大肠杆菌O157:H7

摘要： 研究乳酸和过氧乙酸对大肠杆菌O157:H7生物膜的抑制作用,并从代谢活性、胞外聚合物质量浓度、生物膜的微观结构以及相关功能基因的表达等方面探究乳酸和过氧乙酸对大肠杆菌O157:H7生物膜的抑制机理。结果发现:乳酸和过氧乙酸的最小抑菌剂量(minimum inhibitory concentrations,MIC)分别为0.25%和0.0025%;通过活菌计数测定分析不同剂量乳酸和过氧乙酸对大肠杆菌O157:H7生物膜抑制效果,发现在亚MIC(1/2 MIC和1/4 MIC)下乳酸和过氧乙酸的生物膜抑制作用较弱,而MIC下两种有机酸均可显著抑制大肠杆菌O157:H7生物膜的形成(P<0.05),2 MIC可完全抑制大肠杆菌O157:H7生物膜形成;经MIC的乳酸和过氧乙酸处理后,大肠杆菌O157:H7生物膜的代谢活性分别降低了84.25%和43.49%,而胞外聚合物质量浓度显著减少(P<0.05);乳酸和过氧乙酸均有效抑制了大肠杆菌O157:H7的黏附相关基因(csgA、flhC)、群体感应相关基因(luxS、sdiA)、胞外多糖合成相关基因(csrA、adrB、adrA)以及双组分调控系统相关基因(phoQ、phoP、envZ、ompR)。综上所述,乳酸和过氧乙酸可以作为食品工业中有效的杀菌剂,降低食品生产和加工过程中相关微生物污染的风险。

摘要： 该研究组建了基于高分辨熔解曲线分析的大肠杆菌O157:H7实时荧光定量PCR快速检测试剂盒,对试剂盒的灵敏度、特异性、抗干扰能力和检测人工污染样品的情况进行了评估,并在组建试剂盒的基础上,利用叠氮溴化丙锭(PMAxx)对活/死细胞的选择性,构建了大肠杆菌O157:H7活菌定量检测技术。结果显示,试剂盒特异性强,仅大肠杆菌O157:H7血清型有阳性扩增;最低检测限为84CFU/m L;在四种常见食源性致病菌干扰下能准确检测出大肠杆菌O157:H7;在人工污染食品样品的实际检测中,可检测到初始污染量为7.97×10^(0)CFU/m L的样品;通过单因素变化试验对PMAxx处理的各项参数进行优化,确立了曝光时间11 min、暗孵育时间20min、PMAxx浓度30μmol/L的最优反应体系,并与本研究组建的实时荧光定量PCR试剂盒相结合,建立了在3.4×10^(7)-3.4×10^(2)CFU/m L浓度范围内Ct值与菌液浓度线性关系良好的大肠杆菌O157:H7活菌定量检测方法,为食源性致病菌快速定量检测提供技术支持。

摘要： 以大肠杆菌O157:H7和食品中常见腐败菌假单胞菌为对象,研究两种菌混合培养时菌体泳动能力和混合菌膜形成时的交互作用,进一步采用反转录实时定量聚合酶链式反应分析大肠杆菌O157:H7代表菌株在混合菌膜形成时毒力基因(stx1、stx2、hly和eae)表达变化。菌体泳动性结果显示,3株大肠杆菌O157:H7泳动性均低于4株假单胞菌(P<0.05),两种菌混合培养时假单胞菌的泳动能力受到显著抑制。选择性培养计数发现混合菌膜形成72 h时,两种菌未发生相互促进,其中4株假单胞菌的菌膜形成均受到3株大肠杆菌O157:H7显著抑制(P<0.05)。选取大肠杆菌O157:H7 CICC21530菌株分析毒力基因表达,结果发现混合菌液单位体积、混合菌膜单位面积4种毒力基因表达分别低于单种菌液、单种菌膜(P<0.05),进一步的单位菌数结果亦然,表明混合培养和混合菌膜形成时假单胞菌抑制了大肠杆菌O157:H7毒力基因表达;单位菌数结果还发现菌膜中4种毒力基因表达均高于浮游菌(P<0.05),表明形成菌膜后菌体毒力增强。本研究可为揭示食源性致病菌和腐败菌混合菌膜形成的交互作用及进一步风险评估和风险防控提供科学依据。

摘要： 为研究臭氧水联合副干酪乳杆菌Z21发酵上清液对绿豆芽中大肠杆菌O157:H7的杀菌效果、细胞结构影响和生物膜清除作用,本实验对人工污染大肠杆菌O157:H7的绿豆芽进行联合处理,选出最优的杀菌条件,采用流式细胞仪、扫描电镜、傅里叶红外光谱(Fourier-transform infrared spectroscopy,FT-IR)、拉曼光谱分析臭氧水联合Z21发酵上清液的杀菌机制;通过菌落计数及胞外聚合物分析,研究了臭氧水联合Z21发酵上清液对大肠杆菌O157:H7生物膜的清除效果。结果表明,1.5 mg/L臭氧水联合10%(v/v)Z21发酵上清液处理对大肠杆菌O157:H7杀菌效果最佳,菌落总数减少了2.81 lg CFU/g;与对照组相比,联合处理破坏了大肠杆菌O157:H7细胞壁和细胞膜中的多糖,脂质和蛋白质结构,增加了细胞膜的通透性,改变了菌体形态。联合处理对生物膜有良好的清除效果,显著降低了生物膜的胞外聚合物含量(P<0.05)。本研究为大肠杆菌生物膜的清除及农产品防腐保鲜提供了理论依据。

摘要： 食源性致病菌是引发食物中毒的主要微生物,对人类的健康构成了重要威胁,也逐渐发展为公共卫生、食品工业部门高度重视的一个问题.近年来,因食源性致病菌产生的疾病在世界各地蔓延,其中,大肠杆菌O157:H7是食源性致病菌种类中造成病死率较高的一种细菌,其感染剂量低、致病性强等特点引起研究人员和世界各国卫生组织的广泛关注.基于此,对大肠杆菌O157:H7的检测方法及其演变进行了梳理和比较分析,并着重综述了生物传感器(biosensor)在其检测中的应用进展,以期为大肠杆菌O157:H7快速、准确和可商业化的检测方法的研发提供参考.

摘要： 为了建立不同温度条件下进口生鲜牛肉中大肠杆菌O157:H7的生长预测模型.将于超市购买的进口生鲜牛肉和大肠杆菌O157:H7作为研究对象,监测其在4、16、25、30、37°C贮藏温度条件下进口生鲜牛肉中大肠杆菌生长数据,绘制生长曲线,采用修正Gompertz、Logistic、Richards、MMF四种模型进行拟合,建立进口生鲜牛肉中大肠杆菌一级模型,将一级模型拟合的数据代入Ratkowsky方程建立二级模型,通过准确因子、偏差因子以及均方根误差,对模型的准确性进行检验.结果表明,四种模型拟合后得到的相关系数均为0.98以上,修正Gompertz模型数据表明该模型拟合程度最好,最适合预测大肠杆菌在进口生鲜牛肉上的生长动态,模型的准确因子均为0.99,偏差因子为1.14和1.03,决定系数R2为0.97和0.99,说明所建立的模型可靠性较高.本研究建立的生长预测模型能够有效预测4～37°C不同温度条件下大肠杆菌O157:H7在进口生鲜牛肉上的生长情况.

摘要： 本文从自来水、超声波、微酸性电解水、超声波结合微酸性电解水、超声波结合植酸、次氯酸钠结合植酸、超声-次氯酸钠-微酸性电解水联合处理和超声-次氯酸钠-植酸联合处理8种方法中选出对鲜切生菜清洗后抑菌效果最好的方法超声-次氯酸钠-植酸联合处理,测定该方法处理后的鲜切生菜在贮藏期间的品质指标,以无菌蒸馏水作为对照.探讨超声-次氯酸钠-植酸联合处理对鲜切生菜表面大肠杆菌O157:H7抑菌效果和贮藏品质的影响.结果表明,超声-次氯酸钠-植酸联合处理的抑菌效果最好,抑菌率达到99.97％.处理后的鲜切生菜在贮藏第14 d,质量损失率为3.45％,总色差为5.39,Vc含量为2.93 mg/100 g,叶绿素含量为0.56 mg/g,水分含量为90.54％,均优于对照组;与对照组相比,过氧化物酶和多酚氧化酶活性被有效抑制,总酚含量保持较高的水平.因此,超声-次氯酸钠-植酸联合处理有利于提高鲜切生菜表面大肠杆菌O157:H7的抑菌效果和改善鲜切生菜的贮藏品质.综上表明,超声-次氯酸钠-植酸联合处理可以有效提高鲜切生菜的保鲜效果,延长货架期.

摘要： 致病菌的快速检测已成为研究热点,该文通过合成Fe3O4-COOH@MIL-101纳米粒子,利用该材料的带电性和介孔的富集能力,提高基质辅助激光解吸飞行时间质谱对核糖体蛋白的灵敏性和检测限,并利用核糖体蛋白的保守性完成对大肠杆菌O157:H7的鉴别.

摘要： 为建立一种灵敏、特异、快速、高效地鉴定纺织品基质中大肠杆菌O157:H7的方法,筛选出大肠杆菌O157:H7特有的rfbE基因保守序列,设计PCR特异性引物和荧光双标记探针,结合免疫磁珠技术,集成创新开发一种目标菌低浓度、不可培养情况下的样品中高效、快速富集分离大肠杆菌O157:H7的技术,建立了一种针对纺织品基质的免疫磁珠富集-实时荧光定量PCR方法,其检测下限可达8 CFU/mL.利用该方法对收集到的30份阳性样品进行鉴定,鉴定结果与传统方法结果100％吻合.结果表明,新建方法稳定性强,实现了纺织品中大肠杆菌O157:H7的快速灵敏鉴定.

摘要： 目的：建立12h内快速检测粪便中沙门菌、志贺菌和大肠杆菌O157:H7的多重PCR方法。rn 方法：探讨已报道的多重PCR体系检测粪便中3种目的菌的可行性，根据沙门菌invA基因、志贺菌ipaH基因及大肠杆菌O157:H7rfbE基因筛选设计新引物，优化反应条件，测定方法灵敏度和特异性。8h短时增荫后，对24份模拟粪便样品进行检测。rn 结果：已报道的多重PCR体系不适用于粪便中三种目的菌的检测：新建立的体系适用于粪便样品的检测，能在12 h内同时检测3种目的菌。通过短时增菌，该体系对粪便样品中沙门菌、志贺菌和大肠杆菌O157:H7的灵敏度分别为：8.5CFU/10ml增菌液，27CFU/10ml增菌液，5 CFU/10ml增菌液。对28株目的菌和13株非目的菌的检测结果表明该方法具有良好特异性。rn 结论：成功建立能在12h内同时检测粪便样品中沙门菌、志贺菌和大肠杆菌O157:H7的多重PCR检测方法，该方法特别适用于健康带菌者3种目的菌的快速筛查，为卫生检验检疫、食品微生物安全的监测和监督提供一有用的工具。

摘要： 目的：建立12h内快速检测粪便中沙门菌、志贺菌和大肠杆菌O157:H7的多重PCR方法。rn 方法：探讨已报道的多重PCR体系检测粪便中3种目的菌的可行性，根据沙门菌invA基因、志贺菌ipaH基因及大肠杆菌O157:H7rfbE基因筛选设计新引物，优化反应条件，测定方法灵敏度和特异性。8h短时增荫后，对24份模拟粪便样品进行检测。rn 结果：已报道的多重PCR体系不适用于粪便中三种目的菌的检测：新建立的体系适用于粪便样品的检测，能在12 h内同时检测3种目的菌。通过短时增菌，该体系对粪便样品中沙门菌、志贺菌和大肠杆菌O157:H7的灵敏度分别为：8.5CFU/10ml增菌液，27CFU/10ml增菌液，5 CFU/10ml增菌液。对28株目的菌和13株非目的菌的检测结果表明该方法具有良好特异性。rn 结论：成功建立能在12h内同时检测粪便样品中沙门菌、志贺菌和大肠杆菌O157:H7的多重PCR检测方法，该方法特别适用于健康带菌者3种目的菌的快速筛查，为卫生检验检疫、食品微生物安全的监测和监督提供一有用的工具。

摘要： 目的：建立12h内快速检测粪便中沙门菌、志贺菌和大肠杆菌O157:H7的多重PCR方法。rn 方法：探讨已报道的多重PCR体系检测粪便中3种目的菌的可行性，根据沙门菌invA基因、志贺菌ipaH基因及大肠杆菌O157:H7rfbE基因筛选设计新引物，优化反应条件，测定方法灵敏度和特异性。8h短时增荫后，对24份模拟粪便样品进行检测。rn 结果：已报道的多重PCR体系不适用于粪便中三种目的菌的检测：新建立的体系适用于粪便样品的检测，能在12 h内同时检测3种目的菌。通过短时增菌，该体系对粪便样品中沙门菌、志贺菌和大肠杆菌O157:H7的灵敏度分别为：8.5CFU/10ml增菌液，27CFU/10ml增菌液，5 CFU/10ml增菌液。对28株目的菌和13株非目的菌的检测结果表明该方法具有良好特异性。rn 结论：成功建立能在12h内同时检测粪便样品中沙门菌、志贺菌和大肠杆菌O157:H7的多重PCR检测方法，该方法特别适用于健康带菌者3种目的菌的快速筛查，为卫生检验检疫、食品微生物安全的监测和监督提供一有用的工具。

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摘要： 目的：建立12h内快速检测粪便中沙门菌、志贺菌和大肠杆菌O157:H7的多重PCR方法。rn 方法：探讨已报道的多重PCR体系检测粪便中3种目的菌的可行性，根据沙门菌invA基因、志贺菌ipaH基因及大肠杆菌O157:H7rfbE基因筛选设计新引物，优化反应条件，测定方法灵敏度和特异性。8h短时增荫后，对24份模拟粪便样品进行检测。rn 结果：已报道的多重PCR体系不适用于粪便中三种目的菌的检测：新建立的体系适用于粪便样品的检测，能在12 h内同时检测3种目的菌。通过短时增菌，该体系对粪便样品中沙门菌、志贺菌和大肠杆菌O157:H7的灵敏度分别为：8.5CFU/10ml增菌液，27CFU/10ml增菌液，5 CFU/10ml增菌液。对28株目的菌和13株非目的菌的检测结果表明该方法具有良好特异性。rn 结论：成功建立能在12h内同时检测粪便样品中沙门菌、志贺菌和大肠杆菌O157:H7的多重PCR检测方法，该方法特别适用于健康带菌者3种目的菌的快速筛查，为卫生检验检疫、食品微生物安全的监测和监督提供一有用的工具。

摘要： 利用λ噬菌体的Red重组系统，将氯霉素抗性基因(cat)插入到大肠杆菌0157：H7 Min27株的stx2基因中，获得O157：H7 Min27的突变菌株Min27(△six：：cat)。用丝裂霉素对该突变菌株进行诱导，结合抗性标记和PCR方法筛选出一株突变的Stx2噬菌体，命名为ΦMin27(△stx：：cat)。将ΦMin27(△stx：：cat)感染21株不同血清型的大肠杆菌，采用双层琼脂平板法和氯霉素抗性筛选，观察它对细菌的裂解和溶原转换情况。其中2株血清型分别为O60和O 138的大肠杆菌可以被该突变噬菌体溶原感染，表现出对氯霉素的抗性，但没有形成噬菌斑，而大肠杆菌MG1655株既可以被溶原又可以被裂解。溶原的菌株经丝裂霉素诱导后，能释放出感染性的ΦMin27(△stx：：cat)颗粒，并对大肠杆菌MC1061进行裂解形成噬菌斑。试验结果表明ΦMin27(△stx：：cat)可以感染和溶原特定的大肠杆菌，且溶原菌株能释放出原感染性的噬菌体，显示出ΦMin27(△stx：：cat)噬菌体具有携带外源基因在不同血清型的大肠杆菌间水平转移的能力，为进一步研究Stx噬菌体在不同属菌株之间的溶原转换和Stx毒素表达机制提供了重要的技术平台。

摘要： 利用λ噬菌体的Red重组系统，将氯霉素抗性基因(cat)插入到大肠杆菌0157：H7 Min27株的stx2基因中，获得O157：H7 Min27的突变菌株Min27(△six：：cat)。用丝裂霉素对该突变菌株进行诱导，结合抗性标记和PCR方法筛选出一株突变的Stx2噬菌体，命名为ΦMin27(△stx：：cat)。将ΦMin27(△stx：：cat)感染21株不同血清型的大肠杆菌，采用双层琼脂平板法和氯霉素抗性筛选，观察它对细菌的裂解和溶原转换情况。其中2株血清型分别为O60和O 138的大肠杆菌可以被该突变噬菌体溶原感染，表现出对氯霉素的抗性，但没有形成噬菌斑，而大肠杆菌MG1655株既可以被溶原又可以被裂解。溶原的菌株经丝裂霉素诱导后，能释放出感染性的ΦMin27(△stx：：cat)颗粒，并对大肠杆菌MC1061进行裂解形成噬菌斑。试验结果表明ΦMin27(△stx：：cat)可以感染和溶原特定的大肠杆菌，且溶原菌株能释放出原感染性的噬菌体，显示出ΦMin27(△stx：：cat)噬菌体具有携带外源基因在不同血清型的大肠杆菌间水平转移的能力，为进一步研究Stx噬菌体在不同属菌株之间的溶原转换和Stx毒素表达机制提供了重要的技术平台。

摘要： 利用λ噬菌体的Red重组系统，将氯霉素抗性基因(cat)插入到大肠杆菌0157：H7 Min27株的stx2基因中，获得O157：H7 Min27的突变菌株Min27(△six：：cat)。用丝裂霉素对该突变菌株进行诱导，结合抗性标记和PCR方法筛选出一株突变的Stx2噬菌体，命名为ΦMin27(△stx：：cat)。将ΦMin27(△stx：：cat)感染21株不同血清型的大肠杆菌，采用双层琼脂平板法和氯霉素抗性筛选，观察它对细菌的裂解和溶原转换情况。其中2株血清型分别为O60和O 138的大肠杆菌可以被该突变噬菌体溶原感染，表现出对氯霉素的抗性，但没有形成噬菌斑，而大肠杆菌MG1655株既可以被溶原又可以被裂解。溶原的菌株经丝裂霉素诱导后，能释放出感染性的ΦMin27(△stx：：cat)颗粒，并对大肠杆菌MC1061进行裂解形成噬菌斑。试验结果表明ΦMin27(△stx：：cat)可以感染和溶原特定的大肠杆菌，且溶原菌株能释放出原感染性的噬菌体，显示出ΦMin27(△stx：：cat)噬菌体具有携带外源基因在不同血清型的大肠杆菌间水平转移的能力，为进一步研究Stx噬菌体在不同属菌株之间的溶原转换和Stx毒素表达机制提供了重要的技术平台。

摘要： 利用λ噬菌体的Red重组系统，将氯霉素抗性基因(cat)插入到大肠杆菌0157：H7 Min27株的stx2基因中，获得O157：H7 Min27的突变菌株Min27(△six：：cat)。用丝裂霉素对该突变菌株进行诱导，结合抗性标记和PCR方法筛选出一株突变的Stx2噬菌体，命名为ΦMin27(△stx：：cat)。将ΦMin27(△stx：：cat)感染21株不同血清型的大肠杆菌，采用双层琼脂平板法和氯霉素抗性筛选，观察它对细菌的裂解和溶原转换情况。其中2株血清型分别为O60和O 138的大肠杆菌可以被该突变噬菌体溶原感染，表现出对氯霉素的抗性，但没有形成噬菌斑，而大肠杆菌MG1655株既可以被溶原又可以被裂解。溶原的菌株经丝裂霉素诱导后，能释放出感染性的ΦMin27(△stx：：cat)颗粒，并对大肠杆菌MC1061进行裂解形成噬菌斑。试验结果表明ΦMin27(△stx：：cat)可以感染和溶原特定的大肠杆菌，且溶原菌株能释放出原感染性的噬菌体，显示出ΦMin27(△stx：：cat)噬菌体具有携带外源基因在不同血清型的大肠杆菌间水平转移的能力，为进一步研究Stx噬菌体在不同属菌株之间的溶原转换和Stx毒素表达机制提供了重要的技术平台。

摘要： 根据GenBank中VT1、VT2毒素的基因序列设计合成2对引物,以大肠杆菌O157:H7菌株DNA为模板,扩增vt1、vt2,诱导只扩增出vt2的菌株释放噬菌体,利用多种指示菌经双层琼脂平板法来分离纯化VT2噬菌体,观察噬菌斑的特征,提纯病毒粒子进行电镜观察,并对噬菌体中vt2基因检测、克隆和序列分析.结果显示VT2噬菌体感染MC1061在双层琼脂平板上形成的噬菌斑小而混浊,多呈磨玻璃样;而首次感染大肠杆菌CC118(λpir),此后用MC1061分离的噬菌体,再以MC1061为指示菌,在双层琼脂平板上形成小而清晰透明的噬菌斑.电镜下噬菌体头部呈六边形外廓,尾部细长无尾鞘结构.以噬菌体DNA为模板进行PCR扩增,检测到vt2特异性DNA带,克隆的vt2基因序列与GenBank中编码VT2毒素的核苷酸序列(X07865,NC002655,BA000007,AF291819)的同源性分别达到99％,确定编码VT2毒素的基因位于噬菌体上,并获得VT2噬菌体Φ020324。

摘要： 本发明公开了一种合成致新生儿脑膜炎大肠杆菌糖蛋白结合疫苗的大肠杆菌工程菌及用途。涉及构建合成致新生婴儿脑膜炎大肠杆菌O1血清型糖蛋白结合疫苗细胞工厂的方法。它是利用酿酒酵母高效的同源重组效率，基于DNA Assembler的方法，构建O1抗原合成基因簇质粒。在大肠杆菌JM109中转化O1抗原合成基因簇穿梭质粒，通过脂多糖提取，凝胶电泳和银染鉴定质粒；在FLP‑FRT辅助下删除JM109中的waaL和wecA，排除原始不完整O抗原的干扰。改造pET28a(+)质粒，经诱导，合成糖蛋白结合疫苗，借助于AKTA Primeplus蛋白纯化工作站纯化糖蛋白并通过western‑blotting鉴定该糖蛋白。本发明构建的重组大肠杆菌为生物法合成糖蛋白结合疫苗提供了新的思路。

摘要： 本发明涉及从自然界分离的并可以特异性地杀死产志贺毒素F18型大肠杆菌菌株的肌尾噬菌体科噬菌体Esc‑COP‑1，其具有由SEQ ID NO：1的核苷酸序列表示的基因组（登记号：KCTC 12662BP），以及使用包含所述噬菌体作为活性成分的组合物来预防和治疗产志贺毒素F18型大肠杆菌感染的方法。

摘要： 本发明公开了一种用于对溶液中大肠杆菌浓度检测的传感器的制作方法，制备了一种基于石墨烯的1‑氨基芘和麦芽糖的复合膜，通过嫁接刀豆凝聚素A制成对糖类具有敏感性的改性石墨烯复合膜，并将其涂敷在光纤上制成基于改性石墨烯复合敏感膜涂敷粗锥型的生物传感器。其不仅制作简单容易，另外通过此方法制得的传感器在对溶液中大肠杆菌浓度的检测中，具有灵敏度高、检测效果好，响应时间快，精度和可靠性高的优点。

摘要： 本发明涉及从自然界分离的并可以特异性地杀死肠致病性大肠杆菌的肌尾噬菌体科噬菌体Esc‑CHP‑2，其具有由SEQ ID NO：1的核苷酸序列表示的基因组（登记号：KCTC 12661BP），以及使用包含所述噬菌体作为活性成分的组合物来预防和治疗肠致病性大肠杆菌感染的方法。

摘要： 本发明涉及一种从自然中分离的肌病毒科噬菌体Esc‑COP‑7(受托编号：KCTC 13130BP)，其特征在于，携带具有特异性杀灭大肠杆菌能力、并用序列号1标记的基因组，且本发明还涉及利用以所述噬菌体为有效成分包含在内的组合物防止及治疗致病性大肠杆菌感染的方法。

摘要： 本发明涉及一种从自然中分离的长尾病毒科噬菌体Esc‑COP‑9(受托编号：KCTC 13131BP)，其特征在于，携带具有特异性杀灭大肠杆菌能力、并用序列号1标记的基因组，且本发明还涉及利用以所述噬菌体为有效成分包含在内的组合物防止及治疗致病性大肠杆菌感染的方法。

摘要： 本发明提供了一种使大肠杆菌获得有效NHEJ系统的高通量筛选工具在大肠杆菌基因编辑中的应用，所述使大肠杆菌获得有效NHEJ系统的高通量筛选工具包括：pDual‑Cas9‑Parental质粒载体：含有DNA解旋酶基因、复制子、抗生素抗性基因、核酸酶基因、araC基因、阿拉伯糖启动子和Ⅱs型限制酶识别位点；和pDual‑sgRNA‑lacZ质粒载体：含有靶向lacZ基因的sgRNA序列、组成型表达的强启动子、复制子和抗生素抗性基因。本发明筛选得到的NHEJ系统在大肠杆菌中具有良好的连接效率，并可以进行高效的基因编辑，应用前景广阔。

摘要： 本发明提供了一种大肠杆菌重组核酸、重组大肠杆菌及培养方法和生物合成L‑苏氨酸的方法，涉及生物工程技术领域。本发明所述大肠杆菌重组核酸，利用磷酸烯醇式丙酮酸羧化激酶pck的编码基因、丙酮酸羧化酶pyc的编码基因和苏氨酸操纵子的编码基因对大肠杆菌进行改造，获得一株以葡萄糖为底物的重组大肠杆菌LMT4，利用所述LMT4进行发酵生产，L‑苏氨酸产量以及转化率明显提高，为L‑苏氨酸的工业化生产奠定基础。

摘要： 本发明提供了大肠杆菌重组菌及利用大肠杆菌重组菌生产3,4‑二羟基苯乙醇的方法，大肠杆菌重组菌共表达四种酶，分别为酪氨酸酶、L‑氨基酸氧化酶、酮酸脱羧酶和醇脱氢酶；利用大肠杆菌重组菌，以酪氨酸为底物生产3,4‑二羟基苯乙醇。本发明以酪氨酸为底物，酪氨酸廉价易得，且大多数为生物基来源，不依赖于石化产品，属于可再生资源，此外，由于它的天然属性，在食品、保健品、化妆品领域更易于被消费者认可接受。

摘要： 本发明公开了一种在大肠杆菌内稳定遗传的酵母‑大肠杆菌穿梭质粒及其构建方法。所述的穿梭质粒是基于细菌‑酵母人工染色体，从pGEN‑MCS质粒上通过PCR扩增得到hok‑sok和par元件，然后通过连接将稳定遗传元件hok‑sok和parA构建入细菌‑酵母人工染色体中，进而获得方便克隆长片段DNA、无抗性且在大肠杆菌内稳定遗传的酵母‑大肠杆菌穿梭质粒。优选的，所述的穿梭质粒的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明提供的穿梭质粒载体，不但可实现酵母、细菌内穿梭，可在酵母中通过同源重组进行多片段DNA组装，还可以稳定的在大肠杆菌中复制、遗传，便于进行DNA提取。