Smad2

摘要： 目的:探讨miRNA-222靶向Smad2/7对牙周膜干细胞向成骨分化的影响。方法:采用流式细胞术鉴定人牙周膜干细胞表面标志物,采用油红O染色、茜素红染色和阿尔新蓝染色法验证成脂、成骨和软骨分化能力,同时验证miRNA-222、sh-Smad2和sh-Smad7对成骨分化的影响,RT-PCR检测miRNA-222在成骨分化中的表达,采用Western blot检测miRNA-222对ALP、Runx2、OCN、Smad2和Smad7蛋白的影响。结果:牙周膜干细胞表面呈阳性表达的有STRO1和CD146,阳性率分别为98.63%和99.16%。RT-PCR检测结果显示,在成骨分化过程中,人牙周膜干细胞中miRNA-222表达明显降低。茜素红染色结果显示,与空白组相比,miRNA-222模拟组中的红褐色矿化结节的数量明显降低(P<0.05),miRNA-222抑制组中的红褐色矿化结节的数量显著增多(P<0.05);与sh-NC相比,sh-Smad2组和sh-Smad7组红褐色矿化结节的数量显著减少(P<0.05)。Western blot检测结果显示,与空白组相比,miRNA-222模拟组的ALP、Runx2、OCN蛋白表达明显降低(P<0.05),与miRNA-222模拟组相比,miRNA-222抑制组的ALP、Runx2、OCN蛋白表达显著升高(P<0.05);与空白组相比,miRNA-222模拟组的Smad2和Smad7蛋白表达明显降低(P<0.05),与miRNA-222模拟组相比,miRNA-222抑制组的Smad2和Smad7蛋白表达显著升高(P<0.001)。结论:过表达miRNA-222可以减少Smad2和Smad7表达,从而抑制人牙周膜干细胞的成骨分化。

摘要： 目的:探讨姜黄素对兔耳增生性瘢痕生长的抑制作用及其对TGF-β1/Smad信号通路的影响。方法:建立兔耳增生性瘢痕模型,随机分为模型组(B组)、姜黄素低剂量组(C组)、姜黄素高剂量组(D组);C组及D组分别涂抹浓度为2.5%及10%的姜黄素软膏,B组涂抹不含姜黄素的软膏基质;连续用药28d,同时以正常兔耳作对照组(A组)。对各组组织进行大体形态学观察及病理学分析,RT-PCR法检测转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad2和Smad3 mRNA的表达,比较各组治疗后的变化。结果:模型组中瘢痕增生明显,瘢痕颜色深红,质地较硬,姜黄素药物组中瘢痕生长受到抑制,瘢痕颜色变浅,质地变软,以姜黄素高剂量组改善尤为明显;模型组中瘢痕增生指数(HI)、成纤维细胞密度(NA)、TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA表达水平均明显高于对照组(P<0.05);姜黄素药物组中HI、NA、TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA明显低于模型组(P<0.05),且高剂量组变化更明显(P<0.05)。结论:姜黄素可以明显抑制增生性瘢痕的形成,其机制可能为通过调控TGF-β1/Smad信号通路来完成。

摘要： 目的·探究转化生长因子β(transforming growth factorβ,TGFβ)家族下游的关键转录因子SMAD蛋白(drosophila mothers against decapentaplegic protein)——SMAD2和SMAD3在人胚胎干细胞(human embryonic stem cell,hESC)体外分化过程中的不同作用。方法·在hESC中,通过蛋白质印迹法(Western blotting)检测SMAD2和SMAD3在分化过程中的蛋白表达水平。通过CRISPR/Cas9(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated protein 9)技术构建SMAD2敲除(SMAD2 knockout,SMAD2KO)和SMAD3敲除(SMAD3 knockout,SMAD3KO)的细胞系。利用免疫荧光染色检测SMAD蛋白丢失对多能性因子八聚体结合转录因子4(octamer-binding transcription factor 4,OCT4)和性别决定区Y框蛋白2(sex determining region Y-box 2,SOX2),神经外胚层(neuroectoderm,NE)标志因子配对盒因子6(paired box 6,PAX6)和性别决定区Y框蛋白1(sex determining region Y-box 1,SOX1)以及中内胚层(mesendoderm,ME)标志因子SOX17的表达影响;同时使用流式细胞术鉴定SMAD2敲除或SMAD3敲除对NE标志因子PAX6以及ME标志因子SOX17、脱中胚蛋白(eomesodermin,EOMES)和C-X-C模体趋化因子受体4(C-X-C motif chemokine receptor 4,CXCR4)表达的影响。在SMAD2KO和SMAD3KO细胞中分别过表达SMAD2和SMAD3质粒,通过Western blotting检测SMAD2和SMAD3蛋白回补的效果,并利用实时定量PCR(real-time quantitative reverse transcription PCR,qRT-PCR)检测SMAD蛋白回补后对分化过程中的ME关键因子EOMES、叉头框转录因子A2(forkhead box A2,FOXA2)和GSC同源盒(goosecoid homeobox,GSC)表达的影响。结果·虽然SMAD2和SMAD3的蛋白序列较为相似,但是SMAD2才是hESC中主要表达的蛋白因子。免疫荧光染色结果表明,SMAD2敲除和SMAD3敲除并不会影响hESC多能性因子OCT4和SOX2的表达;同时流式细胞术发现,SMAD蛋白的缺失也不会影响NE标志因子PAX6和SOX1的表达。SMAD3敲除对hESC向ME分化没有显著的影响,而SMAD2敲除严重阻碍了hESC表达ME标志因子SOX17、EOMES和CXCR4。通过qRT-PCR检测显示在SMAD2KO细胞中过表达外源性SMAD2可以有效地恢复ME基因EOMES、FOXA2和GSC的表达,而在SMAD3KO细胞中回补SMAD3对这些ME基因的表达无影响。结论·SMAD2和SMAD3在hESC向ME分化过程中的调控作用不同。SMAD2而非SMAD3是决定hESC表达ME基因的关键。

摘要： 目的探讨miR-522-3p作为促癌基因,通过调控SMAD2促进前列腺癌恶性进展可能的机制。方法生物信息学工具筛选前列腺癌中差异表达的miRNA,预测下游调控靶点;分别在前列腺癌细胞和前列腺上皮细胞中利用荧光定量PCR检测内源性miR-522-3p表达量;敲低前列腺癌细胞中的miR-522-3p水平后,细胞功能实验检测增殖、克隆、侵袭和迁移生物学功能的变化;敲低miR-522-3p后,利用荧光定量PCR检测前列腺癌细胞中SMAD2水平,功能实验检测细胞增殖、克隆、侵袭和迁移生物学功能的变化。结果前列腺癌细胞PC3与前列腺上皮细胞RWPE-1相比,miR-522显著高表达;敲低miR-522-3p后的PC3细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭功能显著下降;公用在线预测软件预测miR-522-3p下游靶基因交集于SMAD2,敲低miR-522-3p后PC3细胞中SMAD2水平上调;在PC3中敲低miR-522-3p的基础上再次转染si-SMAD2,SMAD2低水平的癌细胞增殖、克隆、迁移和侵袭能力均得到恢复。结论miR-522-3p通过抑制SMAD2的表达促进前列腺癌恶性进展。

摘要： 目的通过TGF-β1/Smads信号通路,研究丹荔输通汤对慢性输卵管炎性阻塞模型大鼠的影响。方法将造模后大鼠随机分为模型组、高剂量灌胃+灌肠组(14 g·kg-1)、中剂量灌胃+灌肠组(7 g·kg-1)、低剂量灌胃+灌肠组(3.5 g·kg-1)、中剂量灌胃组(7 g·kg-1)、对照组(阿奇霉素,1 mg·kg-1),另设空白组。予相应药物治疗30 d后处死全部大鼠,取输卵管组织,病理检测观察输卵管组织的组织形态变化,以RT-PCR、Western blot检测各组大鼠输卵管组织中TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA与蛋白的表达。结果与模型组相比,各组大鼠输卵管肿胀、充血等表现均有所减轻,各组大鼠输卵管组织中的TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA与蛋白的表达均明显降低(P<0.01);高剂量灌胃+灌肠组、中剂量灌胃+灌肠组大鼠输卵管组织中的TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA与蛋白的表达均低于低剂量灌胃+灌肠组、中剂量灌胃组、对照组(P<0.01)。结论丹荔输通汤能明显改善输卵管炎性阻塞模型大鼠输卵管组织炎症反应,改善纤维化水平,其可能通过下调TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA与蛋白表达,通过TGF-β1/Smads信号通路发挥作用。

摘要： 目的 检测微小RNA-145(miR-145)和SMAD2蛋白在胶质瘤中的表达情况及与临床意义.方法 收集80例胶质瘤患者的血清和肿瘤组织样本,另选取20例正常脑组织和血清样本作对照.提取血清外泌体,采用实时荧光定量PCR(QPCR)法检测血清外泌体和组织中miR-145的相对表达量.采用免疫组化染色法检测组织中SMAD2蛋白的表达.采用生物信息学方法 分析miR-145与SMAD2的靶向关系.结果 正常脑组织和胶质瘤组织中miR-145表达水平分别为1.00±0.13和0.71±0.24,差异有统计学意义(P<0.05).正常脑组织和脑胶质瘤组织中SMAD2蛋白阳性表达率分别为30.0％(6/20)和73.75％(59/80),差异有统计学意义(P<0.05).SMAD2蛋白阳性表达患者外泌体和瘤组织中miR-145表达量均低于SMAD2蛋白阴性表达患者(0.81±0.24 vs.1.02±0.27,0.61±0.19 vs.0.98±0.11,P<0.05).经Pearson相关性分析,胶质瘤患者血清外泌体miR-145表达量和肿瘤组织中miR-145表达量呈正相关(r=0.724,P<0.001);脑胶质瘤患者血清外泌体和组织中miR-145表达量与肿瘤直径、WHO病理分级和KPS评分有关(P<0.05).生物信息学分析miR-145与SMAD2存在靶向关系.结论 胶质瘤患者血清外泌体和组织中miR-145表达水平降低与肿瘤直径、WHO病理分级和KPS评分有关,同时组织SMAD2蛋白表达相应升高,miR-145/SMAD2轴有望成为脑胶质瘤诊断和治疗的潜在靶点.

摘要： 目的:探讨解毒通络方在大鼠心肌纤维化进程中的作用,并阐明其作用机制.方法:30只SPF级Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、卡托普利组、低剂量解毒通络方组和高剂量解毒通络方组(n=6),以5 mg·kg-1盐酸异丙肾上腺素皮下注射法复制大鼠心肌纤维化模型,卡托普利组、低剂量解毒通络方组和高剂量解毒通络方组大鼠分别用0.005 g·kg-1·d-1卡托普利和1、5 g·kg-1·d-1解毒通络方灌胃28 d,对照组和模型组大鼠灌胃给予等体积蒸馏水,苏木素-伊红(HE)和Masson三色染色观察大鼠心肌组织病理形态表现并计算胶原纤维面积百分率,碱水解法检测大鼠心肌组织中羟脯氨酸水平,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠心肌组织中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)水平,免疫组织化学法检测转化生长因子β1(TGF-β1)和LIM激酶(LIMK)蛋白表达水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测大鼠心肌组织中Smad2、Smad3和Rho相关蛋白激酶(ROCK)mRNA表达水平,Western blotting法检测大鼠心肌组织中磷酸化Smad2/3(p-Smad2/3)和ROCK蛋白表达水平.结果:注射异丙肾上腺素28 d后,大鼠心肌组织呈典型纤维化改变,与正常对照组比较,模型组大鼠心肌组织中胶原纤维面积百分率及羟脯氨酸和AngⅡ水平明显升高(P0.05).结论:解毒通络方可通过抑制TGF-β1/Smad和ROCK通路延缓大鼠心肌纤维化进程.

摘要： 目的探讨1年期犬裁剪去粘膜回肠输尿管中Collagen Ⅲ和Smad2的表达,评估其纤维化。方法用5只比格犬参照前期实验方法,建立裁剪去粘膜回肠代输尿管模型,术后饲养至1年,造影检查与在体观察后切取回肠输尿管;用正常回肠远段部分组织为对照;采用组织病理、免疫组织化学、Western blot和Real-time PCR技术,检测Collagen Ⅲ和Smad2在样本中的表达,比较两组的差异。结果术后模型犬4只持续存活,1只肠梗阻死亡,裁剪去粘膜回肠输尿管显影较好、未见明确狭窄与梗阻;肉眼及镜下观察未发现其与对照组间存在明显差异,管壁各层无显著纤维增生与胶原沉积增加;Collagen Ⅲ和Smad2在两组中均呈阴性表达,其中Smad2实验组低于对照组(P0.05)。结论犬裁剪去粘膜回肠输尿管1年仍能保持较好形态结构,Collagen Ⅲ和Smad2表达无显著增加,管壁无明确纤维化改变,具有长期稳定性。

摘要： 目的 探讨1 年期犬裁剪去粘膜回肠输尿管中Collagen Ⅲ和Smad2的表达,评估其纤维化.方法 用5 只比格犬参照前期实验方法,建立裁剪去粘膜回肠代输尿管模型,术后饲养至1 年,造影检查与在体观察后切取回肠输尿管;用正常回肠远段部分组织为对照;采用组织病理、免疫组织化学、Western blot和Real-time PCR技术,检测Collagen Ⅲ和Smad2在样本中的表达,比较两组的差异.结果 术后模型犬4只持续存活,1 只肠梗阻死亡,裁剪去粘膜回肠输尿管显影较好、未见明确狭窄与梗阻;肉眼及镜下观察未发现其与对照组间存在明显差异,管壁各层无显著纤维增生与胶原沉积增加;Collagen Ⅲ和Smad2在两组中均呈阴性表达,其中Smad2实验组低于对照组(P＜0.05);Collagen Ⅲ和Smad2在蛋白和基因水平的表达,两组无显著差异(P＞0.05).结论 犬裁剪去粘膜回肠输尿管1 年仍能保持较好形态结构,Collagen Ⅲ和Smad2表达无显著增加,管壁无明确纤维化改变,具有长期稳定性.

摘要： 目的 观察小鱼际滚法干预新西兰白兔骨骼肌急性钝挫伤组织机化期的生长/分化因子8(growth differentiation factor 8,GDF-8)表达、受体活化型通路限制性蛋白Smad2、Smad3的表达水平以及Smad2的磷酸化水平(p-Smad2),探究小鱼际滚法干预骨骼肌急性钝挫伤组织机化期的可能作用机制.方法 采用随机数字表法将18只兔分为空白组、模型组、滚法组,每组6只.采用自制重力锤打击装置制备新西兰白兔骨骼肌急性钝挫伤模型,于造模后第5天进行干预,空白组和模型组进行捆绑,滚法组由经过专门培训的专员进行小鱼际滚法干预,皆为上午下午各1次,5 min/次,共3 d.干预结束后,观察苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色组织形态学变化,采用蛋白质印迹法(Western blot,WB)检测GDF-8、p-Smad2、Smad2/3蛋白相对表达量.结果 HE染色结果显示,模型组的股四头肌肌束间不规则结缔样组织明显增多,肌纤维排列紊乱,数量减少、变小,滚法组存在少量结缔组织,肌束排列紧密,肌纤维排列较为整齐,大小近似.WB检测显示,与空白组比较,模型组和滚法组的GDF-8表达都升高(P0.05);与空白组比较,模型组的p-Smad2蛋白表达、p-Smad2/Smad2/3的灰度比值都升高(P<0.01),滚法组均显著低于模型组(P<0.01).结论 小鱼际滚法在兔急性钝挫伤组织机化期可能通过抑制GDF-8/Smad2信号通路达到延缓组织纤维化、促进肌纤维生长以及加强骨骼肌修复的目的.

摘要： 本发明涉及一种Smad4蛋白可结合的DNA片段，其包含一个或多个Smad4蛋白结合框；还涉及该DNA片段的应用；还涉及一种用于检测细胞内Smad4转录调控活性的方法。通过使用本发明的DNA片段和方法，可直接针对性地检测细胞内Smad4的转录调控活性，而非仅仅检测其转录本或蛋白质的含量，从而使得能够更准确地分析Smad4作为转录因子在一些发育生物学和病理学发展中所起的作用。

摘要： 本发明提供了一种过表达SMAD3诱导体细胞重编程为乳腺上皮细胞的方法，可应用于高效精准的调控体内特定组织细胞重编程为乳腺上皮细胞，有利于体内乳腺再生与修复。

摘要： 本发明基于发现TGF‑β信号传导的一种重要的下游介质Smad3，在癌症的发生和发展中起到至关重要的作用。因此，本申请提供了通过抑制Smad3信号传导，例如通过给予Smad3抑制剂SIS3，来治疗癌症的新方法。还提供了通过抑制Smad3信号传导来治疗癌症的组合物和试剂盒。

摘要： 本发明涉及SMAD7的治疗应用。具体地，本发明提供了用于治疗炎性和/或组织损伤病症的方法和组合物。特别地，描述了局部地或全身地递送到炎症和/或组织损伤部位的Smad7组合物的用途。另一些具体的实施方案涉及由放射和/或化学治疗引起的副作用(包括但不限于粘膜炎)的治疗或预防。

摘要： 本发明涉及一种Smad4蛋白可结合的DNA片段，其包含一个或多个Smad4蛋白结合框；还涉及该DNA片段的应用；还涉及一种用于检测细胞内Smad4转录调控活性的方法。通过使用本发明的DNA片段和方法，可直接针对性地检测细胞内Smad4的转录调控活性，而非仅仅检测其转录本或蛋白质的含量，从而使得能够更准确地分析Smad4作为转录因子在一些发育生物学和病理学发展中所起的作用。

摘要： 本发明公开了一种Smad3蛋白作为卵巢癌抗顺铂耐药新靶点的应用。目前针对Smad3蛋白与卵巢癌的关系、及卵巢癌中顺铂耐药机制的关系尚未见研究。为了明确卵巢癌患者顺铂耐药的机制，为卵巢癌患者提供更明确的治疗策略和药物，本发明获得了调控顺铂敏感性的新分子靶标Smad3蛋白，表明Smad3蛋白作为卵巢癌抗顺铂耐药新靶点的应用。本发明采用双硫仑与顺铂联合应用于治疗卵巢癌，治疗效果优于单独的顺铂治疗效果。

摘要： 本发明公开了一种用于检测SMAD4基因全外显子突变的引物、方法及试剂盒，所述特异性引物包括扩增覆盖SMAD4基因全部12个外显子的正反向引物；本发明采用Sanger测序法检测SMAD4基因全外显子突变，可快速检测SMAD4基因全外显子的突变。利用本发明完成的检测结果准确，可以专一性鉴别SMAD4基因是否突变，确保了测定结果的准确性和唯一性；可辅助疾病诊断，提高疾病的风险评估，对早期干预、早期治疗有重要的参考意义。

摘要： 本发明公开了一种靶向Smad4/PELO相互作用的抑制前列腺癌细胞转移的小分子多肽，该靶向Smad4/PELO相互作用的抑制前列腺癌细胞转移的小分子多肽的氨基酸序列为：FCDYMFQQA。其能特异性地阻断Smad4与PELO的相互作用，抑制前列腺癌细胞的迁移及侵袭能力，小鼠实验也证实了该靶向Smad4/PELO相互作用的抑制前列腺癌细胞转移的小分子多肽可抑制前列腺癌细胞在体内的肺转移和肝转移，并提高裸鼠的生存率，达到抵抗肿瘤转移的效果，因此，可将其用于制备抗肿瘤药物或肿瘤诊断试剂，用于诊断或治疗前列腺癌。

摘要： 本发明属于生物传感器技术领域，涉及一种Smad4基因检测生物传感器及制备方法。本发明提高的Smad4基因检测生物传感器，包含Smad4基因检测DNA探针；所述Smad4基因检测DNA探针的核苷酸序列为：5’‑SH‑（CH2）6‑CATACCAGTCTAGACTTAT‑3’。本发明将电化学、磁性材料以及纳米分子相结合，检测Smad蛋白通路中Smad4序列，其检测特异性、灵敏度、生物相容性和检测限性能优异。

摘要： 本公开内容涉及寡核苷酸(例如，SMAD7反义寡核苷酸非对映体)的组合物以及制备、评价效力和使用该组合物的方法。