复性

摘要： 目的建立人血清淀粉样蛋白1单体(HSAA1)的制备方法,并考察其活性及稳定性。方法利用基因重组技术构建重组HSAA1大肠杆菌工程菌,变性条件下进行层析纯化,透析复性纯化后蛋白,采用酶联免疫吸附法检测复性后SAA1的生物活性,在不同温度及不同pH值的缓冲液中考察其储存稳定性。结果SAA1在大肠杆菌E.coli中可溶性表达,纯化后蛋白纯度超过95%,透析复性后蛋白二级结构主要为α螺旋结构;SAA1质量浓度在0.01~2.50µg/mL范围内与吸光度值呈线性关系;SAA1在中性及偏碱性条件下的稳定性高于酸性条件;在pH 8的缓冲液体系中添加25%甘油,室温存放90 d后,SAA1无明显降解。结论采用原核表达体系,结合变性纯化及透析复性可获得高纯度的重组SAA1,可作为免疫检测的标准品和校准品,也可作为抗原制备相应单克隆抗体及多克隆抗体。

摘要： 与阳明以来的心学传统有所不同,陈确的思想是以先验的性善为理论基础,以“复性”的道德工夫实践彰显性善、实现性善为理论架构建立起来的。在本体与工夫之辨上,他特重工夫,强调不能离开工夫求体,主张以工夫统本体,以外显内,通过道德实践工夫彰显本体的价值与意义,达至至善的圣人之境,使儒家的价值理想不凌空蹈虚。

摘要： 目的:疫苗防治将成为金黄色葡萄球菌防控的主要方式,如何解决靶向亚单位疫苗生产中包涵体靶向抗原的复性问题,将是蛋白亚单位疫苗生产的核心问题。方法:构建靶向树突状细胞DEC205受体的金黄色葡萄球菌重组scFv-DEC205-Trap质粒进行PCR、测序鉴定,IPTG诱导表达。对表达后形成的包涵体各项溶解条件:溶液、溶解温度、溶解时间以及是否振荡进行单因素优化;对复性缓冲液的不同添加剂和稀释浓度进行条件优化,最大限度提高包涵体蛋白复性率,Western blot检测复性蛋白抗原性。结果:离心力大于400 g,离心3 min以上,96%的包涵体蛋白沉降;含8 mol/L的尿素溶液在4~40°C溶解0.5 h以上可使包涵体蛋白充分溶解;3 mol/L精氨酸的100 mmol/L Tris-HCl缓冲液稀释5倍复性率最高,抗原性好。结论:实验证明通过适宜的溶解条件和复性条件可以从表达包涵体中获得良好抗原性的重组靶向抗原。

摘要： 为探究不同复性方法制备的重组大肠杆菌外膜蛋白A(rOmpA)的免疫原性,研究分别用纯化的β-环糊精复性rOmpA(β-rOmpA)、吐温-20复性rOmpA(T-rOmpA)和包涵体形式rOmpA(I-rOmpA)作为抗原,与弗氏佐剂乳化后肌肉注射免疫接种小鼠.通过检测血清特异性抗体、脾淋巴细胞分泌细胞因子及攻毒试验进行免疫效力评价.结果,β-rOmpA免疫组小鼠血清抗体水平高于T-rOmpA免疫组和I-rOmpA免疫组(P<0.05);三种抗原免疫均能提高小鼠淋巴细胞分泌IFN-γ水平,且在体外由rOmpA刺激下,β-rOmpA免疫组小鼠产生的IFN-γ、IL-17A水平显著高于T-rOmpA和I-rOmpA免疫组(P<0.05);用E.coli 2002-1菌株腹腔攻毒后,β-rOmpA免疫组小鼠肝、脾、肺、肾中的细菌定植量显著低于T-rOmpA免疫组和I-rOmpA免疫组(P<0.001);攻毒后第2 d PBS对照组小鼠免疫保护率为0时,β-rOmpA免疫组为60％,T-rOmpA免疫组为40％,I-rOmpA免疫组为30％.结果表明,β-环糊精复性纯化的rOmpA免疫原性最好,诱导机体产生免疫应答和免疫保护作用最强.

摘要： 为了建立猪瘟病毒(CSFV)血清抗体检测方法,将CSFV E rns和E2蛋白主要抗原区串联表达的编码核酸序列克隆至原核表达载体pET-32a中,转化大肠杆菌Rosetta TM2(DE3)构建重组表达菌.SDS-PAGE、Western blot鉴定及蛋白质可溶性分析结果显示,表达的E rns/E2蛋白分子质量约为43 ku,能够被CSFV阳性血清识别,主要以包涵体形式存在.通过快速稀释法复性了纯化的包涵体蛋白,复性效率大于40％.以纯化复性的E rns/E2蛋白为包被抗原,经优化各反应条件,建立了间接ELISA检测CSFV抗体方法(E rns/E2-ELISA).特异性、敏感性和重复性试验结果表明,建立的检测方法特异性强、敏感性高、重复性好.利用建立的E rns/E2-ELISA检测方法对121份随机采取的临床血清样本进行检测,与IDEXX CSFV抗体检测试剂盒相比,E rns/E2-ELISA检测方法符合率为86.78％,敏感性为92.11％,特异性为77.78％.利用建立的E rns/E2-ELISA检测方法和IDEXX CSFV抗体检测试剂盒同时评价CSFV C株疫苗免疫的4只30日龄健康仔猪抗体消长规律,可分别于免疫后7 d和14 d开始检出阳性,35～42 d抗体水平达到高峰,49～56 d抗体趋于稳定.

摘要： 王阳明承续"尊德性而道问学"儒学道统,发展出自成体系的德性课程知识观.一是以"心即理"阐明德性课程知识的意蕴,即德性课程知识既要满足自我的"尽心"而为的精神伸展需要,又要体现社会的思想约束和道德规制;二是以"复性"指明德性课程知识的价值,即以复己之性、复人之性、复物之性为价值向度,既继承儒家学术传统的知识积淀,又适应社会的发展需求;三是以"人伦"言明德性课程知识的内容,即在自我主体性确立的基础上践行类别化的人伦关系;四是以"知行合一"申明德性课程知识的内部知识实践和外部行为实践过程,即在主观主义知识观和客观主义知识观的统合中发现德性,在学问知识与生命实践的一致中发展德行.

摘要： 包涵体蛋白质的复性受多种因素的影响,包括包涵体的变性增溶,变性剂的去除,辅助蛋白复性的小分子添加剂等.本文我们将讨论其相关的一些关键参数包括:包涵体蛋白溶解后的构象、构象和活性的变化以及随变性剂浓度降低的复性过程中蛋白质溶解度的变化、小分子添加剂对蛋白复性的影响及聚合蛋白的聚集效应.

摘要： 目的 探究包涵体蛋白LAP-F制备、提取、纯化以及验证它对TGF-β诱导的HK-2细胞在形态学上的影响.方法 通过高浓度尿素溶解包涵体,离心后将上清通过透析使蛋白复性,经镍琼脂糖亲和层析纯化重组蛋白,通过SDS-PAGE凝胶定量蛋白含量;将重组蛋白LAP-F作用于TGF-β诱导的HK-2细胞,并培养48h后通过显微镜观察细胞形态.结果 诱导了LAP-F在包涵体的表达,并筛选出了高表达菌株.结论 原核表达载体构建成功,成功筛选并纯化了目的 蛋白;重组蛋白LAP-F可抑制TGF-β对HK-2细胞的纤维化,为后续研究LAP-F对TGF-β活化过程的干扰作用及对器官纤维化的影响奠定基础.

摘要： 黄曲霉毒素B1(AFB1)是一种具有强致癌性、致畸性和遗传毒性的物质，本研究所己经分离出一种产黄曲霉素氧化酶(Aflatoxin-Oxidase} AFO，也称aflatoxin-detoxifizyme)的真菌E20，并对其进行基因克隆和重组表达，得到了黄曲霉素氧化酶(rAFO )。rAFO为一新发现的氧化酶，对该酶的结构与功能的研究具有重要的理论和实践意义。实验室前期的工作成功将黄曲霉毒素氧化酶基因克隆到含有融合标签MBP的pMAL-C2X载体并在大肠杆菌中进行包涵体表达。本研究将大肠杆菌包涵体表达的rAFO经尿素变性，用不同的复性条件，以期望获得高纯的活性的rAFO蛋白，对其结构进行了初步的分析，为进一步对rAFO结构及功能的深入研究奠定基础。

摘要： 色谱法复性是近年来发展最快的蛋白复性方法之一,它在一定程度上能够抑制蛋白聚集,蛋白复性率高,而且在复性的同时可以使蛋白得到纯化.1991年耿信笃教授首次将高效疏水相互作用色谱(HPHIC)用于重组人干扰素-γ(rhIFN-γ)的复性并同时纯化,其活性回收率是稀释法的2-3倍,并获得了国家发明专利.1997年美国Du-Pout-Merck药业公司将疏水色谱(HIC)用于多个HIV蛋白酶突变体的复性和纯化.目前,HPHIC已经用于多种蛋白的复性,取得了很好的复性效果. 人粒细胞集落刺激因子(hG-CSF)是一种细胞生长因子,是目前已知血细胞集落刺激因子中特异刺激粒系祖细胞增殖、分化乃至维持其功能、存活所必须的一种造血生长因子,同时也是成熟的中性白细胞的功能活化因子,对机体应激防御系统有重要意义,在造血、血液病细胞生长和机体免疫功能中具有不可忽视的作用.本文采用HPHIC对8.0 mol·L-1脲溶解的rhG-CSF包涵体进行了复性并同时纯化,对复性过程中的各种影响因素进行了研究,得到了很好的效果.

摘要： 本文研究了大肠杆菌表达的重组蛋白HAb18G 胞外区片段形成的包含体的特性，并利用这一特性确立了HAb18G 胞外区片段的纯化和复性方法。其过程为：首先将包含体溶解在含有2M 脲的缓冲液中，1.6M (NH4)2SO4 沉淀后上Phenyl-Sepharose 6FF (LS)柱初纯，将收集的目标蛋白峰用Sephadex G-25 柱脱盐后上DEAE 柱继续纯化及复性，最后得到了电泳纯且正确折叠的HAb18G 胞外区片段。

摘要： 本文建立了一种有效的α干扰素复性的方法,将疏水色谱和具有水化能力的渗透质-甘油相结合用于重组人α-干扰素的复性,旨在保持疏水介质抑制蛋白聚集的能力,同时使蛋白质在逐渐增加的亲水环境中折叠,并加强蛋白质自身的疏水坍塌趋势,最后导致天然结构的恢复.

摘要： 本文利用SPSepharoseFastFlow离子交换层析柱作为蛋白质复性系统,采用尿素梯度法进行重组人干扰素-γ包涵体蛋白质的复性实验.结果表明,尿素梯度离子交换层析法能有效地复性重组人干扰素-γ包涵体,并能实现复性和纯化包涵体蛋白质的过程的集成化,复性后的重组人干扰素-γ的纯度达95％.在优化的实验条件下,复性后的重组人干扰素-γ收率为54％,比活达7.5×105IU·mg-1.以Superdex75凝胶作为层析介质,对离子交换层析复性的样品进行分析,离子交换层析复性的样品中重组人干扰素-γ的纯度很高,并且没有聚集体存在.

摘要： 排阻色谱法复性可以提高复性的产率,但它是否能提高复性的速率,一直没有明确的答案,本文就以溶菌酶为目标蛋白,研究了排阻色谱法复性的动力学.

摘要： 本文分别研究了两种HPHIC固定相、6种不同盐配置的不同浓度的流动相、缓冲液组成及pH、11种洗脱方式对rh-proinsulin复性及同时纯化的影响,并对rh-proinsulin8.0mol/L脲提取液分离纯化的条件进行了最优化.结果表明,用HPHIC对rh-proinsulin分离纯化和复性的最佳工艺为:固定相采用XDF-SGM4型HPHIC填料,以硫酸铵为流动相组成,采用45min晨线性梯度洗脱.图1给出了在最佳工艺下HPHIC对rh-proinsulin的色谱分离图.结果表明,rh-proinsulin的8.0mol/L脲提取液经HPHIC一步分离纯化后,质量回收率>90﹪,纯度>90﹪.

摘要： 绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)具有稳定而易于检测的绿色荧光,分子结构的变化直接反映在荧光的变化上,所以以GFP为模型,可以方便地通过对荧光强度的监测来研究蛋白质的折叠情况.我们通过研究不同条件下GFP变性-复性的荧光动力学行为,阐明了pH,离子强度,温度等条件对GFP折叠以及稳定存在的影响.

摘要： 建立了重组hepcidin 的分离纯化方法，并鉴定其活性。由于担体序列不会参与二硫键的形成，因此采用先氧化形成二硫键，再用肠激酶酶切的方法制备重组hepcidin。融合蛋白His-hepcidin 经氧化、复性后的总收率为50﹪，纯度大于95％。酶切后所得重组hepcidin经抑菌圈试验检验，对枯草芽孢杆菌具有抗菌活性。

摘要： 本发明公开了一种自修复性涂料组合物，包括按重量份计的如下组分：氟碳树脂100份、聚碳酸酯二元醇10‑30份、异氰酸酯类固化剂10‑40份；所述氟碳树脂的数均分子量为1000‑50000，玻璃化转变温度为‑20～50°C，羟值为30～100mgKOH/g，酸值为1～10mgKOH/g；所述聚碳酸酯二元醇是由碳酸二酯类与主链碳原子数大于2的二元醇类经酯交换缩合反应得到的，其数均分子量为200‑1000；所述异氰酸酯类固化剂为脲基甲酸酯型聚异氰酸酯，其官能度为4‑6，数均分子量为500‑2000。本发明还公开了一种由该涂料组合物配置的溶液涂布于基材上得到的自修复性涂层、包含该涂层的保护膜及其应用。本发明的自修复性涂料组合物，兼具优异的耐候性及稳定的自我修复特性，特别适用于长期的户外使用。

摘要： 本发明公开了一种自修复性涂料组合物，包括按重量份计的如下组分：氟碳树脂100份、聚碳酸酯二元醇10‑30份、异氰酸酯类固化剂10‑30份；氟碳树脂的数均分子量为1000‑50000，玻璃化转变温度为‑20～50°C，羟值为30～100mgKOH/g，酸值为1～10mgKOH/g；聚碳酸酯二元醇是由碳酸二酯类与主链碳原子数大于2的二元醇类经酯交换缩合反应得到的，其数均分子量为200‑2000。本发明还公开了一种由该涂料组合物配置的溶液涂布于基材上得到的自修复性涂层，以及包含该涂层的保护膜及其应用。本发明的自修复性涂料组合物，兼具优异的耐候性及稳定的自我修复特性，特别适用于长期的户外使用。

摘要： 本发明公开了可独立用于蛋白质复性或作为蛋白质复性前导操作的循环运作方法，包括：(1)将待复性样本加入到变性溶液中溶解；(2)低温环境，变性剂从溶液中逐步析出，微观层面首次做到分子程度产生变性盐浓度平滑下降梯度，在溶液中逐渐形成复性和/或准复性态蛋白质前体，同时随着变性剂的结晶析出，溶液体积减小，蛋白质浓度获得大幅度提升；(3)分离复性和/或准复性态蛋白质前体；(4)将步骤(2)析出的变性剂的结晶与步骤(3)分离出的复性蛋白质和/或准复性蛋白质前体的溶液再溶解，回到步骤(1)的状态，完成一个生产循环。可根据情况随时对各种工作材质进行灵活的调整。该方法可高效制备复性和/或准复性态蛋白质前体。

摘要： 在通过五亚甲基二异氰酸酯与含有活性氢基团的化合物的反应而得到的自修复性聚氨酯树脂原料中，含有活性氢基团的化合物包含数均分子量为100～2000、并且平均官能团数为2～3的多元醇化合物。

摘要： 本发明提供通过由脂肪族多异氰酸酯及/或芳香脂肪族多异氰酸酯形成的多异氰酸酯化合物、与含有活性氢基团的化合物的反应而得到的自修复性聚氨酯树脂原料，其用于制造具有自修复性的聚氨酯树脂，所述自修复性聚氨酯树脂原料在分子末端具有异氰酸酯基，其含有脲基甲酸酯基和异氰酸酯三聚体，其中，脲基甲酸酯基相对于异氰酸酯三聚体的摩尔比率为0.1～20。

摘要： 在通过五亚甲基二异氰酸酯与含有活性氢基团的化合物的反应而得到的自修复性聚氨酯树脂原料中，含有活性氢基团的化合物包含数均分子量为100～2000、并且平均官能团数为2～3的多元醇化合物。

摘要： 本发明公开了一种自修复性涂料组合物，包括按重量份计的如下组分：氟碳树脂100份、聚碳酸酯二元醇10‑30份、异氰酸酯类固化剂10‑40份；所述氟碳树脂的数均分子量为1000‑50000，玻璃化转变温度为‑20～50°C，羟值为30～100mgKOH/g，酸值为1～10mgKOH/g；所述聚碳酸酯二元醇是由碳酸二酯类与主链碳原子数大于2的二元醇类经酯交换缩合反应得到的，其数均分子量为200‑1000；所述异氰酸酯类固化剂为脲基甲酸酯型聚异氰酸酯，其官能度为4‑6，数均分子量为500‑2000。本发明还公开了一种由该涂料组合物配置的溶液涂布于基材上得到的自修复性涂层、包含该涂层的保护膜及其应用。本发明的自修复性涂料组合物，兼具优异的耐候性及稳定的自我修复特性，特别适用于长期的户外使用。

摘要： 本发明涉及一种Boc‑人胰岛素融合蛋白包涵体的高效复性液及其复性方法。具体地，本发明提供一种Boc‑人胰岛素融合蛋白的复性方法，所述的方法包括步骤：(1)将含有Boc‑人胰岛素融合蛋白的包涵体进行裂解，得到裂解混合液，向所述的裂解混合液中加入变性溶液，得到Boc‑人胰岛素融合蛋白变性溶液；(2)将所述Boc‑人胰岛素融合蛋白变性溶液与复性液混合后进行反应，得到复性的Boc‑人胰岛素融合蛋白。本发明所述的方法能够提高复性效率。

摘要： 本发明公开了一种结核分枝杆菌包涵体蛋白复性的方法及其专用复性缓冲液。实验证明，采用本发明提供的复性缓冲液可以复性结核分枝杆菌蛋白W544蛋白，复性得到的W544蛋白能有效刺激结核分枝杆菌感染小鼠的脾淋巴细胞产生免疫反应，同时不刺激健康小鼠的脾淋巴细胞产生免疫反应。由此可见，复性的W544蛋白具有很好的免疫原性。本发明提供的复性缓冲液及依据其建立的结核分枝杆菌包涵体蛋白复性方法具有重要的应用价值。

摘要： 本实用新型公开了一种用于复性罐的拆卸式复性搅拌器，包括：装置外壳，下端对称设置有支撑底座，且所述装置外壳下端安装有出料管，所述装置外壳与进料管相互连接；密封盖板，放置在所述装置外壳的上端，且所述密封盖板上放置有第一电动机；转动轴，与所述第一电动机的输出端相互连接，且所述转动轴上安装有转动轮，所述转动轮通过第一移动板上设置的轮齿结构与第一移动板构成啮合连接。该用于复性罐的拆卸式复性搅拌器，通过转动轮的转动对密封盖板的位置进行上下移动，从而在搅拌叶搅拌时能有效的对搅拌叶的高度进行改变，从而使搅拌效果更佳，且将搅拌轴设置为可拆卸结构，便于对搅拌轴进行拆卸，而后对搅拌轴与搅拌叶进行清洗以及更换。