宫颈癌Hela细胞

摘要： 目的:探究帕瑞昔布钠对宫颈癌HeLa细胞环氧化合酶-2(COX-2)/前列腺素E2(PGE2)通路及其上皮间质转化(EMT)、迁移和侵袭的影响。方法:磺酰罗丹明B(SRB)法检测帕瑞昔布钠在不同浓度和时间点对HeLa细胞存活率的影响,筛选出合适的浓度和时间点。将Hela细胞分为帕瑞昔布钠0μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L组,处理24 h后,Transwell小室法检测各组细胞迁移和侵袭能力,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测各组细胞中通路蛋白COX-2、PGE2及其下游转录激活子3(STAT3)、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化STAT3(p-STAT3)、磷酸化AKT(p-AKT)、上皮间质转化相关E-钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(vimentin)以及迁移侵袭相关基质金属蛋白酶2(MMP2)和基质金属蛋白酶组织抑制剂2(TIMP2)蛋白表达水平。结果:帕瑞昔布钠作用24、48、72 h均可降低HeLa细胞存活率;与帕瑞昔布钠0μmol/L组相比,帕瑞昔布钠25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L组HeLa细胞迁移和侵袭能力、COX-2、PGE2、vimentin蛋白表达水平、STAT3、AKT磷酸化水平和MMP2/TIMP2蛋白比值依次降低,E-cadherin蛋白表达水平依次升高,且呈剂量依赖性(均P<0.05)。结论:帕瑞昔布钠可降低HeLa细胞EMT及迁移侵袭能力,可能与抑制COX-2/PGE2通路有关。

摘要： 目的 探讨竹节参水提物对宫颈癌Hela细胞凋亡的影响.方法 0(阴性对照)、50、100、150μg/mL竹节参水提物作用于宫颈癌Hela细胞中后培养48 h.采用一步法TUNEL染色测定细胞凋亡,流式细胞计数仪测定宫颈癌Hela细胞周期,Hoechst 33342荧光染色观察不同浓度下细胞形态,半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定凋亡相关基因P53、Bax、Caspase-3 mRNA表达水平.结果 竹节参水提取物对宫颈癌Hela细胞增殖具有明显的抑制作用,呈浓度依赖性,36 h时竹节参水提取物对宫颈癌Hela细胞增殖抑制基本达到50.0％以上.竹节参水提取物作用于宫颈癌Hela细胞G0/G,期与S期,随着其质量浓度升高,它对于宫颈癌Hela细胞作用集中于G0/G,期.未加入竹节参水提物时Hela细胞形态均一且结构相对完整,而在50、100、150 μg/mL下He』a细胞开始出现凋亡,能增加凋亡相关基因P53、Bax、Caspase-3 mRNA表达.结论 竹节参水提物体外能抑制宫颈癌Hela细胞增殖,诱导癌细胞的自噬与凋亡,可能与调控凋亡相关基因mRNA表达有关.

摘要： 目的 探讨miR-210对宫颈癌(CC)Hela细胞生物学行为的影响及作用机制.方法 采用qRT-PCR检测正常宫颈上皮细胞和Hela细胞中miR-210的表达水平.在Hela细胞中转染miR-210 inhibitor或inhibitor Control,qRT-PCR检测转染效率,CCK-8增殖实验检测Hela细胞增殖能力,Transwell实验检测Hela细胞侵袭和迁移能力,流式细胞仪检测Hela细胞凋亡情况,Western印迹检测凋亡相关及核因子(NF)-κB信号通路相关蛋白表达水平.结果 miR-210在Hela细胞中的表达水平显著高于正常宫颈上皮H8细胞(P<0.05).转染miR-210 inhibitor能够抑制Hela细胞中miR-210的表达水平(P<0.05).敲减miR-210后Hela细胞OD值、侵袭和迁移细胞数均明显降低(P<0.05),凋亡率明显升高(P<0.05),B细胞淋巴瘤(Bcl)-2蛋白表达水平下调(P<0.05),Bcl-2相关x蛋白(Bax)和酶切半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3蛋白表达水平上调(P<0.05),p-IκBα和p-NF-κB蛋白表达水平下调(P<0.05).结论 miR-210在CC细胞中呈高表达,敲减miR-210能够抑制Hela细胞增殖、侵袭和迁移能力,促进Hela细胞凋亡,该过程可能与抑制NF-κB信号通路的激活有关.

摘要： 目的 分析微小RNA-375(miR-375)、人同源盒基因1(OTX1)对宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭、迁移的影响.方法 体外培养宫颈癌HeLa细胞,分为空白对照组(Control组)、miR-375激动剂阴性对照组(mNC)组、miR-375激动剂组(miR-375 mimic组),miR-375抑制剂剂组(miR-375 inhibitor组),miR-375抑制剂阴性对照组(iNC组);除Control组细胞正常培养外,其余4组转染相应的miR-375激动剂、抑制剂及阴性对照试剂.4组细胞均培养48 h后,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞中miR-375、OTX1 mRNA相对表达水平,MTT检测各组细胞增殖情况,Transwell检测细胞侵袭情况,细胞划痕实验检测细胞迁移,双荧光素报告基因检测宫颈癌HeLa细胞miR-375与OTX1的靶向关系,蛋白免疫印记(Western Blot)检测通路OTX1蛋白、增殖活性标志物-细胞增殖核抗原(Ki-67)蛋白、侵袭迁移相关蛋白基质金属蛋白酶2(MMP-2)、金属蛋白酶组织抑制物-2(TIMP-2)蛋白表达.结果 与Control组、mNC组、iNC组相比,miR-375 inhibitor组的OTX1 mRNA及蛋白表达、增殖标志物Ki-67蛋白表达、侵袭及迁移相关分子MMP-2蛋白表达、增殖率、侵袭率、迁移率均增高(P0.05).双荧光素酶报告实验发现,与miR-375 NC+WT-OTX13'-UTR组相比,miR-375 mimic+WT-OTX13'-UTR组的荧光素酶相对活性降低(P<0.05).结论 miR-375过表达可靶向抑制OTX1表达,进而抑制宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭、迁移.

摘要： 目的:分析干扰Hela细胞TPX2基因对细胞的活性及放疗敏感性的影响.方法:体外培养宫颈癌Hela细胞系,并将其分为干扰组、阴性对照组(NC组)、空白对照组(CON组).干扰组接受TPX2-siRNA干扰质粒、NC组接受空载体转染,CON组以PBS代替质粒,采用RT-PCR实验验证干扰效率,采用CCK-8实验检测细胞增殖能力,采用Transwell小室检测侵袭能力,流式细胞仪检测细胞周期,克隆形成实验检测放疗敏感性.结果:与CON组相比,NC组细胞的TPX2 mRNA相对表达量、TPX2蛋白相对表达水平、细胞侵袭能力均无明显变化(P>0.05);与CON组及NC组相比,干扰组细胞的TPX2 mRNA相对表达量、TPX2蛋白相对表达水平、细胞侵袭能力均明显降低(P0.05);与CON组及NC组相比,干扰组细胞在培养时间为48h、72h、96h时的细胞活性均明显降低(P0.05);与NC组相比,干扰组细胞的S及G2/M期细胞占比明显增多,而G0/G1期细胞占比明显减少(均P<0.05).与CON组相比,干扰组细胞在放疗剂量为4Gy、6Gy、8Gy、10Gy的生存率降低(P均<0.05).结论:干扰宫颈癌Hela细胞TPX2基因可有效干扰TPX2基因的表达,阻碍宫颈癌Hela细胞的增殖、迁移等细胞活性.干扰TPX2基因可有效提高宫颈癌Hela细胞的放疗敏感性,改善宫颈癌放射治疗的疗效.

摘要： 目的:研究宫颈癌HeLa细胞的增殖和凋亡与circV APA靶向miR-628-5p调控的相关性.方法:选取2019年12月-2020年12月收治的50例宫颈癌手术切除标本为研究对象,将切除后的宫颈组织放置在-80°C下的液氮中冷冻,然后进行宫颈细胞的增值及凋亡分析,并且做好相关指标的评价和筛查.结果:经PCR检测,正常宫颈永生化鳞状细胞Ect/E6E7和5个宫颈癌细胞系Ca-Ski,SiHa,C4-1,C33A和HeLa中miR-628-5p表达情况.检测结果中显示:与正常细胞相比,宫颈癌细胞中miR-628-5p表达降低.并且在50份宫颈细胞标本检测分析过程中发现,有35例细胞样本出现不同程度的增殖现象,而有15份标本出现凋亡现象.结论:研究证实,宫颈癌Hela细胞的增殖和凋亡与circV APA靶向miR-628-5p调控具有直接关联,是诱发宫颈癌变的重要因素之一,所以能够将其应用到临床宫颈癌筛查和检验中.

摘要： 目的探究miR-148a对宫颈癌HeLa细胞顺铂化疗敏感度的影响及相关机制。方法体外培养宫颈癌HeLa细胞,设置顺铂浓度梯度检测IC20值;设置对照组、mimic对照组、miR-148a mimic组、inhibitor对照组和miR-148a inhibitor组,转染后使用qRT-PCR法检测miR-148a和STAT3 mRNA表达;4μmol/L顺铂处理后,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期分布,Western blot法检测p-STAT3/STAT3、CyclinD1、Bcl-2、Bax、Cleaved caspase-3蛋白表达。结果HeLa细胞的顺铂IC20约为4μmol/L。与mimic对照组相比,miR-148a mimic组HeLa细胞中miR-148a水平显著升高,STAT3 mRNA水平显著降低(P<0.05);与inhibitor对照组相比,miR-148a inhibitor组HeLa细胞中miR-148a水平显著降低,STAT3 mRNA水平显著升高(P<0.05)。顺铂处理后,与mimic对照组相比,miR-148a mimic组HeLa细胞凋亡率、G0/G1期细胞比例、Bax、Cleaved caspase-3蛋白水平显著升高,OD值、S期和G2/M期细胞比例及p-STAT3/STAT3、Cyclin D1、Bcl-2蛋白水平显著降低(P<0.05);与inhibitor对照组相比,miR-148a inhibitor组HeLa细胞上述指标均朝相反的趋势显著变化(P<0.05)。结论miR-148a可通过靶向抑制STAT3增强宫颈癌HeLa细胞的顺铂化疗敏感度。

摘要： 目的 探讨自然杀伤(NK)细胞对人宫颈癌HeLa细胞的体外杀伤作用以及不同浓度NK细胞对宫颈癌HeLa细胞裸鼠移植瘤的治疗效果.方法 采用含红色荧光蛋白(RFP)和荧光素酶报告基因(Luc)的慢病毒感染HeLa细胞,荧光倒置显微镜检测细胞中RFP基因的表达,体外成像技术检测Luc基因的表达.分别将不同浓度的NK细胞作用于HeLa-RFP/Luc细胞24、48、72 h,CCK-8法检测NK细胞对靶细胞的杀伤作用.将HeLa-RFP/Luc细胞接种于BALB/c-nu裸鼠皮下,建立宫颈癌裸鼠移植瘤模型,待肿瘤生长至100 mm3时,随机分为模型组、NK高剂量组、NK低剂量组、空白对照组,每组10只.给药4个疗程后,观察各组裸鼠的一般状况,每周测量体重及瘤体大小,体外活体成像观察裸鼠瘤体的荧光变化.治疗周期结束后,剥离瘤体,称重,取脾脏组织,采用ELISA法检测脾脏组织液中肿瘤相关基因的表达.结果 NK细胞对HeLa-RFP/Luc细胞的体外杀伤率呈时间和剂量依赖性,效靶比越大则杀伤作用越强,且作用72 h后,各效靶比的杀伤率均达90％以上.成功筛选出共表达RFP和Luc基因的HeLa-RFP/Luc细胞株.NK细胞治疗对裸鼠的体重无明显影响(P>0.05),但随着治疗周期的延长,治疗组裸鼠瘤体体积和荧光值的增长速率均明显低于模型对照组(P0.05),IL-2、IFN-γ水平显著升高,IL-4水平显著降低(P<0.05).结论 NK细胞治疗可延缓人宫颈癌HeLa细胞的生长,下调促肿瘤因子的表达,且在治疗3个疗程后效果最佳.

摘要： 目的:探讨miR-520a-3p调控宫颈癌细胞因子分泌的分子机制.方法:通过TargetScanHuman分析miR-520a-3p与NF-κB复合体亚基RELA的匹配情况,然后通过荧光素酶报告系统检测miR-520a-3p是否靶向NF-κB复合体亚基RELA;使用LPS刺激宫颈癌HELA细胞后,将miR-520a-3p mimics与转染试剂混合后滴入HELA细胞中,此为过表达组;将miR-520a-3p inhibitor与转染试剂混合后滴入HELA细胞中,此为敲低组,通过酶联免疫吸附试验检测过表达组和敲低组GCSF,GM-CSF,IL-2,IL-3,IL-4,IL-5,IL-6,IL-9,IL-10,IL-12 p40,IL-12 p70,IL-13,IL-17,IFN-γ,MCP-1,MCP-5,RANTES,TNFα的表达水平.每次实验重复3次.结果:miR-520a-3p靶向RELA的3'UTR;LPS激活NF-kB信号通路后,宫颈癌HELA细胞分泌的细胞因子GCSF,GM-CSF,IL-2,IL-3,IL-4,IL-5,IL-6,IL-9,IL-10,IL-12 p40,IL-12 p70,IL-13,IL-17,IFN-γ,MCP-1,MCP-5,RANTES,TNFα的蛋白表达水平上升(P<0.05);过表达组中NF-κB复合体亚基RELA的蛋白表达水平下降,宫颈癌HELA细胞分泌的上述细胞因子的蛋白表达水平下降(P<0.05);敲低组中NF-κB复合体亚基RELA的蛋白表达水平上升,宫颈癌HELA细胞分泌的上述细胞因子的蛋白表达水平上升(P<0.05).结论:miR-520a-3p通过靶向NF-κB信号通路的关键分子RE-LA抑制宫颈癌HELA细胞的细胞因子分泌.

摘要： 目的:探讨1,25二羟基维生素D3(1,25(OH)2D3)联合顺铂(DDP)在体外对宫颈癌Hela细胞增殖和凋亡的影响及可能存在的机制.方法:体外培养宫颈癌Hela细胞,MTT法检测1,25(OH)2D3和DDP对Hela细胞增殖的影响.流式细胞术分析细胞周期.Westernblot检测1,25(OH)2D3和DDP对Hela细胞内P27蛋白表达水平的影响.结果:所选浓度范围内(10-8～10-6mol/L)的1,25(OH)2D3对Hela细胞的增殖抑制差异无统计学意义(P＞0.05),但与作用时间密切相关(P＜0.05),DDP浓度在5-20μg/ml范围内对Hela细胞增殖有明显的抑制作用,并呈浓度及时间依赖性(P＜0.01).流式细胞仪检测到1,25(OH)2D3处理12h后联合DDP组G0/G1期(DNA合成期)细胞比例明显增多(P＜0.01).Westernblot观察到1,25(OH)2D3处理12h后联合DDP组细胞内P27蛋白表达水平明显升高(P＜0.01).结论:1,25(OH)2D3可能通过上调Hela细胞内P27蛋白表达水平,与顺铂协同促进细胞凋亡、诱导细胞周期阻滞,进而提高顺铂抗肿瘤作用.

摘要： 本发明公开了一种与耐药宫颈癌癌细胞系Hela细胞膜表面分子结合的多肽，该多肽为耐药宫颈癌癌细胞系Hela细胞膜表面分子提供蛋白标签的功能性，该多肽选自如下氨基酸序列中的一种：SEQ ID NOs：1、2、3、4、5、6、7、8、9和10。本发明还公开了一种核酸，其编码所述的多肽，该核酸选自如下碱基序列中的一种：SEQ ID NOs：11、12、13、14、15、16、17、18、19和20。所述的多肽或所述的核酸在与耐药宫颈癌细胞系Hela细胞膜表面分子结合中的应用。本发明提供的上述多肽，对肿瘤细胞的亲和力强，可作为靶向特定肿瘤细胞的靶向头基；且，该多条多肽与肿瘤细胞结合会抑制细胞膜的某些功能，可能会抑制肿瘤细胞的生长或者与化疗药物有协同作用，具有治疗效果，可用于肿瘤的靶向治疗。

摘要： 本发明公开了一种激活宫颈癌HeLa细胞中LRIG1基因表达的双链saRNA（small activating RNA）分子。saRNA由正义链5’‑UUC UUC CUG ACU GGG ACA U[dT][dT]‑３′和反义链5’‑AUG UCC CAG UCA GGA AGA A[dT][dT]‑３′组成。本发明的saRNA分子可靶向结合LRIG启动子区，抑制人宫颈癌HeLa细胞增殖和侵袭迁移，诱导HeLa细胞发生凋亡，可用于制备宫颈癌治疗的药物。

摘要： 本发明实施公开了一种宫颈癌预后标志微生物及其在制备宫颈癌预后预测诊断产品中的应用，所述宫颈癌预后标志微生物包括Dermabacter、Sulfurovum、Nostoc、Thermacetogenium和Alphavirus。本发明开发了所述5种宫颈癌预后标志微生物，并建立了预后评分系统；时间依赖性ROC曲线及多变量Cox回归分析显示本发明开发的5‑微生物预后评分系统对总生存率(OS)的判别能力明显优于其他临床因素(如年龄、分期、肿瘤大小)，且在5年的曲线下面积不劣于其在1或2年的面积，说明本预后评分系统对宫颈癌预后有独立且较持久的判别力。

摘要： 本发明公开了一种与耐药宫颈癌癌细胞系Hela细胞膜表面分子结合的多肽，该多肽为耐药宫颈癌癌细胞系Hela细胞膜表面分子提供蛋白标签的功能性，该多肽选自如下氨基酸序列中的一种：SEQ ID NOs：1、2、3、4、5、6、7、8、9和10。本发明还公开了一种核酸，其编码所述的多肽，该核酸选自如下碱基序列中的一种：SEQ ID NOs：11、12、13、14、15、16、17、18、19和20。所述的多肽或所述的核酸在与耐药宫颈癌细胞系Hela细胞膜表面分子结合中的应用。本发明提供的上述多肽，对肿瘤细胞的亲和力强，可作为靶向特定肿瘤细胞的靶向头基；且，该多条多肽与肿瘤细胞结合会抑制细胞膜的某些功能，可能会抑制肿瘤细胞的生长或者与化疗药物有协同作用，具有治疗效果，可用于肿瘤的靶向治疗。

摘要： 本发明公开了一种激活宫颈癌HeLa细胞中LRIG1基因表达的双链saRNA（small activating RNA）分子。saRNA由正义链5’‑UUC UUC CUG ACU GGG ACA U[dT][dT]‑３′和反义链5’‑AUG UCC CAG UCA GGA AGA A[dT][dT]‑３′组成。本发明的saRNA分子可靶向结合LRIG启动子区，抑制人宫颈癌HeLa细胞增殖和侵袭迁移，诱导HeLa细胞发生凋亡，可用于制备宫颈癌治疗的药物。

摘要： 本发明提供了一种具有式(Ⅰ)结构的异黄酮衍生物在抑制人宫颈癌Hela细胞增殖上的应用；本申请的异黄酮衍生物是一种异黄酮的羧酸盐衍生物，其对人宫颈癌Hela细胞增殖具有较好的抑制能力，可以作为具有抗宫颈癌细胞增殖的黄酮类新药的基础。

摘要： 本发明属于中药技术领域，具体涉及一种蜜桶花片在制备抑制宫颈癌细胞HelaS3细胞增殖药物中的应用及蜜桶花片的制备方法。所述蜜桶花片由蜜桶花1700g作为原料药制成，采用超临界萃取制备而成，使得麦角甾苷含量有很大提高。

摘要： 本发明属于中药技术领域，具体涉及一种山蜡梅叶片在制备抑制宫颈癌细胞HeLa细胞增殖药物中的应用及山蜡梅叶片的制备方法。所述山蜡梅叶片由山蜡梅叶1500g作为原料药制成，采用超临界萃取制备而成，使得槲皮素和山柰素含量有很大提高。

摘要： 本发明公开了一种以放线菌素FGR制备用于治疗人宫颈癌细胞Hela裸鼠皮下移植瘤的药物的应用，所述放线菌素FGR的给药剂量为每kg裸鼠体重0.05‑0.2g。本发明的有益效果为：因体外实验具有一定的局限性，本发明以放线菌次级代谢产物抗癌作用为主旨，对放线菌素FGR进行深入研究，为进一步研究放线菌素FGR在动物体内是否同样具有抗癌功效，本发明将放线菌素FGR运用到人源宫颈癌细胞(Hela)裸鼠异种移植瘤模型中，密切监视记录裸鼠体重、饮食、饮水、瘤体直径及体温等一般生长发育情况，计算裸鼠体重增长率肿瘤体积，相对肿瘤体积、抑瘤率，裸鼠瘤体及脏器做切片，HE染色及透射电镜切片染色，综合衡量放线菌素FGR在患瘤裸鼠体内的效果。

摘要： 本发明公开了COPA在制备子宫颈癌诊断生物标记物和/或子宫颈癌药物开发中的应用。本发明是基于发明人采用综合蛋白组学分析策略(基于LC‑MS的非靶向蛋白质组学结合基于PRM的靶向蛋白质组学)，首次鉴定COPA是子宫颈癌的生物标志物，并经过IHC染色的再次验证；并且，肿瘤组织中COPA染色强度与患者的FIGO分期有关，COPA呈中‑强阳性染色者预后差。将COPA应用于制备子宫颈癌诊断生物标记物，可对患者进行精准分类。发明人还首次观察到靶向下调子宫颈癌细胞内COPA蛋白显著抑制癌细胞的侵袭性，确定COPA是子宫颈癌的干预靶点。将COPA应用于子宫颈癌药物开发，对高危患者实施分子靶向治疗，可改善预后。