TaqMan

摘要： 目的 建立一种灵敏且特异的实时荧光定量RT-PCR方法,用于快速检测盖塔病毒(getah virus,GETV).方法 从GenBank数据库下载GETV基因序列,使用Clustal X完成序列比对,针对高保守区段设计特异性引物和探针;以GETV核酸为标准品建立标准曲线,分别对检测反应的灵敏度、特异性和稳定性进行评价.结果 本方法能特异地检测GETV,与多种虫媒病毒无交叉反应;灵敏度为1.0× 10 pfu/ml,批内和批间变异系数均小于1％.从湖南、河北、福建、重庆采集的196批蚊虫中检出1批GETV阳性.结论 建立了灵敏度高,特异性强的TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR方法用于GETV筛查.

摘要： 目的 基于猪霍乱沙门菌血清型特异性基因,建立TaqMan逆转录实时聚合酶链反应(TaqMamrRT-PCR)检测猪霍乱沙门菌的方法.方法 利用基因组序列比对筛选到猪霍乱沙门菌特有的基因SC0358,通过普通PCR及利用多种血清型沙门菌及非沙门菌菌株共计145株,评价该方法的菌株特异性,针对该基因设计TaqMan-rRT-PCR检测方法的引物,优化反应条件,建立针对该靶基因的TaqMan-rRT-PCR检测方法,以纯菌及血液模拟标本RNA为模板进行敏感性检测.结果 利用该方法检测26株猪霍乱沙门菌均为阳性,其余菌株扩增均阴性,对纯菌RNA检测中,TaqMan-rRT-PCR的最低检测限度为5 fg/反应,约为10个拷贝/反应.对全血液模拟样品分析中,敏感性达25 cfu/mL.结论 以猪霍乱沙门菌保守、特异基因SC0358建立的TaqMan-rRT-PCR方法,能够简便快捷区分猪霍乱沙门菌与其他血清型沙门菌,尤其能够区分与其有抗原式相同的丙型副伤寒沙门菌,此方法为猪霍乱沙门菌感染的快速诊断提供了简便的手段,可用于对猪霍乱沙门菌的早期诊断.

摘要： 文章通过选用磁珠法组织核酸提取试剂盒对畜肉制品中的DNA进行提取,使之适用于PCR检测技术,依据标准《畜肉制品中牛成分定性检测方法实时荧光PCR法》(SN/T 2557—2010)检测其中是否含有牛特异性基因序列,同时在提取时加入猪源作为干扰,并进行灵敏度试验,为验证提取、扩增过程及方法准确性,加做核酸提取空白、扩增空白对照、扩增阴性对照和扩增阳性对照.该方法选用的磁珠法组织核酸提取试剂盒提取效率高,抗干扰能力强,且该方法在检测结果分析中增加了质量控制,可排除假阴性结果,检测时间可缩短为4h以内,可用于市售新鲜、冷冻畜肉和肉干、肉酱等畜肉制品中的牛成分快速定性检测.从而为打击不法商家和企业用低价猪肉代替或非肉冒充牛肉提供了有力的技术保障,维护了消费者权益.

摘要： 为了建立TaqMan荧光定量PCR方法来快速检测水貂淋巴细胞上的犬瘟热病毒受体信号淋巴细胞激活分子(SLAM),根据水貂SLAM基因的保守区域,设计1对特异引物和探针,通过优化反应条件,并进行敏感性试验、重复性试验和水貂外周血淋巴细胞检测试验.结果 表明,建立的TaqMan荧光定量PCR检测方法最低检出量可达4.9个拷贝;组内重复和组间重复Cq值变异系数均小于1％;应用该方法可成功检出犬瘟热病毒感染前后水貂外周血淋巴细胞中的SLAM基因的表达情况.表明建立的检测方法敏感性高,重复性好,可以用于犬瘟热病毒与SLAM受体互作以及致病机制的研究.

摘要： 山羊支原体山羊亚种(Mcc)是引起传染性无乳症(CA)的主要病原之一.为建立一种准确、快速、高通量的Mcc检测方法,本研究根据GenBank登录的Mcc ATCC27343株MCAP_0033基因序列设计1对特异性引物和探针,通过各反应条件的优化,建立了基于Mcc California Kid株的TaqMan荧光定量PCR方法,并对该方法进行特异性、敏感性和重复性试验.结果显示,该方法能特异性检测Mcc,与山羊支原体山羊肺炎亚种、丝状支原体山羊亚种、绵羊肺炎支原体、精氨酸支原体、牛支原体、大肠杆菌、巴氏杆菌、莱氏无胆甾原体、金黄色葡萄球菌、溶血性曼氏杆菌、伪结核棒状杆菌等羊常见病原均无交叉反应,特异性较强;该方法对Mcc的检测限为10拷贝/μL,敏感性较高,而常规PCR检测限仅为104拷贝/μL;组内和组间重复性试验的变异系数均小于2％,重复性较好.利用该方法对47份肺脏组织样品进行检测,同时利用PCR方法和支原体分离鉴定法进行检测.结果3种方法均未检出Mcc,与福建省未有该病发生的报道一致.以上结果表明该方法可用于Mcc的快速检测.本研究首次建立的Mcc TaqMan荧光定量PCR方法为Mcc感染的早期快速检测提供技术支持.

摘要： 为了建立快速检测水貂犬瘟热病毒的TaqMan荧光定量PCR方法,试验根据犬瘟热病毒核衣壳蛋白基因的保守区域设计一对特异引物和探针,优化体系反应条件,并进行敏感性试验、特异性试验、重复性试验和水貂外周血淋巴细胞感染犬瘟热病毒后的检测.结果 表明:建立的TaqMan荧光定量PCR检测方法最低检出量为3.96个拷贝;与水貂细小病毒、水貂阿留申病毒均无交叉反应;批内重复和批间重复循环阈值(Ct)变异系数均小于1％;应用该方法可成功检出水貂外周血淋巴细胞中的犬瘟热病毒.说明建立的检测方法敏感性、特异性、重复性好,可以用于水貂犬瘟热病毒的临床检测.

摘要： 根据猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2的序列设计两对特异性引物及TaqMan探针，以重组质粒为标准品做标准曲线，建立了PCV2的TaqMan荧光定量PCR检测方法。结果显示：TaqMan荧光定量建立的标准曲线循环阈值(Ct值)与模板浓度具有良好的线性关系，相关系数为0.99652，灵敏度约为2×104拷贝/μL，对猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒、猪伪狂犬病毒、猪瘟兔化弱毒无交叉反应.表明本方法快速、敏感、特异性强，具有较高的重复性，为PCC2的临床检测及基础研究提供技术支持。

摘要： 根据猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2的序列设计两对特异性引物及TaqMan探针，以重组质粒为标准品做标准曲线，建立了PCV2的TaqMan荧光定量PCR检测方法。结果显示：TaqMan荧光定量建立的标准曲线循环阈值(Ct值)与模板浓度具有良好的线性关系，相关系数为0.99652，灵敏度约为2×104拷贝/μL，对猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒、猪伪狂犬病毒、猪瘟兔化弱毒无交叉反应.表明本方法快速、敏感、特异性强，具有较高的重复性，为PCC2的临床检测及基础研究提供技术支持。

摘要： 根据猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2的序列设计两对特异性引物及TaqMan探针，以重组质粒为标准品做标准曲线，建立了PCV2的TaqMan荧光定量PCR检测方法。结果显示：TaqMan荧光定量建立的标准曲线循环阈值(Ct值)与模板浓度具有良好的线性关系，相关系数为0.99652，灵敏度约为2×104拷贝/μL，对猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒、猪伪狂犬病毒、猪瘟兔化弱毒无交叉反应.表明本方法快速、敏感、特异性强，具有较高的重复性，为PCC2的临床检测及基础研究提供技术支持。

摘要： 本发明基于TaqMan探针，建立了一套利用qPCR（实时荧光定量PCR）技术快速鉴别美洲大蠊药材的方法，设计了一对特异性引物及一条特异性探针。采用特异性引物组，对美洲大蠊待测样品的基因组DNA进行实时荧光定量PCR，通过探针在反应过程中，荧光信号的变化对样品进行定性和定量的检测。本方法具有操作方便、快速（1.5 h之内）、省时及准确等优势。

摘要： 基于Taqman探针的水貂圆环病毒实时荧光定量PCR试剂盒，涉及水貂圆环病毒检测领域，包括上游引物、下游引物、探针、2X TaqMan Fast qPCR预混液、ddH2O、阳性质控品和阴性质控品；上游引物MiCV‑F：5'‑AGGGCCTTTGGGCATCATTG‑3'；下游引物MiCV‑R：5'‑CCCGCCTGCAAACTGAAGAA‑3'；探针MiCV‑P：5'‑ACGGAGTTGCTGCAGATGCCACGGT‑3'；探针MiCV‑P的5'端为荧光基团标记，探针MiCV‑P的3'端为荧光淬灭基团标记。本发明针对性强、特异性强、敏感性高和可重复性好，能够实时快速测定水貂圆环病毒。

摘要： 本发明属于病毒检测领域，具体提供了一种同时检测三种圆圈病毒的三重TaqMan荧光定量PCR试剂盒，其中整合了鸡传染性贫血病毒(CAV)的正向引物、反向引物和特异性荧光探针；圆圈病毒禽源1型(Gyrovirus galga1，GyG1)的正向引物、反向引物和特异性荧光探针；圆圈病毒人源1型(Gyrovirushomsa1,GyH1)的正向引物、反向引物和特异性荧光探针；采用上述组成的试剂盒具备高灵敏性、高特异性、低污染和实时检测的优势，为畜禽养殖场临床圆圈病毒病的早期诊断、监测预警和防治，及动物食品安全检验提供可靠的技术和产品。

摘要： 本发明提供了一种快速鉴别和检测禽腺病毒血清4型和8型的TaqMan引物和探针序列，包括以下目的基因的特异性引物和探针，其序列如下：上游引物序列为：5’‑TTCGACACGTCCATCAACTG‑3’；下游引物序列为：5’‑GTCGTAGTGGAAGTACTGACG‑3’；探针序列：5’‑TGCGACATCACCAAGGACT‑3’；其中探针序列的5’端采用FAM修饰，3’端采用MGB基团修饰。根据该发明的TaqMan引物能够快速鉴别FAdv‑4和FAdv‑8，可对FAdv阳性样品的绝对定量和样品中FAdv载量的计算。本发明提供的引物和探针序列具有良好的检测特异性和灵敏度。

摘要： 本发明公开了一种牛纽布病毒TaqMan荧光定量RT‑PCR检测引物、探针及应用。属于生物检测技术领域。包括：引物NB‑F‑4716、NB‑R‑4949和探针NBV‑TZ。本发明最佳上下游引物浓度均为500nmol/L，探针浓度为400nmol/L，在1×108～1×101copies/μL之间呈现良好的线性关系，线性相关系数R2＝0.996，扩增效率为105.9％；特异性较强，敏感性较高，对BNeV质粒标准品最低检测下限为1×101copies/μL，重复性较好，组内变异系数和组间变异系数均小于3％；为BNeV的检测和分子流行病学调查提供了有力的手段。

摘要： 本发明公开了一种用于检测犬细环病毒的引物和TaqMan探针及其应用，属于分子生物学领域。所述引物上游检测引物如SEQ ID NO:1所示，下游检测引物如SEQ ID NO:2所示；探针如SEQ ID NO:5所示。本发明还在上述引物两侧的基因组序列上，设计一对新的质粒引物，其扩增片段长度为395bp，涵盖了荧光定量引物扩增的178bp片段的全部，该对质粒引物的序列如SEQ ID NO:3‑4所示。本发明利用上述引物和探针或者质粒引物检测犬细环病毒具有检测时间短、灵敏性高、特异性强、重复性好等优势，同时也有效的解决了传统PCR污染问题，为犬细环病毒的检测提供了一种有效的技术手段。

摘要： 本发明提供了一种逆转录引物、下游引物和TaqMan探针序列的组合物，所述逆转录引物序列包括TaqMan探针序列和PCR下游引物序列。本发明组合物具有通用性，只需要根据目标基因设计上游引物，与本发明组合物一起使用即可用于不同的基因检测，简化了实验前期准备工作以及实验操作过程，大大降低了实验成本。

摘要： 本发明公开了禽呼肠孤病毒TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR检测试剂盒及其应用。本发明提供了引物探针组，由引物1、引物2和探针组成；所述引物1的核苷酸序列为序列1；所述引物2的核苷酸序列为序列2；所述探针的核苷酸序列为序列3。本发明利用TaqMan MGB探针技术，建立一种特异性检测ARV病毒的实时荧光定量PCR技术，成功运用于ARV的快速检测诊断。

摘要： 本发明属于分子生物学技术领域，尤其涉及一种利用TaqMan探针和特异性引物鉴别山银花及其制剂的方法。所述特异性引物包括上游引物和下游引物，上游引物的核苷酸序列为5'‑TCCAACAGTTTTTCTTTTATTTTTA‑3'，下游引物的核苷酸序列为5'‑GTCTTAGTGTATACGAGTTAAAAAA‑3；TaqMan探针的核苷酸序列为5'FAM‑TAAAAAATGAAAGCCCAAAACACAA‑BQ13'。TaqMan探针法是首次应用到山银花的鉴别；专属性强，从物种DNA层面鉴别山银花，本发明所述引物及探针序列是山银花所专有，其他物种或药材则无此序列；灵敏度高，只要ng级别的模板DNA浓度，当药材、饮片及制剂中掺入1％的山银花药材或粉末即可检出；适用性广，不受药材生长环境及外观性状的影响，性状完全破碎的药材粉末均可应用，对于山银花制剂中可检查山银花原料药材基源是否正确，即使经过加工炮制的山银花制剂也适用。

摘要： 本发明公开了一种检测雄激素受体突变ARv33基因表达的引物、taqman探针、RT‑PCR试剂盒及检测方法，引物包括上游引物序列如SEQ ID NO:13所示，下游引物序列如SEQ ID NO:14所示，taqman探针的核酸序列如SEQ ID NO:15所示；同时公开了采用前述引物和taqman探针来检测ARv33基因表达的RT‑PCR试剂盒，以及检测方法。