东北林蛙

摘要： 为了解环境温度对东北林蛙(Rana dybowskii)和黑龙江林蛙(R.amurensis)体温调节能力的影响,研究了2种林蛙在不同时间(07:00、10:00、13:00、16:00、19:00)、室温及梯度变温(10、12、14、16、18、20°C)等条件时的体温变化规律。结果表明:2种林蛙体温调节均无显著的性别差异,林蛙体温与环境温度的变化趋势一致。环境温度最高时,2种林蛙的体温也达到最高,体温与环境温度显著正相关;体温的变化幅度、回归方程的斜率和等温点3个参数可以作为判断体温调节能力的重要指标。东北林蛙的体温日变化幅度大于黑龙江林蛙。体温与环境温度的线性回归分析表明,东北林蛙斜率的绝对值大于黑龙江林蛙,东北林蛙的等温点低于黑龙江林蛙。与黑龙江林蛙相比,东北林蛙的体温波动较大,其体温调节能力较低。

摘要： 为确定吉林市某林蛙养殖场发病东北林蛙的病因,本试验从患病东北林蛙腹腔和脏器中分离得到5株细菌,命名为R1~R5。通过溶血活性试验、动物回归试验和斑马鱼致病性试验,确定菌株R5具有较强的致病性,可使东北林蛙和斑马鱼致病死亡;通过生理生化和分子生物学鉴定方法,初步鉴定R5菌株为嗜水气单胞菌;通过分子生物学方法进行16S rDNA和gyrB管家基因系统进化树分析,R5菌株与嗜水气单胞菌聚类,且同源性在98%以上;致病性和毒力基因携带情况分析显示,R5菌株携带气溶素(aer)、细胞毒性肠毒素(act)、黏附素(Aha)、丝氨酸蛋白酶(ser)、脂肪酶(Lip)、密度感应系统调控基因(LuxS)这6种毒力因子;药敏试验结果显示,R5菌株对庆大霉素、四环素、氟苯尼考、氧氟沙星、环丙沙星、多黏菌素B、头孢拉啶、头孢噻肟、头孢吡肟、复方新诺明敏感,对丁胺卡那、氯霉素中介,对氨苄西林具有一定的耐药性。本试验结果可为东北林蛙嗜水气单胞菌的防治提供一定参考。

摘要： 本文对东北林蛙不同生物学时期的人工养殖技术、疾病防控与管理进行综述,并提出东北林蛙养殖产业发展对策与建议。

摘要： 为了降低东北林蛙幼蛙入林生活期间的死亡率,利用2日龄蝇蛆和蟋蟀若虫作为辅助喂养东北林蛙的饵料,分不同喂养处理组对东北林蛙存活情况进行研究。结果表明:人工辅助投放活饵有利于降低东北林蛙死亡率,以投放蝇蛆和蟋蟀混喂处理组效果最佳。

摘要： 目的 建立基于分子生物学鉴定林蛙油真伪的检测方法.方法 采集成年雌蛙卵巢组织,经风干制成林蛙油,通过改良方法提取总DNA,以已报道的东北林蛙、黑龙江林蛙、黑斑侧褶蛙、牛蛙和中华蟾蜍的COI及cytB基因为模板,设计引物探针.结果 PCR扩增产物测序结果中仅东北林蛙获得230 bp左右产物,且序列比对与东北林蛙COI序列一致性为99％左右,说明实验对象林蛙为东北林蛙.结论 利用线粒体基因独特的优势,应用PCR扩增东北林蛙COI基因,通过测序确定东北林蛙亚种,建立了东北林蛙亚种及其产品的鉴别方法.

摘要： 东北林蛙(Rana dybowskii)是我国历史悠久的药用动物,其干燥输卵管——哈蟆油为著名滋补药材,有极高的经济价值.由于药用及保健需求的不断增加,东北林蛙的价格逐年上升.近年来,东北林蛙的养殖产业快速发展,且有南移的趋势,但养殖过程中所遇问题颇多,成功率较低.本文对东北林蛙的养殖分类、养殖方式及疾病防治进行综述,以期为东北林蛙的养殖和应用提供参考.

摘要： 对吉林省柳河县林蛙养殖场试验区内东北林蛙适生环境昆虫物种多样性进行了调查,掌握了虫口种类情况,为试验区繁育低位昆虫、提高载蛙量提供依据.鉴定有6目13科17种,辛普森多样性指数为0.86.其中,普通伊蚊优势度指数最高,为33.18;麻皮蝽最低,仅有0.22.

摘要： 应用本研究组开发的15个微卫星位点分析长白山南部东北林蛙种群遗传变异和种群动态.采集吉林长白山南部东北林蛙样本11个,辽宁辽东山地样本17个,辽宁千山山地样本8个.研究结果表明,长白山南部东北林蛙种群具有中等水平遗传多样性,三个种群无显著遗传分化,遗传变异主要来自于个体间;种群异质化程度有所提高,存在一定近交现象;在100 km距离内东北林蛙呈现正的空间遗传相关性;长白山南部东北林蛙经历过短期瓶颈效应.在种质资源保护对策上应将本区东北林蛙种群作为一个保护单元.

摘要： 内蒙古自治区农牧厅、辽宁省农业农村厅、吉林省农业农村厅、黑龙江省农业农村厅:根据我部与国家林业和草原局联合下发的《关于进一步规范蛙类保护管理的通知》(农渔发〔2020〕15号,以下简称《通知》),中国林蛙(东北林蛙)和黑龙江林蛙(以下均简称“林蛙”)明确由渔业主管部门按照水生动物管理。林蛙管理划分调整以来,各地渔业主管部门积极与林草部门沟通协调,做好工作交接及后续管理工作,总体进展比较顺利,但在实际工作中也存在一些政策不清、管理要求不明的问题。为进一步加强对林蛙保护和产业发展的指导,现就有关事项通知如下。

摘要： 应用本研究组开发的15个微卫星位点分析长白山南部东北林蛙种群遗传变异和种群动态。采集吉林长白山南部东北林蛙样本11个,辽宁辽东山地样本17个,辽宁千山山地样本8个。研究结果表明,长白山南部东北林蛙种群具有中等水平遗传多样性,三个种群无显著遗传分化,遗传变异主要来自于个体间;种群异质化程度有所提高,存在一定近交现象;在100 km距离内东北林蛙呈现正的空间遗传相关性;长白山南部东北林蛙经历过短期瓶颈效应。在种质资源保护对策上应将本区东北林蛙种群作为一个保护单元。

摘要： 目的：建立东北林蛙皮肤分泌物中多肽类的反相高效液相色谱分析方法。rn 方法：将东北林蛙皮肤分泌物冻干粉用0.1％TFA水溶液溶解，通过SunfireTM C18(5urn 4.6*150mm)色谱分析柱进行分析分离。rn 结果：确定的最佳液相色谱检测条件为：检测波长216nm和280nm;流动相为乙腈：甲醇：水/TFA=9％：1％：90％；流速0.5ml/min；进样量20ul。rn 结论：通过实验证实，本方法简便、有效、稳定、重复性好，是一种较为理想的多肽混合物分离法。

摘要： 筛选对流感病毒具有抑制作用的东北林蛙皮肤抗菌肽，分析其作用机制。方法建立三种给药模式：1)先感染病毒后加多肽的预防组；2)先加多肽后感染病毒的治疗组；3)病毒与多肽共同孵育后作用的杀灭组，采用MTT法观察抗菌肽对流感病毒感染MDCK细胞的保护作用。结果抗菌肽多表现出抑流感病毒活性，且杀灭组抑病毒的活性最强。结论东北林蛙皮肤抗菌肽具有体外抗流感病毒作用，其作用机制为直接与病毒粒子包膜结合将其灭活。

摘要： 蛙皮抗菌肽是由蛙科两栖动物皮肤分泌的有抗菌、抗癌等多种功能的小分子多肽。本研究利用质谱技术并结合cDNA克隆方法对东北林蛙皮肤分泌物进行高通量筛选，人工合成得到的新型抗菌肽，对其抗菌活性和溶血活性进行研究。结果表明，一只东北林蛙的皮肤可同时表达14种抗菌肽，Dybowsikin-1 CYDa的氨基酸组成及顺序与其他蛙科动物抗菌肽明显不同，为新型抗菌肽。生物学功能分析显示，Dybowsikin-1CYDa具有明显的抗大肠杆菌、金黄色葡萄球菌活性和低溶血活性，最小抑菌浓度分别为3μM和6μM。本研究工作显示，Dybowsikin-1 CYDa具有开发成为新一代抗菌药物的应用前景。

摘要： 中国林蛙是我国东北名贵的集药用、食用与保健于一身的经济蛙类，其皮肤作为与栖息环境直接接触的器官，在自然进化过程中逐渐形成了抵御病原微生物侵略的天然防御系统。

摘要： 目的：根据历史文献资料记载、近代国内外学者关于林蛙属的研究报道及我们所研究的内容，探讨哈蟆油的原动物基源。方法：综合分析文献资料报道，从史书记载、形态学、染色体组型、银带及同工酶电泳、基因水平等方面，探讨哈蟆油的原动物基源。结果与结论：名贵中药材哈蟆油的原动物基源应为东北林蛙，其分类阶元为我国蛙类的一有效物种。

摘要： 本发明公开了一种东北林蛙开放式栖息生境，包括：成体越冬场；成体产卵育幼场和幼体避难场；成体觅食场以及幼体成体迁移通道，其连接成体越冬场、低洼水坑或池塘和所述成体觅食场，以上各场地相互配合，有利于提高野生东北林蛙产卵成功率、蛙卵孵化率、幼蛙成活率等，同时营造出有利于东北林蛙觅食、避害以及越冬休眠的小生境，不仅有助于野生东北林蛙数量的增加和恢复，还有利于改善天然河流溪沟及其岸坡的自然环境。本发明还公开了一种东北林蛙开放式栖息生境的构建方法，为成功构建开放式栖息生境提供技术参考。

摘要： 本发明公开了一种东北林蛙提早人工繁育方法，主要包括温室的构建，温室内产卵孵化池和室外蝌蚪饲养池的构建，种蛙的选择，跌卵，孵化，蝌蚪培育等步骤。本方法将林蛙繁育分为2个阶段，第一阶段在温室内饲养，通过温室的加温作用，提供适宜温度使种蛙产卵；通过控制温室内温度，同时采取水温的调节和控制技术，使卵和蝌蚪先期在温室内孵化和饲养，当外界温度适宜时将蝌蚪移送到室外孵化池内饲养。本发明提供的方法可提前15天批量获得林蛙蝌蚪和幼蛙，操作简便，孵化率好，蝌蚪和幼蛙体重大且体质好，雌性比例高，变态率高。

摘要： 一种利用复合酶生产活性东北林蛙胶原蛋白低聚肽的方法涉及胶原蛋白制备领域，该方法包括：1)将干东北林蛙皮浸灰、软化、过夜，水洗至中性；2)加入复合酶，酶解2～3小时，加热至85°C，灭活20分钟；3)活性炭脱色，超滤膜精制、浓缩，真空冷冻干燥，得到小分子活性林蛙胶原蛋白低聚肽。本发明的方法可以大幅度降低成本，酶解率为90％以上，提取率在30％以上同比增长5％左右，酶解后提取纯度可达90％-97％，极大地减少对环境的污染并简化操纵工序，高效，环保。

摘要： 本发明涉及从东北林蛙皮肤中分离出的抗菌肽及其在抗菌药物中的应用。采用的技术方案是：两条抗菌肽为从两栖类动物东北林蛙皮肤分泌物中分离得到的序列特异性单链多肽，分子量分别为1459.9和2184.2，等电点分别为9.70和12.60，氨基酸全序列分别为SEQIDNO.1和SEQ ID NO.2。制备方法是收集东北林蛙皮肤分泌物，离心去除沉淀、冷冻干燥后，G50和G25分子筛层析、高压液相反相柱层析分离纯化后得到单一组分。本发明可以在制备治疗微生物感染疾病药物中应用。

摘要： 本发明提供一种鉴定东北林蛙遗传性别的分子标记。其主要特征是，提取东北林蛙脚趾组织的基因组，以提取的基因组DNA为模板，以含SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示序列的引物对进行PCR扩增反应。通过14%的聚丙烯酰胺凝胶对PCR扩增产物进行电泳检测，结果具有SEQ ID NO:3所示核苷酸序列（222bp）对应条带的个体为遗传雄性东北林蛙，缺失SEQ ID NO:3所示核苷酸序列对应条带的个体为遗传雌性东北林蛙。本发明其优点是，获得了东北林蛙遗传雄性特异性DNA分子标记，可快速、简便、准确地鉴定东北林蛙的遗传性别。本发明可获得伪雄个体，即生理为雄性，但遗传为雌性的个体。利用伪雄个体与雌性个体交配，其后代生理雌性的比例高达90%以上，可显著提高东北林蛙养殖的经济效益。

摘要： 一种鉴定东北林蛙遗传性别的分子标记及其应用，它涉及分子标记领域。为了解决目前无法对东北林蛙遗传性别进行鉴定的问题，本发明提取东北林蛙脚趾组织的基因组，以提取的基因组DNA为模板，以含SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示序列的引物对进行PCR扩增反应。通过14%的聚丙烯酰胺凝胶对PCR扩增产物进行电泳检测，扩增结果具有SEQ ID NO:3所示核苷酸序列（261 bp）对应条带的个体为遗传雄性东北林蛙，缺失SEQ ID NO:3所示核苷酸序列对应条带的个体为遗传雌性东北林蛙。该发明可鉴定伪雄个体，即生理为雄性，但遗传为雌性的个体。利用伪雄个体与雌性个体交配，产生的后代，生理雌性比例高达90%以上。能实现对东北林蛙养殖群体性别控制，提高东北林蛙养殖的经济效益。

摘要： 本发明公开了一种东北林蛙开放式栖息生境，包括：成体越冬场；成体产卵育幼场和幼体避难场；成体觅食场以及幼体成体迁移通道，其连接成体越冬场、低洼水坑或池塘和所述成体觅食场，以上各场地相互配合，有利于提高野生东北林蛙产卵成功率、蛙卵孵化率、幼蛙成活率等，同时营造出有利于东北林蛙觅食、避害以及越冬休眠的小生境，不仅有助于野生东北林蛙数量的增加和恢复，还有利于改善天然河流溪沟及其岸坡的自然环境。本发明还公开了一种东北林蛙开放式栖息生境的构建方法，为成功构建开放式栖息生境提供技术参考。

摘要： 一种东北林蛙延长休眠期的方法，包括下述步骤：1、修建一个90m

摘要： 本发明是东北林蛙性别控制及繁育技术，其特征是，将人工孵化蝌蚪水池中的水温，控制在20-25摄氏度范围内，蝌蚪孵化时间短、速度快、孵化出公蛙的比率高；将人工孵化蝌蚪水池中的水温，控制在10-20摄氏度范围内，孵化出母蛙的比率高，将人工孵化蝌蚪水池中的水温，始终保持在15-18摄氏度范围内，蝌蚪生长发育十分迅速，母蛙孵化率可达到60-70％，并且孵化时间适宜；降低水温的方法，一是加大引进外来的流水量；二是向池内倾斜方式，用玉米秆等高稞作物搭起遮阳棚，来减少阳光对水面的直接照射，以此来降低水池中的水温。该东北林蛙性别控制及繁育技术，具有科学控制水温，使蝌蚪既能快速发育生长，又能有效控制林蛙雌雄比例，使变态的幼蛙上山后，取食能力强、活动迅速、幼蛙成活率高的特点。

摘要： 本发明涉及一种东北林蛙皮肤分泌的抗菌肽及其编码序列和应用。所述的抗菌肽氨基酸序列为序列表SEQIDNo.1所示，分子量为3000.6道尔顿，等电点为9.7。该抗菌肽基因完整DNA序列见序列表SEQIDNo.2所示，该抗菌肽可通过氨基酸合成仪进行制备，其具有显著的抗菌活性，且不会对哺乳动物的红细胞产生溶血作用，可用于开发制备抗菌药物。