子孢子

摘要： 疟疾是由疟原虫引起的虫媒传染病,在全球尤其是热带地区肆虐流行,严重威胁着人类的健康.疟原虫主要在人类宿主体内发育繁殖,具有复杂的生命周期,包括疟原虫入侵、迁移、逃避免疫攻击、肝细胞内分裂增殖、入侵红细胞并在红细胞内大量繁殖、周期性释放等系列过程,最终导致疟疾患者症状周期性发作.本文重点围绕疟原虫(即子孢子、裂殖子)人体红细胞外、红细胞内入侵及发育过程的研究进展进行综述,为疟疾疫苗研发和疟疾防控救治提供参考.

摘要： 一、奶牛球虫病简介近年来,奶牛场的犊牛时有感染球虫病。断奶后的犊牛多发,出现腹泻、血样粪便,脱水严重可导致死亡。球虫虫卵感染主要多发生在温暖多雨的夏季。一些感染牛和隐性感染成年牛排出球虫卵囊,在温湿的环境中形成孢子化卵囊-感染性卵囊,污染的垫料、饲草和饮水被犊牛吞食,子孢子进入宿主肠上皮细胞内进行无性和有性繁殖导致犊牛出现腹泻、血便等症状。

摘要： In order to study the effect of artesunate (ARS) on E.tenella sporozoites invading cells,DF-1 cells and sporozoites were treated respectively by ARS.After porozoites labeled by special fluorescent dye,the apoptotic rate of DF-1 cells,mitochondrial membrane potential of sporozoites and invasion rate of sporozoites were detected by flow cytometry.The results showed that there was no significant difference in apoptotic rate of DF-1 cells between treated group by ARS (2.5 μmol/L) for 12 hrs and untreated treatment.Comparing to the control,ARS directly treated sporozoites for 2hrs,the mitochondrial membrane potential decreased by 33.97±8.40％ and the invasion rate of the sporozoites declined by 4.13±3.97％.The cell were treated with ARS for 2hrs or 12hrs before adding the sporozoites,the invasion rate of the sporozoites accordingly decreased by 7.23±2.74％ and 53.67±0.74％,respectively.The cells were mixed with sporozoites and then treated by ARS for 12hrs,the invasion rate of the sporozoites declined by 56.30± 1.81％.The cells and sporozoites were simultaneously treated by ARS and bongkerkic acid,the invasion rate enhanced by 9.70±0.60％ (p＜0.01).Therefore,the results indicated that ARS obviously inhibited the invasion rate of sporozoites mainly via acting with the sites on cellular membrane,and this action had a significant time-effect.This study provides experimental basis for research on anti coccidiosis mechanism of artemisinin drugs.%为研究青蒿琥酯(ARS)对柔嫩艾美耳球虫子孢子(SP)侵入DF-1细胞的影响,本实验利用ARS分别处理SP和DF-1细胞,前者经特定荧光标记后,流式细胞仪检测细胞凋亡、SP线粒体膜电位和侵入率.结果显示,ARS (2.5 μmol/L)处理DF-1细胞12 h与未处理组相比,细胞凋亡率无明显差异.与空白对照组相比,ARS直接处理SP2h,可使SP线粒体膜电位下降33.97±8.40％,并使其对细胞的侵入率下降4.13±3.97％.ARS直接处理细胞2h和12h后,再加入SP,则其侵入率分别下降7.23±2.74％和53.67±0.74％.细胞和SP混合后用ARS处理12 h,其侵入率下降56.30±1.81％.若在ARS处理的同时加入凋亡抑制剂米酵菌酸,可以使SP的侵入率提高9.70±0.60％(p＜0.01).这表明ARS作用于细胞后对SP侵入的抑制作用更为明显,并具有显著的时间效应.本研究为青蒿素类药物抗球虫作用机理研究提供实验依据.

摘要： 鸡的球虫病的对养鸡业危害较为严重的一种寄生虫性疾病,死亡率能达到20％～80％.由于易感性高、耐药性产生快等原因,增加了球虫病治疗的难度,要求在诊断、治疗及用药上都要有准确地把握,才能起到良好的效果.否则将造成严重的经济损失.

摘要： 牛环形泰勒焦虫病由泰勒科泰勒属的环形泰勒焦虫(环形刚第焦虫)引起,是牛的一种季节性很强的地方性流行病,多呈急性过程,发病率高,死亡率大,使养牛业遭受很严重的损失。我国西北、华北、东北的一些省区都有流行。1生活史当感染泰勒焦虫的蜱在牛体吸血时,虫体(子孢子)随蜱的睡液进入牛体,主要在脾、淋巴结、肝等网状内皮组胞内进行裂体增殖,先形成大裂殖体(无性生殖体)。

摘要： 对疟疾免疫的复杂性众所周知,然而抗疟疾免疫保护作用的明确的相关物还没有建立。如果能对疟疾疫苗候选物诱导的免疫标志物有更好的了解,则可大大有助于疫苗的开发、免疫原性的监测和疫苗现场效力的评估。作者曾报告过,用数种疫苗方案在牛津未接触过疟疾的健康受试者中,抗子孢子试验性攻击的完全的保护效力或部分保护效力。

摘要： In order to screen the proteins related to the invasion of Eimeria tenella sporozoites, the yeast two-hybrid cDNA library of E.tenella sporozoites was constructed in the present study. The total RNA was isolated from the sporozoites and used as the template to synthesize the ifrst-strand cDNAs. The dscDNAs were acquired by long-distance polymerase chain reaction (LD-PCR) using the ifrst-strand cDNAs as the template and purified with Chroma Spin TE-400 Column to remove less than 200 bp fragments. The dscDNA,pGADT7-Rec and CarrierDNA were co-transformed into Y187 yeast competent cells. The dscDNA were then connected with pGADT7-Rec by homologous recombination reaction to construct the yeast two-hybrid cDNA library of E. tenella sporozoites. The results showed that the conversion ratio and titer of the cDNA library were 4.33×105/μg pGADT7-Rec and 3.62×107cfu/mL, respectively. As demonstrated in PCR ampliifcation, the cDNA library contained approximately 93.75%recombinant clones and the inserted cDNA fragments were between 200 bp and 2000 bp. Furthermore, 5 gene fragments were obtained by PCR amplication using the cDNA library as template and 5 speciifc pairs of primers of E.tenella. Therefore, it concluded that a yeast two-hybrid cDNA library of the sporozoites was constructed for screening invasion-related interaction proteins of the sporozoites of E.tenella.%为了筛选柔嫩艾美耳球虫子孢子入侵相关的蛋白，利用酵母双杂交体系构建了柔嫩艾美耳球虫子孢子酵母双杂交cDNA文库。提取纯化的子孢子总RNA，经MMLV-RT反转录合成cDNA第一链后，利用LD-PCR扩增合成双链cDNA(ds cDNA)， dscDNA经纯化柱CHROMA SPINT+TE-400 Columns纯化剔除小于200 bp的片段。将纯化后dscDNA、pGADT7-Rec及CarrierDNA共转化到已经制备好的酵母感受态细胞Y187中，dscDNA与pGADT7-Rec以同源重组的方式在细胞内进行连接，经过缺陷性培养基（SD/-Leu）的筛选得到酵母双杂交cDNA文库。结果显示，构建的柔嫩艾美耳球虫子孢子酵母双杂交cDNA文库的转化率为4.33×105/μg pGADT7-Rec，文库滴度为3.62×107 cfu/mL。随机挑取32个单克隆进行PCR检测，插入片段大小为200～2000 bp，重组率为93.75％，并以该文库作为模板，用柔嫩艾美耳球虫5对特异性引物进行PCR扩增，获得了这5个基因片段。结果表明成功构建了柔嫩艾美耳球虫子孢子酵母双杂交cDNA文库，为进一步筛选和研究球虫入侵互作蛋白奠定了基础。

摘要： Apicomplexan parasites infect nearly all vertebrate hosts even including humans and cause some severe diseases such as malaria, toxoplasmosis, cryptosporidiosis which are responsible for substantial economic losses. Like most intracellular pathogens, egress from host cells is a vital step of the apicomplexan parasites, which attracted attentions of many research groups.Unfortunately, as an important genus of Phylum Apicomplexa, little information of egress is known on Eimeria species which leads large amount of losses to poultry industry annually.In this report we used ethanol to induce egress of E.tenella M2e transgenic strain (EtM2e) sporozoites which express yellow fluorescent protein (YFP).Results showed that ethanol could induce egress of EtM2e sporozoites from infected Madin Derby Bovine Kidney ( MDBK) cells, and this process was depended on the mobility of the parasites.We also found that ethanol could also stimulate microneme protein discharge.Furthermore, both the course of egress and the secretion of microneme were controlled by the flux of intracellular Ca2+of the parasite.Taken together, our results preliminarily explained the mechanism of egress of eimerian parasites, which provided clues to the further study.%艾美耳球虫是一类重要的肠道病原，其裂殖生殖阶段的虫体逸出过程是造成畜禽肠道破坏的主要原因之一，但此逸出过程的机制仍鲜有报道。本研究以乙醇作为诱导剂研究柔嫩艾美耳球虫M2 e株子孢子从宿主细胞中逸出的机制。结果显示，乙醇可诱导子孢子从MDBK细胞中逸出，此逸出过程依赖于虫体的运动能力；同时，乙醇可激发子孢子逸出相关的微线体蛋白2（ Mic2）的分泌释放。进一步实验证实，螯合虫体内部钙离子明显阻断了子孢子逸出及Mic2蛋白的释放。本研究初步证实了与柔嫩艾美耳球虫逸出相关的蛋白和离子，为深入解析球虫致病的分子机制、研发新型抗球虫药物提供了新的研究方向。

摘要： 为了研究青蒿琥酯(ARS)对柔嫩艾美耳球虫子孢子入侵DF-1细胞的影响,本试验利用ARS分别处理子孢子和DF-1细胞,特定荧光标记后,流式细胞仪检测细胞凋亡、子孢子线粒体膜电位和入侵率.结果显示,ARS(2.5μmol/L)处理DF-1细胞12h与未处理细胞相比,细胞凋亡率无明显差异.与空白对照组相比,ARS处理子孢子2h可使其线粒体膜电位下降33.97±8.40％,对DF-1细胞的入侵率也有所下降;但ARS处理DF-1细胞2h后再加入子孢子,则入侵率显著下降(43.77±2.27％,P＜0.01).ARS预处理DF-1细胞12h再加入予孢子或者细胞与子孢子混合后处理再给予ATS处理12h,则入侵率分别降为6.37±0.71％和5.00±0.35％.在ARS处理细胞和子孢子的同时加入凋亡抑制剂米酵菌酸,可使子孢子的入侵率平均提高9.70±0.60％(P＜0.01).这表明与处理子孢子相比,ARS处理细胞对子孢子入侵的抑制作用更为明显,并具有显著的时间效应,其机理值得进一步研究.

摘要： 目的：目的探讨常山水提液对艾美耳球虫刺激的鸡免疫细胞(外周血淋巴细胞、脾淋巴细胞、脾巨噬细胞、骨髓巨噬细胞)增殖、NO分泌及吞噬功能的影响,rn 方法：不同浓度常山提取液加入到体外子孢子刺激24h免疫细胞培养体系中培养24h,分别通过MTT法、Griess法和中性红法检测免疫细胞增殖、NO分泌以及吞噬功能.rn 结果：常山提取液在一定浓度内对体外艾美耳球虫子孢子刺激鸡外周血淋巴细胞的增殖和NO分泌有促进作用,低浓度时细胞的增殖作用最显著,细胞分泌NO的含量随常山浓度的升高逐渐升高;常山提取液能够刺激脾淋巴细胞增殖和NO分泌,随着浓度的升高,促进作用增强;常由提取液对脾巨噬细胞的增殖和NO分泌促进作用不明显;常山在一定程度上可以增强脾巨噬细胞和骨髓巨噬细胞的吞噬功能.rn 结论：常山提取液能够刺激免疫细胞增殖、NO分泌,增强巨噬细胞吞噬功能,促进细胞免疫和非特异性免疫,从而抵抗球虫感染.

摘要： 为对柔嫩艾美尔球虫子孢子阶段的基因克隆和分析研究.利用invitrogen的CloneMiner Ⅱ cDNAL-ibrary Construction Kit构建了柔嫩艾美尔球虫子孢子阶段的全长cDNA文库.用Invitrogen Trizol Reagent提出总RNA,用Fasttrack2.0试剂盒分离mRNA,以mRNA为模板进行cDNA双链的合成并对加重组接头和分级分离纯化,将分级分离纯化的cDNA与pDONR222载体进行重组反应,并将重组产物用电转化法转入DH10B感受态细胞内得到原始文库,扩增后保存于:80°C冰箱内.随机抽提质粒进行测序,在NCBI中利用BLAST进行比对,并利用与NCBI中ORF Finder软件对测序结果进行ORF的预测.经测定,构建的cDNA文库库容量约为0.5～1×107,平均平均插入片段大于1.0 kb,重组率大于85％,全长比例大于50％.随机选取20个克隆测序中含有EtMICl、EtSERPIN1及其他与弓形虫高度类似的基因.本研究成功构建了柔嫩艾美尔球虫高质量的子孢子全长cDNA文库,从而为研究相关的功能基因奠定了基础.

摘要： 本发明涉及一种解析球虫子孢子表面蛋白指纹图谱的方法及球虫子孢子表面蛋白指纹图谱的应用，属于兽医技术领域。本发明采用生物素标记试剂Sulfo‑NHS‑SS‑Biotin标记子孢子，后用细胞裂解液裂解子孢子，并提取子孢子细胞膜蛋白，将获得蛋白利用链霉亲和素‑琼脂糖亲和纯化，后进行质谱鉴定分析，建立一种有效分离子孢子表面蛋白方法，并阐明子孢子表面蛋白谱组成，为筛选有效表面蛋白抗原，获得具有应用潜力的疫苗候选分子组合奠定基础。

摘要： 本发明涉及用于以高产率纯化高品质的重组恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)环子孢子蛋白的方法。这一方法以高产率提供rCSP而不需要变性和重折叠该蛋白质。本发明克服了本发明领域中先前遇到的障碍，包括rCSP的二聚化、聚集和N‑末端降解。本发明提供的方法是可放大的，且可以应用于大的发酵批次。本发明还涉及重组恶性疟原虫环子孢子蛋白的稳定液体制剂及用于稳定地维持rCSP在稳定液体制剂中的方法。

摘要： 本发明涉及一种解析球虫子孢子表面蛋白指纹图谱的方法及球虫子孢子表面蛋白指纹图谱的应用，属于兽医技术领域。本发明采用生物素标记试剂Sulfo‑NHS‑SS‑Biotin标记子孢子，后用细胞裂解液裂解子孢子，并提取子孢子细胞膜蛋白，将获得蛋白利用链霉亲和素‑琼脂糖亲和纯化，后进行质谱鉴定分析，建立一种有效分离子孢子表面蛋白方法，并阐明子孢子表面蛋白谱组成，为筛选有效表面蛋白抗原，获得具有应用潜力的疫苗候选分子组合奠定基础。

摘要： 本发明提供了靶向疟原虫子孢子、特别是疟原虫环子孢子蛋白的抗体。本发明还提供了编码这种抗体的核酸。此外，本发明提供了本发明的抗体在预防和治疗疟疾中的用途。

摘要： 本发明提供一种柔嫩艾美耳球虫子孢子的分离纯化方法和接种方法，涉及生物技术领域。本发明的分离纯化方法包括：取感染鸡粪便，加水，过滤；离心，沉淀加入饱和食盐水，离心，上清液加水得卵囊稀释液；离心，沉淀加入氯胺T溶液，得孢子化卵囊悬液；离心，沉淀加入饱和食盐水重悬，离心收集卵囊沉淀；加入次氯酸钠溶液重悬，收集卵囊；震荡破碎，待孢子囊全部逸出停止震荡，离心得到孢子囊，加入胰酶消化液进行消化，过滤离心收集沉淀，得柔嫩艾美耳球虫子孢子。本发明的接种方法是将上述孢子囊或子孢子精准注射于小鸡肌胃和小肠中段，实现成功感染。本发明的纯化方法得到的孢子囊和子孢子的纯化程度高，实验操作简便，注射接种后感染成功率达100％。

摘要： 本发明提供了例如用于疟疾疫苗的根据SEQ ID NO:1的疟原虫环子孢子蛋白的片段。本发明还提供了编码根据SEQ ID NO:1的疟原虫环子孢子蛋白的片段的核酸、包含根据SEQ ID NO:1的疟原虫环子孢子蛋白的片段的组合物和结合根据SEQ ID NO:1的疟原虫环子孢子蛋白的片段的抗体。根据本发明的抗体特异性结合恶性疟原虫子孢子并且可用于治疗和/或预防疟疾。

摘要： 本发明涉及一种快速获得大量纯化的疟原虫子孢子的方法，先收集感染疟疾的按蚊，经麻醉消毒后，用精细的解剖分离方法取代传统的匀浆处理方法，以获得唾液腺子孢子，然后利用无菌滤膜替代传统的纤维素柱进行纯化处理，即得纯化的疟原虫子孢子。操作简便可逆，与传统方法相比，具有分离时间短、子孢子得率高、活力高等优点。

摘要： 本申请是有关体外饲养的人类宿主范围疟原虫子孢子，其中从配子母细胞期到子孢子期的孢子生殖在蚊子外部进行，和产生所述子孢子的方法。本文提供体外饲养的人类宿主范围感染性疟原虫子孢子(SPZ)，尤其恶性疟原虫、间日疟原虫、卵形疟原虫、三日疟原虫和诺氏疟原虫，其中从配子母细胞期到子孢子期的孢子生殖在蚊子外部进行，和产生所述子孢子的方法。

摘要： 本实用新型属于微生物领域，提供一种球虫子孢子分离装置，包括层析组件和恒温加热组件。层析组件包括层析柱，在层析柱内设置有纤维素脱洗液，层析柱的底部设置有子孢子通道。恒温加热组件包括液浴套管和恒温液供给装置，液浴套管套设在层析柱的外侧，恒温液供给装置控制恒温液体循环流动，在流动过程中途经液浴套管，恒温液体对层析柱内的纤维素脱洗液进行恒温加热，使层析柱内的子孢子始终在适宜的温度下蠕动，始终保持较高的活性。本实用新型提供的球虫子孢子分离装置解决了现有技术中使用加热灯对纤维素脱洗液加热导致的温度不可控的问题，提高了子孢子分离的成功率。

摘要： 本实用新型公开了一种用于纯化柔嫩艾美耳球虫子孢子的层析柱，其包括中空圆柱筒，在所述中空圆柱筒的底部中心延伸设有用于滤液流出的中空管，所述中空管与中空圆柱筒相连通；在中空圆柱筒外套设有保温套，在中空圆柱筒内自下至上依次填充有过滤纱布层和DEAE‑52纤维素层。实验证明，采用本实用新型提供的层析柱可实现快速纯化回收柔嫩艾美耳球虫子孢子，回收率可高达85％，并能够保持子孢子的活力；另外，本实用新型所述层析柱还具有结构简单、使用方便、制作成本低等优点，对开展柔嫩艾美耳球虫的研究试验具有重要价值和很强的实用性。