柯萨奇B3病毒

摘要： 目的:探究抑制芳基烃受体(aryl hydrocarbon receptor,AhR)对柯萨奇B3病毒(coxsackievirus 3,CVB3)诱导的小鼠病毒性心肌炎(viral myocarditis,VMC)心肌损伤及细胞焦亡的影响。方法:将60只BALB/c小鼠随机分为对照组(Control)、AhR抑制剂组(AhR inhibitor)、模型组(VMC)、VMC+AhR抑制剂组(VMC+AhR inhibitor),每组15只。VMC组和VMC+AhR抑制剂组小鼠腹腔注射CVB3建立心肌炎模型后,AhR抑制剂组和VMC+AhR抑制剂组小鼠腹腔注射AhR抑制剂CH223191(10mg/kg)。10d后,通过高分辨率Vevo2100小动物超声成像系统检测各组小鼠心脏超声指标,ELISA法检测血清心肌肌钙蛋白l(cardiac troponin l,cTnl)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和IL-18的含量,苏木精-伊红(HE)染色观察心肌组织病理学变化,TUNEL染色检测心肌组织细胞的凋亡情况,免疫组织化学染色测定心肌组织NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor pyrin domain containing 3,NLRP3)与消皮素D(Gasdermin-D,GSDMD)的阳性表达水平,实时荧光定量PCR和Western blot检测心肌组织焦亡相关蛋白含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cysteinyl aspartate specific proteinase,caspase-1)、细胞凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC)、NLRP3及GSDMD在mRNA和蛋白上的表达水平。结果:与对照组比较,VMC组小鼠FS和EF下降,LVIDd和LVAWd增加,血清中cTnl、TNF-α、IL-1β以及IL-18的含量均上升,心肌组织内细胞排列紊乱,伴随大量炎性细胞浸润,心肌组织内TUNEL阳性率升高,NLRP3阳性表达率和GSDMD阳性表达率也升高,caspase-1、ASC、NLRP3及GSDMD的mRNA相对表达量和蛋白相对表达量均上调,差异均具有统计学意义(P<0.05);与VMC组比较,VMC+AhR抑制剂组小鼠FS和EF升高,LVIDd和LVAWd减小,血清中cTnl、TNF-α、IL-1β以及IL-18的含量均降低,心肌组织病理损伤明显减轻,心肌组织内TUNEL阳性率下降,同时,NLRP3阳性表达率和GSDMD阳性表达率均降低,caspase-1、ASC、NLRP3及GSDMD的mRNA相对表达量和蛋白相对表达量均下调,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:抑制AhR对CVB3诱导的小鼠病毒性心肌炎起保护作用,能够减轻心肌组织损伤,并抑制心肌细胞焦亡。

摘要： 目的探讨人源抗菌肽LL-37对病毒性心肌炎(viral myocarditis,VMC)小鼠病毒复制和炎症反应的影响及其可能的分子机制。方法将48只BALB/c小鼠随机分成4组:正常对照组(Blank)、模型组(VMC)、LL-37低剂量组(LL-37-L)和LL-37高剂量组(LL-37-H),每组12只。除Blank组外,其他组均采用腹腔注射柯萨奇B3病毒(Coxsackie virus B3,CVB3)病毒液构建VMC模型小鼠。于抗菌肽LL-37干预第7天后将小鼠处死并取材。采用苏木素伊红染色观察心肌组织病理学变化;全自动生化仪检测血清心肌损伤标志物心肌肌钙蛋白I(cTnI)、肌红蛋白(Mb)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)浓度;50%终点法测定心肌组织CVB3病毒滴度;实时定量聚合酶链反应法检测心肌组织中CVB3 RNA表达水平;酶联免疫吸附试验法检测心肌组织炎症因子白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)浓度;Western blot法检测心肌组织TLR-4、MyD88和p-NF-κB p65蛋白表达水平。结果与Blank组比较,VMC组小鼠心肌组织出现明显炎性损伤,且心肌病理积分显著增加[(3.18±0.33)分vs(0.00±0.00)分,P0.05)。结论人源抗菌肽LL-37可抑制VMC小鼠心肌组织中CVB3病毒复制和炎症反应,改善心肌损伤,其机制可能与TLR-4/NF-κB通路的抑制有关。

摘要： [目的]探讨趋化因子12(chemokine 12,CXCL12)/趋化因子受体4(chemokine receptor 4,CXCR4)生物轴在清心饮含药血清抑制柯萨奇B3病毒(Coxsackie virus B3,CVB3)感染后心脏微血管内皮细胞(cardiac microvascular endothelial cells,CMVECs)发生内皮间充质转分化(endothelial-mesenchymal transition,EndMT)过程中的作用。[方法]取生长状态良好的CMVECs设计为正常对照组、模型组、CXCR4拮抗剂组、清心饮组和清心饮+CXCR4拮抗剂组。除正常对照组用含10%胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)的杜尔伯克改良伊格尔培养基(Dulbecco’s modification of Eaglews medium,DMEM)培养外,其余各组CMVECs先用CVB3培养基感染2 h,后弃去CVB3培养基,改为普通培养。通过细胞计数试剂(cell counting kit-8,CCK8)检测各组细胞活力,免疫荧光(immunofluorescence,IF)、免疫印迹和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,Real-time qPCR)等实验方法检测内皮细胞标志物血小板-内皮细胞黏附分子(platelet endothelial cell adhesion molecule-1,PECAM-1/CD31)、间充质细胞标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、CXCL12和CXCR4的蛋白及基因表达。[结果]与正常对照组比较,模型组CD31表达下降(P0.05),清心饮组CXCL12表达下降(P<0.05)。与清心饮组比较,清心饮+CXCR4拮抗剂组CD31的表达增强(P<0.05),α-SMA、CXCL12和CXCR4表达下降(P<0.01,P<0.05)。[结论] CXCL12/CXCR4生物轴参与了CVB3感染后CMVECs发生EndMT的过程,拮抗CXCL12/CXCR4生物轴能够明显增强清心饮对该过程的抑制。

摘要： 目的:研究牡荆素对柯萨奇B3病毒(CVB3)诱导的病毒性心肌炎心肌细胞凋亡和炎症的影响及其可能作用机制.方法:体外培养人心肌细胞AC-16,将细胞分为5组:正常组、病毒组、牡荆素低剂量组(10 mg/kg)、牡荆素中剂量组(30 mg/kg)和牡荆素高剂量组(50 mg/kg),正常组常规培养,病毒组和牡荆素组经CVB3诱导构建病毒性心肌炎细胞模型,牡荆素各剂量组分别给予不同剂量牡荆素处理:MTT法检测细胞增殖活性;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;Western blotting检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及p-p38MAPK蛋白的表达;ELISA法检测细胞培养液中白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达水平.结果:与正常组比较,病毒组心肌细胞增殖活力降低,凋亡率升高,细胞中Bcl-2蛋白相对表达水平降低,Bax蛋白相对表达水平升高,细胞培养液中IL-1β和TNF-α水平升高,细胞中p-p38MAPK蛋白相对表达量升高(P＜0.05);与病毒组比较,牡荆素低、中、高剂量组心肌细胞增殖活力增强,细胞中Bcl-2蛋白相对表达水平升高,凋亡率、Bax蛋白相对表达水平、细胞培养液中IL-1β和TNF-α水平、p-p38MAPK蛋白均降低(均P＜0.05),并具有一定的剂量依赖性.结论:牡荆素能够抑制CVB3诱导的心肌细胞凋亡和炎症,促进细胞增殖,其作用机制可能与抑制p38MAPK信号通路激活有关.

摘要： 柯萨奇病毒B3是一种常见的致病病毒,大量的临床和实验研究证明,中医药在防治柯萨奇病毒B3方面具有其独特的优势和良好的应用前景.该文从单味药及有效成分、中药复方和中药注射液抗柯萨奇病毒B3实验研究及展望等4个方面论述了近10年来国内外中抗柯萨奇病毒B3实验研究概况,希望能为中医药抗柯萨奇病毒B3的相关研究提供一定的参考和思路.

摘要： 目的:研究柯萨奇B3病毒(CVB3)感染乳鼠心肌细胞miRNA378和miRNA378*表达的作用.方法:原代培养乳鼠心肌细胞分3组(n=6):对照组(正常细胞)、CVB感染组(正常细胞+CVB3)、黄芪总黄酮组(正常细胞+CVB3+黄芪总黄酮).CVB感染组感染CVB3,黄芪总黄酮组感染CVB3同时给予黄芪总黄酮20 mg/L.采用免疫组化方法检测乳鼠心室肌细胞α-SMA蛋白,实时荧光定量PCR技术检测各组心肌细胞miRNA378及miRNA378*表达.结果:①与对照组相比较,CVB感染组心肌细胞miRNA378及miRNA378*表达明显减少(P＜0.01);②与CVB感染组比较,黄芪总黄酮心肌细胞miRNA378及miRNA378*表达明显增加(P＜0.0l).结论:黄芪总黄酮可以减少CVB3感染心肌细胞miRNA378及miRNA378*表达.

摘要： 目的:拟利用过表达calpain内源性抑制剂calpastatin的转基因小鼠(Tg-CAST小鼠),观察calpain在柯萨奇B3病毒导致的病毒性心肌炎的作用,并探讨其可能机制.方法:以CVB3直接感染Tg-CAST小鼠建立病毒性心肌炎模型，同时设立相应对照组。观察心重/体重比值变化情况，行HE染色观察心肌组织炎症细胞浸润情况并进行病理学评分，同时检测外周血心肌损伤标志物CK-MB,cTnI的水平。结果：Tg-CAST小鼠心肌组织中calpastatin表达上调，calpain活性受到明显抑制。与病毒感染野生型对照相比，CVB3感染的Tg-CAST小鼠心重/体重比值降低，心肌组织炎症浸润减轻，对应心肌病理评分下降，同时外周血心肌损伤标志物CK-MB,cTnI的水平降低;心肌组织内VP1表达下降;心肌纤维化相关因子Smad3表达明显下降，MMP2表达和活性明显下降;炎症相关因子IL17,IFNγ及PFN在心肌组织内的分布及表达也明显下降。结论：以上研究说明calpastatin过表达对柯萨奇B3病毒导致的病毒性心肌炎表现出显著的心脏保护作用，提示calpain在病毒性心肌炎发病中的重要作用。病毒性心肌炎发病及进展过程中，病毒的持续复制、机体免疫炎症反应以及心肌纤维化是重要的致病机制;而围绕这三个方面展开的研究结果显示calpain参与柯萨奇病毒复制，参与调控炎症因子生成，参与心肌纤维化相关因子表达;因此，calpain可能通过以上多种机制参与病毒性心肌炎发病，是病毒性心肌炎治疗的良好靶点。

摘要： 目的:拟利用过表达calpain内源性抑制剂calpastatin的转基因小鼠(Tg-CAST小鼠),观察calpain在柯萨奇B3病毒导致的病毒性心肌炎的作用,并探讨其可能机制.方法:以CVB3直接感染Tg-CAST小鼠建立病毒性心肌炎模型，同时设立相应对照组。观察心重/体重比值变化情况，行HE染色观察心肌组织炎症细胞浸润情况并进行病理学评分，同时检测外周血心肌损伤标志物CK-MB,cTnI的水平。结果：Tg-CAST小鼠心肌组织中calpastatin表达上调，calpain活性受到明显抑制。与病毒感染野生型对照相比，CVB3感染的Tg-CAST小鼠心重/体重比值降低，心肌组织炎症浸润减轻，对应心肌病理评分下降，同时外周血心肌损伤标志物CK-MB,cTnI的水平降低;心肌组织内VP1表达下降;心肌纤维化相关因子Smad3表达明显下降，MMP2表达和活性明显下降;炎症相关因子IL17,IFNγ及PFN在心肌组织内的分布及表达也明显下降。结论：以上研究说明calpastatin过表达对柯萨奇B3病毒导致的病毒性心肌炎表现出显著的心脏保护作用，提示calpain在病毒性心肌炎发病中的重要作用。病毒性心肌炎发病及进展过程中，病毒的持续复制、机体免疫炎症反应以及心肌纤维化是重要的致病机制;而围绕这三个方面展开的研究结果显示calpain参与柯萨奇病毒复制，参与调控炎症因子生成，参与心肌纤维化相关因子表达;因此，calpain可能通过以上多种机制参与病毒性心肌炎发病，是病毒性心肌炎治疗的良好靶点。

摘要： 目的:拟利用过表达calpain内源性抑制剂calpastatin的转基因小鼠(Tg-CAST小鼠),观察calpain在柯萨奇B3病毒导致的病毒性心肌炎的作用,并探讨其可能机制.方法:以CVB3直接感染Tg-CAST小鼠建立病毒性心肌炎模型，同时设立相应对照组。观察心重/体重比值变化情况，行HE染色观察心肌组织炎症细胞浸润情况并进行病理学评分，同时检测外周血心肌损伤标志物CK-MB,cTnI的水平。结果：Tg-CAST小鼠心肌组织中calpastatin表达上调，calpain活性受到明显抑制。与病毒感染野生型对照相比，CVB3感染的Tg-CAST小鼠心重/体重比值降低，心肌组织炎症浸润减轻，对应心肌病理评分下降，同时外周血心肌损伤标志物CK-MB,cTnI的水平降低;心肌组织内VP1表达下降;心肌纤维化相关因子Smad3表达明显下降，MMP2表达和活性明显下降;炎症相关因子IL17,IFNγ及PFN在心肌组织内的分布及表达也明显下降。结论：以上研究说明calpastatin过表达对柯萨奇B3病毒导致的病毒性心肌炎表现出显著的心脏保护作用，提示calpain在病毒性心肌炎发病中的重要作用。病毒性心肌炎发病及进展过程中，病毒的持续复制、机体免疫炎症反应以及心肌纤维化是重要的致病机制;而围绕这三个方面展开的研究结果显示calpain参与柯萨奇病毒复制，参与调控炎症因子生成，参与心肌纤维化相关因子表达;因此，calpain可能通过以上多种机制参与病毒性心肌炎发病，是病毒性心肌炎治疗的良好靶点。

摘要： 目的:拟利用过表达calpain内源性抑制剂calpastatin的转基因小鼠(Tg-CAST小鼠),观察calpain在柯萨奇B3病毒导致的病毒性心肌炎的作用,并探讨其可能机制.方法:以CVB3直接感染Tg-CAST小鼠建立病毒性心肌炎模型，同时设立相应对照组。观察心重/体重比值变化情况，行HE染色观察心肌组织炎症细胞浸润情况并进行病理学评分，同时检测外周血心肌损伤标志物CK-MB,cTnI的水平。结果：Tg-CAST小鼠心肌组织中calpastatin表达上调，calpain活性受到明显抑制。与病毒感染野生型对照相比，CVB3感染的Tg-CAST小鼠心重/体重比值降低，心肌组织炎症浸润减轻，对应心肌病理评分下降，同时外周血心肌损伤标志物CK-MB,cTnI的水平降低;心肌组织内VP1表达下降;心肌纤维化相关因子Smad3表达明显下降，MMP2表达和活性明显下降;炎症相关因子IL17,IFNγ及PFN在心肌组织内的分布及表达也明显下降。结论：以上研究说明calpastatin过表达对柯萨奇B3病毒导致的病毒性心肌炎表现出显著的心脏保护作用，提示calpain在病毒性心肌炎发病中的重要作用。病毒性心肌炎发病及进展过程中，病毒的持续复制、机体免疫炎症反应以及心肌纤维化是重要的致病机制;而围绕这三个方面展开的研究结果显示calpain参与柯萨奇病毒复制，参与调控炎症因子生成，参与心肌纤维化相关因子表达;因此，calpain可能通过以上多种机制参与病毒性心肌炎发病，是病毒性心肌炎治疗的良好靶点。

摘要： 目的:拟利用过表达calpain内源性抑制剂calpastatin的转基因小鼠(Tg-CAST小鼠),观察calpain在柯萨奇B3病毒导致的病毒性心肌炎的作用,并探讨其可能机制.方法:以CVB3直接感染Tg-CAST小鼠建立病毒性心肌炎模型，同时设立相应对照组。观察心重/体重比值变化情况，行HE染色观察心肌组织炎症细胞浸润情况并进行病理学评分，同时检测外周血心肌损伤标志物CK-MB,cTnI的水平。结果：Tg-CAST小鼠心肌组织中calpastatin表达上调，calpain活性受到明显抑制。与病毒感染野生型对照相比，CVB3感染的Tg-CAST小鼠心重/体重比值降低，心肌组织炎症浸润减轻，对应心肌病理评分下降，同时外周血心肌损伤标志物CK-MB,cTnI的水平降低;心肌组织内VP1表达下降;心肌纤维化相关因子Smad3表达明显下降，MMP2表达和活性明显下降;炎症相关因子IL17,IFNγ及PFN在心肌组织内的分布及表达也明显下降。结论：以上研究说明calpastatin过表达对柯萨奇B3病毒导致的病毒性心肌炎表现出显著的心脏保护作用，提示calpain在病毒性心肌炎发病中的重要作用。病毒性心肌炎发病及进展过程中，病毒的持续复制、机体免疫炎症反应以及心肌纤维化是重要的致病机制;而围绕这三个方面展开的研究结果显示calpain参与柯萨奇病毒复制，参与调控炎症因子生成，参与心肌纤维化相关因子表达;因此，calpain可能通过以上多种机制参与病毒性心肌炎发病，是病毒性心肌炎治疗的良好靶点。

摘要： 目的：探讨miRNA21通过靶基因程序性死亡蛋白4(PDCD4)在柯萨奇B3病毒(CVB3)诱导的心脏微血管内皮细胞凋亡中的作用和机制。方法：①在CVB3感染的CMVECs模型上,采用miRNA芯片和RT PCR筛选并验证表达显著差异的miRNA、检索数据库miRanda和TargetScan预测其靶基因;②CVB3感染CMVECs、分别转染miRNA21 mimics及inhibitor至CMVECs,检测CMVECs凋亡、Caspase-3活性、CMVECs增殖率和靶基因PDCD4蛋白表达；③构建PDCD4 过表达质粒，合成PDCD4siRNA，共转染PDCD4基因和报告基因AP-1-Luc、PDCD4siRNA和报告基因、AP-1-Luc于CMVECs细胞,通过检测报告基因荧光素酶活性以确定PDCD4基因对AP-1转录活性的影响;④提取各组细胞核蛋白,电泳迁移率改变实验检测AP-1和DNA的结合活性.结果：①采用miRNA芯片和RT PCR，发现CMVECs感染CVB3后miRNA21的表达上调了3.65倍，经检索数据库并结合相关文献报道，预测其靶基因为PDCD4;②CVB3感染CMVECs及CMVECs转染miRNA21 mimics后，细胞凋亡上升(p<0.05)、Caspase-3活性上调(P<0.05)、PDCD4蛋白表达下调(P<0.01)、CMVECs增殖下调(P<0.05);miRNA 2linhibitor转染CVB3感染的CMVECs后，与CVB3感染对照组相比，细胞凋亡减少(P<0.05), Caspase-3活陛下调(P<0.05，PDCD4表达上调(P<0.05), CMVECs细胞增殖上调(P<0.05);③CMVECs细胞分别过表达PDCD4基因和转染PDCD4siRNA后，报告基因AP-1-Luc荧光素酶活性分别下降0.25倍(P<0.05)和上升2.2倍(P<0.05);④CMVECs细胞分别上调及抑制PDCD4表达后，与对照组相比，AP-1与DNA的结合活性分别下降30%和上升65%。结论：在CVB3诱导的CMVECs凋亡中，通过上调miRNA 21，抑制靶基因PDCD4表达，激活转录因子AP-1，通过下游转录产物的表达，对CMVECs凋亡发挥调控作用。

摘要： 目的：探讨miRNA21通过靶基因程序性死亡蛋白4(PDCD4)在柯萨奇B3病毒(CVB3)诱导的心脏微血管内皮细胞凋亡中的作用和机制。方法：①在CVB3感染的CMVECs模型上,采用miRNA芯片和RT PCR筛选并验证表达显著差异的miRNA、检索数据库miRanda和TargetScan预测其靶基因;②CVB3感染CMVECs、分别转染miRNA21 mimics及inhibitor至CMVECs,检测CMVECs凋亡、Caspase-3活性、CMVECs增殖率和靶基因PDCD4蛋白表达；③构建PDCD4 过表达质粒，合成PDCD4siRNA，共转染PDCD4基因和报告基因AP-1-Luc、PDCD4siRNA和报告基因、AP-1-Luc于CMVECs细胞,通过检测报告基因荧光素酶活性以确定PDCD4基因对AP-1转录活性的影响;④提取各组细胞核蛋白,电泳迁移率改变实验检测AP-1和DNA的结合活性.结果：①采用miRNA芯片和RT PCR，发现CMVECs感染CVB3后miRNA21的表达上调了3.65倍，经检索数据库并结合相关文献报道，预测其靶基因为PDCD4;②CVB3感染CMVECs及CMVECs转染miRNA21 mimics后，细胞凋亡上升(p<0.05)、Caspase-3活性上调(P<0.05)、PDCD4蛋白表达下调(P<0.01)、CMVECs增殖下调(P<0.05);miRNA 2linhibitor转染CVB3感染的CMVECs后，与CVB3感染对照组相比，细胞凋亡减少(P<0.05), Caspase-3活陛下调(P<0.05，PDCD4表达上调(P<0.05), CMVECs细胞增殖上调(P<0.05);③CMVECs细胞分别过表达PDCD4基因和转染PDCD4siRNA后，报告基因AP-1-Luc荧光素酶活性分别下降0.25倍(P<0.05)和上升2.2倍(P<0.05);④CMVECs细胞分别上调及抑制PDCD4表达后，与对照组相比，AP-1与DNA的结合活性分别下降30%和上升65%。结论：在CVB3诱导的CMVECs凋亡中，通过上调miRNA 21，抑制靶基因PDCD4表达，激活转录因子AP-1，通过下游转录产物的表达，对CMVECs凋亡发挥调控作用。

摘要： 目的：探讨miRNA21通过靶基因程序性死亡蛋白4(PDCD4)在柯萨奇B3病毒(CVB3)诱导的心脏微血管内皮细胞凋亡中的作用和机制。方法：①在CVB3感染的CMVECs模型上,采用miRNA芯片和RT PCR筛选并验证表达显著差异的miRNA、检索数据库miRanda和TargetScan预测其靶基因;②CVB3感染CMVECs、分别转染miRNA21 mimics及inhibitor至CMVECs,检测CMVECs凋亡、Caspase-3活性、CMVECs增殖率和靶基因PDCD4蛋白表达；③构建PDCD4 过表达质粒，合成PDCD4siRNA，共转染PDCD4基因和报告基因AP-1-Luc、PDCD4siRNA和报告基因、AP-1-Luc于CMVECs细胞,通过检测报告基因荧光素酶活性以确定PDCD4基因对AP-1转录活性的影响;④提取各组细胞核蛋白,电泳迁移率改变实验检测AP-1和DNA的结合活性.结果：①采用miRNA芯片和RT PCR，发现CMVECs感染CVB3后miRNA21的表达上调了3.65倍，经检索数据库并结合相关文献报道，预测其靶基因为PDCD4;②CVB3感染CMVECs及CMVECs转染miRNA21 mimics后，细胞凋亡上升(p<0.05)、Caspase-3活性上调(P<0.05)、PDCD4蛋白表达下调(P<0.01)、CMVECs增殖下调(P<0.05);miRNA 2linhibitor转染CVB3感染的CMVECs后，与CVB3感染对照组相比，细胞凋亡减少(P<0.05), Caspase-3活陛下调(P<0.05，PDCD4表达上调(P<0.05), CMVECs细胞增殖上调(P<0.05);③CMVECs细胞分别过表达PDCD4基因和转染PDCD4siRNA后，报告基因AP-1-Luc荧光素酶活性分别下降0.25倍(P<0.05)和上升2.2倍(P<0.05);④CMVECs细胞分别上调及抑制PDCD4表达后，与对照组相比，AP-1与DNA的结合活性分别下降30%和上升65%。结论：在CVB3诱导的CMVECs凋亡中，通过上调miRNA 21，抑制靶基因PDCD4表达，激活转录因子AP-1，通过下游转录产物的表达，对CMVECs凋亡发挥调控作用。

摘要： 目的：探讨miRNA21通过靶基因程序性死亡蛋白4(PDCD4)在柯萨奇B3病毒(CVB3)诱导的心脏微血管内皮细胞凋亡中的作用和机制。方法：①在CVB3感染的CMVECs模型上,采用miRNA芯片和RT PCR筛选并验证表达显著差异的miRNA、检索数据库miRanda和TargetScan预测其靶基因;②CVB3感染CMVECs、分别转染miRNA21 mimics及inhibitor至CMVECs,检测CMVECs凋亡、Caspase-3活性、CMVECs增殖率和靶基因PDCD4蛋白表达；③构建PDCD4 过表达质粒，合成PDCD4siRNA，共转染PDCD4基因和报告基因AP-1-Luc、PDCD4siRNA和报告基因、AP-1-Luc于CMVECs细胞,通过检测报告基因荧光素酶活性以确定PDCD4基因对AP-1转录活性的影响;④提取各组细胞核蛋白,电泳迁移率改变实验检测AP-1和DNA的结合活性.结果：①采用miRNA芯片和RT PCR，发现CMVECs感染CVB3后miRNA21的表达上调了3.65倍，经检索数据库并结合相关文献报道，预测其靶基因为PDCD4;②CVB3感染CMVECs及CMVECs转染miRNA21 mimics后，细胞凋亡上升(p<0.05)、Caspase-3活性上调(P<0.05)、PDCD4蛋白表达下调(P<0.01)、CMVECs增殖下调(P<0.05);miRNA 2linhibitor转染CVB3感染的CMVECs后，与CVB3感染对照组相比，细胞凋亡减少(P<0.05), Caspase-3活陛下调(P<0.05，PDCD4表达上调(P<0.05), CMVECs细胞增殖上调(P<0.05);③CMVECs细胞分别过表达PDCD4基因和转染PDCD4siRNA后，报告基因AP-1-Luc荧光素酶活性分别下降0.25倍(P<0.05)和上升2.2倍(P<0.05);④CMVECs细胞分别上调及抑制PDCD4表达后，与对照组相比，AP-1与DNA的结合活性分别下降30%和上升65%。结论：在CVB3诱导的CMVECs凋亡中，通过上调miRNA 21，抑制靶基因PDCD4表达，激活转录因子AP-1，通过下游转录产物的表达，对CMVECs凋亡发挥调控作用。

摘要： 目的：探讨miRNA21通过靶基因程序性死亡蛋白4(PDCD4)在柯萨奇B3病毒(CVB3)诱导的心脏微血管内皮细胞凋亡中的作用和机制。方法：①在CVB3感染的CMVECs模型上,采用miRNA芯片和RT PCR筛选并验证表达显著差异的miRNA、检索数据库miRanda和TargetScan预测其靶基因;②CVB3感染CMVECs、分别转染miRNA21 mimics及inhibitor至CMVECs,检测CMVECs凋亡、Caspase-3活性、CMVECs增殖率和靶基因PDCD4蛋白表达；③构建PDCD4 过表达质粒，合成PDCD4siRNA，共转染PDCD4基因和报告基因AP-1-Luc、PDCD4siRNA和报告基因、AP-1-Luc于CMVECs细胞,通过检测报告基因荧光素酶活性以确定PDCD4基因对AP-1转录活性的影响;④提取各组细胞核蛋白,电泳迁移率改变实验检测AP-1和DNA的结合活性.结果：①采用miRNA芯片和RT PCR，发现CMVECs感染CVB3后miRNA21的表达上调了3.65倍，经检索数据库并结合相关文献报道，预测其靶基因为PDCD4;②CVB3感染CMVECs及CMVECs转染miRNA21 mimics后，细胞凋亡上升(p<0.05)、Caspase-3活性上调(P<0.05)、PDCD4蛋白表达下调(P<0.01)、CMVECs增殖下调(P<0.05);miRNA 2linhibitor转染CVB3感染的CMVECs后，与CVB3感染对照组相比，细胞凋亡减少(P<0.05), Caspase-3活陛下调(P<0.05，PDCD4表达上调(P<0.05), CMVECs细胞增殖上调(P<0.05);③CMVECs细胞分别过表达PDCD4基因和转染PDCD4siRNA后，报告基因AP-1-Luc荧光素酶活性分别下降0.25倍(P<0.05)和上升2.2倍(P<0.05);④CMVECs细胞分别上调及抑制PDCD4表达后，与对照组相比，AP-1与DNA的结合活性分别下降30%和上升65%。结论：在CVB3诱导的CMVECs凋亡中，通过上调miRNA 21，抑制靶基因PDCD4表达，激活转录因子AP-1，通过下游转录产物的表达，对CMVECs凋亡发挥调控作用。

摘要： 本发明公开了槐果碱或其可药用盐在制备治疗柯萨奇B病毒引发的病毒心血管系统疾病的药物中的应用，槐果碱或其可药用盐作为柯萨奇B病毒所致扩张型心肌病、病毒性心内膜炎、病毒性心瓣膜炎、病毒性心包炎、病毒性冠状动脉炎、病毒性肥厚型心肌病的药物，可提高治愈率，减少死亡率，而且没有明显的细胞毒性作用，同时槐果碱的药源丰富，且制备简便，成本低廉，适用于工业化生产。

摘要： 本发明涉及一种柯萨奇A组4型病毒突变株及其应用，包括强毒力突变株和弱毒力突变株，所述强毒力突变株中单独或任意组合的含有如下位点：VP1蛋白：112D、3D蛋白的突变：3I、404W、406K。所述弱毒力突变株中单独或任意组合的含有如下位点：VP1蛋白：112E、3D蛋白：3M、404R、406R。

摘要： 本发明公开了一种柯萨奇A16病毒IgA抗体量子点免疫荧光层析试纸条。本发明的柯萨奇A16病毒IgA抗体量子点免疫荧光层析纸条包括背板以及设置于背板上的样品垫、量子点颗粒标记垫、硝酸纤维素膜、吸水纸。本发明的试纸条利用量子点免疫荧光技术，并基于唾液标本中柯萨奇A16病毒IgA抗体作为检测靶位，能够高度灵敏、简单快速地对柯萨奇A16病毒早期感染进行诊断，有助于及时监控手足口病疫情，并防止疫情的蔓延。

摘要： 本发明提供带荧光蛋白标签的重组柯萨奇B3病毒，该病毒为感染性重组病毒rCV‑CS和表达GFP的重组病毒rCV‑GFP，序列如SEQ ID NO：1，其构建方法是在CVB3全长感染性cDNA克隆质粒pCV的基础上，构建含有多克隆位点MCS，并在MCS前加入2Apro酶切识别序列的CVB3全长感染性克隆质粒pCV‑CS；以pEGFP为模板扩增GFP片段，得到GFP编码基因；将GFP编码基因引入到pCV‑CS的多克隆位点，构建表达GFP的CVB3全基因感染性克隆质粒pCV‑GFP；pCV‑GFP经脂质体转染、扩增后获得带荧光蛋白标签的重组柯萨奇B3病毒rCV‑GFP。采用本发明的技术方案用于制备在活体动物细胞中示踪病毒，并产生显著的效果。

摘要： 本发明涉及一种插入miRNA互补序列的多组织限制型柯萨奇B组III型病毒及其应用。所述的miRNA包括：miR‑206，miRNA‑29a‑3p，miRNA‑124‑3p。所述的应用指所述的多组织限制型柯萨奇B组III型病毒能够用于制备心脏，胰腺和脑组织限制型疫苗。

摘要： 本发明涉及免疫学领域和分子病毒学领域，特别是柯萨奇A6型病毒的诊断、预防和治疗领域。具体而言，本发明涉及针对柯萨奇A6型病毒的单克隆抗体或其抗原结合片段，以及包含所述抗体或其抗原结合片段的组合物(例如，诊断剂和治疗剂)。此外，本发明还涉及所述抗体或其抗原结合片段的用途。本发明的抗体或其抗原结合片段可用于诊断、预防和/或治疗柯萨奇A6型病毒的感染和/或由所述感染引起的疾病(例如，手口足病)。

摘要： 本发明公开了一种柯萨奇A2病毒(CVA2)株构建感染动物模型的方法，通过CVA2病毒株的培养、优化CVA2病毒株感染动物模型的相关参数，成功构建了CVA2病毒株感染动物模型。该动物模型可表现出类似人类感染的嗜睡、昏迷、共济失调、肢体麻痹等神经系统症状，成功模拟了人类疾病的大部分症状。本发明还公开了上述方法构建的CVA2病毒株感染动物模型在评价CVA2病毒疫苗、抗病毒药物中的应用。该动物模型可用于评估抗病毒血清被动免疫、母源性抗体、灭活全病毒疫苗主动免疫对新生小鼠的免疫保护作用。该动物模型可用于CVA2病毒抗病毒药物和疫苗的开发，有助于达到预防和控制CVA2相关手足口病的目的。

摘要： 本发明涉及一种柯萨奇A组4型病毒突变株及其应用，包括强毒力突变株和弱毒力突变株，所述强毒力突变株中单独或任意组合的含有如下位点：VP1蛋白：112D、3D蛋白的突变：3I、404W、406K。所述弱毒力突变株中单独或任意组合的含有如下位点：VP1蛋白：112E、3D蛋白：3M、404R、406R。

摘要： 本发明涉及一种柯萨奇A组2型病毒的突变株，所述的突变株包括强毒力突变株和弱毒力突变株，所述的强毒力突变株中单独或任意组合的含有如下位点：VP3蛋白：94C、VP1蛋白：165S、VP1蛋白：242I。所述的弱毒力突变株中单独或任意组合的含有如下位点：VP3蛋白：94T、VP1蛋白：165G、VP1蛋白：242K。

摘要： 本发明涉及一组柯萨奇A组6型病毒突变株及其应用，包括强毒力突变株和弱毒力突变株，所述强毒力突变株中单独或任意组合的含有如下位点：VP1蛋白：124M、242V、VP2蛋白：57D、VP3蛋白：135P。所述弱毒力突变株中单独或任意组合的含有如下位点：VP1蛋白：124V、242I、VP2蛋白：57D、VP3蛋白：135P。