丝氨酸蛋白酶抑制剂

摘要： 目的探讨人阳离子胰蛋白酶原(PRSS1)基因和丝氨酸蛋白酶抑制剂Kazal 1型(SPINK1)基因热点突变检测对遗传性胰腺炎(hereditary pancreatitis,HP)高危人群的诊断价值。方法采集2020年8月—2021年9月我院住院的高危HP患者的外周静脉血,提取标本DNA,进行PCR扩增,利用Sanger测序法检测HP高危患者外周血PRSS1和SPINK1基因的突变情况。对于测序中发现的非热点突变,以慢性胰腺炎遗传风险因素数据库中已知致病突变和可能致病突变认定为HP相关突变,数据库中未有的突变,在PubMed数据库和ClinVar数据库中查找是否有突变相关报道和致病性分析结果。结果6例患者中5例检测到突变,3例患者检测到PRSS1基因杂合性突变,分别为热点突变c.364 C>T和非热点突变c.455-33 C>T、c.235 G>A,其中c.455-33 C>T突变未见报道,c.235 G>A突变首次在中国人群中报道;2例患者检测到SPINK1杂合性突变,均为c.194+2 T>C突变。结论PRSS1和SPINK1基因热点突变检测对HP高危人群具有较高的诊断价值,适合在HP高危人群中大规模筛查,有利于HP患者精准诊断和早期干预。

摘要： 目的 探讨甲状腺功能亢进患者血清丝氨酸蛋白酶抑制剂(Vaspin)、血清孤独G蛋白偶联受体配体(Apelin)、血清趋化素(chemerin)水平与骨代谢的关系。方法 将100例甲状腺功能亢进患者按照骨密度分为骨量正常组30例、骨量减少组35例和骨质疏松组35例。比较3组患者的基线资料,血清Vaspin、血清Apelin、血清chemerin水平和骨代谢指标水平,分析血清Vaspin、血清Apelin、血清chemerin水平与骨代谢指标的关系。结果 3组患者性别、年龄和基础疾病情况比较,差异无统计学意义(P>0.05)。3组患者的25-羟基维生素D(25-OH VD)和Ⅰ型前胶原N-末端前肽(PINP)值随着骨密度的减小而减小,骨源性碱性磷酸酶(BALP)、血清骨钙素(BGP)和β-胶原特殊序列(β-CTX)值随着骨密度的减小而增大,差异均有统计学意义(P0.05);3组患者血清甲状旁腺激素(PTH)水平、Vaspin、Apelin和chemerin的值随骨密度的下降而升高,差异有统计学意义(P<0.05)。血清Vaspin、Apelin、chemerin表达水平与骨代谢指标均呈正相关(P<0.05)。结论 甲状腺功能亢进患者血清Vaspin、Apelin、chemerin水平变化与骨密度下降有一定的相关性,临床上可结合血清Vaspin、Apelin、chemerin水平来评估甲状腺功能亢进患者骨代谢状况,进而采取措施预防骨质疏松。

摘要： 长岛型掌跖角化病(Nagashima-type palmoplantar keratosis,NPPK)是亚洲人群中最常见的掌跖角化病,2013年Kubo等学者通过全外显子组测序发现其为丝氨酸蛋白酶抑制剂B7(SERPINB7)基因纯合或复合杂合突变所致,目前发现15种不同的致病性突变。NPPK的典型临床特征表现为超出掌跖皮肤掌缘的角化过度。NPPK远期预后良好,暂无标准化治疗方案,目前研究发现庆大霉素可以有效缓解NPPK患者皮肤角化过度和异味,然而仍需更多的临床研究去验证。

摘要： 【目的】克隆鉴定褐飞虱(Nilaparvata lugens)丝氨酸蛋白酶抑制剂基因Nlserpin2,探明其表达模式和生物学功能。【方法】基于褐飞虱转录组数据,利用PCR技术克隆Nlserpin2全长cDNA序列;利用生物信息学手段分析其核酸和蛋白序列特征;通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测其在褐飞虱不同发育时期(卵、1—5龄若虫和雌雄成虫)和初羽化雌成虫不同组织(脂肪体、肠道和卵巢)中的表达,以及病原真菌金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae)侵染褐飞虱5龄若虫不同时间后的诱导表达模式;利用RNAi技术探明Nlserpin2基因沉默对褐飞虱5龄若虫存活率及抵御金龟子绿僵菌侵染能力的影响。【结果】Nlserpin2 cDNA序列(GenBank登录号:KC355239)全长1209 bp,编码402个氨基酸,含有serpin蛋白超家族所具有的典型serpin结构域和RCL区,且N端包含一段由27个氨基酸残基组成的信号肽。系统进化树分析表明,Nlserpin2与半翅目其他昆虫的serpin聚为一支,其中与白背飞虱(Sogatella furcifera)serpin亲缘关系最近。qRT-PCR分析表明,Nlserpin2表达具有明显的时空特异性,其在褐飞虱成虫中的表达量显著高于其他龄期,且在雄成虫中表达量最高;卵和低龄若虫(1—3龄)中Nlserpin2的表达量显著低于高龄若虫(4—5龄),其中3龄若虫期最低;Nlserpin2在褐飞虱雌成虫肠道、脂肪体和卵巢中均有表达,且肠道中表达量显著高于脂肪体和卵巢。金龟子绿僵菌诱导2 d和3 d后Nlserpin2的表达量显著上调,但随着诱导时间的增加,Nlserpin2表达量呈回稳趋势。RNAi分析结果显示,显微注射dsNlserpin2可显著抑制Nlserpin2的表达水平。干扰Nlserpin2后褐飞虱5龄若虫的存活率以及对金龟子绿僵菌侵染的抵御能力均显著降低。与对照组相比,Nlserpin2干扰的褐飞虱在金龟子绿僵菌侵染5 d和8 d后的校正存活率分别下降了28.4%和31.0%,且均达到显著水平。【结论】Nlserpin2在褐飞虱防御病原真菌侵染过程中发挥重要作用,可作为应用RNAi技术防控褐飞虱的潜在靶标和褐飞虱高毒力病原真菌遗传改良的资源基因。

摘要： 目的评价一种两栖类动物皮肤分泌物中的多肽RanacyclinE(氨基酸序列SAPRGCWTKSYPPKPCK)的丝氨酸蛋白酶抑制活性。方法RanacyclinE由Fmoc固相化学合成后经基质辅助激光解析质谱鉴定,测定胰蛋白酶抑制常数Ki。结果RanacyclinE的酶抑制常数Ki值为95.96μM。结论天然生物肽RanacyclinE是一种潜在的丝氨酸蛋白酶抑制剂。

摘要： 丝氨酸蛋白酶抑制剂vaspin是近年发现的一种脂肪因子,主要由脂肪组织产生,能够调控机体的炎症反应、糖脂代谢和胰岛素抵抗等.vaspin通过调节多种信号通路参与炎症反应并调控炎症因子的表达,并与动脉粥样硬化、2型糖尿病、银屑病等疾病的发生发展密切相关.当机体患有动脉粥样硬化或糖尿病心肌病等疾病时,外源性vaspin减少炎症因子释放,减轻炎症反应,延缓疾病的进展.深入了解vaspin及其介导的与炎症相关通路,分析vaspin与炎症反应的关系,有助于为临床治疗提供新的方向.

摘要： 目的:研究益气健脾方联合复方左炔诺孕酮对多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)的临床疗效及对丝氨酸蛋白酶抑制剂(visceral adipose tissue-derived serine protease inhibitor,vaspin)和瘦素(leptin)的影响.方法:选取2019年2月至2020年4月期间我院收治的80例PCOS患者,采用随机数字表法分为对照组和观察组,每组40例.对照组给予复方左炔诺孕酮片,观察组在对照组的基础上加服益气健脾方,治疗3个月经周期后对比两组患者的疗效.分别于治疗前后检测两组患者的激素水平、糖脂代谢指标及血清vaspin和leptin的水平.观察并记录两组患者治疗期间发生的不良反应.结果:治疗后观察组总有效率高于对照组(P＜0.05).治疗后两组患者的睾酮(testosterone,T)、促黄体生成素(luteinizing hormone,LH)和LH/促卵泡素(Follicle stimulating hormone,FSH)均显著降低(P＜0.05),且观察组的T、LH和LH/FSH降低较为明显(P＜0.05).治疗后两组患者的空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、空腹胰岛素(fasting insulin,FINS)、Homa IR、总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyc-eride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)均显著降低,高密度脂蛋白(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)显著升高(P＜0.05),与对照组治疗后相比,观察组治疗后的FBG、FINS、Homa IR、TC、TG、LDL-C均较低,HDL-C较高(P＜0.05).治疗后vaspin和leptin均显著降低(P＜0.05),且观察组治疗后的vaspin和leptin的表达水平较低(P＜0.05).两组患者不良反应总发生率无统计学差异(P＞0.05).结论:益气健脾方联合复方左炔诺孕酮可有效提高对PCOS的临床疗效,改善患者的激素水平及糖脂代谢指标,降低血清vaspin和leptin的水平,且不增加不良反应发生率.

摘要： cqvip:多囊卵巢综合征(PCOS)是一种常见的内分泌代谢疾病,其好发于育龄女性,临床上主要表现为腹部肥胖、血脂异常、高雄激素症及月经紊乱等[1-2]。据了解,50%~90%的PCOS女性都具有明显的胰岛素抵抗(IR),作为一种对IR的代偿性反应,高胰岛素血症的发展继而与黄体生成素(LH)协同作用,从而作为一种卵巢卵泡细胞中的促性腺激素[3]。脂肪因子在IR、糖尿病及动脉粥样硬化的发病过程中起到重要作用。

摘要： 急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征(ALI/ARDS)是一种临床常见的呼吸系统疾病,主要以肺水肿、肺顺应性降低、肺上皮/内皮细胞损伤为病理学特征。目前认为各种病因引发的全身炎症反应综合征(SIRS)是ALI/ARDS发生发展的核心。SIRS状态下广泛激活的中性粒细胞可以迁移至肺组织中,并释放大量蛋白酶,包括:中性粒细胞丝氨酸蛋白酶(NSPs)、溶菌酶、髓过氧化物酶以及胶原蛋白酶等,进而诱发严重的肺组织损伤。其中,NSPs如中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)、组织蛋白酶G(CG)、蛋白酶3(PR3)以及中性粒细胞丝氨酸蛋白酶4(NSP4)等在ALI/ARDS的发病过程中发挥了重要作用。丝氨酸蛋白酶抑制剂(Serpins)可能通过作用于这些活性酶起到保护肺组织的作用,但具体机制目前尚未完全阐明。现从NSPs在ALI/ARDS炎症反应中的作用机制、Serpins的结构概述、Serpins在ALI/ARDS中的首要作用(如抑制NSPs活性)、Serpins在ALI/ARDS中的其他作用〔如抑制炎性因子的释放、调控细胞凋亡、对血管内皮细胞及肺表面活性蛋白-D(SP-D)的保护作用〕以及外源性Serpins在治疗ALI/ARDS的临床应用方面,探讨Serpins在ALI/ARDS病理机制中的作用,从而为ALI/ARDS的临床治疗提供新的思路和策略。

摘要： 主要研究猪带绦虫丝氨酸蛋白酶抑制剂Ts-serpin-1(WormBase:TsM_000065700)对宿主THP-1细胞的免疫调节作用。通过设计特异性引物和RT-PCR扩增技术,获得Ts-serpin-1编码序列,用qRT-PCR分析Ts-serpin-1基因在猪带绦虫成虫和中绦期幼虫的表达情况;构建pCold-Ts-serpin-1原核表达载体,诱导表达纯化重组蛋白Ts-serpin-1;用重组蛋白Ts-serpin-1处理THP-1细胞,采用qRT-PCR和ELISA方法检测Ts-serpin-1处理THP-1细胞后,各炎性细胞因子的变化情况。结果显示:获得的Ts-serpin-1目的基因长度为1149 bp,编码382个氨基酸,含有Serpin家族特有的反应中心环。Ts-serpin-1基因在猪带绦虫成虫和中绦期幼虫均表达,且成虫表达量显著高于幼虫。重组蛋白Ts-serpin-1的分子质量约为43 ku,可抑制THP-1细胞促炎性细胞因子IL-6、IL-1β、IL-12、TNF-α、IFN-γ和iNOS2的表达,促进抗炎性细胞因子IL-10和TGF-β的分泌表达。以上结果提示,Ts-serpin-1在寄生虫-宿主互作过程中可能发挥重要作用。

摘要： 本研究旨在初步了解丝氨酸蛋白酶抑制剂基因在扩展莫尼茨绦虫生长发育中的作用.试验采用分子克隆获得扩展莫尼茨绦虫丝氨酸蛋白酶抑制剂serpin基因部分片段,应用MEGA软件对其进行了进化分析.同时以beta-Tubulin基因作为内参基因,采用SYBR Green real-time RT-PCR方法检测了该基因在扩展莫尼茨绦虫四个不同发育阶段即头节、幼节、成节、孕节中的表达差异.最终克隆获得749 bp的serpin基因片段,进化分析表明,扩展莫尼茨绦虫serpin基因与多方棘球蚴serpin基因有较近的亲缘关系.标准曲线分析显示,sperin和beta-Tubulin基因的Ct值与阳性质粒的浓度均呈良好的线性关系,相关系数均大于0.99,溶解曲线分析表明,产物为特异的单峰,具有较高的特异性.同时实验结果显示serpin基因在虫体各发育阶段中的表达丰度存在差异,从高到低依次为孕节、头节、成节、幼节.由此初步推测,此基因可能在扩展莫尼茨绦虫虫卵发育为六钩蚴的过程中发挥一定作用.

摘要： 根据GenBank中旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制剂(TsSerPIN)基因序列设计引物,从中国河南猪旋毛虫分离株肌幼虫总RNA应用RT-PCR扩增获得目的基因片段,克隆到pMD-18T载体并测序鉴定。对重组质粒pMD-18T-TsSerPIN进行限制性酶切,获取目的基因片段后连接到表达质粒载体pET30a,构建重组表达质粒pET30a-TsSerPIN,转化大肠杆菌DH5a,筛选阳性克隆,经限制性酶切分析、PCR及测序鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3),以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表达产物,对表达产物纯化后用Western-blot方法和ELISA鉴定TsSetPIN重组蛋白的抗原性。构建的重组表达质粒pET30a-TsSerPIN阳性克隆经PCR与双酶切鉴定,与预期结果一致,测序鉴定无基因突变,开放阅读框正确。含有pET30a-TsSerPIN重组表达质粒的大肠杆菌BL21(DE3)诱导后得到了高效表达,SDS-PAGE显示表达产物分子量约为42.5kDa,而且主要以包涵体形式存在。Western-blot和ELISA结果表明TsSerPIN重组抗原可以被旋毛虫感染猪阳性血清特异性识别,具有良好的抗原性,可以作为猪旋毛虫病免疫诊断的候选抗原。

摘要： 激肽释放酶是调节炎性过程中最重要的酶系统之一.抑肽酶作为一种有效的抗纤维蛋白溶解方法,对于一个成年人来说,足量抑肽酶治疗近似于6百万KIU,大约血浆浓度为200KIU每毫升.抑肽酶的血浆水平达到4.3umol/L,就达到抑制从白细胞释放的激肽释放酶、胰蛋白酶、纤维蛋白溶酶和其他一些炎性介质的浓度范围.本报道重点介绍一些丝氨酸蛋白酶和各种炎性过程在缺血性损伤中的相互作用.

摘要： 目的:构建重组人Bikunin结构域Ⅰ(rhBikunin dominⅠ)真核表达载体,并检测在毕赤酵母X-33中的表达. 方法:将含有人Bikunin dominⅠ(hBikunin dominⅠ)的质粒为模版,通过PCR的方法扩增所需的DNA目的片段,与毕赤酵母表达载体pPICZαC相连接,构建重组质粒pPICZαC-hBikunin domainⅠ,DNA的测序分析.然后重组线性质粒电转化X-33毕赤酵母感受态细胞,经PCR、活力以及SDS-PAGE鉴定分析表达产物. 结果:测序正确,琼脂糖凝胶电泳结果显示在162bp处出现目的条带,胰蛋白酶抑制活力测定确定rhBikunin domainⅠ具有活力,SDS-PAGE鉴定在6000处出现蛋白条带. 结论:本研究在毕赤酵母X-33中成功地重组表达hBikunin dominⅠ.

摘要： 目的:构建重组人Bikunin结构域Ⅰ(rhBikunin dominⅠ)真核表达载体,并检测在毕赤酵母X-33中的表达. 方法:将含有人Bikunin dominⅠ(hBikunin dominⅠ)的质粒为模版,通过PCR的方法扩增所需的DNA目的片段,与毕赤酵母表达载体pPICZαC相连接,构建重组质粒pPICZαC-hBikunin domainⅠ,DNA的测序分析.然后重组线性质粒电转化X-33毕赤酵母感受态细胞,经PCR、活力以及SDS-PAGE鉴定分析表达产物. 结果:测序正确,琼脂糖凝胶电泳结果显示在162bp处出现目的条带,胰蛋白酶抑制活力测定确定rhBikunin domainⅠ具有活力,SDS-PAGE鉴定在6000处出现蛋白条带. 结论:本研究在毕赤酵母X-33中成功地重组表达hBikunin dominⅠ.

摘要： 目的:构建重组人Bikunin结构域Ⅰ(rhBikunin dominⅠ)真核表达载体,并检测在毕赤酵母X-33中的表达. 方法:将含有人Bikunin dominⅠ(hBikunin dominⅠ)的质粒为模版,通过PCR的方法扩增所需的DNA目的片段,与毕赤酵母表达载体pPICZαC相连接,构建重组质粒pPICZαC-hBikunin domainⅠ,DNA的测序分析.然后重组线性质粒电转化X-33毕赤酵母感受态细胞,经PCR、活力以及SDS-PAGE鉴定分析表达产物. 结果:测序正确,琼脂糖凝胶电泳结果显示在162bp处出现目的条带,胰蛋白酶抑制活力测定确定rhBikunin domainⅠ具有活力,SDS-PAGE鉴定在6000处出现蛋白条带. 结论:本研究在毕赤酵母X-33中成功地重组表达hBikunin dominⅠ.

摘要： 目的:构建重组人Bikunin结构域Ⅰ(rhBikunin dominⅠ)真核表达载体,并检测在毕赤酵母X-33中的表达. 方法:将含有人Bikunin dominⅠ(hBikunin dominⅠ)的质粒为模版,通过PCR的方法扩增所需的DNA目的片段,与毕赤酵母表达载体pPICZαC相连接,构建重组质粒pPICZαC-hBikunin domainⅠ,DNA的测序分析.然后重组线性质粒电转化X-33毕赤酵母感受态细胞,经PCR、活力以及SDS-PAGE鉴定分析表达产物. 结果:测序正确,琼脂糖凝胶电泳结果显示在162bp处出现目的条带,胰蛋白酶抑制活力测定确定rhBikunin domainⅠ具有活力,SDS-PAGE鉴定在6000处出现蛋白条带. 结论:本研究在毕赤酵母X-33中成功地重组表达hBikunin dominⅠ.

摘要： 目的:构建重组人Bikunin结构域Ⅰ(rhBikunin dominⅠ)真核表达载体,并检测在毕赤酵母X-33中的表达. 方法:将含有人Bikunin dominⅠ(hBikunin dominⅠ)的质粒为模版,通过PCR的方法扩增所需的DNA目的片段,与毕赤酵母表达载体pPICZαC相连接,构建重组质粒pPICZαC-hBikunin domainⅠ,DNA的测序分析.然后重组线性质粒电转化X-33毕赤酵母感受态细胞,经PCR、活力以及SDS-PAGE鉴定分析表达产物. 结果:测序正确,琼脂糖凝胶电泳结果显示在162bp处出现目的条带,胰蛋白酶抑制活力测定确定rhBikunin domainⅠ具有活力,SDS-PAGE鉴定在6000处出现蛋白条带. 结论:本研究在毕赤酵母X-33中成功地重组表达hBikunin dominⅠ.

摘要： 本发明涉及一种式I或式Ia化合物或其药学上可接受的盐，其抑制丝氨酸蛋白酶的活性，特别是抑制丙型肝炎病毒NS3-NS4A蛋白酶的活性。象这样，它们通过干扰丙型肝炎病毒的生活周期来起作用，可用作抗病毒剂。本发明还涉及包含所述化合物的药学可接受的组合物，其离体使用或对遭受HCV感染的患者给药，和制备这些化合物的方法。本发明还涉及通过给患者服用包含本发明化合物的药物组合物来治疗HCV感染的方法。

摘要： 本发明提供了制造和使用具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐的方法；其中n是在1和2之间的整数，含1和2；m是在0和2之间的整数，含0和2；X选自由CH或N组成的组；R

摘要： 本发明提供了作为人纤溶酶和血浆激肽释放酶有效抑制剂的化合物，并且所述化合物能用于预防失血，以及作为纤维蛋白粘合剂的成分。本发明进一步提供了制备和使用所述化合物的方法。

摘要： 本发明涉及一种式I或式Ia化合物或其药学上可接受的盐，其抑制丝氨酸蛋白酶的活性，特别是抑制丙型肝炎病毒NS3-NS4A蛋白酶的活性。象这样，它们通过干扰丙型肝炎病毒的生活周期来起作用，可用作抗病毒剂。本发明还涉及包含所述化合物的药学可接受的组合物，其离体使用或对遭受HCV感染的患者给药，和制备这些化合物的方法。本发明还涉及通过给患者服用包含本发明化合物的药物组合物来治疗HCV感染的方法。

摘要： 本发明涉及一种式I或式Ia化合物或其药学上可接受的盐，其抑制丝氨酸蛋白酶的活性，特别是抑制丙型肝炎病毒NS3-NS4A蛋白酶的活性。象这样，它们通过干扰丙型肝炎病毒的生活周期来起作用，可用作抗病毒剂。本发明还涉及包含所述化合物的药学可接受的组合物，其离体使用或对遭受HCV感染的患者给药，和制备这些化合物的方法。本发明还涉及通过给患者服用包含本发明化合物的药物组合物来治疗HCV感染的方法。

摘要： 本发明涉及一种式I或式Ia化合物或其药学上可接受的盐，其抑制丝氨酸蛋白酶的活性，特别是抑制丙型肝炎病毒NS3－NS4A蛋白酶的活性。像这样，它们通过干扰丙型肝炎病毒的生活周期来起作用，可用作抗病毒剂。本发明还涉及包含所述化合物的药学可接受的组合物，其离体使用或对遭受HCV感染的患者给药，和制备这些化合物的方法。本发明还涉及通过给患者服用包含本发明化合物的药物组合物来治疗HCV感染的方法。

摘要： 本发明提供了制造和使用具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐的方法；其中n是在1和2之间的整数，含1和2；m是在0和2之间的整数，含0和2；X选自由CH或N组成的组；R

摘要： 本发明提供了作为人纤溶酶和血浆激肽释放酶有效抑制剂的化合物，并且所述化合物能用于预防失血，以及作为纤维蛋白粘合剂的成分。本发明进一步提供了制备和使用所述化合物的方法。

摘要： 大环脯氨酸衍生的HCV丝氨酸蛋白酶抑制剂。本发明公开了式I化合物或其药学上可接受的盐、酯或前药：式I化合物抑制丝氨酸蛋白酶活性，尤其是丙型肝炎病毒(HCV)NS3‑NS4A蛋白酶的活性。因此，本发明化合物干扰丙型肝炎病毒的生命周期并且也可用作抗病毒剂。本发明进一步涉及包含上述化合物的药物组合物，其用于给予患有HCV感染的受试者。本发明还涉及通过给予包含本发明化合物的药物组合物来治疗受试者的HCV感染的方法。

摘要： 本发明提供了一种生产能有效调节丝氨酸蛋白酶活性的重组丝氨酸蛋白酶抑制剂的方法。同时也提供了能够调节丝氨酸蛋白酶活性的组成以及使用这些组成来调节细胞中的发炎过程。