喜树

摘要： 为加快喜树优良种苗的繁育,满足喜树大面积种植的种苗需求,利用植物组织培养技术建立喜树组培苗规模化生产体系,以当年生喜树成熟种子为材料进行组培快繁,研究各种因素对喜树组培生长的影响,优选出最佳方案。试验结果表明:喜树种子最佳培养基为MS培养基,萌芽率为86.7%;30日龄喜树试管苗茎在WPM+NAA0.5 mg/L+BA1.5 mg/L培养基上愈伤组织诱导率最高,为82%;愈伤组织脱分化不定芽分化最佳培养基为WPM+BA1.0 mg/L+2,4-D 0.2 mg/L,分化率达82%,每块愈伤组织平均分化芽数4.55个;不定芽增殖最佳培养基为WPM+BA0.5 mg/L,增殖系数最大为5.8,平均芽长0.74 cm;生根培养最佳培养基WPM+IBA0.5 mg/L,生根率最高为88%,平均根数6根,平均根长1.26 cm。移栽在泥炭土:蛭石:珍珠岩=1:1:1的基质中生长良好,存活率达90%以上。研究结果为喜树工厂化育苗提供了关键解决途径。

摘要： 【目的】明确喜树叶斑病病原菌,并探究不同杀菌剂对病原菌的室内抑菌活性,为防治大田喜树叶斑病提供科学依据。【方法】通过常规组织块分离法分离喜树叶斑病病原菌并进行致病性测定,结合形态特征观察及rDNA-ITS序列分析鉴定病原菌的分类地位;采用菌丝生长速率法测定12种常见杀菌剂对病原菌的室内毒力。【结果】从广西农业职业技术大学中草药园的喜树叶斑病上分离到一株真菌,菌株命名为XS-1,经致病性测定、形态学观察和分子鉴定,确定多主棒孢霉(Corynespora cassiicola)是引起喜树叶斑病的病原菌,为国内首次报道,将该病害命名为喜树棒孢霉叶斑病。杀菌剂室内毒力测定结果表明,12种杀菌剂对菌株XS-1菌丝生长均有较强的抑制作用,其中,20%苯甲咪鲜胺微乳剂的抑制作用最强,其EC_(50)为0.0980 mg/L,其次是20%戊菌唑水乳剂、50%多菌灵可湿性粉剂、20%抑霉唑水乳剂、250 g/L丙环唑乳油和10%苯醚甲环唑水分散粒剂,其EC_(50)分别为0.3737、0.4557、0.4878、0.5746和0.5956 mg/L。【结论】经致病性测定、形态特征观察及分子鉴定,确定引起喜树叶斑病病原菌为多主棒孢霉(C.cassiicola);20%苯甲·咪鲜胺微乳剂、20%戊菌唑水乳剂、50%多菌灵可湿性粉剂、20%抑霉唑水乳剂、250 g/L丙环唑乳油和10%苯醚甲环唑水分散粒剂对喜树棒孢霉菌丝生长均具有较强的抑制作用,可作为喜树棒孢霉叶斑病田间防治参考用药。

摘要： 化感作用是影响人工混交林种间关系的重要因素之一.已有研究表明:喜树南方红豆杉混交对喜树生长有明显促进作用,并从混交改善混交林地微气候角度解释了这种促进作用,但未从种间化感作用角度探讨这种作用.为了探究南方红豆杉是否对喜树具有潜在的化感促进作用,从而更全面了解喜树南方红豆杉混交林种间关系,考察了不同浓度(25、50 g/L和100 g/L)的南方红豆杉(Taxus chinensis var.mairei)鲜叶、凋落叶、枝和根水浸提液对喜树(Camptotheca acuminata)种子发芽和幼苗生长的影响.结果表明:(1)南方红豆杉凋落叶浸提液对喜树种子发芽和幼苗生长无显著影响(P＞0.05),而鲜叶、枝和根浸提液对喜树发芽和幼苗生长均具有不同程度的促进作用(P＜0.05),且作用强度大体与浓度呈正相关;(2)100 g/L的南方红豆杉鲜叶、枝和根浸提液浸泡的喜树种子,其发芽率比对照组分别提高8.1％、14.9％和25.6％;(3)南方红豆杉鲜叶浸提液只有在高浓度(100 g/L)时,对喜树幼苗基径生长具有促进作用(P＜0.05),而对其株高、全株干重和净光合速率无显著影响;南方红豆杉根和枝浸提液对喜树幼苗株高、基茎、干重和净光合速率均具有促进作用(P＜0.05),与对照组相比,100 g/L的根和枝浸提液浇灌喜树幼苗,可以使喜树幼苗株高分别提高14.2％和8.4％,基径分别提高19.0％和15.3％,干重分别提高23.1％和15.9％,净光合速率分别提高11.6％和6.1％.研究结果表明,在喜树南方红豆杉混交林中,南方红豆杉对喜树的正向化感作用可能是促进喜树生长的重要因素之一.

摘要： [目的]研究喜树不同部位提取物对中型红火蚁工蚁的毒力和行为影响,为利用植物源材料防治红火蚁等重大害虫提供借鉴依据.[方法]采用水试管喂养法,研究不同浓度的喜树叶、茎、种子、芽提取物及喜树碱溶液对红火蚁工蚁的毒杀活性和聚集率、抓附率、行走率、攀爬率的影响.[结果]与对照相比,喜树不同部位提取物对中型红火蚁工蚁均有一定的毒杀作用,试验期间,随时间的延长,红火蚁死亡率增加.其中,种子提取液及100μg/mL喜树碱溶液的毒杀效果最好,处理11 d后,红火蚁的死亡率分别为78.33％和80.00％.喜树不同部位提取物及喜树碱对中型红火蚁工蚁的各种行为能力也有一定的影响,其中,种子和100μg/mL喜树碱的效果最好,处理11 d后,红火蚁的聚集率分别为10.00％和6.67％,抓附率分别为16.67％和15.00％,行走率均为16.67％,攀爬率分别为18.33％和16.67％,二者处理之间均无显著差异,但与对照相比都呈显著差异.[结论]喜树不同部位提取物对中型红火蚁均具有良好的毒杀活性,对其行为也有一定的抑制作用,其中种子的活性最好,具有开发成防治红火蚁植物材料的潜力.

摘要： 为了探索喜树组织培养愈伤组织诱导的最佳配方,利用喜树不同外植体(带腋芽茎段、侧芽和叶片),在MS培养基中添加不同激素(2,4-D,6-BA和NAA)的不同浓度和不同配比,进行愈伤组织的诱导.结果 表明:在MS培养基中培养,带腋芽茎段添加NAA 0.5mg/L+6-BA 0.5mg/L+2,4-D 2mg/L,愈伤组织诱导效果最佳,愈伤组织的诱导率达到了60％.

摘要： 以喜树内生菌为研究对象,经发酵培养后提取喜树碱及其衍生物,采用HPLC法对发酵液中喜树碱及其衍生物进行定性检测,获得能够产生喜树碱(CPT)及10-羟基喜树碱(HCPT)的喜树内生菌.通过对喜树碱生物合成途径的研究,选取10-羟基香叶醇羟化酶(G10 H)、10-羟基香叶醇脱氢酶(HGO)、色氨酸脱羧酶(TDC)和异胡豆苷合酶(STR)4个关键酶基因作为研究对象,设计特异性引物,克隆目的基因.提取喜树RNA,经反转录合成cDNA,同时提取喜树内生菌DNA.分别以植物cDNA和内生菌DNA作为模板,筛选鉴定喜树碱合成途径的关键酶基因G10 H、HGO、TDC和STR并与喜树关键酶基因进行比较,初步解析喜树碱代谢途径,为喜树内生菌发酵合成喜树碱及其衍生物提供理论依据.

摘要： 喜树是我国特有的珍贵树种,其次生代谢物因含有一种重要生物碱而闻名.为了宣传这种珍贵喜树资源及推广应用,以湖北国营通城县黄袍林场为对象,简要介绍了黄袍林场喜树的木本资源生长特征 、种子园 、育苗及推广应用情况.希望引起政府部门和科研人员的重视和研究,提高对这种国家 Ⅱ 级保护植物的保护及推广应用.

摘要： 为明确5-氨基乙酰丙酸(ALA)的生理生化机理,研究了ALA对喜树幼苗盐害的缓解效应.结果表明,80 mg L-1的ALA对喜树幼苗盐胁迫的缓解效果更佳.80 mg L-1的ALA处理提升了盐胁迫下喜树幼苗的抗氧化能力,显著增加了幼苗叶片的氮素含量和叶绿素含量,缓解了盐胁迫对PSⅡ的破坏,提高了光合碳同化能力,从而促进幼苗生长.盐胁迫下喜树幼苗叶片的过氧化物酶(POD)活性和叶绿素含量并未随ALA浓度增加而升高.这为喜树的抗盐栽培提供了理论依据.

摘要： 以10个喜树种源1年生苗木为试验材料，通过低温循环仪自动降温程序模拟低温处理，采用电导法测定叶片相对电导率，用Logistic曲线拟合求出拐点温度(即半致死温度LT50)作为抗寒力评价的参考指标，比较了10个喜树种源的抗寒能力。结果表明，10个喜树种源的抗寒能力从强到弱的顺序依次为：江苏南京、浙江长兴、安徽黄山、江西南昌、湖南浏阳、浙江龙泉、湖南邵阳、贵州贵阳、云南昆明、广西桂林。通过聚类分析将其分为4类：江苏南京种源为一类，抗寒性最强;浙江长兴、安徽黄山和江西南昌3个种源为一类，抗寒性较强；湖南浏阳、浙江龙泉和湖南邵阳3个种源为一类，抗寒性较弱;贵州贵阳、云南昆明和广西桂林种源为一类，抗寒性最弱。研究结果为喜树的引种、扩大栽培与栽培技术措施制订提供一定的理论依据。

摘要： 喜树碱用于灭螺实验,结果显示,喜树碱具有较好灭螺效果,经喜树碱提取液半致死浓度处理的钉螺,其碱性磷酸酶和谷丙转氨酶的活性均升高后下降,且钉螺头部肿胀,肌肉溃损,细胞核形态异常,微绒毛散乱,组织水肿。

摘要： 通过定株观察、套袋试验和石蜡切片技术对喜树的花部结构和开花物候期进行了观察。喜树花序为混合花序，由4～6个头状花序组成聚伞花序;每个头状花序由30～90朵小花组成，上部3～4个头状花序由两性花构成，下部1～2个头状花序则由雄花构成，为两性花与雄花同株;不存在雌花.两性花具花盘蜜腺;雄蕊10枚，分内外两轮，外轮5枚先成熟;雌蕊1枚，柱头3裂，外翻，子房下位，具一下垂的倒生胚珠，单珠被，薄珠心.喜树为虫媒花，以头状花序为传粉单位，聚伞花序最顶端的头状花序最先开放，5～6天后，下一级侧轴上的头状花序开放，同一头状花序内的花同时开放;雄蕊先成熟，当雄蕊脱落后，雌蕊发育成熟，并与下级头状花序的雄蕊的成熟期重合。因此喜树花为半同步雌雄蕊异熟类型，不存在自花受粉，也不存在同一头状花序的小花间传粉现象。雌雄异熟会导致后期开放的头状花序因无花粉来源而无法完成受粉作用，因而也降低了喜树的结实率。

摘要： 本文通过温室盆栽接种试验，研究蜜色无梗囊霉(Acaulosporamellea)、弯丝硬囊霉(Sclerocstis sinuosa)及二者混合接种(分别记为Am、Ss和Am-Ss)对喜树幼苗生长和氮、磷养分吸收的影响。结果表明，在生物量方面，菌根幼苗优于无菌根幼苗，其中Am和Am-Ss的菌根幼苗与无菌根幼苗差异显著。总体上，丛枝菌根的形成对于喜树幼苗氮素营养吸收的影响不大，但却促进了喜树幼苗对磷素营养的吸收，并且主要体现在根的磷含量上。与无菌根幼苗比，所有菌根幼苗根的氮、磷分配比例增加，而叶片的氮、磷分配比例减少。

摘要： 本文在5L气升环流反应器中实现了喜树细胞悬浮培养,研究了喜树细胞悬浮培养的生长动力学规律.恒速生长期测出糖的得率系数为0.316g/g,维持系数为0.0932g/g.d;通过测定生理量和电导率的变化得出生物量增加与电导率变化的相关系数为2.46×10.从培养工艺上看喜树细胞生长大致可分为延迟期、指数生长期、恒速生长期及减速生长期四个阶段;最大生物量达到12.05g/L.

摘要： 本文研究了喜树细胞气升内环流反应器培养过程中的气—液氧传递规律及其影响因素.用5L气升内环流反应器实现了喜树细胞颗粒的悬浮培养.在通气量较小(0.02m/h)的情况下,反应器内DO值能维持较高的水平(35℅以上).喜树细胞颗粒在培养液中的沉降速度很小,少量的通气便能使其悬浮起来,有利于工程上的操作.培养系统ka一直能维持较高的水平.在平稳期前培养系统的固含率增大是影响ka值的主要因素,进入平稳期后影响ka的主要因素是大量单细胞的聚集成团而造成的流体流变特性的改变.

摘要： 本发明涉及一种利用喜树悬浮细胞生产喜树碱和10‑羟基喜树碱的方法，属于医药生物技术领域。本方法包括以下步骤：(1)将喜树悬浮细胞细胞接种到MS液体培养基进行培养，培养过程中添加山梨糖醇；(2)收集相应的悬浮细胞和细胞培养液；(3)分离提取喜树碱和10‑羟基喜树碱。本发明利用喜树悬浮细胞获得喜树碱、10‑羟基喜树碱的方法简单易控制，与传统喜树碱和10‑羟基喜树碱的制备方法相比，本发明采用山梨糖醇作为诱导因子能100～500余倍地提高喜树碱和10‑羟基喜树碱产量。

摘要： 本发明属生物技术领域，涉及一种采用转aoc基因提高喜树愈伤组织中喜树碱含量的方法。本发明从喜树中克隆aoc基因，构建含aoc基因的植物表达载体，用根癌农杆菌介导，将aoc基因导入喜树细胞并再生出愈伤组织；PCR和半定量RT-PCR检测外源目的基因aoc的整合和表达情况，高效液相色谱检测器测定喜树愈伤组织中喜树碱含量，筛选喜树碱含量提高的转基因喜树愈伤组织。本发明获得的转基因喜树愈伤组织中喜树碱的含量显著提高，本发明提供了一种提高喜树细胞培养物中喜树碱含量的方法，对解决喜树碱药源匮乏、满足医药工业大规模工厂化生产需要具有重要意义。

摘要： 本发明公开一种应用核壳型SiO2@松香基高分子色谱柱高效分离喜树碱与10‑羟基喜树碱的方法，以甲基丙烯酸或甲基丙烯酸甲酯为单体，马来海松酸丙烯酸乙二醇酯或丙烯海松酸丙烯酸乙二醇酯为交联剂，与自由基引发剂充分混合后涂覆到硅胶表面，然后使其进行自由基聚合反应得到核壳型SiO2@松香基高分子微球，微球粒径分布为2‑50μm，孔径分布0.5‑15nm，比表面积150‑350m2/g。将核壳型SiO2@松香基高分子微球用湿法装柱制备色谱柱，采用制得的色谱柱对喜树碱和10‑羟基喜树碱进行HPLC分离，检测波长：254nm，温度30±10°C，流速0.3‑1.0mL/min，喜树碱和10‑羟基喜树碱的分离度为2.45‑3.47。本发明对喜树碱和10‑羟基喜树碱具有较高的分离度和选择性，且该方法灵敏度高，操作简单，快速高效，环境友好。

摘要： 本发明公开一种应用松香基高分子色谱柱高效分离喜树碱与10‑羟基喜树碱的方法，以α‑甲基丙烯酸(或甲基丙烯酸甲酯)为单体，马来松香丙烯酸乙二醇酯为交联剂，采用微悬浮自由基聚合方法制备松香基高分子微球；微球为球形多孔材料，其粒径分布为3‑10μm，平均孔径为10‑15nm，比表面积为90‑120m2/g，酸值50‑150mgKOH/g。将松香基高分子微球用装柱机湿法装柱制备色谱柱；通过对喜树碱和10‑羟基喜树碱进行HPLC分离，检测波长：230‑290nm，温度30±10°C，流速0.3‑1.0mL/min，喜树碱和10‑羟基喜树碱的分离度为1.80‑2.15。本发明对喜树碱和10‑羟基喜树碱具有较高的分离度，选择性高，且该方法灵敏度高、操作简单，快速高效，不会对药物、保健品、食品造成二次污染。

摘要： 一种喜树碱分子印迹聚合物的制备及其分离纯化喜树果中喜树碱的方法，它涉及一种分离纯化喜树碱的方法。本发明是为了解决传统分离纯化方法对喜树碱的分离效率低，选择性差，步骤复杂以及有机溶剂消耗量大等缺陷；以及传统的分子印迹方法中存在位点被包裹在聚合物内部，吸附量小，亲水性差欠缺等问题。方法：首先，以苯乙烯和二乙烯基苯为原料合成聚苯乙烯微球；其次，利用氯甲基乙基醚对聚苯乙烯微球进行功能化修饰；最后，利用苯酚为功能单体，采用表面分子印迹与烷基化反应结合制备得到喜树碱分子印迹聚合物，并将其应用于分离纯化喜树果中的喜树碱。本发明制备的喜树碱分子印迹聚合物吸附性能良好，建立的方法选择性好，亲水性强，回收率高。

摘要： 本发明涉及一种利用喜树悬浮细胞生产喜树碱和10‑羟基喜树碱的方法，属于医药生物技术领域。本方法包括以下步骤：(1)将喜树悬浮细胞细胞接种到MS液体培养基进行培养，培养过程中添加山梨糖醇；(2)收集相应的悬浮细胞和细胞培养液；(3)分离提取喜树碱和10‑羟基喜树碱。本发明利用喜树悬浮细胞获得喜树碱、10‑羟基喜树碱的方法简单易控制，与传统喜树碱和10‑羟基喜树碱的制备方法相比，本发明采用山梨糖醇作为诱导因子能100～500余倍地提高喜树碱和10‑羟基喜树碱产量。

摘要： 本发明属生物技术领域，涉及一种采用转aoc基因提高喜树愈伤组织中喜树碱含量的方法。本发明从喜树中克隆aoc基因，构建含aoc基因的植物表达载体，用根癌农杆菌介导，将aoc基因导入喜树细胞并再生出愈伤组织；PCR和半定量RT-PCR检测外源目的基因aoc的整合和表达情况，高效液相色谱检测器测定喜树愈伤组织中喜树碱含量，筛选喜树碱含量提高的转基因喜树愈伤组织。本发明获得的转基因喜树愈伤组织中喜树碱的含量显著提高，本发明提供了一种提高喜树细胞培养物中喜树碱含量的方法，对解决喜树碱药源匮乏、满足医药工业大规模工厂化生产需要具有重要意义。

摘要： 本发明公开了一种还原响应型喜树碱二聚体及基于该喜树碱二聚体的还原敏感的药物传递系统，属于生物医药和纳米医学技术领域。本发明的技术方案要点为：将二溴马来酰亚胺依次与三甘醇单甲醚、2,2‑二羟乙基二硫化物、喜树碱反应制得还原响应型喜树碱二聚体，该喜树碱二聚体的结构式为：本发明还具体公开了该喜树碱二聚体的制备方法及基于该喜树碱二聚体的还原敏感的药物传递系统。本发明的药物传递系统与喜树碱传递系统相比，其载药量由1wt％提高至9.6wt％，并且该药物传递系统具有还原敏感性、良好的生物相容性和抑制肿瘤细胞增殖的能力，可用于制备具有缓控释和靶向性的抗癌药物传递系统。

摘要： 本发明公开一种应用核壳型SiO2@松香基高分子色谱柱高效分离喜树碱与10‑羟基喜树碱的方法，以甲基丙烯酸或甲基丙烯酸甲酯为单体，马来海松酸丙烯酸乙二醇酯或丙烯海松酸丙烯酸乙二醇酯为交联剂，与自由基引发剂充分混合后涂覆到硅胶表面，然后使其进行自由基聚合反应得到核壳型SiO2@松香基高分子微球，微球粒径分布为2‑50μm，孔径分布0.5‑15nm，比表面积150‑350m2/g。将核壳型SiO2@松香基高分子微球用湿法装柱制备色谱柱，采用制得的色谱柱对喜树碱和10‑羟基喜树碱进行HPLC分离，检测波长：254nm，温度30±10°C，流速0.3‑1.0mL/min，喜树碱和10‑羟基喜树碱的分离度为2.45‑3.47。本发明对喜树碱和10‑羟基喜树碱具有较高的分离度和选择性，且该方法灵敏度高，操作简单，快速高效，环境友好。

摘要： 本发明公开一种应用松香基高分子色谱柱高效分离喜树碱与10‑羟基喜树碱的方法，以α‑甲基丙烯酸(或甲基丙烯酸甲酯)为单体，马来松香丙烯酸乙二醇酯为交联剂，采用微悬浮自由基聚合方法制备松香基高分子微球；微球为球形多孔材料，其粒径分布为3‑10μm，平均孔径为10‑15nm，比表面积为90‑120m2/g，酸值50‑150mgKOH/g。将松香基高分子微球用装柱机湿法装柱制备色谱柱；通过对喜树碱和10‑羟基喜树碱进行HPLC分离，检测波长：230‑290nm，温度30±10°C，流速0.3‑1.0mL/min，喜树碱和10‑羟基喜树碱的分离度为1.80‑2.15。本发明对喜树碱和10‑羟基喜树碱具有较高的分离度，选择性高，且该方法灵敏度高、操作简单，快速高效，不会对药物、保健品、食品造成二次污染。