p65

摘要： 目的探究虎杖多糖抑制卵巢癌细胞增殖的分子机制。方法采用MTT法和菌落形成实验分析细胞增殖。采用qRT-PCR法检测SKOV3细胞中P65mRNA表达水平。采用免疫印迹检测P65蛋白表达水平。采用流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡率。采用TUNEL检测细胞凋亡。结果虎杖多糖抑制卵巢癌细胞增殖,并且促进其凋亡。虎杖多糖诱导SKOV3细胞中P65的mRNA及蛋白表达水平降低。虎杖多糖诱导SKOV3细胞中S期阻滞。结论虎杖多糖通过NF-κB/P65信号通路抑制卵巢癌细胞增殖,并促进其凋亡。

摘要： 目的 研究枸杞多糖对苯并芘(BaP)诱导人绒毛外滋养层细胞凋亡和侵袭的影响和机制。方法 用BaP诱导人绒毛膜滋养层细胞,以枸杞多糖干预,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室检测细胞侵袭和迁移,Western blot检测细胞中MMP-9、Bax、Bcl-2、p65蛋白表达。用p65激活剂处理人绒毛膜滋养层细胞,探讨p65激活剂对枸杞多糖影响人绒毛膜滋养层细胞凋亡和侵袭的作用。结果 与对照组比较,模型组细胞凋亡率升高,细胞侵袭能力下降,细胞中Bax、p65蛋白表达升高(P<0.05),MMP-9、Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05);与模型组比较,枸杞多糖各剂量组细胞凋亡率降低(P<0.05),细胞侵袭能力增强(P<0.05),Bax、p65蛋白表达降低(P<0.05),MMP-9、Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05),并呈剂量依赖性。p65激活剂可以逆转枸杞多糖对BaP诱导人绒毛膜滋养层细胞凋亡和侵袭的影响。结论 枸杞多糖具有拮抗BaP诱导的人绒毛膜滋养层细胞凋亡,促进细胞侵袭的作用,其机制可能与p65有关。

摘要： 目的观察中药胰炎消方治疗重症急性胰腺炎(SAP)疗效。方法将90例SAP患者按照随机数字表法分为治疗组与对照组各45例。对照组进行西医常规治疗,治疗组在此基础上予以中药胰炎消方口服,比较两组治疗前后中医证候评分、血淀粉酶、尿淀粉酶含量及血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBiL)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、核因子-κB p65(NF-κB p65)、D-乳酸、二胺氧化酶(DAO)含量。结果治疗后治疗组中医证候发热、腹痛、腹胀、恶心呕吐、大便秘结评分均低于对照组(P<0.01);血淀粉酶、尿淀粉酶含量低于对照组(P<0.01);血清ALT、AST、TBiL、IL-6、TNF-α、NF-κB p65、D-乳酸、DAO含量均低于对照组(P<0.01),差异均有统计学意义。结论胰炎消方可有效降低中医证候评分,降低血尿淀粉酶含量,保护肝脏功能,治疗SAP效果显著,其机制可能与调节调节核因子-κB的表达和炎症因子的释放,保护肠道黏膜屏障功能有关。

摘要： 目的:探究环状RNA(circRNA)_103809对结肠癌SW480细胞作用。方法:qRT-PCR检测结肠癌组织及细胞、正常组织及细胞中circRNA_103809表达。将SW480细胞分为对照组(Control),过表达circRNA_103809组(LV-circRNA_103809)及其阴性对照组(LV-scramble)。除对照组外,按分组分别转染LV-circRNA_103809和LV-scramble质粒。qRT-PCR检测各转染组SW480细胞中circRNA_103809、Ki67和p21表达;CCK8检测各组细胞增殖倍数;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;线粒体膜电位的变化;试剂盒检测各组细胞超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量;ELISA检测各组细胞上清液中IL-1β、IL-6和IL-4炎症因子水平,免疫荧光检测p65的核转移;Western blot检测Bax/Bcl-2,活化胱天蛋白酶(cleaved cas)-9/cas-9,cleaved cas-3/cas-3相对表达量及细胞核中p65蛋白的表达。结果:结肠癌组织及细胞中circRNA_103809表达显著下调,p21的表达显著上调(P<0.05)。与对照组相比,过表达circRNA_103809组SW480细胞中circRNA_103809的表达显著上调,Ki67的表达显著下调(P<0.05),细胞增殖倍数显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05),线粒体膜电位降低,Bax/Bcl-2、cleaved cas-9/cas-9和cleaved cas-3/cas-3显著升高(P<0.05),SOD含量减少,MDA含量增加(P<0.05),促炎因子IL-1β和IL-6水平显著降低,抗炎因子IL-4水平显著升高(P<0.05),细胞核中p65蛋白表达显著下调,核定位显著减少(P<0.05)。结论:circRNA_103809在结肠癌SW480细胞中发挥抑癌作用,抑制细胞增殖,通过增强氧化应激促进细胞凋亡,抑制炎症反应阻止癌细胞发展进程。

摘要： 目的:探究细胞分裂周期蛋白20(cell division cycle 20,CDC20)对人脂肪间充质干细胞(human adipose-derived stem cells,hASCs)成骨分化的调控作用及其机制。方法:将hASCs分别进行成骨向诱导0、7、14 d后,通过实时荧光定量PCR和Western blot检测CDC20表达量的变化。对稳定敲低CDC20的hASCs进行成骨向诱导后,分别通过碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色定量实验,Western blot检测成骨相关标志物的表达。将稳定敲低CDC20的hASCs与β-磷酸三钙(β-tricalcium phosphate,β-TCP)材料混合植入裸鼠皮下,8周后取材,HE、MASSON染色检测骨胶原的形成。对过表达CDC20的hASCs进行成骨向诱导后,通过ALP染色定量实验检测hASCs成骨向分化。利用免疫共沉淀和Western blot探索CDC20和p65的关系。构建CDC20和p65双敲细胞系,检测p65在CDC20调控骨再生中的作用。结果:在hASCs成骨向分化过程中,CDC20的表达显著升高(P<0.05)。稳定敲低CDC20的hASCs在成骨诱导后ALP活性为(7.31±0.25)、(11.01±0.49)U/gprot,低于对照组(16.00±0.35)U/gprot,差异有统计学意义(P<0.05);Western blot结果显示敲低CDC20组RUNX2的蛋白水平降低。稳定敲低CDC20的hASCs与β-TCP材料混合物植入裸鼠皮下8周后其形成的骨胶原较对照组减少。过表达CDC20的hASCs在成骨诱导后ALP活性为(20.74±0.53)U/gprot,高于对照组(12.58±0.42)U/gprot,差异有统计学意义(P<0.05)。CDC20可结合p65;敲低CDC20后,p65的表达量升高;过表达CDC20后,p65的表达量降低,且在加入蛋白酶体抑制剂MG132后回升。CDC20和p65双敲细胞系成骨诱导后,ALP染色及定量结果表明CDC20对hASCs成骨向分化的调控依赖于p65。结论:CDC20通过泛素蛋白酶体途径降解p65促进人脂肪间充质干细胞成骨向分化,为骨再生提供全新的潜在治疗靶点。

摘要： Purpose: This research evaluates the efficacy of astaxanthin (AX) on cerebral ischemia/reperfusion (I/R) injury in rats and elucidates the potential mechanism of its neuronal protective effect. Methods: Rats were subjected to a middle cerebral artery occlusion/reperfusion (MCAO/R) model. Fifty grown male Sprague-Dawley (SD) rats were divided into 5 groups, including sham operation group (Sham), MCAO/R group, MCAO/R+AX group, MCAO/R+ AX+ Scramble group and MCAO/R+AX+ si-PPAR-γ group. The neurological score and cerebral infarction volume were evaluated after surgery. Rat microglia (RM) were stimulated by lipopolysaccharide (LPS) to form an inflammatory environment. LPS-induced RM cells were incubated with different concentrations of AX (1, 5 or 10 μg/mL), then cell viability, the expression of microglial activation markers, including cytokines (IL-1β, IL-6 and TNF-α), cluster of differentiation 68 (CD68), inducible nitric oxide synthase (iNOS) and CD206 and the expression of PPAR-γ and phosphorylated P65 (p-P65) proteins were determined. Cells were treated with pcDNA-PPAR-γ, as well as treatment with si-PPAR-γ or PPAR-γ antagonist GW9662 before AX treatment, and then cell activation mediators were tested. Results: AX inhibits LPS-induced RM cells activation and enhanced the expression level of PPAR-γ protein in way of dose-dependent, and pcDNA-PPAR-γ treatment had the same effect as AX. While si-PPAR-γ transfection or PPAR-γ suppressant GW9662 treatment reversed the effect of AX, and cut down the level of PPAR-γ protein and augmented the level of p-P65 protein. In addition, AX treatment alleviated the infarct volume, and sensorimotor and cognitive functions of MCAO/R model rats. Conclusion: AX alleviates LPS-induced microglial injury and has a protective effect on rat cerebral I/R injury by regulating the PPAR-γ/NF-κB pathway.

摘要： 目的探讨FMS样酪氨酸激酶3(FLT3)小分子干扰RNA(siRNA)和p65 siRNA联合抑制对THP-1细胞增殖、凋亡的影响及可能的机制。方法使用FLT3 siRNA、p65 siRNA及FLT3 siRNA+p65 siRNA分别转染处于指数增殖期的THP-1细胞,细胞计数试剂-8检测细胞增殖,Annexin V-FITC/PI染色检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期,实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测FLT3、p65和核辅抑制子维甲酸/甲状腺受体沉默因子(SMRT)mRNA的表达,Western blotting检测p65和SMRT蛋白的表达水平,流式细胞术检测FLT3蛋白的表达。结果使用FLT3 siRNA、p65 siRNA及FLT3 siRNA+p65 siRNA转染THP-1细胞后,细胞的增殖受抑制,生长曲线变平,缺乏指数增殖的特征;细胞的早期凋亡率显著升高(F=22.311,P<0.001),以联合组最为明显;细胞出现G_(0)/G_(1)期至S期的阻滞,G_(0)/G_(1)期的细胞比例明显上升(F=32.705,P<0.001),S期的细胞比例显著下降(F=42.611,P<0.001),以联合组最为明显。RT-PCR、Western blotting及流式细胞术显示:FLT3 siRNA、p65 siRNA及联合组中FLT3 mRNA和蛋白表达均明显降低(F_(mRNA)=22.311,P<0.001;F_(蛋白)=128.78,P<0.001),以联合组作用最为明显;p65 siRNA及联合组中p65 mRNA和蛋白表达明显降低(F_(mRNA)=88.911,P<0.001;F_(蛋白)=27.591,P<0.001);p65 siRNA及联合组中SMRT mRNA和蛋白的表达均明显增高(F_(mRNA)=7.736,P=0.005;F_(蛋白)=6.123,P=0.009)。结论联合抑制FLT3和p65表达能够有效抑制THP-1细胞的增殖,诱导其凋亡,可作为肿瘤治疗的研究方向之一。

摘要： 目的:探讨苍附导痰丸(CFDT)对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠模型的影响及其潜在机制.方法:雌性SD大鼠随机分为四组:分别为正常对照组,PCOS模型组(PCOS),PCOS+CFDT实验组(PCOS+CFDT),PCOS+克罗米芬柠檬酸盐(CC)阳性对照组(PCOS+CC).测量大鼠体重、形态变化、血清睾酮(T)和雌二醇(E2)以评估CFDT的作用.并用免疫组化(IHC)检测TNF-α,NF-κB通路中p65和JNK的表达.结果:PCOS大鼠卵巢组织结构紊乱、颗粒细胞数明显减少、卵泡中无卵母细胞或放射冠.CFDT和CC可显著改善体重、卵巢形态或性激素水平.IHC结果显示,PCOS大鼠中TNF-α,p65,p-p65和p-JNK的表达水平增加,CFDT和CC治疗均可显著逆转这些因子上调.结论:CFDT可能通过激活TNF-α、p65和JNK表达达到减轻PCOS大鼠的体重、卵巢形态和性激素的作用.

摘要： 目的 探讨p65和p16在局限期小细胞肺癌(SCLC)中的表达及其临床意义.方法 选取2010年1月至2018年12月在温州医科大学附属第二医院经病理确诊的128例局限期SCLC患者的癌组织标本,并将其中50例患者的癌旁肺组织作为对照.应用免疫组化SP法检测局限期SCLC癌组织和癌旁肺组织中p65、p16的表达情况,分析SCLC癌组织中p65、p16阳性表达与临床特征、预后的关系及两者表达的相关性.结果 SCLC癌组织中p65阳性表达率为56.3％,明显高于癌旁肺组织的8.0％,差异有统计学意义(P0.05).结论 p65、p16可能在局限期SCLC的发生、发展中起一定作用,p65也可能对SCLC患者的预后有一定的指导意义.

摘要： 目的 探讨丹皮酚抑制类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(RA-FLSs)的炎症反应可能的机制.方法 人成纤维样滑膜细胞(FLSs)通过肿瘤坏死因子(TNF-α)刺激及丹皮酚处理后,利用CCK-8法检测丹皮酚对RA-FLSs炎性增殖的抑制水平;Western blot检测MANF与内质网应激相关蛋白ATF6变化水平;Western blot及免疫荧光实验检测丹皮酚对MANF细胞质/核易位的影响;实时荧光定量分析PCR(RT-qPCR)法检测丹皮酚对转录因子p65的转录活性的影响.结果 丹皮酚抑制RA-FLSs的异常增殖及迁移;丹皮酚促进内质网应激相关蛋白ATF6及MANF的表达增加;丹皮酚促进MANF蛋白向细胞核转移;丹皮酚能够剂量依赖性地抑制p65转录活性.结论 丹皮酚通过内质网应激途径,促进MANF的表达及核转移,通过抑制p65转录活性,抑制RA-FLSs的炎症反应.