夹心ELISA

摘要： 本试验旨在建立一种可用于大规模检测蓝狐兔脑炎微孢子虫的夹心ELISA方法,使其在疾病早期或隐性感染时,能及早地发现并确诊,从而采取措施。首先,于病料中初步分离兔脑炎微孢子虫,随后通过革兰染色和ITS基因对比验证病原,通过接种犬肾细胞进行纯化。制定免疫方案,将纯化的兔脑炎微孢子虫以1×10^(7)mL^(-1)免疫新西兰白兔制备多克隆抗体。采用纯化后的多抗作为捕捉抗体,蓝狐Ig G作为识别抗体,家兔抗狐Ig G-HRP作为指示抗体,通过检测纯化后的微孢子虫建立夹心ELISA。研究表明,多抗最适包被质量浓度为5μg/m L,50 g/L脱脂奶粉溶液37°C封闭1 h,待测样本孵育时间为2 h(37°C),识别抗体质量浓度为37.5μg/m L,反应时间为1.5 h(37°C),家兔抗狐Ig G-HRP工作浓度为1∶5000,孵育时间为1 h(37°C)。本研究建立的夹心ELISA对纯化孢子的最低检测浓度为6.25×10^(5)mL^(-1),对人工添加微孢子虫的最低检测灵敏度为1.25×10^(6)mL^(-1),特异性试验时只在检测添加兔脑炎微孢子虫时为阳性。通过检测辽宁省辽阳市不同养殖场的60份样品,对建立的夹心ELISA进行初步应用,其结果与PCR检测结果的符合率为79.97%。本研究具有一定的可应用性,可为大规模检测蓝狐感染兔脑炎微孢子虫时提供一些技术支持,同时也为兔脑炎微孢子虫的免疫学检测方法的研究提供了理论依据。

摘要： 为建立一种早期诊断动物细粒棘球蚴病的方法,诱导表达含PET-EgAgB8/2载体的原核表达菌,以表达纯化蛋白为抗原,制备单克隆抗体,并以制备的抗体建立检测细粒棘球蚴病夹心ELISA方法.结果显示,原核表达菌在37°C诱导培养,菌体上清中大量表达,经验证为目的蛋白,用纯化蛋白免疫小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞融合,筛选得到9株具有良好特异性、稳定分泌单克隆抗体的细胞株,经两两配对,选择75C86/15作为包被抗体,27E57/32为酶标二抗,当包被抗体浓度为1.42μg/mL,4°C包被过夜、用含50 g/L脱脂奶粉的PBS T封闭、抗原作1:100稀释、酶标二抗1:1000稀释、反应底物作用15 min时效果最佳,检测方法的特异性为98.8％,敏感性为95.3％.成功制备细粒棘球蚴抗原B8/2蛋白单克隆抗体并建立了ELISA检测方法.

摘要： 用禽流感病毒(AIV)A/Chicken/Guangxi/90C/2011(H1N2)毒株制备单克隆抗体(McAb)并建立夹心ELISA检测H1亚型AIV。AIV 90C/2011(H1N2)毒株经纯化灭活后免疫BALB/c小鼠,取第5次免疫3 d后的脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合。用4 U的H1抗原经血凝抑制试验(HI)筛选效价高的杂交瘤细胞株并经3次亚克隆,最终获得抗体分泌高且稳定的杂交瘤细胞株。分泌的抗体经H1 HI、Western-blot和间接免疫荧光检测进行验证,并用于建立夹心ELISA方法检测H1 AIV。经融合细胞筛选,获得4株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株,用其中一株7B9制备单克隆抗体,分泌抗体效价达1∶512,其抗体类型经鉴定为Ig G1。用制备的单抗建立夹心ELISA方法检测H1 AIV,测定其阴阳判定值为0.2714。特异性试验显示,检测的H1 AIV毒株D450值均大于0.2714,对照的其他AIV毒株以及新城疫病毒、产蛋下降综合征病毒毒株的D450值均小于0.2714。敏感性测试最低能检测出10^(-5)稀释的HA效价的H1 AIV。本试验建立的基于McAb的H1 AIV夹心ELISA检测方法特异性好,敏感。

摘要： 本研究基于实验室制备的PCV3 Cap蛋白单克隆抗体,建立检测PCV3的夹心ELISA方法.通过筛选最佳包被浓度、包被时间、一抗和二抗浓度来建立夹心ELISA方法并确定临界值.探讨该方法的特异性和重复性,并进行临床应用.结果表明,单抗包被10μg/mL(1:200)、一抗1:4000稀释、二抗1:5000稀释后的作用浓度为最佳工作浓度;特异性试验表明,该诊断方法特异性良好,与PCV2等多种病毒蛋白不存在交叉反应;重复测试结果表明,测定内和测定间的变异小于5％.研究结果表明,建立的夹心ELISA试验可用于临床检测PCV3.

摘要： 为了建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)游离受体定量检测方法,本试验用表达猪唾液酸黏附素(Sn)游离受体的重组腺病毒rAd Sn4D-Fc感染PK-15细胞,以细胞培养上清纯化的Sn4DFc游离受体作为标准抗原,鼠抗猪Sn免疫血清为一抗,生物素标记兔抗猪Sn多克隆抗体为二抗,建立定量检测Sn4D-Fc游离受体的双抗体夹心ELISA方法;用rAd-Sn4D-Fc注射仔猪,定期采集血清进行游离受体检测.结果显示,纯化Sn4D-Fc标准抗原的纯度为94.3％,能被Sn免疫血清识别;一抗的最佳工作浓度为5 μg/mL蛋白,二抗的最佳稀释度为1∶4 000,夹心ELISA检测标准抗原的灵敏度为0.4 ng/mL,对照抗原无交叉反应;夹心ELISA能从重组腺病毒注射猪血清中检测到Sn4D-Fc游离受体,最高表达量为6.54 ng/mL,持续时间为15d.研究结果表明,建立的双抗体夹心ELISA可用于PRRSV游离受体的体内外定量检测.

摘要： 为掌握泸山猴群的结核杆菌感染情况,2016年12月利用泸山猴群抓捕分流机会,在捕获的103只猕猴群中,随机采集47份血液标本,采用双抗体夹心ELISA方法进行结核杆菌检测.结果显示,47份血液标本均为阴性.结果表明,泸山景区猕猴群感染结核病的风险较低,与人类互相传染的可能性小,但需继续加强监测和宣传,倡导文明旅游,共同保护人类与野生动物的健康.%In order to recognize the infection status ofMycobacterium tuberculosis in monkeys in Lushan City, 47 blood samples were randomly collected from 103 macaques which were captured during their group division in December of 2016,then double-antibody sandwich ELISA method was used to conductMycobacterium tuberculosis detection. The results showed that all the 47 samples were detected negative,indicating the probability of Tuberculosis infection of macaques in Lushan scenic area was low,and it was unlikely to transmit to humans. However,it was necessary to continuously strengthen the relevant surveillance and publicity,advocate civilized tourism,so as to protect the health of human and wildlife jointly.

摘要： This study was aimed to develop a sandwich ELISA kit for the diagnosis of bovine tuberculosis.And it was applied and evaluated in the quarantine of bovine tuberculosis.We established a bovine IFN-γ release method in vitro and developing three batches of kits.The sensitivity,repeatability and retention period of the kit were all evaluated.Totally 961 serum samples were tested using the developed sandwich ELISA kit tuberculin skin test and a commercial ELISA kit.Our results showed that the detection limit of this ELISA was 8.21 mg/mL.The repeatability tests showed good reproducibility in the intraassay and inter-assay.At the same time,the retention period of the kit was more than 12 months.Compared with the tuberculin skin test,the positive coincidence rate was 70.59％ and the negative coincidence rate was 99.20％,while the total coincidence rate was 98.44％.And compared with the BOVIGAMTM kit,the positive coincidence rate was 91.30％ and the negative coincidence rate was 99.78％,while the total coincidence rate reached 99.58％.At the same time,the sensitivity and specificity of the sandwich kit were 85.00％ and 100％,respectively.We established a bovine IFN-γ release method in vitro and developing corresponding kits successfully have a good application prospect.%目的 研制一种牛结核γ-干扰素夹心ELISA检测试剂盒,并在奶牛结核病检疫中进行初步应用和评价.方法 建立牛结核γ-干扰素夹心ELISA检测方法,基于此法试制3批试剂盒,并对试剂盒的灵敏度、可重复性和保存期进行评价,其后进行初步应用,对961头奶牛采用单纯颈部皮试变态反应、商品化BOVIGAMTM试剂盒与试制的牛结核γ-干扰素夹心ELISA检测试剂盒进行同步检测.结果 该试剂盒对质控样品的最低检出量达到8.21 ng/mL,而且检测重复性良好,试剂盒保存期达12个月以上.在进行临床试验时,试制的试剂盒与单纯颈部皮试变态反应相比,阳性一致率为70.59％,阴性一致率为99.20％,总一致率为98.44％;与BOVIGAMTM试剂盒相比,阳性一致率为91.30％,阴性一致率为99.78％,总一致率为99.58％.其灵敏度为85.00％,特异性为100.00％.结论 成功建立牛结核γ-干扰素夹心ELISA检测方法,并研制出相应试剂盒,具有良好应用前景.

摘要： Vitellogenin (VTG) in zebrafish (Danio rerio) is a core biomarker for screening estrogenic activity of chemicals in the test guidelines of the Organization for Economic Co-operation and Development.Piscine VTG is normally quantified by the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) including competitive ELISA and sandwich ELISA.Among them,competitive ELISA was the most commonly used method.To determine the optimal method for accurate quantification of zebrafish VTG,both competitive ELISA and sandwich ELISA were developed and their performances were compared in this study.First,VTG was purified from the whole body homogenate (WBH) of zebrafish treated with 17β-estradiol (E2)by gel filtration followed by anion-exchange chromatography.The purified proteins were subjected to native polyacrylamide gel electrophoresis (Native-PAGE) and stained positively with methyl green,Sudan black B,and Schiff's reagent,thus they were characterized as phospholipoglycoproteins.In sodium dodecyl sulfate-PAGE (SDS-PAGE),the purified proteins were separated into two major polypeptides corresponding to 180 and 143 kDa,which was similar to other reports on the VTGs.Therefore,the purified proteins were identified as zebrafish VTGs.Then,the purified VTGs were used to immunize rabbits by intraperitoneal injection to prepare anti-VTG polyclonal antibody.Western blot revealed that the prepared antibody reacted with homogenate from E2-treated male zebrafish and purified VTG,but no cross-reaction was observed in the homogenate from control male zebrafish,indicating that the antibody was highly specific to zebrafish VTG.Using the purified VTG and polyclonal antibody,competitive ELISA and sandwich ELISA for quantifying VTG concentrations in zebrafish were developed.The specificity test showed that VTG standard curves of both ELISAs were parallel to curves of WBH from E2-treated males,while there was no cross-reactivity with WBH from control males,confirming that both ELISAs could specifically quantify VTG concentrations of WBH in zebrafish.The competitive ELISA had a detection limit of 20 ng/mL and a working range from 31.25 to 1 000 ng/mL,while the sandwich ELISA had a working range from 3.9 to 250 ng/mL and a detection limit of 2.2 ng/mL,which was lower than the competitive ELISA.Moreover,the sandwich ELISA was simple and timesaving because it did not include the preincubation protocol of samples.Additionally,the intra-and inter-assay coefficients of variations in the sandwich ELISA were 2.1％～5.7％ and 3.0％～7.3％,respectively,which were lower than the values of competitive ELISA,revealing that the sandwich format had a higher precision.This study revealed that the simple and highly sensitive sandwich ELISA was suitable for the accurate detection of VTG inductions in zebrafish exposed to environmental estrogens.%斑马鱼卵黄原蛋白(Vitellogenin,VTG)是检测环境雌激素活性的重要生物标志物.为了确定最佳的斑马鱼VTG检测方法,本研究利用纯化的斑马鱼VTG及其多克隆抗体同时建立了竞争ELISA与夹心ELISA,并比较了2种方法对VTG的敏感度与精确度.采用凝胶过滤与离子交换层析相结合的方法从17β-雌二醇暴露后的斑马鱼整体匀浆液中纯化获得了2种高分子量的糖磷脂蛋白,SDS变性电泳显示分子量为180与143 kDa的两条主带,证实纯化的蛋白为斑马鱼VTG.Western blot结果表明制备的抗血清对斑马鱼VTG具有很高的特异性,利用纯化的VTG及其多克隆抗体建立了定量斑马鱼VTG的竞争ELISA和夹心ELISA.与竞争ELISA相比,夹心ELISA不需要抗原抗体共孵育的过程,操作更加省时、简便,其工作范围为3.9～250 ng/mL,检出限约为2.2 ng/mL,组内与组间变异系数则分别为2.1～5.7和3.0～7.3,表现出更高的敏感度与精确度,推荐该方法用于环境雌激素活性的检测.

摘要： A sandwich ELISA was generated to detect viral hemorrhagic septicemia virus (VHSV) using MAb IP5B11 as capture antibody and rabbit polyclonal antibody to VHSV as detection antibody.The reaction conditions were optimized and the coating and blocking agents were confirmed to be buffer bicarbonate at 4 °C for 12 h and 10％ fetal bovine serum at 37 °C for 2 h,respectively.The optimal reaction time and temperature of antigen were 20 °C for 90 min.The specificity of the sandwich ELISA was tested with several common fish virus and no cross reaction was observed.The coefficients of variation of the inter-and intra-assay were 0.046 and 0.064,respectively.Application of this sandwich ELISA to 40 eel tissue homogenate mixed with VHSV and 40 eel and 5 platichthys stellatus homogenate without virus as negative control revealed that the sandwich ELISA had the same accuracy as the RT-PCR,the coincidence rate was 100％.The development and application of this test used for entry and exit fish quarantine and epidemic surveillance of domestic farms were promising.%为建立病毒性出血性败血症病毒(VHSV)的夹心ELISA方法,本研究以VHSV单克隆抗体(MAb)IP5B11为捕捉抗体,兔抗VHSV多抗为检测抗体,经反应条件优化建立了VHSV夹心ELISA检测方法.结果表明,该方法与几种常见鱼病病毒无交叉反应,具有较好的特异性;该方法组内和组间变异系数平均值分别为0.046和0.064,重复性良好.采用夹心ELISA和RT-PCR同时检测添加VHSV病毒悬液的40份鳗鱼组织匀浆和未添加病毒的40份阴性对照鳗鱼以及5份星斑川鲽模拟组织样品,结果两种方法检测符合率为100％.本研究建立的夹心ELISA方法可以用于出入境鱼类疫病的检测和国内养殖场的疫情监控.

摘要： To develop an assay for quantitative determination porcine circovirus type 2b (PCV2b),a sandwich ELISA was established using a his-tagged nanobody as capture antibody and a mouse monoclonal antibody against PCV2b as detection antibody.This assay was specific for detection of PK-15 cell proliferated PCV2b and E.coli or Baculovirus expressed PCV2b Cap protein but had no cross-reaction with other swine virus.The linear range of this assay was determined to be 104.3 TCID50/mL to 10s5 TCID50/mL for PCV2b and the recovery ratio of spiked PCV2b was 89.3％-105.6％.The coefficient variation (CV) of intraand inter-assay were both less than 5％,demonstrating the high repeatability of the assay.Compared with indirect immunofluorescent assay (IFA),the virus titers quantified by this ELISA and IFA had no significant difference,and the dispersion was smaller than the latter.The serological response of pigs immunized with PCV2b inactivated vaccine also indicated that the antigen quantified by ELISA was reliable.This assay showed high reproducibility and a short detection time,and it could be used to determine the antigen yields for PCV2b vaccines production.%为建立快速定量检测猪圆环病毒2b型(PCV2b)抗原含量的方法,本研究采用重组抗PCV2b纳米抗体作为捕获抗体,鼠抗PCV2b单克隆抗体为检测抗体,建立了定量检测PCV2b的夹心ELISA方法.该方法不仅能够用于猪圆环疫苗中PCV2b抗原的检测,还可用于大肠杆菌或杆状病毒表达的PCV2b衣壳蛋白(Cap)亚单位疫苗的检测,且与其它猪病毒无交叉反应.该方法检测细胞培养PCV2b的线性范围是1043 TCID50/mL～1055 TCID50mL,样品回收率为89.3％～105.6％,该方法批内、批间变异系数小于5％,重复性好.该方法与间接免疫荧光方法(IFA)检测相同样品时误差值小于10％,并且ELISA检测结果离散度更小.分别用两种方法定量PCV2b抗原,取相同抗原量免疫猪,其诱导产生的PCV2b抗体效价无显著差异.本研究构建的夹心ELISA方法在定量猪圆环疫苗中PCV2b抗原方面,与传统的IFA方法比较其显示了良好的符合性,并具有更好的重复性和更短的检测周期,是替代IFA方法用于PCV2b定量检测的更优选择.

摘要： 本试验采集36头荷斯坦奶牛初乳奶样、利用夹心ELISA方法检测乳中乳铁蛋白的绝对含量，同时通过SDS-PAGE电泳进行相对定量分析。免疫乳的制备通过埋植抗原缓释剂ARD(Antigen Release Device)生产获得。数据分析采用SAS 9.0进行统计分析和多重比较。结果表明：初乳中乳铁蛋白含量变化较大，尤其是分娩后24h内下降明显，从1.315mg/mL降至0.655mg/mL。免疫刺激可以引起乳中乳铁蛋白含量的变化，免疫后7d乳中乳铁蛋白的含量基本相当于产后3d的水平。

摘要： 本试验采集36头荷斯坦奶牛初乳奶样、利用夹心ELISA方法检测乳中乳铁蛋白的绝对含量，同时通过SDS-PAGE电泳进行相对定量分析。免疫乳的制备通过埋植抗原缓释剂ARD(Antigen Release Device)生产获得。数据分析采用SAS 9.0进行统计分析和多重比较。结果表明：初乳中乳铁蛋白含量变化较大，尤其是分娩后24h内下降明显，从1.315mg/mL降至0.655mg/mL。免疫刺激可以引起乳中乳铁蛋白含量的变化，免疫后7d乳中乳铁蛋白的含量基本相当于产后3d的水平。

摘要： 本试验采集36头荷斯坦奶牛初乳奶样、利用夹心ELISA方法检测乳中乳铁蛋白的绝对含量，同时通过SDS-PAGE电泳进行相对定量分析。免疫乳的制备通过埋植抗原缓释剂ARD(Antigen Release Device)生产获得。数据分析采用SAS 9.0进行统计分析和多重比较。结果表明：初乳中乳铁蛋白含量变化较大，尤其是分娩后24h内下降明显，从1.315mg/mL降至0.655mg/mL。免疫刺激可以引起乳中乳铁蛋白含量的变化，免疫后7d乳中乳铁蛋白的含量基本相当于产后3d的水平。

摘要： 本试验采集36头荷斯坦奶牛初乳奶样、利用夹心ELISA方法检测乳中乳铁蛋白的绝对含量，同时通过SDS-PAGE电泳进行相对定量分析。免疫乳的制备通过埋植抗原缓释剂ARD(Antigen Release Device)生产获得。数据分析采用SAS 9.0进行统计分析和多重比较。结果表明：初乳中乳铁蛋白含量变化较大，尤其是分娩后24h内下降明显，从1.315mg/mL降至0.655mg/mL。免疫刺激可以引起乳中乳铁蛋白含量的变化，免疫后7d乳中乳铁蛋白的含量基本相当于产后3d的水平。

摘要： 本试验采集36头荷斯坦奶牛初乳奶样、利用夹心ELISA方法检测乳中乳铁蛋白的绝对含量，同时通过SDS-PAGE电泳进行相对定量分析。免疫乳的制备通过埋植抗原缓释剂ARD(Antigen Release Device)生产获得。数据分析采用SAS 9.0进行统计分析和多重比较。结果表明：初乳中乳铁蛋白含量变化较大，尤其是分娩后24h内下降明显，从1.315mg/mL降至0.655mg/mL。免疫刺激可以引起乳中乳铁蛋白含量的变化，免疫后7d乳中乳铁蛋白的含量基本相当于产后3d的水平。

摘要： 本试验采集36头荷斯坦奶牛初乳奶样、利用夹心ELISA方法检测乳中乳铁蛋白的绝对含量，同时通过SDS-PAGE电泳进行相对定量分析。免疫乳的制备通过埋植抗原缓释剂ARD(Antigen Release Device)生产获得。数据分析采用SAS 9.0进行统计分析和多重比较。结果表明：初乳中乳铁蛋白含量变化较大，尤其是分娩后24h内下降明显，从1.315mg/mL降至0.655mg/mL。免疫刺激可以引起乳中乳铁蛋白含量的变化，免疫后7d乳中乳铁蛋白的含量基本相当于产后3d的水平。

摘要： 本发明涉及蛋白质检测技术领域，公开了一种基于磁珠载体双抗夹心ELISA的考古现场快速检测痕量丝素蛋白的方法，包括以下步骤：（1）将鼠单克隆抗体IgA与磁珠偶联，获得免疫磁珠；（2）加入待测样品，孵育，获得丝素蛋白结合磁珠；（3）加入一抗，孵育，获得丝素蛋白双抗夹心磁珠；（4）加入酶标二抗，孵育，获得二抗结合磁珠；（5）加入显色液进行显色；（6）磁性分离出上清液，向上清液中加入终止液，进行光密度值测试，结合标准曲线，即可获得待测样品中的丝素蛋白浓度。本发明通过将磁珠与双抗夹心ELISA结合，并利用鼠单克隆抗体IgA制备免疫磁珠，实现了痕量丝素蛋白的检测，且操作便捷，耗时较短。

摘要： 本发明提供了一种快速检测Aβ42的双抗体夹心ELISA试剂盒，具体包括：包被抗体：单克隆抗体BJ‑1；检测抗体：单克隆抗体6E10；所述单克隆抗体BJ‑1由2011年7月1日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国，武汉，武汉大学，保藏编号为CCTCC NO：C201155的杂交瘤细胞株BJNA分泌获得；采用本发明的Aβ42检测试剂盒，可以高效、灵敏、稳定地测定脑脊液中Aβ42的含量。

摘要： 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种检测猪急性腹泻综合征冠状病毒的双抗体夹心ELISA试剂盒。本发明的检测猪急性腹泻综合征冠状病毒的双抗夹心ELISA试剂盒，包括：包被有兔抗SADS‑CoV N蛋白多克隆抗体的酶标板、HRP标记的鼠抗SADS‑CoV N蛋白单克隆抗体。还包括酶标二抗、封闭液、稀释液、洗涤液、显色液以及终止液。本发明所建立的双抗体夹心ELISA试剂盒具有较好的特异性、敏感性、批内和批间重复性。该试剂盒最低病毒的检出量为10‑4.42TCID50/0.1mL，并且不与PEDV、TGEV和PDCoV反生反应，批内和批间重复变异系数小于10%。与RT‑PCR方法比较，本发明双抗夹心ELISA试剂盒检测的符合率为93.93％。本发明所建立的SADS‑CoV抗原双抗体夹心ELISA检测方法具有良好的敏感性、特异性和重复性，能用于SADS‑CoV的临床检测。

摘要： 本发明公开的是一种检测非洲猪瘟病毒的双抗体夹心ELISA诊断试剂盒及其方法，试剂盒包括包被有捕获抗体的酶标板、P30抗原、抗P30蛋白多克隆抗体、HRP标记羊抗兔酶标抗体、阴性对照、显色液、洗涤液、终止液、封闭液，构建重组质粒pET‑32a‑P30，并表达和纯化，免疫获得抗P30蛋白的多克隆抗体，以rP30、抗P30蛋白的多克隆抗体和单克隆抗体为材料，通过对封闭液、抗原孵育时间、抗体孵育时间及显色时间优化，在实验室条件下初步建立了一套检测ASFV血样抗原的双抗体夹心ELISA诊断体系，可以有效检出ASFV，为非洲猪瘟防控提供了新的技术手段，检测快速、准确且特异性强。

摘要： 本发明提供了一种羽扇豆过敏原Lupan1的夹心ELISA方法，包括如下步骤：(1)对质粒和质粒载体进行双酶切，将得到的VHH基因片段与质粒载体进行连接形成重组质粒，然后将所述的重组质粒电转化入大肠杆菌感受态细胞中进行纳米抗体的表达，纯化得到的纳米抗体蛋白；(2)双抗夹心ELISA方法的构建：在捕获抗体中加入羽扇豆总蛋白，使其与捕获抗体结合，然后加入检测抗体，鼠抗HA单克隆抗体为一抗，HRP标记的单克隆抗体为二抗，进行显色后即成。本发明所述的羽扇豆过敏原Lupan1的夹心ELISA方法基于特异性的纳米抗体，能够开发食品中痕量过敏原的高灵敏快速检测体系，用于食物组分中过敏原检测。

摘要： 本发明提供了一种花生过敏原Arah3的双抗夹心ELISA方法，包括如下步骤：(1)纳米抗体的制备及筛选：将得到的VHH基因片段与质粒载体进行连接形成重组质粒，将重组质粒电转化入大肠杆菌感受态细胞中进行纳米抗体的表达，纯化得到的纳米抗体蛋白；(2)双抗夹心ELISA方法的构建：将捕获抗体包被酶标板，加入花生总蛋白，使其与捕获抗体结合，然后加入检测抗体，鼠抗HA单克隆抗体为一抗，HRP标记的羊抗鼠单克隆抗体为二抗，进行显色后即成。本发明所述的花生过敏原Arah3的双抗夹心ELISA方法基于特异性的纳米抗体，能开发食品中痕量过敏原的高灵敏快速检测体系，用于食物组分中过敏原检测。

摘要： 本发明涉及一种检测生物样本中黄原胶含量的双抗体夹心ELISA方法，属于免疫分析技术领域。本发明提供的一种生物样本中黄原胶含量的双抗体夹心ELISA检测方法，包括以下步骤：1)抗体包被；2)封闭；3)加样品；4)加酶标抗体；5)加显色液；6)加终止液；7)测定：用酶标仪测定波长450nm处的OD值；该方法具有较高的灵敏度，对黄原胶具有较好的特异性，定量准确，简单易用的特点，可用于生物样本中黄原胶含量的检测，具有实际应用价值，具有良好的推广性。

摘要： 本发明属于免疫学和生物技术领域，具体涉及用于检测分散酶II(DispaseII)的双抗夹心ELISA检测试剂盒及检测方法与应用。本发明的分散酶II的双抗夹心ELISA检测试剂盒包括：包被有捕获抗体的酶标板制成的固相抗体、酶标抗体、分散酶II标准品、样品稀释液、包被缓冲液、封闭液、稳定剂、ELISA酶标板、洗涤液、显色液和终止液。本发明提供用于定量检测各种生物制品的中间品、半成品和成品中Dispase II残留量的专用试剂盒。本试剂盒操作方便简单，可直接用于样品分析，重现性好，稳定性高。

摘要： 本发明公开一种基于夹心ELISA的纳米等离子共振生物芯片以及快速定性定量检测目标物的方法，属于抗原的等离子共振定量检测技术领域；包括基片和修饰在基片上的目标物的包被抗体；基片包括基底和镀在基底表面的1‑20nm钛膜层、2‑80nm银膜层和2‑70nm金膜层，或者1‑20nm钛膜层、2‑70nm银膜层。采用该方法所能检测的目标物包括肿瘤标志物(例如甲胎蛋白、前列腺特异抗原)、动物疾病(例如非洲猪瘟病毒)、食品小分子(例如磺胺)等所有能使用酶联免疫分析技术进行定性定量检测的化学物质，适用范围非常广；利用上述SPR芯片集成制备的芯片微孔板进行目标定量检测，能够显著提高其检测灵敏度，降低了检测限。

摘要： 本发明公开了一种基于改良双抗体夹心ELISA法的尖吻蝮蛇蛇毒检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：步骤一：初步提纯，采用饱和硫酸铵方法初步纯化马抗尖吻蝮蛇血浆中的马抗尖吻蝮蛇IgG；步骤二：重复提纯，采用亲和层析法对马抗尖吻蝮蛇IgG进一步层析纯化，收集目标峰对应的抗体，再次过柱层析提纯，得到较纯的马抗尖吻蝮蛇IgG；步骤三：包被抗体，取部分步骤二纯化后的抗体作为包被抗体，包被到48孔板中；步骤四：标记抗体，取部分步骤二纯化后的抗体与辣根过氧化物酶(HRP)进行反应获得辣根过氧化物酶标记抗体(HRP‑IgG)，以此作为夹心抗体；步骤五：包装试剂盒，将步骤三中包被好的48孔板真空密封后与步骤四的夹心抗体装入盒中备用，试剂盒制备完成，可用于检测人或动物血清中是否含有尖吻蝮蛇毒素。