子宫内膜细胞

摘要： 子宫内膜炎是奶牛养殖业常见的一种繁殖疾病,目前主要利用抗生素进行治疗。本试验利用已成功构建的子宫内膜细胞炎症模型,研究添加1μmol/L虾青素对脂多糖(LPS)诱导奶牛子宫内膜细胞调亡的影响,处理24h后利用流式细胞仪检测细胞的凋亡比例,利用荧光定量RT-PCR和WesternBlot分别检测Bax、Bcl-2、Fas、Caspase8、Caspase3基因的mRNA和蛋白表达水平,并利用酶标仪检测培养液中FasL含量。结果表明,脂多糖(LPS)作用子宫内膜细胞6h后,细胞凋亡比例显著增加(P<0.05);线粒体介导的促凋亡关键基因Bax表达升高(P<0.05),抗凋亡基因Bcl-2表达降低(P<0.05);Fas/FasL信号通路的关键基因Fas、Caspase8表达升高(P<0.05),FasL蛋白水平也显著升高(P<0.05);凋亡执行效应酶Caspase3基因表达显著升高(P<0.05)。说明LPS从线粒体和Fas/FasL两条通路诱导子宫内膜细胞发生凋亡。加入1μmol/L虾青素培养细胞24h后,细胞凋亡比例显著下降(P<0.05);Bax、Fas、Caspase8和Caspase3表达水平均显著降低(P<0.05),Bcl-2表达水平显著升高(P<0.05),说明虾青素通过线粒体和Fas/FasL两条信号通路抑制LPS诱导的子宫内膜细胞凋亡。本试验可为奶牛子宫内膜炎的预防和治疗提供理论参考。

摘要： 胚胎早期死亡及流产严重影响母牛的繁殖性能,造成极大的经济损失。本研究利用不同浓度双氧水(H_(2)O_(2))处理子宫内膜细胞6 h,通过流式细胞仪、酶标仪分别进行细胞内活性氧(ROS)水平、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性以及还原型谷胱甘肽(GSH)与氧化型谷胱甘肽(GSSG)比值检测,建立子宫内膜细胞氧化应激模型。在此基础上,利用流式细胞仪检测细胞凋亡和生长周期,利用荧光定量RT-PCR和Western blot检测Fas/FasL信号通路关键基因的mRNA和蛋白表达水平,并利用慢病毒介导的RNA干扰(RNAi)抑制子宫内膜细胞中Fas基因表达,进一步验证Fas/FasL凋亡通路是否参与氧化应激诱导的子宫内膜细胞凋亡。所有试验都重复3次以上。结果发现,利用200μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)处理子宫内膜细胞6 h,细胞内ROS阳性水平急剧增加(P<0.05),SOD和CAT活性以及GSH与GSSG比值都显著降低(P<0.05),说明H_(2)O_(2)处理对子宫内膜细胞造成氧化应激损伤。在此处理条件下,生长周期中S期比例显著降低(P<0.05),凋亡比例显著提高(P<0.05);Fas/FasL凋亡通路中关键基因Fas、Caspase 8和Caspase 3的mRNA表达水平显著升高(P<0.05);培养液中FasL浓度以及Fas、Caspase 8和Caspase 3蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。进一步研究发现,抑制Fas基因表达在一定程度上降低了氧化应激诱导的细胞凋亡比例以及Fas/FasL凋亡通路中关键基因的表达水平。总之,本研究结果表明,氧化应激通过激活Fas/FasL信号通路促进奶牛子宫内膜细胞凋亡,这为解释氧化应激对子宫内膜细胞的不利影响提供了新的见解。

摘要： 西安交大第一附属医院妇产科李奇灵教授团队基于长期子宫内膜细胞学研究积累,于2018年开始和西安交通大学自动化学院钟德星副教授团队合作,将人工智能应用于子宫内膜细胞学诊断。利用深度学习方法对大量子宫内膜细胞patch进行训练并展开集中测试。训练集可达100%的准确率,测试集获得了93.5%的准确率、92.2%的特异性和92.0%的敏感性。团队还开发了子宫内膜细胞医学图像分析软件,结合李教授前期发明成果转化的子宫内膜取样、制片系统,形成了准确、快速、自动识别的子宫内膜细胞人工智能辅助诊断系统。该系统可大幅降低医生的工作强度,提升病理医生的工作效率,适用于大规模开展筛查和诊断工作。

摘要： 为了有效分离纯化绵羊子宫内膜上皮细胞和基质细胞,为绵羊早期胚胎附植相关研究提供可靠的体外细胞模型,本试验采用组织块培养法分离培养子宫内膜上皮和基质细胞,利用胰酶差时消化法对2种细胞进行纯化,通过免疫荧光法对上皮细胞和基质细胞的特异性表达蛋白角蛋白18(CK18)和波形蛋白分别进行鉴定。结果显示,利用组织块法第3天开始有细胞从组织块中爬出,5~6 d单层细胞铺开,显微镜下观察细胞形态呈梭形和铺路石状,2种细胞交织在一起生长。使用0.25%胰蛋白酶消化细胞时,基质细胞约90 s变圆有脱落,而上皮细胞则需要6 min变圆有脱落。免疫荧光鉴定结果显示上皮细胞呈角蛋白阳性,波形蛋白染色阴性,阳性率大于95%。基质细胞呈波形蛋白阳性,角蛋白阴性,阳性率大于95%。研究结果表明,采用组织块培养法结合胰酶差时消化法可成功分离得到纯度较高的绵羊子宫内膜上皮细胞和基质细胞,为绵羊胚胎附植过程中子宫内膜细胞的相关生物学功能研究奠定基础。

摘要： 本文探讨了人绒毛膜促性腺激素(hCG)作用于子宫内膜细胞所引起的信号改变,以及抗苗勒试管激素受体AMHR2对子宫内膜容受性调控的作用机制.采集人子宫内膜组织,用胰酶消化的方法分离原代细胞并培养,用hCG处理细胞24 h后,采用荧光定量PCR方法检测AMHR2基因表达水平,免疫印迹杂交方法检测AMHR2蛋白表达变化.结果表明,分离得到人原代子宫内膜细胞,能够正常传代培养,细胞中表达AMHR2基因和蛋白.用hCG处理细胞24 h后,AMHR2基因和蛋白表达水平均显著增加(P<0.05).体外实验hCG能够促进子宫内膜细胞中AMHR2基因和蛋白的表达,可能通过AMHR2提高子宫内膜容受性.

摘要： 本文探讨了人绒毛膜促性腺激素(hCG)作用于子宫内膜细胞所引起的信号改变,以及抗苗勒试管激素受体AMHR2对子宫内膜容受性调控的作用机制。采集人子宫内膜组织,用胰酶消化的方法分离原代细胞并培养,用hCG处理细胞24 h后,采用荧光定量PCR方法检测AMHR2基因表达水平,免疫印迹杂交方法检测AMHR2蛋白表达变化。结果表明,分离得到人原代子宫内膜细胞,能够正常传代培养,细胞中表达AMHR2基因和蛋白。用hCG处理细胞24 h后,AMHR2基因和蛋白表达水平均显著增加(P<0.05)。体外实验hCG能够促进子宫内膜细胞中AMHR2基因和蛋白的表达,可能通过AMHR2提高子宫内膜容受性。

摘要： 目的:分析miR-155及其靶因子EMs中的生物学作用,探讨其分子机制;方法:采集40例EMs患者和40名其他良性妇科疾病患者的子宫内膜组织,对其miR-155表达情况进行检测.再将miR-155 mimic和miR-155 inhibtor转染到EMs子宫内膜细胞样本中,然后对细胞活力和迁移、侵袭能力进行检测,同时对细胞凋亡相关蛋白、MMP 9的表达情况进行检测;结果:EMs患者子宫内膜组织miR-155表达水平和阳性率均明显高于非EMs患者(P<0.05).子宫内膜细胞经转染后,上调miR-155表达可促进细胞增殖,提高细胞活力,抑制miR-155表达可抑制细胞活力(P<0.05).相关蛋白及MMP 9的表达也随之发生变化;结论:miR-155可能通过对细胞增殖和抑制等活性调控作用参与到了EMs的发生和发展过程中.

摘要： 目的:通过研究绵羊体外早期胚胎单独或协同孕激素诱导前后子宫内膜细胞MUC-1基因的表达差异,建立体外模型,为探讨胚胎与子宫源MUC-1基因的相互作用机制提供参考,同时为进一步判断MUC-1能否作为绵羊子宫容受态的分子标记物奠定基础.rn 方法:将绵羊子宫内膜上皮细胞在不同浓度孕酮(0、10-5mol/L、10-6mol/L、10-7mol/L、10-8mol/L)下培养48h后检测细胞中MUC-1的表达情况,并筛选出孕酮的最适浓度.然后用绵羊体外囊胚单独或协同孕酮与 子宫内膜上皮细胞进行共培养,检测诱导前后细胞中MUC-1的表达差异.rn 预期结果:利用绵羊早期胚胎与子宫内膜上皮细胞共培养的方法,构建出绵羊子宫内膜细胞MUC-1基因表达诱导模型,并鉴定其在诱导前后的表达差异.rn 创新点:首次利用体外模型检测绵羊早期胚胎诱导子宫内膜细胞MUC-1的表达,并为进一步探讨MUC-1参与绵羊子宫容受态的调节机制提供新的试验基础.

摘要： 为了研究LPS介导的小鼠子宫内膜细胞中TLR4/NF-κB信号通路以及槲皮素的影响,取孕4.5d小鼠,采用组织块培养法培养小鼠子宫内膜细胞,待细胞铺板达80％后,LPS处理细胞4h、8h、12h、24h、48h,提取细胞胞浆和胞核蛋白,Western blotting检测胞浆TLR4蛋白和胞核NF-κB蛋白的表达的变化.补充不同浓度槲皮素(10、50、100μmol/L)处理12h后,HE染色子宫内膜细胞;细胞免疫荧光检测NF-κB的跨膜表达;Western blotting检测胞浆TLR4蛋白和胞核NF-κB蛋白的表达的变化.通过免疫荧光化学染色显示NF-κB蛋白表达由胞质向胞核转位;收集LPS作用子宫内膜细胞各时间段的蛋白,检测TLR4蛋白和NF-κB蛋白的变化,两者表达变化具有同步一致性.试验结果证实LPS有效激活了子宫内膜细胞中TLR4/NF-κB信号通路;10μmol/L的槲皮素能有效缓解LPS对细胞的炎症损伤作用.

摘要： 为探讨山羊子宫内膜细胞和性腺激素对子宫NK细胞(uNK)分泌VEGF和IFN-γ含量的影响.本研究以永生化山羊子宫内膜基质细胞(ESC)和上皮细胞(EEC)为体外研究模型,通过ELISA法检测子宫内膜细胞和性腺激素(E2,P4)对uNK细胞分泌VEGF和IFN-γ含量的影响.结果显示,在uNK细胞与EEC共培养时,雌激素E2单独或与P4共同作用可显著抑制uNK细胞中IFN-γ和VEGF分泌水平(P＜0.05),而P4单独作用不显著;而当uNK细胞与ESC共培养时,孕酮P4单独或与E2共同作用可显著增强IFN-γ在uNK细胞中的分泌水平(P＜0.05),而E2单独或与P4共同作用可显著抑制VEGF分泌水平(P＜0.05).本实验结果提示性腺激素对与EEC或ESC共培养的uNK细胞分泌水平具有不同程度的调节作用.

摘要： 目的：为探讨性腺激素对山羊子宫内膜细胞分泌活性的影响.方法：以hTERT转染获得的永生化山羊子宫内膜细胞为体外研究模型,通过ELISA法检测性腺激素E2和P4对单独或共培养子宫内膜基质(ESC)与上皮细胞(EEC)的TGF-β与TNF-α的分泌活性.结果:不同浓度及组合E2与/或P4均显著增强ESC分泌TGF-β活性(P＜0.05),而对TNF-α分泌活性影响不明显;P4对EEC中TNF-α分泌活性有显著增强作用(P＜0.05),而E2则显著抑制EEC对TGF-β的分泌活性(P＜0.05).在基于套皿共培养ESC与EEC体系中,性腺激素均对TGF-β与TNF-α的分泌活性呈现不同程度的抑制作用.结论：不同浓度E2与/或P4对单独或共培养山羊子宫内膜细胞TGF-β与TNF-α的分泌活性呈现不同的调节作用.

摘要： 为了初步建立有效的牛胚胎与子宫内膜细胞的体外共培养体系.本实验分别将体外受精第7天后的胚胎和孤雌激活,与培养7天的胚胎与子宫内膜细胞共培养,在48、72 h后分别统计体外受精实验组和孤雌激活实验组的孵化率.实验结果表明:在本实验室培养条件下,在与子宫内膜细胞共培养48 h后,体外受精胚胎和孤雌发育胚胎在孵化率上存在显著差异(40±5)％、(25±5)％,(P＜0.05)；与子宫内膜共培养72 h后,孵化率无显著差异(70±8.66)％,(65±5)％,(P＞0.05).本实验证明了在体外环境下,牛体外胚胎与子宫内膜细胞共培养后能够正常孵化,可以初步建立起牛体外胚胎与子宫内膜细胞的体外共培养体系,并为进一步研究该体系对牛体外胚胎培养质量的影响奠定一些基础.

摘要： 目的：探讨子宫内膜细胞共培养联合序贯成组培养对人早期废弃冷冻胚胎发育的影响。方法：获取人子宫内膜细胞并冷冻保存.共培养前解冻内膜细胞并培养至约30％～50％汇合时解冻人早期废弃胚胎.2～3个胚胎一起转移至已更换胚胎培养液的内膜细胞上行成组共培养.待胚胎发育至8细胞期更换为囊胚培养液.观察胚胎复苏存活、桑葚胚及囊胚形成情况.结果：人子宫内膜细胞生长良好.采取内膜细胞联合序贯成组培养废弃胚胎33个,总体桑葚胚形成率45.5％,囊胚形成率27.2％,其中Ⅰ-Ⅱ级胚胎桑葚胚、囊胚形成率皆高于Ⅲ-Ⅳ胚胎,差异有显著意义(P＜0.05).结论：子宫内膜细胞共培养联合序贯成组培养对人早期冷冻胚胎的发育具有积极的支持作用,为充分利用宝贵的资源进行胚胎实验室质控、胚胎干细胞研究等领域提高支持性方案.

摘要： 孕酮对于牛胚胎的着床和妊娠过程的维持具有重要作用。在体条件下，孕酮会阻止子宫内膜的上孕酮受体的增加，但在牛妊娠识别启动时，孕酮的增加并没有影响孕酮受体的表达。在子宫内膜的细胞水平上，孕酮对孕酮受体的表达是否产生影响?本试验分别用50、100、200和400 ng/ml浓度的孕酮处理体外培养的牛子宫内膜细胞1、3、6、12、24小时，然后收集细胞通过半定量RT-PCR分析孕酮对子宫内膜细胞PR表达的影响。结果表明：在细胞层次水平上，孕酮能够抑制子宫内膜体外培养细胞上孕酮受体的表达。

摘要： 利用鸟氨酸脱羧酶(ODC)siRNA干涉、ODC过表达、添加特异性ODC抑制剂二氟甲基鸟氨酸(DFMO)处理小鼠子宫内膜上皮细胞和基质细胞,采用实时定量PCR对多胺代谢相关酶类mRNA水平进行检测.结果显示:在子宫内膜上皮和基质细胞中,ODC siRNA转染后可导致SSAT mRNA水平下降为对照组的71.78%和54.36%(P<0.01),SAMDC mRNA水平上升为对照组的1.666 6倍和3.036 6倍(P<0.01);ODC过表达造成SSAT水平为对照组的1.921 4和2.852 7倍(P<0.01),AZ I mRNA水平为对照组的1.962 1和3.073 8倍(P<0.01);利用DFMO处理体外分离的上皮细胞和基质细胞,SSAT mRNA水平为对照组的1.626 7和1.773 3倍(P<0.01),SAMDC mRNA水平为对照组的1.630 0和1.730 0倍(P<0.01),AZ I mRNA水平为对照组的71.00%和76.67%(P<0.01);DFMO处理后上皮细胞和基质细胞数目(31.00士3.00和43.67士7.51)和活力(0.26士0.03和0.36士0.05)都显著下降(P<0.01),处于静止期的比例增加(56.33%和58.75%)高于对照组(43.46%和47.83%),处于分裂期的百分比(27.27%和27.37%)低于对照组(37.76%和40.30%).结论:对多胺限速酶mRNA水平和酶活性的调节可引起多胺相关酶类mRNA水平的变化,维持了细胞内多胺水平的稳定,从而调节细胞的增殖.

摘要： 子宫内膜炎作为困扰奶牛养殖业的三大疾病之一，给奶牛养殖业的发展带来严重影响。革兰氏阳性菌是引起的子宫内膜炎的主要原因之一，而脂磷壁酸(Lipoteichoic acid，LTA)则是革兰氏阳性菌细胞壁中的重要组成部分。Toll样受体2(Toll-likereceptor 2，TLR2) 是天然免疫系统识别病原微生物的主要受体，在天然免疫反应中具有重要的作用，与革兰氏阳性菌引起的子宫内膜炎密切相关。本试验用LTA刺激，通过体内、体外试验，观察小鼠子宫内膜组织中TLR2表达的变化，以及炎性细胞因子TNF-α、IL6的表达变化，为TLR2信号途径的研究提供一定依据。

摘要： 子宫内膜炎作为困扰奶牛养殖业的三大疾病之一，给奶牛养殖业的发展带来严重影响。革兰氏阳性菌是引起的子宫内膜炎的主要原因之一，而脂磷壁酸(Lipoteichoic acid，LTA)则是革兰氏阳性菌细胞壁中的重要组成部分。Toll样受体2(Toll-likereceptor 2，TLR2) 是天然免疫系统识别病原微生物的主要受体，在天然免疫反应中具有重要的作用，与革兰氏阳性菌引起的子宫内膜炎密切相关。本试验用LTA刺激，通过体内、体外试验，观察小鼠子宫内膜组织中TLR2表达的变化，以及炎性细胞因子TNF-α、IL6的表达变化，为TLR2信号途径的研究提供一定依据。

摘要： 本发明涉及细胞石蜡切片技术领域，具体涉及一种子宫内膜脱落细胞石蜡切片的制备方法，包括以下步骤：（1）采集子宫内膜的脱落细胞样本，并将细胞样本投入到装有保存液的保存瓶中保存；（2）摇匀保存瓶，再将保存瓶内的液体倒入到离心管内进行离心处理，除去上清液后加入缓冲液摇匀，吸取离心管内少量的无悬浮物液体，备用；（3）将促凝剂和固定剂加入到离心管内，混匀，再次进行离心处理，除去上清液后进行冷冻处理，冷冻处理完成后，提取离心管内的细胞沉渣并用滤纸包埋，经常规固定、脱水、透明和石蜡包埋处理后制得石蜡细胞块，石蜡细胞块经切片和HE染色处理后，制得石蜡切片。该制备方法步骤简单，操作方便，制得的石蜡切片的质量好。

摘要： 本发明公开了子宫内膜癌相关的标志分子及其在诊断子宫内膜癌中的应用，所述生物标志物为CDH1和RPS4X，CDH1和RPS4X联合对子宫内膜癌具有较好的诊断效能、较高的灵敏度和特异性，本发明还提供了用于诊断子宫内膜癌的产品以及诊断系统。

摘要： 永生化子宫内膜异位症在位子宫内膜间质细胞构建和鉴定，涉及子宫内膜异位症。iheESCs细胞构建；iheESCs细胞作为子宫内膜间质细胞特征的鉴定。构建的iheESCs细胞的细胞生长周期明显延长，其增殖速率、雌/孕激素受体、EMT标志蛋白等均未发生改变，同时蜕膜化诱导反应、雌激素和炎症反应均为发生改变，并且构建后的细胞不具有致瘤性。因此，构建的iheESCs细胞相比于普通的原代细胞具有明显的生命周期长、表型稳定、状态活性均更高的特点，可适用于子宫内膜异位症病理机制，子宫内膜容受性生理机制等研究，在临床实验、医学生物实验等均具有一定的适用性。

摘要： 本发明公开了一种治疗子宫内膜损伤和卵巢早衰的子宫内膜干细胞及外泌体的联合制剂和其制备方法与给药方法。包括子宫内膜干细胞以及通过饥饿培养获得子宫内膜干细胞外泌体浓缩液。通过对子宫内膜干细胞饥饿培养的方法，促进其生物活性物质的分泌。以外泌体的形式回收子宫内膜干细胞分泌的生物活性物质，大大提高了回收效率、回收方式更为简便。通过不同孔径的生物膜梯度过滤的方法，收集并浓缩子宫内膜干细胞分泌的外泌体，简化了外泌体回收的流程，提高了外泌体的纯度。

摘要： 本发明公开了一种用于治疗子宫内膜损伤的子宫内膜干细胞外泌体浓缩液凝胶制剂及其制备方法与给药方法，采用饥饿子宫内膜干细胞的方法,在较短时间内就能得到人子宫内膜干细胞外泌体提取物，通过超速离心的方法浓缩以获得高浓度的人子宫内膜干细胞外泌体，其中人子宫内膜干细胞外泌体外用凝胶中含有海藻酸钠和复方电解质注射液作为稳定剂，并含有保湿剂、透皮吸收促进剂，使其形成稳定均一，利于吸收的凝胶状物质。用于子宫内膜损伤的治疗。

摘要： 本发明涉及细胞石蜡切片技术领域，具体涉及一种子宫内膜脱落细胞石蜡切片的制备方法，包括以下步骤：（1）采集子宫内膜的脱落细胞样本，并将细胞样本投入到装有保存液的保存瓶中保存；（2）摇匀保存瓶，再将保存瓶内的液体倒入到离心管内进行离心处理，除去上清液后加入缓冲液摇匀，吸取离心管内少量的无悬浮物液体，备用；（3）将促凝剂和固定剂加入到离心管内，混匀，再次进行离心处理，除去上清液后进行冷冻处理，冷冻处理完成后，提取离心管内的细胞沉渣并用滤纸包埋，经常规固定、脱水、透明和石蜡包埋处理后制得石蜡细胞块，石蜡细胞块经切片和HE染色处理后，制得石蜡切片。该制备方法步骤简单，操作方便，制得的石蜡切片的质量好。

摘要： 本发明提供了一种子宫内膜样腺癌检测试剂及其制备方法，检测试剂由以下试剂混合而成，试剂A：浓度为10mM的碳酸氢铵溶液中加入质量浓度0.5～5％的SDS配制而成；试剂B：由0.01～10U/10μL糖胺酰酶和0.01～10U/10μL唾液酸酶混合配制而成，混合溶液pH值为4～9；试剂C：由8‑氨基芘‑1,3,6‑三磺酸溶于DMSO中配制而成，浓度为0.01mM～1M；试剂D：终止液。本发明通过检测试剂测定血清中糖组图谱，将峰值量化进行统计学分析，提供一种子宫内膜样腺癌血清糖组图谱的模型的建立方法来检测子宫内膜样腺癌。

摘要： 本发明公开了子宫内膜癌相关的标志分子及其在诊断子宫内膜癌中的应用，所述生物标志物为CDH1和RPS4X，CDH1和RPS4X联合对子宫内膜癌具有较好的诊断效能、较高的灵敏度和特异性，本发明还提供了用于诊断子宫内膜癌的产品以及诊断系统。

摘要： 本发明涉及一组子宫内膜容受性生物标志物、试剂盒及判断子宫内膜容受性的方法。该生物标志物可以为PCOS不孕患者的早期发现和诊断、靶向干预及指导胚胎移植提供一种高效、快捷、特异性强、敏感性高的检测评估手段；本发明的用于检测PCOS子宫内膜容受性的试剂盒，含有上述子宫内膜容受性标志物，可以为PCOS不孕症患者的早期发现和诊断提供一种高效、快捷、特异性强、敏感性高的检测评估手段。

摘要： 本发明公开了子宫内膜洗液及其在治疗子宫内膜炎方面的应用，它是冲洗健康动物的子宫得到的生理盐水洗液。将子宫内膜洗液注射到患有子宫内膜炎的子宫内，小鼠大肠杆菌子宫内膜炎模型，治愈率达70%。临床试验表明牛子宫内膜炎有效率为70%，治愈率60%。