基因转导

摘要： 目的:研究表皮生长因子样结构域9(epiderma growth factor-like domain 9,EGFL9)基因在肝癌组织及细胞系中的表达水平及其对Huh-7肝癌细胞系增殖、侵袭和迁移的影响。方法:采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-qPCR)方法检测EGFL9基因在20例肝癌及对应的癌旁肝组织标本中的表达水平。下载癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库内肝癌基因表达数据,对EGFL9在肝癌中的表达进行分析。RT-qPCR检测EGFL9基因在Huh-7、SMMC-7721及HepG2三种常见的肝癌细胞系和HL-7702正常肝脏细胞系中的表达水平。采用慢病毒介导的siRNA及基因转导技术分别构建EGFL9基因敲减及过表达的Huh-7肝癌细胞,以噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法、Transwell侵袭实验和迁移实验观察EGFL9基因敲减及过表达对Huh-7肝癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。结果:RT-qPCR结果显示,EGFL9基因在20例肝癌组织中的表达量高于对应的癌旁组织。TCGA数据库分析结果也显示,EGFL9在肝癌组织中的平均表达量明显高于癌旁组织。EGFL9在3株肝癌细胞系中的表达水平均高于正常肝脏细胞系。EGFL9基因敲减的Huh-7肝癌细胞的增殖速度明显慢于对照Huh-7肝癌细胞,其侵袭、迁移能力也明显被抑制;EGFL9基因过表达的Huh-7肝癌细胞实验结果则与之相反。结论:EGFL9在肝癌组织和细胞中的表达水平明显上调,且可促进肝癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力,提示EGFL9可能是一个潜在的肝癌治疗靶点。

摘要： 嵌合抗原受体T细胞免疫疗法(CAR-T)被认为是最有潜力的癌症治疗方法,并取得了良好的临床疗效.随着CAR-T大规模应用,该技术的局限性也逐渐暴露出来,如治疗效果差 、疾病复发 、不良反应多等.这使得制造结构更优 、安全性更高 、效能更佳的CAR-T细胞成为临床所需.了解CAR-T的制造过程,掌握技术进展,是构建理想的CAR-T细胞的关键.本文以CAR-T细胞构建技术为中心,着重综述嵌合抗原受体各组分的构建及基因转导技术的研究进展,并就符合药品生产质量管理规范(GMP)标准的CAR-T细胞产品进行描述,最后对该技术发展及推广应用进行展望.

摘要： 肾脏的基因治疗近些年研究较多并取得了一定的进展,其研究热点主要集中在腺相关病毒.本文概述了腺相关病毒在基因转导的研究进展,综述了靶向肾小管的基因转导的不同途径和基因载体,探讨了腺相关病毒靶向肾小管的基因转导策略及存在的问题.

摘要： 目的探讨TRPC6(瞬时受体电势C通道蛋白6)过表达慢病毒(PHBCMV-TRPC-EGFP)导入SD大鼠耳蜗后,能否转染毛细胞,促进听力修复。方法21只健康大鼠,随机分为3组:TRPC6组,空病毒组,对照组。噪音暴露后,TRPC6组和空病毒组,于噪声暴露后1d经圆窗膜耳蜗分别注入PHBCMV-TRPC-EGFP和荧光表达空病毒。全部3组大鼠于噪音暴露后3、10、20 d行脑干电位(ABR)检测,噪声暴露后20 d行耳蜗铺片,观察耳蜗TRPC6的转染状况及毛细胞变化。结果噪音暴露前及后3 d,3组大鼠ABR值差异无统计学意义。噪音暴露后10 d,ABR值差异有统计学意义:其中TRPC6组与空病毒和对照组之间ABR阈值差异有显著性(P=0.01,P=0.00)。噪音暴露后20 d,3组ABR值差异有统计学意义(P=0.00),其中TRPC6组与空病毒和对照组之间差异均有显著性(P=0.00,P=0.00)。噪音暴露后20 d,TRPC6组和空病毒组大鼠耳蜗铺片在荧光显微镜下和GFP激光共聚焦显微镜下观察,可见荧光阳性表达毛细胞,对照组耳蜗铺片未见毛细胞荧光表达。TRPC6组较空病毒组毛细胞缺失较轻。结论TRPC6过表达慢病毒导入大鼠耳蜗后,能成功转染大鼠毛细胞,促进其修复以治疗噪音性耳聋。

摘要： 目的 探讨TRPC6(瞬时受体电势C通道蛋白6)过表达慢病毒(PHBCMV-TRPC-EGFP)导入SD大鼠耳蜗后,能否转染毛细胞,促进听力修复.方法 21 只健康大鼠,随机分为3 组:TRPC6 组,空病毒组,对照组.噪音暴露后,TRPC6 组和空病毒组,于噪声暴露后1 d经圆窗膜耳蜗分别注入PHBCMV-TRPC-EGFP和荧光表达空病毒.全部3 组大鼠于噪音暴露后3、10、20 d行脑干电位(ABR)检测,噪声暴露后20 d行耳蜗铺片,观察耳蜗TRPC6 的转染状况及毛细胞变化.结果 噪音暴露前及后3 d,3组大鼠ABR值差异无统计学意义.噪音暴露后10 d,ABR值差异有统计学意义:其中TRPC6 组与空病毒和对照组之间ABR阈值差异有显著性(P＝0.01,P＝0.00).噪音暴露后20 d,3组ABR值差异有统计学意义(P＝0.00),其中TRPC6组与空病毒和对照组之间差异均有显著性(P＝0.00,P＝0.00).噪音暴露后20 d,TRPC6 组和空病毒组大鼠耳蜗铺片在荧光显微镜下和GFP激光共聚焦显微镜下观察,可见荧光阳性表达毛细胞,对照组耳蜗铺片未见毛细胞荧光表达.TRPC6组较空病毒组毛细胞缺失较轻.结论 TRPC6 过表达慢病毒导入大鼠耳蜗后,能成功转染大鼠毛细胞,促进其修复以治疗噪音性耳聋.

摘要： 研究构建稳定表达Plekhs1 shRNA 2型重组腺相关病毒载体(rAAV2-GFP-shRNA-Plekhs1),筛选并制备抑制Plekhs1表达效果最强重组腺相关病毒(rAAV2-PL3).重组病毒子宫角注射到小鼠子宫,通过Real-time PCR、荧光检测、免疫组化技术检测rAAV2-PL3在小鼠子宫侵染表达规律,分析rAAV2-PL3侵染小鼠子宫抑制Plekhs1表达效果及对生殖影响.结果表明,rAAV2-PL3可有效转染至小鼠子宫内膜上皮细胞中并抑制Plekhs1表达,F1代产仔数量显著降低.研究表明,子宫角注射重组腺相关病毒可高效研究子宫腔上皮基因功能.

摘要： 慢性心力衰竭(CHF)是构成全球人口发病率和病死率的主要原因,无论在经济方面还是社会方面都给人类带来了巨大的负担.目前,虽然常规治疗方法在降低心力衰竭病死率方面有着稳定和实质性的进展,但是新的药物以及常规心脏外科手术在延长5年生存率方面并没有取得满意的临床效果.基因治疗是在上世纪70年代随着重组DNA技术的发展而引入的.幸运的是,近年来随着基于载体的基因转导策略在动物模型以及初步临床试验中的应用,基因治疗可能会为CHF提供理想的替代治疗方案.20年来,研究者针对心力衰竭基因治疗的不同基因,不同信号转导通路和不同转导方式进行了大量研究.目前CHF基因治疗的主要目的是抑制心肌细胞凋亡,并通过最有效的心肌转染减少不良重塑和增加收缩力.在本文中,将总结多种心力衰竭模型中的基因转导技术,讨论这些转导策略在基于载体介导的心脏基因转导系统中的优势和不足,并着重论述基于外科方法的再循环转导技术.

摘要： 目的 通过圆窗膜显微注射和完整圆窗膜途径转导小鼠内耳携带GFP的9型腺相关病毒(adeno-asso-ciated virus,AAV),比较两种方式的可行性、转染效率以及对听力的影响.方法 18只C57BL/6小鼠,随机分为圆窗膜显微注射组和完整圆窗膜途径组,术前均行听性脑干反应(auditory brain response,ABR)测听,术后两周行ABR测听后取双侧耳蜗基底膜铺片及冰冻切片观察GFP表达情况.结果 两种转导方法对小鼠听力均无显著影响,圆窗膜显微注射组转染耳蜗内毛细胞GFP可见表达,转染效率由底转到顶转逐渐降低,无毛细胞损伤,经完整圆窗膜途径转染耳蜗未见GFP表达.结论 9型AAV难以通过完整圆窗膜,通过显微注射方式能够将目的基因高效转导内耳,对内毛细胞有选择特异性,且对听力影响较小,是一种安全有效的内耳转导方式.

摘要： 目的：构建携带脑源性神经营养因子（ BDNF）基因的重组腺相关病毒（ rAAV）载体，并检测其体外表达目的基因的能力。方法利用基因重组技术，采用BamHI和EcoRI双酶分别将pcDNA3中的BDNF目的基因片断切出，再克隆到质粒pAAV－MCS中， PCR酶切测序鉴定序列。与腺相关病毒包装质粒pAAV－RC、pHelp-er，用磷酸钙法共转染HEK 293细胞，包装得到含转基因过表达BDNF的病毒载体（ rAAV－BDNF）。 rAAV感染体外培养的小鼠螺旋神经节细胞（ SGC）后，RT－PCR和Western blot法检测细胞BDNF基因及蛋白表达情况。结果成功地构建BDNF基因的rAAV载体，并可在SGC中表达BDNF。结论 SGC能稳定、高效表达外源BDNF，为将其进一步应用于感音神经性耳聋性疾病治疗的研究奠定了方法学基础。%Objective To construct recombinant adeno-associated virus ( rAAV) vector encoding the brain derived neurotrophic factor ( BDNF) gene and to examine its ability to express the BDNF gene in vitro.Methods The plasmid pcDNA3-BDNF was digested with BamHI and EcoRI.Then the BDNF gene fragment was cloned into plasmid pAAV-MCS.The recombinant plasmids was identified by DNA sequencing and restriction digestion.Then the packaging cell lines ( HEK 293 cell) were co-transfected with the pAAV-MCS-BDNF together with the control plasmid pAAV-RC and pHelper by phosphate-calcium deposit method.Then rAAV were used to infect the spiral ganglion cells (SGC), the expression of BDNF was detected by Western blot and RT-PCR method.Results The rAAV vectors of BDNF gene were constructed and expressed in the SGC successfully.Conclusions These results indicate that rAAV can deliver BD-NF gene to SGC in vitro, suggesting the rAAV can be used for gene therapy of sensorineural hearing loss, which lays the basis for its application in the treatment of the sensorineural hearing loss.

摘要： 目的 评估sFlt-1基因针对人骨肉瘤G-292细胞体外转导的效率.方法 逆转录病毒介导的sFlt-1基因体外转染人骨肉瘤G-292细胞,应用ELISA试验评估sFlt-1转基因表达的效率.结果 sFlt-1转导后3d检测到了高水平表达,21 d时达到峰值;转基因产物较高水平的表达至少维持了8周.结论 ELISA试验测定证实sFlt-1基因体外转导成功.

摘要： 研究腺病毒相关病毒2介导水通道1基因重建小型猪腮腺放射损伤功能的有效性及对全身和局部的影响.对20只小型猪单侧腮腺进行单次20Gy放射治疗建立放射损伤模型。局部逆行投递1×1011 vp AAV2-AQP1转导至放射损伤的腮腺中可部分重建小型猪放射损伤腮腺功能达放射前水平的35%，且持续时间在8周以上，对全身和局部无明显影响。腮腺局部基因转导AAV2-AQP1较Ad-AQP1具有对放射损伤腮腺功能重建持续时间更长的作用，AAV2-AQP1有望为临床提供更有效的涎腺放射损伤治疗方法。

摘要： 本文采用重组腺相关病毒2作为载体,转导SERCA2a基因,研究了其对慢性心力衰竭大鼠的治疗作用，并研究了SERCA2a基因导入对心肌蛋白质组的影响，探讨了SERCA2a基因转导治疗心力衰竭的多种可能的机理。

摘要： 为了寻求一种较理想的口腔种植时骨量不足的解决方案,为了给临床上修复颅颌面骨缺损提供理论依据,本研究拟通过基因增强型骨组织工程原理,应用骨再生相关因子-Sonic hedgehog(Shh)基因转导骨髓来源的间充质干细胞(bone marrow derivedmesenchymal stem cells,MSCs),将Shh基因修饰的MSCs与具有骨传导作用的骨移植材料复合,再植入犬下颌骨种植体周围骨缺损模型中,通过体内外实验探讨该方案对骨量增加及骨质改善的效果,评价Shh基因在牙槽骨缺损修复中的作用。本研究证明Shh基因能够体外诱导MSCs向成骨细胞分化，利用基因增强型骨组织工程原理将Shh基因传递到骨缺损区域能够显著的促进骨再生修复，进一步推进了Shh介导的基因增强型骨组织工程方法在骨再生研究中的发展。

摘要： @@仙台病毒（Sendai virus SeV），又称乙型副流感病毒Ⅰ型，日本凝血病毒（hemagglutinating virus of Japan, HVJ），是单负链的的RNA病毒，属副粘病毒科，呼吸道病毒属。早在上世纪80 年代，人们已经发现仙台病毒具有包膜融合作用并将其用于细胞融合实验及脂质体混合转染。随着反相遗传学技术的发展，仙台病毒被开发为胞质表达传播缺陷型的病毒载体，临床前研究已证实其携带外源基因对某些疾病，如呼吸道疾病，缺血性损伤，肿瘤的治疗作用。另外，仙台病毒载体已成为活载体疫苗的候选载体用于新型疫苗的研究，其作为病毒载体的优势主要在于：Ⅰ迅速感染细胞，摄取时间短，Ⅱ感染不受细胞周期的影响，Ⅲ表达外源基因高效且可调控，Ⅳ生活周期完全在胞质中进行，无DNA相，无整合风险，安全性高，Ⅴ单负链RNA基因组且不分节段，重组几率大大降低，Ⅵ可高效在各种组织中表达，应用范围广。目前，仙台病毒载体被定义为高效的基因转导工具。本文从仙台病毒的基因组分子结构，致病性，载体的构建和类型以及其应用等方面进行详细论述。

摘要： 基因治疗中一个重要、关键问题就是在整体动物或是人体采用何种方式，将目标基因安全、高效导入靶细胞，并有效表达目标蛋白。质粒局部给予的方式，以其靶向性好、安全、方便越来越引起人们的重视。本文以大鼠离体心脏Langendorff逆行灌注方式给予pCDNA HSP70裸质粒，观察其是否可有效导入、表达，并产生抗急性心肌损伤作用，为将来开展冠状动脉给予pCDNA HSP70裸质粒，进行抗心肌损伤的基因治疗奠定实验基础。

摘要： 通过基因治疗补充或替代体内基因缺陷或不足来治疗人类疾病已引起关注.自从1994年在美国国立卫生研究院(NIH)首次成功将外源基因转移至涎腺得以表达,涎腺的基因治疗发展非常迅速.本文介绍，一 涎腺基因治疗优点，二 涎腺基因转导技术，三、基因治疗涎腺放射损伤，四、涎腺基因治疗糖尿病及生长激素缺乏症，五、涎腺基因疗法治疗口腔白念感染。

摘要： 神经母细胞瘤是一种严重危害人类特别是儿童健康的疾病,在儿童肿瘤死亡率中高居第一位.外科手术对早期实体瘤的患者较为有效,对晚期及有微小残余病变的患者则达不到治疗目的.自杀基因联合细胞因子基因治疗在基因治疗领域中有其优越之处,而备受关注. 本文以人恶性神经母细胞瘤株SH-SY5Y为对象,将含有GM-CSF-Hytk融合基因的逆转录病毒真核表达载体Lxpsp-hGM-CSF-Hytk转导该肿瘤细胞,用潮霉素B进行筛选,以获得可稳定传代的阳性细胞集落.再进一步检测外源基因的存在和活性细胞因子的分泌,探讨该融合基因体系的体外抗瘤效应,为今后利用此融合基因体系治疗恶性肿瘤迈出第一步.

摘要： 作者将CD95cDNA导入食管癌细胞并观察了CD95基因在转导株的表达及其体外抑瘤效应,可望为食管癌的CD95转基因治疗提供依据.

摘要： 本文研究将外源基因导入干细胞,再将基因工程修饰的干细胞植入体内,通过这些细胞实现补充,修复、治疗功能,使离体基因治疗更加有效.

摘要： 本文研究将外源基因导入干细胞,再将基因工程修饰的干细胞植入体内,通过这些细胞实现补充,修复、治疗功能,使离体基因治疗更加有效.

摘要： 本发明涉及烟草SLs信号转导蛋白NtDAD2及其编码基因，重组表达载体、基因编辑载体及应用，属于植物基因工程技术领域。本发明通过设计特异性引物，克隆获得了烟草SLs信号转导蛋白NtDAD2的编码基因NtDAD2基因。通过实时定量PCR分析发现，正常烟草植株中，NtDAD2基因在花、叶、茎和腋芽中的表达量较高。NtDAD2基因敲除的突变株系，其分枝明显增多，腋芽增长活跃；表明NtDAD2蛋白在烟草生长发育、分枝发育中具有十分重要的作用。因此，可以利用NtDAD2基因对于植物品种进行育种。

摘要： 本发明提供用于更有效的急性髓性白血病免疫疗法的基因修饰NK细胞系及其用途，所述基因修饰NK细胞系转化宿主免疫细胞以表达包含FLT3特异性单克隆抗体或其功能片段、跨膜结构域和T细胞受体的CD3ζ结构域的癌抗原特异性嵌合抗原受体(CAR)蛋白。

摘要： 本发明提供了一种利用昆虫杆状病毒转导cas9基因到哺乳动物细胞进行基因编辑的方法，该方法通过构建含有gRNA、cas9、筛选标记的基因片段、哺乳动物细胞可识别的启动子、转录终止子序列的重组Bacmind质粒，并将其转染sf9细胞，包装获得重组杆状病毒，用其对哺乳动物细胞进行cas9的转导。利用杆状病毒可将大DNA导入哺乳动物细胞，降低cas9/筛选标记基因导入哺乳动物细胞的难度，本发明方法对于cas9的转导效率优异；本发明接近单细胞转导方法，无需反复大量稀释筛选即可找到成功编辑的克隆；所用携带有gRNA/cas9基因的杆状病毒，滴度高，易于保存、复制，可高效重复利用，便于开展相关工作。

摘要： 本发明涉及烟草SLs信号转导蛋白NtDAD2及其编码基因，重组表达载体、基因编辑载体及应用，属于植物基因工程技术领域。本发明通过设计特异性引物，克隆获得了烟草SLs信号转导蛋白NtDAD2的编码基因

摘要： 本公开内容的实施方案涵盖用于产生工程化T细胞的方法和组合物。本公开内容涉及用于产生T细胞的大规模方法，所述T细胞可以使用CRISPR工程化以破坏一种或多种基因的表达并且还表达至少一种异源抗原受体。具体实施方案包括用于该方法的具体参数。T细胞可能是也可能不是病毒特异性的。

摘要： 本公开内容的实施方案涵盖用于产生工程化间充质干细胞/间充质基质细胞(MSC)的方法和组合物。本公开内容涉及用于产生MSC的大规模方法，所述MSC可以使用CRISPR工程化以破坏一种或多种基因的表达并且还表达至少一种异源抗原受体。具体实施方案包括用于该方法的具体参数。

摘要： 本公开内容的实施方案涵盖用于产生工程化B细胞的方法和组合物。本公开内容涉及用于产生B细胞的大规模方法，所述B细胞可以使用CRISPR工程化以破坏一种或多种基因的表达并且还表达至少一种异源抗原受体。具体实施方案包括用于该方法的具体参数。

摘要： 本发明公开了一株不具转导耐药基因能力的沙门菌噬菌体CKT1及其应用，该烈性噬菌体CKT1已于2022年1月21日保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为：CCTCCM2022110。本发明分离到的沙门菌噬菌体CKT1对不同来源的鸡白痢沙门菌、鸡伤寒沙门菌及肠炎沙门菌等D群沙门菌均具有裂解活性，潜伏期短，子代噬菌体爆发量高，抗噬菌体突变率低，基因组上不携带毒力基因与耐药基因，不具转导能力，不会造成耐药基因的传播，是一种安全、高效、特异性强的烈性噬菌体，不会破坏雏鸡肠道菌群。该噬菌体制剂可成为一种新型环保的净化种鸡场鸡白痢沙门菌的辅助手段，也是预防和治疗鸡群鸡白痢或鸡伤寒沙门菌感染的替代策略。

摘要： 本文公开了通过施用阻断、抑制或减少免疫球蛋白G(IgG)和新生儿Fc受体(FcRn)之间的相互作用的药剂来治疗可能发展或已经具有预先存在的基因治疗中和抗体(例如抗FcRn抗体)的患者以减少IgG再循环并增强体内IgG清除率的方法。还公开了使用减少IgG与FcRn相互作用的药剂用于基因疗法治疗有需要的患者的疾病的方法。

摘要： 人虹膜颜色可以变亮，如从棕色变为浅棕色、绿色、淡褐色或蓝色，方法是通过所述人眼角膜引入黑色素细胞杀伤试剂，并使所述虹膜前表面与足以杀死所述虹膜基质中的黑色素细胞的剂量的试剂接触。