自然伽马测井曲线与目标曲线的初始对应位置，以其为起点，按照目标曲线的曲线变化，将自然伽马测井曲线调谐至目标曲线，获得时深转换表进而确定天文年代标尺；基于天文年代标尺确定待测定的地震界面的年代。本发明选用具有绝对时间的地震界面作为时间锚点，将自然伽马曲线由深度域变化为时间域，得到天文年代标尺，并能够基于天文年代标尺测定地震界面的年代。

摘要： 本申请第一方面公开了一种低米氏常数的肌酸脒基水解酶，属于酶工程技术领域；本申请第二方面公开了低米氏常数的肌酸脒基水解酶的制备方法，第三方面本申请还公开了一种包含相关核苷酸序列的重组质粒；本申请通过克隆并实现了肌酸脒基水解酶在大肠杆菌工程菌种进行表达，解决了现有的肌酸脒基水解酶因米氏常数较高，导致应用中检出限较高的问题，同时本申请获得的肌酸脒基水解酶的酶活性较高，为拓宽肌酸脒基水解酶的应用奠定了基础。

摘要： 本发明涉及一种脲酶米氏常数测试方法即脲酶-酚红法，属于生物化学和应用酶学技术领域。本发明所提供的测试方法是以一系列不同浓度的尿素溶液为底物，酚红为指示剂，在脲酶的作用下，尿素分解产氨，pH值上升，在酚红指示剂的作用下，体系的颜色变深，吸光度增加，用分光光度计或酶标仪测吸光度。酶促反应速率与吸光度值的增加成正比，因此可以用吸光度增加值的倒数1/△A代替双倒数方程1/V=Km/（Vmax[S]）+1/Vmax中的1/V，对底物尿素浓度的倒数1/[S]作图，根据双倒数方程可得直线在X轴上的截距即为-1/Km，求得Km值。