牛胚胎

摘要： 近年来牛体外胚胎生产取得很大进展,可以稳定地在体外获得囊胚,但体外生产效率偏低,不能满足产业需要。在牛体外胚胎生产过程中很容易产生活性氧和活性氮,导致配子和胚胎受到氧化应激或硝化应激。褪黑素作为一种强有力的抗氧化剂和抗凋亡剂,可以直接清除有毒的氧衍生物,减少活性氧的形成,在牛体外胚胎生产过程中发挥积极作用。本文主要对褪黑素在牛卵母细胞体外成熟、体外受精、早期胚胎发育、配子和胚胎冷冻保存等方面的研究进行综述,为后续体外胚胎生产技术的优化研究和推广应用提供参考。

摘要： 旨在基于高通量SNP芯片建立一种可评估牛早期胚胎染色体质量和生产性能的方法,为胚胎牛育种提供技术支撑。本研究通过胚胎切割技术分别对荷斯坦奶牛体内囊胚(n=27)、体外囊胚(n=21)、体外2细胞胚胎(n=6)和8细胞胚胎(n=5)进行切割取样并统计发育率,其中体内囊胚组分为1/2体内胚组(切取半个胚胎)和体内滋养层(trophoblast cells,TE)组(切取体内胚胎少量TE),体外囊胚组、体外2和8细胞胚胎分别为体外TE组(切取体外胚胎少量TE)、体外2细胞(切取体外2细胞胚胎的1个卵裂球)和8细胞组(切取体外8细胞胚胎的1个卵裂球)。切割取样后进行全基因组扩增(whole-genome amplification,WGA),对扩增成功且DNA量大于1000 ng的样品进行SNP芯片检测,芯片检出率大于90%的进行生产性能评估,低于90%的进行染色体片段缺失分析和数据填充。结果显示:1)切割部分TE后,体内TE组剩余部分和体外TE组剩余部分继续培养24 h后的发育率分别为(94.4±5.6)%和(90.5±6.6)%,而1/2体内胚组剩余部分的发育率显著降低,仅为(22.2±14.7)%。2)1/2体内胚组和体外2细胞组扩增成功率为100%,而体内TE组、体外TE组和体外8细胞组扩增的成功率分别为(94.4±5.6)%、(76.2±9.5)%和(60.0±24.5)%;与1/2体内胚组相比,体内TE组和体外TE组经WGA后DNA量均显著下降(P<0.05),且体外TE组扩增后DNA量显著低于体内TE组(P<0.05)。3)相较于1/2体内胚组(91.2±1.6)%,体内TE组(76.7±15.2)%、体外TE组(74.3±9.6)%、体外2细胞组(76.1±6.9)%、体外8细胞组(61.2±19.0)%芯片检出率均显著下降(P<0.05),且检出率均低于90%。4)以至少连续7个SNPs缺失作为染色体片段缺失筛选标准,体外TE组和体内TE组分别筛选到188个和388个染色体缺失片段,相应的缺失片段各包括46和48个基因;GO和KEGG富集分析结果显示,体外TE组缺失基因主要与细胞骨架和细胞分化相关,而体内TE组缺失基因则主要与细胞物质分泌和运输相关。5)在64958个SNPs填充位点中52334个SNPs填充位点的填充准确性(R~2)在0.99~1之间且填充准确性为91%,说明填充的准确率较高,育种值估计显示,体外TE组生产性能低于体内TE组。综上,利用胚胎切割、单细胞基因组扩增和基因组芯片可在微创的前提下,实现对植入前早期胚胎染色体质量和生产性能的评估。同时,体内外胚胎染色体缺失片段对比分析发现体外发育过程中细胞骨架等基因异常表达可能是导致体外胚胎质量差的原因之一。

摘要： 胚胎保存技术的发展与胚胎移植技术的发展息息相关,胚胎保存技术不仅可保存多余的胚胎,更为随时随地进行胚胎移植提供技术支持。该文主要就牛胚胎玻璃化冷冻保存技术的原理、冷冻保存的优势、方法及国内近期研究进展进行详细阐述,并对其发展前景进行展望。

摘要： 北方白犀牛是世界上最濒危的哺乳动物。2018年3月，随着最后一头雄性北方白犀牛苏丹的离世，让剩下的丽头雌性北方白犀牛法图和纳金成为这一物种仅存的成员，也使该物种走向灭绝。

摘要： 2018年7月4日,一个国际研究团队声称,他们通过辅助生殖技术成功培育出濒临灭绝的北方白犀牛与其近亲亚种的杂交胚胎,为挽救这种濒危动物带来希望.北方白犀牛是一种濒临灭绝的哺乳动物——世界上最后一头雄性北方白犀牛已离世,两头雌性北方白犀牛成为这一物种仅存成员.为挽救这一物种,保存它们的基因,由意大利和德国科研人员领衔的团队尝试在实验室中培育了杂交犀牛胚胎.

摘要： 广西百桂农业生态股份有限公司于2011年9月注册成立，是一家以资本、农业生态养殖技术为核心投资控股公司，目前核心技术除了肉牛胚胎方面、还有包括高效牧草；6kg牧草可以转化为1kg牛肉；公司产品申请中华人民共和国生态原产地的认证，打造生态产业扶贫体系。

摘要： 本研究分析了不同移植地点、受体牛来源、受体牛黄体位置、移植季节以及对受体牛实施尾椎硬膜外麻醉等对胚胎移植受胎率的影响.2013年9月～2015年3月,在内蒙古和北京地区移植奶牛胚胎745枚,平均受胎率为57.2％.内蒙古地区的A牛场胚胎移植受胎率(50.3％)低于北京地区的B牛场(65.5％)和C牛场(61.7％),且差异显著(P＜0.05),而同一地区的B牛场和C牛场之间差异不显著(P＞0.05);不同来源受体牛受胎率比较,新西兰荷斯坦牛受胎率(57.4％)略低于澳大利亚荷斯坦牛(65.4％)和中国荷斯坦牛(65.5％),但差异不显著(P＞0.05),而澳大利亚荷斯坦牛与中国荷斯坦牛受胎率差异也不显著(P＞0.05);受体牛不同黄体位置受胎率比较,左侧黄体受体牛受胎率(60.4％)略高于右侧(54.7％),但差异不显著(P＞0.05);移植季节对胚胎移植受胎率影响,以春季受胎率最高(71％),其次是冬季(63.2％),最低是秋季(60.6％),但不同移植季节的胚胎移植受胎率没有显著差异(P＞0.05);受体牛实施尾椎硬膜外麻醉的受胎率(66.7％)略高于未实施麻醉的受体牛(62.4％),但差异不显著(P＞0.05).

摘要： 胚胎移植技术是迅速扩大某一优良品种群体的重要方法。笔者自1992年与意大利专家合作开展此项工作，至今已有二十多年了。此期间，与中国农科院畜牧研究所，河南省肉牛纯种繁育中心，德国、加拿大、荷兰等国家的专家合作，在黄牛场开展胚胎移植工作。在这一过程中，我们积累了一些经验，在此与业内同仁交流一下。

摘要： 本文在全面分析胚胎采集过程中的每个技术环节基础上,指出影响采胚效果的影响因素,并提出了相应的解决办法及应对措施.

摘要： 卵母细胞体外成熟、体外受精、胚胎体外培养是牛胚胎体生产的三个主要技术环节,与胚胎的存活及发育能力密切相关,进而影响胚胎移植后效率.本文综述了牛卵母细胞体外成熟、体外受精、胚胎体外培养的研究进展,为有关研究和生产提供参考.

摘要： 本试验系统研究了电融合参数、以及不同形态、大小和代数的供体细胞对牛胚胎克隆效果的影响，旨在优化转脂肪型脂肪酸结合蛋白基因(A-FABP)体细胞核移植的技术体系，为克隆胚胎的生产、移植、并最终繁殖转A-FABP基因克隆牛奠定试验基础。

摘要： 本实验对将受精20h之后的卵母细胞移出后，分别加入不同量的卵泡抑素继续培养，观察结果，通过实验研究发现，IVC1阶段沉默卵泡抑素基因，在受精后7d不会影响囊胚率，与处理组无显著差别。综合亦1VC1阶段添加不同浓度卵泡抑素对牛胚胎早期发育影响的结果，可能在早期的胚胎发育的最初阶段，尤其是发生早期卵裂的阶段，卵泡抑素并不是必须的。

摘要： 本文简要介绍了牛胚胎发育阶段和几种不同的质量等级评价体系.由于体系不同,用来将胚胎"分级",本身就造成了标准不一致,给胚胎质量评定带来了困难.建议采用国际胚胎移植协会标准格式制定的胚胎发育阶段编码和"质量编码"标准.

摘要： 在利用体外受精技术产业化体外生产牛胚胎的体系中,在胚胎培养当天加入犊牛血清(FBS)的实验组,其卵裂率(80.6﹪,253/314)、囊胚率(41.8﹪,259/620)和冻胚率(20.8﹪,129/620)与在体外受精(IVF)3-d后才加入FBS的对照组结果差异不显著(相应为83.4﹪,262/314;48.5﹪,301/620和24.2﹪,151/620,P>0.05).在IVF后第3-d将培养体系中的未受精卵及发育迟缓的2-细胞胚胎剔除与否不同的胚胎培养方式对其后囊胚的产量和质量均无显著影响.结果表明,在牛胚胎工厂化生产的条件下,IVF后的假定受精卵可以在改良SOF液中培养至囊胚阶段,中途不需要任何处理,而不影响其产胚效率.

摘要： 为了评估牛胚胎体外培养过程中褪黑素对胚胎发育和胚胎质量的潜在影响.牛卵丘卵母细胞复合体(COCs)体外成熟24h后进行体外受精.然后将胚胎培养在添加10-7M褪黑素的培养液中.通过观察卵裂率,8-细胞率和囊胚率研究褪黑素对胚胎发育的影响.通过玻璃化冷冻解冻后囊胚死亡率、孵化率及发育相关基因的表达研究褪黑素对胚胎质量的影响.研究结果显示,褪黑素能显著提高体外生产牛胚胎的卵裂率和8-细胞率.此外,胚胎培养的第7天,褪黑素组囊胚率显著高于对照组.以上结果表明褪黑素能促进牛胚胎体外发育.在胚胎发育的第7天将早期囊胚进行玻璃化冷冻,解冻培养24小时后,褪黑素(10-7M)组囊胚孵化率显著高于对照组,而囊胚冷冻解冻后48～72h,褪黑素组囊胚死亡率均显著低于对照组.此外,褪黑素组囊胚冷冻解冻后DNMT3A,OCC,CDH1表达显著上调,AQP3的表达显著下调.综上所述,褪黑素不仅促进牛胚胎体外发育的速度及囊胚率,而且还通过提高抗冷冻能力及调控发育相关基因的表达而提高囊胚质量.

摘要： 为了确认IFN-τ调控牛早期胚胎的发育，检测不同阶段胚胎IFNR基因的表达，然后向牛胚胎发育液中添加rbIFN-τ来确认其是否影响牛早期胚胎的发育。

摘要： 利用转染后的体细胞作为核供体进行体细胞核移植(SCNT)可以生产转基因克隆动物。SCNT得到健康存活后代的效率非常低，再克隆效率情况也一样，而且再克隆效率随着代数的增加而越低。SCNT效率低主要体现在胎儿流产率高，主要是由胎儿和胎盘异常引起的。小鼠和牛的实验发现，IVF胚胎与孤雌激活的卵母细胞嵌合后得到的嵌合体胚胎可以通过互补的方式挽救孤雌激活的卵母细胞，得到存活的后代。鉴于此，向再克隆胚胎中注射来源于IVF胚胎的卵裂球，那么IVF来源的卵裂球可以通过互补的方式纠正克隆胚胎的发育缺陷，从而使克隆胚胎的发育能力得到提高。本研究以本实验室建立的转rhLF克隆牛的耳成纤维细胞系为核供体，通过体细胞核移植的方法获得再克隆胚胎。

摘要： 本研究分3个实验分别对比了在-20°C冰冻条件下保存数周后的体外成熟培养液(MM)、体外受精液(FM)及早期胚胎体外培养液(mSOF)对牛体外胚胎工厂化生产效果的影响.结果表明,与每周新鲜配制的培养液相比,经过2-8周冰冻保存后的MM和FM对牛卵母细胞的受精卵裂、囊胚发育及可冻胚胎的效率均无显著影响;经冰冻保存2-4周后的mSOF,虽然对卵裂率无影响,但显著影响到囊胚发育率.结果说明,现行的牛用MM和FM可在-20°C下保存至少8周而不影响其胚胎工厂化生产效率;而mSOF则不宜用冰冻方法保存.

摘要： 本文运用LAMP法开发并推出了LAMP牛胚性判别试剂盒.DNA扩增只需35分钟,从DNA抽出后到扩增检出完成大约只需1小时,与PCR所需的2-3小时相比是大幅缩短了所需时间.

摘要： 本发明提供了牛克隆胚胎冷冻液、解冻液、试剂盒和牛克隆胚胎冷冻及解冻方法，属于体外胚胎冷冻技术，所述冷冻方法如下：将牛克隆胚胎置于基础液中在24～25°C平衡胚胎5～10min后；依次置于第一玻璃化冷冻液中在24～25°C平衡胚胎4～6min、第二玻璃化冷冻液中在24～25°C平衡胚胎4～6min、第三玻璃化冷冻液中在24～25°C平衡胚胎35～45s，最后置于液氮中冷冻。将冷冻的牛克隆胚胎置于第一解冻液中在37～39°C解冻胚胎50～70s后，置于第二解冻液中在24～25°C平衡胚胎4～6min，最后置于基础液中在24～25°C平衡胚胎4～6min。利用本发明所述方法，牛克隆胚胎的受胎率高达25％。

摘要： 本发明提供了一种牛体外受精胚胎或牛克隆胚胎的培养液以及培养方法，属于牛体外胚胎的培养技术领域；所述牛体外胚胎的培养液，包括胚胎基础培养液和瘦素；所述瘦素在培养液中的浓度为1～80ng/ml。本发明所述培养方法，包括以下步骤：1细胞到8细胞期的牛体外受精胚胎或牛克隆胚胎置于所述的胚胎培养液中，在38.5°C，0.5％CO2、100％湿度条件下进行体外培养。所述培养液和培养方法能够显著提高牛体外受精胚胎或牛克隆胚胎的囊胚发育率及胚胎质量，缩短囊胚形成时间，从而大大提高了体外受精和克隆技术效率，进而明显降低胚胎制作成本；所述瘦素可在1细胞到8细胞期间的任何时期添加于基础培养液，并可获得上述有利效果。

摘要： 本发明涉及牛早期胚胎性别鉴定和胚胎分割的方法，还涉及用于牛早期胚胎性别鉴定的PBS液即磷酸盐缓冲液，该缓冲液的pH值为6.8~7.2且是照如下方式配制的：取磷酸氢二钾9.39g与磷酸二氢钾3.5g，加水使成1000ml，滤过，在115°C灭菌30分钟。本发明方法包括如下步骤：使卵母细胞和精子进行体外受精得到桑椹胚；将桑椹胚在分割液滴内用分割刀割取胚胎组织作为性别鉴定的样品；环介导等温扩增法性别鉴定试剂盒制作样品并配制Master Mix；待样品混合后使反应管置环介导等温扩增实时浊度检测系统中反应，根据结果确定样品为雄性、雌性、不确定需要重做三类情形之一。本发明方法呈现如说明书所述优异技术效果。

摘要： 本发明提供了一种胚胎组织块与胚胎共移植提高牛移植妊娠率的方法，涉及家畜繁殖学领域，属胚胎生物技术的范畴，作为提高牛繁殖力的辅助技术。本发明通过将C级胚胎及用雄性胚胎制作的胚胎块和滋养层分别与可用胚胎共移植，达到增强妊娠识别信号的目的。该发明显著提高了胚胎移植妊娠率，操作简便且具有较好的经济前景。

摘要： 本发明涉及生物技术领域，公开了一种用于胚胎体外生产的培养液，所述培养液为含5-10mmol/L Hepes、15-26.2mmol/L NaHCO

摘要： 本发明公开了一种提高牛胚胎移植中受体牛可用率的方法。本发明通过使用母牛注射促黄体素释放激素A3，可以获得如本发明所述一个或者多个方面的技术效果。本发明方法包括如下步骤：(1)提供供体牛；(2)对供体牛肌肉注射促黄体素释放激素A3；(3)从注射药物起连续观察3d内母牛的发情、排卵情况，记录母牛开始出现发情时间和发情结束时间，每天早晚各观察一次，并以母牛外观发情征状，结合直肠检查来确定发情时间、发情程序及排卵状况，以注射药物后3d内表现发情的判断为发情同期化，并对发情排卵的母牛，按冻配技术操作规程适时进行人工授精，精液为同种供体牛的冻精；(4)以配种后90d，直肠检查结果为依据确定母牛是否怀孕，按常规方法进行孕期饲养。

摘要： 本发明涉及用于牛胚胎分割的分割液和牛胚胎分割方法。所述分割液包含：9.39g磷酸氢二钾、3.5g磷酸二氢钾、68g蔗糖、12g聚维酮K30、注射用水至1000ml。所述牛胚胎分割方法包括如下步骤：采集卵母细胞并使其进行体外成熟；使精子悬液与成熟的卵母细胞孵育以完成体外受精；受精胚胎培养至桑椹胚，挑选出桑椹胚；将桑椹胚用移入分割液滴内，置于倒置显微镜下分割使胚胎一分为二；将分割半胚移入胚胎培养液中培养至桑椹胚发育成可用于胚胎移植的扩张囊胚。使用本发明的胚胎分割液能够有效地提高胚胎分割的效果。

摘要： 本发明公开了一种提高牛胚胎移植中受体牛可用率的方法。本发明通过使用母牛注射促黄体素释放激素A3，可以获得如本发明所述一个或者多个方面的技术效果。本发明方法包括如下步骤：(1)提供供体牛；(2)对供体牛肌肉注射促黄体素释放激素A3；(3)从注射药物起连续观察3d内母牛的发情、排卵情况，记录母牛开始出现发情时间和发情结束时间，每天早晚各观察一次，并以母牛外观发情征状，结合直肠检查来确定发情时间、发情程序及排卵状况，以注射药物后3d内表现发情的判断为发情同期化，并对发情排卵的母牛，按冻配技术操作规程适时进行人工授精，精液为同种供体牛的冻精；(4)以配种后90d，直肠检查结果为依据确定母牛是否怀孕，按常规方法进行孕期饲养。

摘要： 本实用新型公开了一种用于牛胚胎移植中口吸式胚胎操作装置，包括依次首尾相连的采集头、软管和口吸管，所述采集头包括玻璃管主体和一端渐细的锥形玻璃管，所述玻璃管主体的一端与一端渐细的锥形玻璃管的宽端连通；所述玻璃管主体与一端渐细的锥形玻璃管之间的夹角为钝角；所述玻璃管主体的另一端与所述软管的一端连通；所述口吸管包括圆筒形的管体，所述管体的下端与所述软管的另一端连通，所述管体的底部一体设置有过滤体；本实用新型的优点在于：不但避免了口吸带来的二次污染，而且便于控制，精确度高。

摘要： 本实用新型公开了一种用于牛胚胎移植中口吸式胚胎操作装置，包括依次首尾相连的采集头、软管和口吸管，所述采集头包括玻璃管主体和一端渐细的锥形玻璃管，所述玻璃管主体的一端与一端渐细的锥形玻璃管的宽端连通；所述玻璃管主体与一端渐细的锥形玻璃管之间的夹角为钝角；所述玻璃管主体的另一端与所述软管的一端连通；所述口吸管包括圆筒形的管体，所述管体的下端与所述软管的另一端连通，所述管体的底部一体设置有过滤体；本实用新型的优点在于：不但避免了口吸带来的二次污染，而且便于控制，精确度高。