泛素连接酶

摘要： GID/CTLH复合体是真核细胞中特有的具有E3泛素连接酶活性的大分子量蛋白复合体,深入分析其结构与功能具有重要的生物学意义.酵母GID复合体能帮助细胞快速应对微环境中营养状态的改变,同时在糖代谢调控中发挥重要作用;哺乳动物中的CTLH复合体能够迅速接收细胞外的不同信号,协调细胞发生可逆的变化,从而适应不断变化的环境,同时该复合体也涉及细胞内多个不同的生理途径的调控.本文综述了GID/CTLH复合体蛋白亚基的结构域、组成及功能的研究进展,旨在为该蛋白复合体的深入研究提供理论基础.

摘要： 神经系统疾病主要是指中枢神经系统和周围神经系统的病变所引起的一些疾病。RNF4是新近发现的一种SUMO(small ubiquitin-like modifier)靶向的泛素连接酶(SUMO-targeted ubiquitin ligases,STUbL),不仅参与蛋白质降解,还在其他多种细胞信号途径中发挥重要作用。研究显示,RNF4可通过泛素蛋白酶体途径参与多种病理生理过程,包括神经系统疾病、免疫系统疾病以及肿瘤等。本文就RNF4在神经系统疾病中的作用作一综述,旨在提供RNF4在神经系统疾病中的最新进展。

摘要： Pellino蛋白是近年来新发现的一类E3泛素连接酶,通过靶蛋白泛素化介导蛋白降解、蛋白与蛋白的相互作用、蛋白质细胞定位以及信号传导.目前研究表明Pellino蛋白在固有免疫细胞和获得性免疫细胞中具有重要调控作用,与炎症和自身免疫密切相关.本文总结了近年来Pellino蛋白的表达与活性调控、介导的信号转导途径以及在免疫细胞中的分子调控机制的研究成果,同时探讨了Pellino蛋白在自身免疫、炎症、癌症、心脏疾病及肥胖疾病中的作用,并结合目前的研究进展提出新的科学问题和发展方向.

摘要： 目的探讨泛素连接酶三基序蛋白21(TRIM21)对结直肠癌(colorectal cancer,CRC)中鞘氨醇激酶2(SphK2)的调控作用及机制。方法将转染Flag-SphK2的PLC/RPF/5细胞分为a、b、c、d、e组,分别采用表皮生长因子刺激、葡萄糖饥饿处理、过氧化氢刺激、缺氧处理、转化生长因子-β刺激,通过质谱鉴定与SphK2互作的蛋白。将HEK-293T细胞分为f、g、h、i、j、k、l、m、n、o组,f~k组分别转染Flag-SphK2、Flag-SphK2+HA-TRIM21质粒、Flag-SphK2、Flag-SphK2+His-Ubquitin、Flag-SphK2+His-Ubquitin+1μg HA-TRIM21质粒、Flag-SphK2+His-Ubquitin+4μg HA-TRIM21质粒,l~o组分别分别转染HA-TRIM21质粒0、0.3、0.6、0.9μg,f~g组进行免疫共沉淀实验鉴定SphK2与TRIM21蛋白的相互作用情况,h~k组进行体内泛素化实验鉴定TRIM21对SphK2泛素化水平的影响,l~o组进行Western-blot实验检测TRIM21过表达对SphK2蛋白水平的影响。将His-TRIM21、GST-SphK2蛋白混合液分为p、q组,分别加入琼脂糖珠、谷胱甘肽琼脂糖珠,进行蛋白体外结合实验鉴定SphK2与TRIM21蛋白的相互作用情况。将EP管分为r、s、t三组,每组分别加入GST-SphK2+E1/E2/Ub、GST-SphK2+His-TRIM21、GST-SphK2+His-TRIM21+E1/E2/Ub蛋白,进行体外泛素化实验鉴定TRIM21对SphK2泛素化水平的影响。将RKO细胞分为u、v、w、x四组,各组分别感染LV-sgTRIM21-1、LV-sgTRIM21-2、LV-sgTRIM21-3、LV-sgControl慢病毒,采用Western-blot实验检测TRIM21敲除对RKO细胞SphK2蛋白水平及半衰期的影响,采用CCK-8实验检测TRIM21敲除对RKO细胞5-氟尿嘧啶(5-Fu)敏感性的影响。结果质谱分析、免疫共沉淀和蛋白质体外结合实验显示TRIM21与SphK2存在蛋白互作。体内、体外泛素化实验确定TRIM21介导SphK2发生多聚泛素化。在HEK-293T细胞中,TRIM21的外源过表达导致SphK2蛋白水平上调(F=196.22,P<0.05)。与x组相比,TRIM21敲除的RKO细胞系中SphK2蛋白表达水平降低、SphK2蛋白半衰期缩短、对5-Fu的敏感性增加(F=24.83~890.51,P<0.05)。结论在CRC中,TRIM21通过催化SphK2泛素化,提高了SphK2蛋白的表达水平。敲除TRIM21能提高CRC细胞对5-FU的敏感性。

摘要： 环指蛋白6(ring finger protein 6,RNF6)是含有RING结构域的泛素连接酶E3,可作为骨架招募E2和靶蛋白,介导泛素由E2转移到底物特定位点。RNF6可通过泛素化修饰底物蛋白改变其表达水平,也可改变底物功能。RNF6参与SHP1/STAT3、Akt/mTOR、Wnt/β-catenin、ERα/Bcl-xL、MAPK/ERK、MAD1/c-myc等信号通路的调控,与多种恶性肿瘤的发生发展相关。靶向抑制RNF6表达或可作为抑制肿瘤发生发展的一种方法,但仍需大量研究。本文通过查阅近年来涉及泛素连接酶RNF6的文献,综述RNF6的发现历程、结构特征及其与恶性肿瘤的关系,旨在为后续深入研究RNF6对肿瘤的影响提供理论基础。

摘要： 高温影响坛紫菜(Pyropia haitanensis)的产量和品质,是制约紫菜产业发展的主要因素.前期研究发现,高温胁迫下,坛紫菜泛素蛋白酶体系统相关基因显著上调表达,但其响应高温胁迫的分子功能还未知.本研究通过分子生物学、遗传学等技术手段对坛紫菜cuUin E3连接酶基因(PhCUL1)的功能进行研究.利用PCR方法克隆了PhCUL1基因的全长,PhCUL1全长为2500 bp,开放阅读框(ORE)长度为2481bp,该基因存在1个Cullin (407～618 aa)结构域和1个Cullin Nedd8(754～821 aa)结构域,其中,Cullin Nedd8结构域为蛋白融合位点.进化树分析显示,PhCUL1在进化上与脐形紫菜(Porphyra umbilicalis)有较近的亲缘关系.qRT-PCR结果显示,PhCUL1基因被高温显著诱导.为进一步阐明PhCUL1的分子功能,将其转入莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)进行功能验证,过表达PhCUL1株系比野生型更能耐受高温胁迫.同时,在高温33°C下处理3h和6h内,转基因植株的PhCUL1基因呈上调表达.这初步说明PhCUL1基因在坛紫菜响应高温胁迫过程中发挥着重要作用,其具体调控机制有待进一步研究.本研究有助于阐明坛紫菜泛素蛋白酶体系统响应高温胁迫的分子机制,为指导耐高温新品种选育提供理论依据.

摘要： 近日,中国农业科学院植物保护研究所作物有害生物功能基因组研究创新团队在植物学知名期刊《分子植物》上发表了研究文章。该研究发现高等植物特有的维管植物单锌指转录因子是先天免疫的关键因子,揭示了转录因子(VOZ)作为桥梁连通泛素连接酶对抗病蛋白调控的分子机制。

摘要： 近日,马克斯-普朗克研究所的科研团队在顶级期刊《Nature》发表了一篇题为“Ubiquitin ligation to F-box protein targets by SCF-RBR E3-E3 super-assembly”的文章,研究发现人体细胞中存在一种“SCF-RBR E3-E3”泛素连接酶超级组装,该组装可将泛素连接至F-box蛋白靶标,从而抵抗肿瘤发生,与此同时,研究人员还开发了一种新型低温显微镜,首次可视化了这种抗肿瘤新疗法。

摘要： 低温胁迫限制植物的生长发育及其地理分布.不同物种在低温胁迫反应过程中发生了重大的转录组重新编程,许多蛋白质被认为是这种适应性反应的重要因子.泛素化是一种翻译后修饰,能够调控蛋白的丰度、活性、亚细胞区隔和转运,并参与低温应答过程.E3是泛素-蛋白酶体系统的主要组成部分,识别目标蛋白,并将泛素从E2上转移到目标蛋白上.由于E3具有底物识别的特异性,从而调控植物多种低温胁迫反应相关的信号通路.以此为基础,总结了参与泛素-蛋白酶体系统的组成成分,并详细阐述了 E3在低温胁迫反应中的作用.

摘要： SIAH是一类高度保守的RING型E3泛素连接酶,因其结合底物的多样性,参与许多重要的生命活动,包括缺氧反应、线粒体动力学、DNA损伤、免疫防御等.近年研究显示,SIAH与多种肿瘤相关,参与调控肿瘤细胞中的多种信号通路,通过影响细胞增殖和凋亡、化疗药物抵抗等途径影响肿瘤的发生发展.全面认识SIAH能够为探索肿瘤的发病机制提供新的理论依据,为肿瘤的诊断及治疗提供更多参考.

摘要： 目的：探讨泛素连接酶RING2对苯并[a]芘(Benzo(a)pyrene,BaP)染毒人支气管上皮(human bronchial epithelial,16HBE)细胞细胞周期和P53蛋白表达的影响.rn 方法：以16HBE未处理组为阴性对照组,二甲基亚砜(DMSO)组为溶剂对照组,MOCK组为序列对照组.在使用RNA干扰技术降低泛素连接酶RING2基因表达前后,分别进行不同浓度BaP(1、2、4、8、16、32μmol/L)染毒24h;16μmol/L BaP染毒不同时间(1、2、4、8、12、24h)实验.用流式细胞术检测干扰前后两组细胞细胞周期分布情况,用Western-blot法检测干扰前后两组细胞P53蛋白表达水平.rn 结果：1.流式细胞术检测结果显示：与阴性对照组比较,16HBE细胞染毒后各浓度和各时点组S期细胞所占的比例均增加(P＜0.05),而16HBE(SiRNA-RING2)各浓度和各时点组S期细胞所占的比例均下降(P＜0.05).经协方差分析,分组因素(是否进行RNAi)和染毒浓度都对S期细胞比例有影响,P值均为小于0.001,16HBE(siRNA-RING2)细胞组的修正均数(17.09％)比16HBE细胞组(31.55％)明显降低(P＜0.001).分组因素(是否进行RNAi)和染毒时间都对S期细胞比例有影响,P值均为小于0.001,16HBE(siRNA-RING2)细胞组的修正均数(13.07％)比16HBE细胞组(28.04％)明显下降(P＜0.001).2.Western-blot结果显示：与阴性对照组比较,16HBE细胞染毒后各浓度和各时点组P53的表达水平均增加(P＜0.05),而16HBE(SiRNA-RING2)细胞除16μmol/L染毒8h组外,其余各组P53的表达水平均降低(P＜0.05).经协方差分析,分组因素(是否进行RNAi)和染毒浓度都对P53的表达水平有影响,P值分别为0.026和0.028.16HBE(siRNA-RING2)细胞组的修正均数(0.989)比16HBE细胞组(1.375)明显下降(P＜0.01);分组因素(是否进行RNAi)和染毒时间都对P53的表达水平有影响,P值分别为0.007和0.035.16HBE(siRNA-RING2)细胞组的修正均数(0.857)比16HBE细胞组(1.541)明显下降(P＜0.01).rn 结论：RING2参与的组蛋白泛素化修饰可能通过影响P53表达和细胞周期S期的变化来发挥对DNA损伤修复的调控.

摘要： COP1(Constitutive photomorphogenic 1)具有泛素标记功能,从而使被标记蛋白降解.在香蕉中发现有两个COP1基因,分别命名为:MaCOP1-1和MaCOP1-2.MaERF11是一个转录抑制子,它通过转录调控或与乙烯合成基因互作的途径来参与香蕉果实采后成熟.在本文中,荧光定量实验结果显示:香蕉果实自然成熟及乙烯催熟处理中MaCOP1s的转录水平在果皮与果肉中都被诱导上调.值得注意的是,酵母双杂表明MaCOP1-1、MaCOP1-2分别与MaERF11蛋白互作.总的结果表明: 泛素连接酶MaCOP1-1、MaCOP1-2通过降解转录抑制子MaERF11,参与香蕉采后成熟.

摘要： 本文通过研究E3泛素连接酶在与TGF-β1信号通路相关疾病中的作用,探讨胚胎发育、器官形成、良恶性肿瘤、炎症、创伤、器官纤维化等疾病的发病机制。

摘要： 目的：探讨泛素连接酶Ring2在苯并(a)芘致细胞DNA损伤中的作用。方法：采用RNA干扰方法降低人支气管上皮细胞(16HBE)Ring2表达。以不同浓度BaP(0、1、2、4、8、16、32μ mol/L)染毒16HBE和siRNA-Ring2细胞24h；以16μmol/LBaP染毒16HBE和siRNA-Ring2细胞不同时间(0h、1h、2h、4h、8h、12h、24h).染毒结束后采用碱性单细胞凝胶电泳法检测DNA损伤水平.结果：采用RNAi 36h后,目的基因Ring2的表达量与正常细胞相比下降了72％,达到后续实验要求。经协方差分析，分组因素(是否进行RNAi)和染毒浓度都对OTM值有影响，P值分别为0.032和小于0.001.正常细胞和siRNA-Ring2细胞组的修正均数相比,siRNA-Ring2组OTM明显高于正常细胞组；分组因素(是否进行RNAi)和染毒时间都对OTM值有影响,P值分别为0.031和小于0.001.正常细胞和siRNA-Ring2细胞组的修正均数相比，siRNA-Ring2组OTM明显高于正常细胞组。结论：Ring2低表达的细胞DNA对BaP的敏感性增加，可能与降低Ring2表达后致H2A单泛素化水平降低有一定关系。

摘要： 目的：阐明运动骨骼肌泛素蛋白酶体途径活性调节的机制。方法：60只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为2组:对照组和阻断组，观察大强度运动后骨骼肌中两个泛素连接酶MuRF1, MAFbx基因表达的变化。结论：(1)大强度运动即刻至运动后6小时骨骼肌泛素连接酶MuRF1、 MAFbx基因表达增强，途径活性提高。(2)阻断NF-κB信号，运动后1小时基因表达低于对照组，提示运动后NF-κB信号可能参与了骨骼肌泛素蛋白酶体途径活性的调节;(3)而运动后6小时基因表达高于对照组，可能是阻断正常生理功能的反馈现象。

摘要： 转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β) 是一种多功能蛋白,调节细胞增殖、分化、迁移、凋亡等多种细胞生物学效应.已有研究证实,TGF-β是重要的促纤维化细胞因子之一,且与肿瘤的发展密切相关.Smad信号是其发挥作用的主要通路.而近年研究发现,E3泛素连接酶Arkadia通过Smad信号能起到增强TGF-β信号通路生物学效应的作用,因而日益引起人们的关注.本文拟对TGF-β信号转导通路中Arkadia的作用,做一综述.指出Arkadia具有增强TGF-β的转录活性，继而放大TGF-β信号的作用。而TGF-β通路又与多种疾病相关，如多种组织或器官的纤维化，肿瘤的发生与进展等，因而可以考虑从Arkadia着手，降低Arkadia的表达，从而减弱TGF-β信号的转导，进而阻止与其相关的疾病的发生。

摘要： 目的:研究参与调控KLF4泛素化降解途径的泛素连接酶,以及KLF4泛素化降解途径在乳腺癌发生发展中的作用.rn 方法：利用E3连接酶相关基因siRNA 文库筛选可能参与KLF4泛素化的E3连接酶.在乳腺癌细胞系MCF7中,分别瞬时转染216个E3连接酶相关基因的成熟体siRNA后并通过western-blotting方法检测KLF4蛋白水平,来筛选可能参与KLF4的泛素化降解的E3连接酶.进一步利用半衰期追踪实验验证相关的泛素连接酶对KLF4稳定性的影响，利用泛素化实验验证其对KLF4泛素化的影响。利用免疫共沉淀实验研究泛素连接酶与KLF4的相互作用。建立稳定敲降E3连接酶的乳腺癌细胞系来研究敲降E3连接酶对乳腺癌细胞增殖、凋亡和侵袭转移等表型的影响。rn 结果:通过泛素结合相关基因siRNA文库筛选以及后期验证实验发现F-box家族成员FBX09能够明显降低KLF4蛋白的稳定性，提高KLF4的泛素化水平。免疫共沉淀试验发现FBX09能与KLF4蛋白相互结合。FBX09可以通过促进KLF4泛素化降解提高乳腺癌细胞的迁移。rn 结论:FBX09参与KLF4蛋白的泛素化调节，影响乳腺癌细胞的迁移能力，进一步研究KLF4泛素化降解的机制以及泛素化调控KLF4在肿瘤发生发展及侵袭转移中的作用，将为阐明KLF4的调控机制及生物学功能奠定基础。

摘要： 本研究在实验室前期定位基础上结合大豆基因组信息和基因的功能预测选择耐铝候选基因，并对候选基因进行克隆和功能验证;同时，在前人研究的基础上选用再生能力较好的7份大豆材料进行丛生芽率比较试验，并对转化体系进行改进。

摘要： 茉莉酸类化合物(JAs)对伤反应中起着重要作用,它们是调控植物对昆虫及病原物诱导反应中起到关键作用的信号分子,这种调控既是局部的,也是全株性的。其它一些信号调控途径,如乙烯、水杨酸及生长素等,在时间与空间上与茉莉酸类信号传导存在着信号通讯,以激活各种诱导基因的表达。本文就有关这方面的最新进展作一简要的综述。着重茉莉酸类生物合成的翻译后调控方面。

摘要： 茉莉酸类化合物(JAs)对伤反应中起着重要作用,它们是调控植物对昆虫及病原物诱导反应中起到关键作用的信号分子,这种调控既是局部的,也是全株性的。其它一些信号调控途径,如乙烯、水杨酸及生长素等,在时间与空间上与茉莉酸类信号传导存在着信号通讯,以激活各种诱导基因的表达。本文就有关这方面的最新进展作一简要的综述。着重茉莉酸类生物合成的翻译后调控方面。

摘要： 本发明涉及生物技术领域，涉及一种番茄泛素化E3连接酶基因SlCHIP1及应用和基因SlCHIP2。本发明克隆了番茄泛素化E3连接酶基因SlCHIP1和SlCHIP2核苷酸序列，并研究和讨论了这两个基因的同源性及与其它物种同源基因的进化关系，及在番茄抗高温中的作用和机制，为番茄及其他物种的抗高温育种及选种提供了一种新基因资源和可能的分子标记。

摘要： 本发明公开了一种中国明对虾泛素连接酶基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，并提供了其重组表达与纯化方法。本发明还提供了中国明对虾泛素连接酶基因编码的泛素连接酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，并提供了该基因序列的用途、泛素连接酶的用途：可以利用中国明对虾泛素连接酶基因制备原核表达载体，转化大肠杆菌，表达具有抗病毒活性的重组蛋白。利用本发明获得的重组的泛素连接酶蛋白可用于抗病毒的饲料添加剂、动植物基因转化和药物开发。

摘要： 本发明涉及生物医药领域，具体是E3泛素连接酶ASB3作为抗肿瘤新靶点在制备肝癌治疗药物中的应用。本发明通过小干扰RNA特异性下调ASB3，提供了一种新的肝癌治疗方式。干扰ASB3能够抑制肝癌细胞的增殖活力，诱导肝癌细胞凋亡；对裸鼠皮下肝癌种植瘤具有治疗作用；解决了中晚期肝癌现有治疗方式疗效差、预后不佳等技术问题。

摘要： 本发明公开了大豆E3泛素连接酶GmNLA1的应用。大豆GmNLA1蛋白编码基因GmNLA1，其核苷酸序列为：SEQ ID NO.1。将构建的植物过量表达载体pMDC83‑GmNLA1和GmNLA1‑RNAi转化到大豆毛状根中，用1/2 Hoagland处理15d后发现，在GmNLA1‑OE转基因毛状根中，GmNLA1‑OE转基因毛状根中的P浓度显著降低。在GmNLA1‑RNAi转基因毛状根中的P浓度显著增加。总的来说，GmNLA1可能通过负调节大豆转基因毛状根中的P浓度来负调控大豆磷效率。

摘要： 本发明公开了一种中国明对虾泛素连接酶基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，并提供了其重组表达与纯化方法。本发明还提供了中国明对虾泛素连接酶基因编码的泛素连接酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，并提供了该基因序列的用途、泛素连接酶的用途：可以利用中国明对虾泛素连接酶基因制备原核表达载体，转化大肠杆菌，表达具有抗病毒活性的重组蛋白。利用本发明获得的重组的泛素连接酶蛋白可用于抗病毒的饲料添加剂、动植物基因转化和药物开发。

摘要： 本发明描述了双官能化合物，其可用作B细胞淋巴瘤6蛋白(BCL6；靶蛋白)的调节剂。具体地讲，本公开的双官能化合物在一端上含有与相应E3泛素连接酶结合的希佩尔‑林道、小脑蛋白、凋亡抑制蛋白或小鼠双微体同源物2配体，并且在另一端上含有结合所述靶蛋白的部分，使得所述靶蛋白被置于所述泛素连接酶附近，以实现靶蛋白的降解(和抑制)。本公开的双官能化合物表现出与靶蛋白的降解/抑制相关的广泛范围的药理学活性。使用本公开的化合物和组合物治疗或预防由靶蛋白的聚集或积累导致的疾病或病症。

摘要： 本发明涉及生物技术领域，具体涉及E3泛素连接酶HRD1在调控初级纤毛发生中的应用。更具体地，本发明提供了HRD1在促进纤毛发生、制备纤毛相关疾病的药物中的应用；以及，HRD1抑制剂在抑制纤毛发生、构建胚胎发育缺陷的动物模型中的应用。

摘要： 本发明公开了一种E3泛素连接酶RBCK1在制备治疗肝癌的药物中的应用，本发明研究发现，RBCK1的高表达与较差的肿瘤生存和远处侵袭显著相关。功能实验证明RBCK1通过增强GLUT1介导的有氧糖酵解促进迁移和侵袭，RBCK1激活WNT/β‑catenin/GLUT1通路诱导HCC细胞迁移和有氧糖酵解依赖于PPARγ/PGC1α复合物的破坏。RBCK1促进PPARγ泛素化降解，RBCK1过表达增强WNT/β‑catenin转录活性，从而上调GLUT1介导的HCC细胞有氧糖酵解。不论在体内还是体外，RBCK1在肝癌细胞的发生和进展过程中都发挥着重要的作用，并且依据RBCK1在肝癌组织中的高表达结果，为今后肝癌患者的潜在靶向治疗提供强有力的手段。

摘要： 本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种失活泛素连接酶提高酵母虾青素产量的方法及重组菌株。该重组菌株由出发菌株红发夫酵母经遗传改造，敲除其中至少一个E3泛素连接酶获得，所得重组菌株提高红发夫酵母虾青素的产量。本发明通过敲除红发夫酵母E3泛素连接酶编码基因，消除E3泛素连接酶对虾青素合成的负调控作用，以提高虾青素产量。与对照菌株相比，E3泛素连接酶基因敲除菌株的虾青素细胞含量可以显著提高8.3倍。该方法可应用于构建虾青素高产菌株和提高虾青素产量。

摘要： 本发明提供了棉花SINA E3泛素连接酶基因在提高植物抗旱性中的应用，涉及植物分子生物学技术领域。所述棉花基因为GhSINA12基因，本发明实验研究发现当陆地棉受到干旱胁迫时，GhSINA12基因显著上调表达。同时，表明棉花GhSINA12转基因株系在干旱胁迫响应中具有正调控作用。利用病毒诱导的基因沉默技术沉默表达棉花GhSINA12基因，表明GhSINA12沉默株系在干旱胁迫中的耐旱性明显降低。本发明表明棉花GhSINA12基因可以响应干旱胁迫，在一定程度上提高了植株的抗旱性，并且可能通过依赖ABA通路来调控植物的抗旱性。本发明为调控目的植物应答干旱胁迫以及培育和筛选抗旱植物提供了新的方法。