PCR扩增

摘要： 为查明中山市某鸽场病鸽的病因,进而制定合理的治疗方案,对中山市某鸽场的肉鸽进行了病理剖检,细菌分离、培养、纯化,特性观察,镜检,16S rDNA测序,序列分析及构建进化树判断疑似致病菌。方法:利用家禽生理解剖技术对肉鸽进行解剖,培养肝脏及粪便中所分离的疑似致病菌。对疑似病原菌进行革兰氏染色、基因组DNA提取、PCR扩增及测序,进而进行同源性比对,选择合适的菌株构建系统发育树。结果:从病鸽肝脏分离到一株疑似病原菌20210801.OX1,革兰氏染色呈红色,DNA跑电泳的结果显示在1500bp,根据测序结果构建进化树的结果初步判断肉鸽分离的疑似致病菌为弗氏志贺氏菌。

摘要： 根据NCBI收录的绵羊SLC17A8(Solute Carrier Family 17 Member 8)基因序列设计特异性引物,利用PCR技术扩增兰坪乌骨绵羊SLC17A8基因外显子区,经测序后拼接序列,并对编码区序列以及翻译后蛋白序列进行蛋白结构预测。结果显示,兰坪乌骨绵羊SLC17A8基因编码区长为1770 bp,编码589个氨基酸。同源性比对显示兰坪乌骨绵羊SLC17A8氨基酸序列与普通绵羊的该基因氨基酸序列同源性达到99.66%,发现有11个突变位点,其中2个错义突变位点,SLC17A8-Exon1 G159A位点编码的氨基酸由Gly(甘氨酸)突变到Glu(谷氨酸);SLC17A8-Exon2 G87A位点编码的氨基酸由Gly突变到Arg(精氨酸)。蛋白结构预测显示,SLC17A8蛋白空间结构主要有α螺旋、β转角和无规则卷曲。

摘要： 目的以工程菌为载体,寻找可以长期保存中药材蕲蛇标准品特异DNA指纹区段的克隆技术.方法采用蕲蛇DNA检测试剂盒提取蕲蛇标准品基因组DNA,按照2010年版《中国药典》收录的方法进行蕲蛇特异DNA片段PCR扩增,将PCR产物与质粒载体重组后导入工程菌细胞内;体外培养细菌,提取重组质粒,应用PCR及测序方法鉴定插入片段是否正确.将鉴定正确、携带正品蕲蛇特异DNA序列的菌落置-80°C冰柜保存,分别以30 d、60 d、3个月和6个月为时间点进行复苏,进行稳定性评价.结果PCR扩增蕲蛇标准品特异DNA片段长度约为300 bp,插入质粒载体后,转入工程菌细胞内的蕲蛇DNA经体外克隆、PCR扩增及测序鉴定,扩增产物与目标大小一致,序列与Genbank中蕲蛇序均一致.将4个时间点复苏后的菌落进行PCR扩增后,条带清晰,没有降解.结论采用分子克隆技术保存蕲蛇特异基因片段的方法可行、有效,方法简单明了,获得的标准品DNA稳定性良好,结果可靠.

摘要： 创设真实的实验情境“鉴定青梗菜种子纯度”,利用SSR分子标记方法将教材中的“DNA片段的扩增及电泳鉴定”实验具体化和生活化,组织学生亲身实践、主动探索。学生通过科学实践,关注、思考并尝试解决生产生活中的生物学问题,探究能力和创新精神得到较大提升。

摘要： 大肠杆菌是一种最常见的革兰氏阴性菌,是一种常见的条件性致病菌。由于在治疗大肠杆菌时抗生素的大量使用,使大肠杆菌产生了很多耐药基因,其中超广谱β-内酰胺酶对许多β-内酰胺类抗生素具有耐药性,且以其中的CTX-M型为主,为了更好地研究产超广谱β-内酰胺酶,本次实验通过设计并扩增产超广谱β-内酰胺酶的CTX-M-3基因,并通过Nde I、Xho I两种限制性内切酶酶切并连接,预计构建pET-42b-ESBLs的原核表达载体,并送往上海生工公司进行测序,并对测序结果的遗传相似性及遗传进化进行分析,由于引物的特异性或模板的特殊性,测序结果显示扩增结果为DH5α染色体基因组并构建的载体是DH5α染色体基因的原核表达载体。

摘要： [目的]准确高效分离红树林等海洋环境中产脂肽芽孢杆菌.[方法]将前期从红树林环境筛出具有抗菌活性的12株芽孢菌株作为研究菌株,采用溶血活性及排油作用对其中的可能产脂肽菌株进行初步筛选,并基于脂肽合成酶基因PCR扩增法对脂肽合成酶基因携带菌复筛,采用飞行时间质谱(TOF-MS)对所产脂肽进行鉴定.[结果]初步发现6株芽孢杆菌具有溶血活性,其中HY-5、HY-4和HN-9这3株具有排油能力,油层透明圈的直径分别为45、32和3 mm.PCR扩增检测到HY-5含有iturin、surfactin和bacillomycin D合成酶基因,HY-4含有iturin、surfactin合成酶基因,HN-9含有iturin合成酶基因.TOF-MS检测到HY-5和HY-4的发酵液含surfactin、iturin和bacillomycin 3种脂肽,HN-9的发酵液只含iturin.[结论]基于PCR与TOF-MS为核心的级联技术,建立一种海洋源脂肽产生菌快速筛选以及脂肽谱快速鉴定的方法,解决海洋源芽孢杆菌在常规培养基难合成脂肽造成的漏筛情况.

摘要： 从内蒙古呼和浩特市郊区某猪场饲养的母猪鼻腔分泌物中分离到1株病原细菌.经细菌纯化培养和生化鉴定后,结果表明该细菌为革兰氏阳性.菌体形态为成对、短链状、葡萄串状排列的球菌.进一步进行了PCR扩增产物测序分析发现该菌株与金黄色葡萄球菌的同源性达99％.药敏试验显示,该菌株对拜有利高度敏感,对庆大霉素、头孢噻污、氧氟沙星、卡那霉素、氯霉素中度敏感,对林可霉素、四环素等耐药.结果显示,该分离菌符合金黄色葡萄球菌的生物学及分子学特性.

摘要： 目的探讨肠道菌群在冠心病合并心力衰竭(心衰)患者中的变化及益生菌干预对炎性因子的影响。方法①选择2019年1-8月郑州大学第五附属医院体检科健康体检者15人为对照组,特需病房就诊的冠心病患者20例为冠心病组,冠心病合并心衰患者20例为合并组。采用PCR扩增及基因测序方法完成3组肠道菌群测定;将扩增后获得的PCR产物进行纯化,根据不同的相似度水平,对所有序列完成操作分类单位(OTU)划分,以门、属、种统计完成群落组成,并比较分析3组肠道菌群的差异。②从合并组中选取10例,按随机数字表法分为A1、A2两组。A1组予以膳食管理,A2组在A1组基础上联合益生菌干预,比较两组干预效果。结果 OTU划分出14个细菌门,其中5个细菌门为3组共有。3组中丰度最高为拟杆菌门(Bacteroidetes,平均丰度对照组为66.23±5.11,冠心病组为45.69±4.63,合并组为27.89±2.39);在属水平上,55份标本共鉴定36个细菌属,其中拟杆菌属、普雷沃菌属、萨特菌属等,在3组中含量均>1%,3组标本在上述细菌属中差异无统计学意义(P>0.05);而在种水平上,共鉴定出24个细菌种,3组丰度较高的种包括:普雷沃菌卡布里、普通拟杆菌等。A2组益生菌干预后,厚壁菌门(Firmicutes)、变形菌门(Proteobacteria)、放线菌门(Actinobacteria)及梭杆菌门(Fusobacteria)丰度均高于A1组(P<0.05);拟杆菌门丰度均低于A1组(P<0.05);肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、IL-8及C反应蛋白(CRP)水平低于A1组(P<0.05)。结论 PCR扩增及基因序列可用于检测冠心病及合并心衰患者体内有害菌群及促进健康的有益菌群;对于冠心病合并心衰患者给予益生菌干预能调节肠道菌群,值得推广应用。

摘要： 为了研究牡丹种质资源的遗传多样性和DNA鉴定,采用ISSR标记的方法来进行试验,即采用改良的CTAB法从成熟干燥的牡丹叶片中提取基因组DNA,其质量检测采用琼脂糖凝胶电泳法和超微量分光光度计法,用优化的ISSR-PCR反应系统,对加拿大哥伦比亚大学(University of British Columbia,UBC)公布的220条ISSR引物进行筛选.结果表明,从6个牡丹品种的叶片中提取的DNA浓度范围在30×10-3～100×10-3μg/μL之间,DNA样品纯度D260 nm/D280 nm比值在1.7～1.9之间;从220条ISSR引物中筛选出了12条适合牡丹的扩增结果好的引物,选出的引物扩增条带清晰、多态性高、重复性好.说明提取的DNA质量较好,该改良的CTAB法适用于从蛋白质和酚类物质含量较高的植物材料中提取基因组DNA;筛选出的12条ISSR引物为进一步研究牡丹资源的遗传多样性奠定了基础.

摘要： 目的 探讨肠道菌群在冠心病合并心力衰竭(心衰)患者中的变化及益生菌干预对炎性因子的影响.方法 ①选择2019年1-8月郑州大学第五附属医院体检科健康体检者15人为对照组,特需病房就诊的冠心病患者20例为冠心病组,冠心病合并心衰患者20例为合并组.采用PCR扩增及基因测序方法完成3组肠道菌群测定;将扩增后获得的PCR产物进行纯化,根据不同的相似度水平,对所有序列完成操作分类单位(OTU)划分,以门、属、种统计完成群落组成,并比较分析3组肠道菌群的差异.②从合并组中选取10例,按随机数字表法分为A1、A2两组.A1组予以膳食管理,A2组在A1组基础上联合益生菌干预,比较两组干预效果.结果 OTU划分出14个细菌门,其中5个细菌门为3组共有.3组中丰度最高为拟杆菌门(Bacteroidetes,平均丰度对照组为66.23±5.11,冠心病组为45.69±4.63,合并组为27.89±2.39);在属水平上,55份标本共鉴定36个细菌属,其中拟杆菌属、普雷沃菌属、萨特菌属等,在3组中含量均>1％,3组标本在上述细菌属中差异无统计学意义(P>0.05);而在种水平上,共鉴定出24个细菌种,3组丰度较高的种包括:普雷沃菌卡布里、普通拟杆菌等.A2组益生菌干预后,厚壁菌门(Firmicutes)、变形菌门(Proteobacteria)、放线菌门(Actinobacteria)及梭杆菌门(Fusobacteria)丰度均高于A1组(P<0.05);拟杆菌门丰度均低于A1组(P<0.05);肿瘤坏死因子?α(TNF?α)、白细胞介素?6(IL?6)、IL?8及C反应蛋白(CRP)水平低于A1组(P<0.05).结论 PCR扩增及基因序列可用于检测冠心病及合并心衰患者体内有害菌群及促进健康的有益菌群;对于冠心病合并心衰患者给予益生菌干预能调节肠道菌群,值得推广应用.

摘要： 目的：建立不同产区浙贝母的叶绿体rbcL基因的PCR扩增体系,并对产区间的序列差异进行分析. 方法：总DNA提取方法采用试剂盒法,PCR扩增体系主要考察退火温度、Taq酶浓度、Mg2+、dNTP浓度等因素.基因序列分析采用ContingExpress和DNAman软件. 结果：50uL反应体系中含Taq酶1U,2.5mmol/Lng2+、dNTP分别为2uL,退火温度为52°C.浙贝母rbcL序列全长599bp,G+C含量为50.7％,浙贝母不同产区rbcL序列未发现突变位点. 结论：所建立的体系可用以浙贝母rbcL序列分析,为浙贝母的rbcL序列研究奠定基础.rbcL序列不适合作为浙贝母种间和产地间的鉴别工具.

摘要： 目的：建立不同产区浙贝母的叶绿体rbcL基因的PCR扩增体系,并对产区间的序列差异进行分析. 方法：总DNA提取方法采用试剂盒法,PCR扩增体系主要考察退火温度、Taq酶浓度、Mg2+、dNTP浓度等因素.基因序列分析采用ContingExpress和DNAman软件. 结果：50uL反应体系中含Taq酶1U,2.5mmol/Lng2+、dNTP分别为2uL,退火温度为52°C.浙贝母rbcL序列全长599bp,G+C含量为50.7％,浙贝母不同产区rbcL序列未发现突变位点. 结论：所建立的体系可用以浙贝母rbcL序列分析,为浙贝母的rbcL序列研究奠定基础.rbcL序列不适合作为浙贝母种间和产地间的鉴别工具.

摘要： 目的：建立不同产区浙贝母的叶绿体rbcL基因的PCR扩增体系,并对产区间的序列差异进行分析. 方法：总DNA提取方法采用试剂盒法,PCR扩增体系主要考察退火温度、Taq酶浓度、Mg2+、dNTP浓度等因素.基因序列分析采用ContingExpress和DNAman软件. 结果：50uL反应体系中含Taq酶1U,2.5mmol/Lng2+、dNTP分别为2uL,退火温度为52°C.浙贝母rbcL序列全长599bp,G+C含量为50.7％,浙贝母不同产区rbcL序列未发现突变位点. 结论：所建立的体系可用以浙贝母rbcL序列分析,为浙贝母的rbcL序列研究奠定基础.rbcL序列不适合作为浙贝母种间和产地间的鉴别工具.

摘要： 目的：建立不同产区浙贝母的叶绿体rbcL基因的PCR扩增体系,并对产区间的序列差异进行分析. 方法：总DNA提取方法采用试剂盒法,PCR扩增体系主要考察退火温度、Taq酶浓度、Mg2+、dNTP浓度等因素.基因序列分析采用ContingExpress和DNAman软件. 结果：50uL反应体系中含Taq酶1U,2.5mmol/Lng2+、dNTP分别为2uL,退火温度为52°C.浙贝母rbcL序列全长599bp,G+C含量为50.7％,浙贝母不同产区rbcL序列未发现突变位点. 结论：所建立的体系可用以浙贝母rbcL序列分析,为浙贝母的rbcL序列研究奠定基础.rbcL序列不适合作为浙贝母种间和产地间的鉴别工具.

摘要： 目的：建立不同产区浙贝母的叶绿体rbcL基因的PCR扩增体系,并对产区间的序列差异进行分析. 方法：总DNA提取方法采用试剂盒法,PCR扩增体系主要考察退火温度、Taq酶浓度、Mg2+、dNTP浓度等因素.基因序列分析采用ContingExpress和DNAman软件. 结果：50uL反应体系中含Taq酶1U,2.5mmol/Lng2+、dNTP分别为2uL,退火温度为52°C.浙贝母rbcL序列全长599bp,G+C含量为50.7％,浙贝母不同产区rbcL序列未发现突变位点. 结论：所建立的体系可用以浙贝母rbcL序列分析,为浙贝母的rbcL序列研究奠定基础.rbcL序列不适合作为浙贝母种间和产地间的鉴别工具.

摘要： 本文通过对固定相似穿孔线虫样品进行洗涤、刺破和裂解等步骤,得到固定线虫单条虫DNA粗提液,以该提取液为模板,使用相似穿孔线虫特异引物进一步进行PCR扩增并检测,发现条带清晰,经测序结果可靠,本研究对于其他已固定植物寄生线虫的分子鉴定具有重要的理论依据和指导意义.

摘要： 本文通过对固定相似穿孔线虫样品进行洗涤、刺破和裂解等步骤,得到固定线虫单条虫DNA粗提液,以该提取液为模板,使用相似穿孔线虫特异引物进一步进行PCR扩增并检测,发现条带清晰,经测序结果可靠,本研究对于其他已固定植物寄生线虫的分子鉴定具有重要的理论依据和指导意义.

摘要： 本文通过对固定相似穿孔线虫样品进行洗涤、刺破和裂解等步骤,得到固定线虫单条虫DNA粗提液,以该提取液为模板,使用相似穿孔线虫特异引物进一步进行PCR扩增并检测,发现条带清晰,经测序结果可靠,本研究对于其他已固定植物寄生线虫的分子鉴定具有重要的理论依据和指导意义.

摘要： 本文通过对固定相似穿孔线虫样品进行洗涤、刺破和裂解等步骤,得到固定线虫单条虫DNA粗提液,以该提取液为模板,使用相似穿孔线虫特异引物进一步进行PCR扩增并检测,发现条带清晰,经测序结果可靠,本研究对于其他已固定植物寄生线虫的分子鉴定具有重要的理论依据和指导意义.

摘要： 本文比较了PVP法、CTAB法和SDS法对集胞藻6803(Synechocystis sp.PCC6803)基因组DNA的提取效果,并采用紫外可见分光光度计、琼脂糖凝胶电泳及PCR扩增检测基因组DNA质量.结果表明,三种方法均能提取到符合分子生物学要求的基因组DNA,其中SDS法提取的DNA综合质量最高.以提取的基因组DNA为模板,以sll0853引物进行PCR扩增,三种方法均能扩增出目的条带,其中CTAB法及SDS法的条带更为清晰。

摘要： 本发明提供利用PCR扩增法从作为模板的核酸分子可以优先扩增含有所期望核酸序列的核酸链，可以更简便、而且具有重复性更高的核酸扩增法。即提供分别设计在PCR扩增反应使用的两个引物的碱基序列，要使得夹住应当扩增的碱基序列区域的两个引物的溶解温度Tm值在PCR反应条件下各不相同，使用Tm值不同的这两个引物，由作为模板的核酸分子进行PCR扩增反应的方法。

摘要： 本发明提供一种对流PCR扩增检测系统和方法。该系统包括：微流控芯片，包括存储结构、对流PCR管、FTA膜和废液接收结构，对流PCR管的第一端与存储结构的存储腔连通，对流PCR管的第二端与废液接收结构的废液腔连通，FTA膜设置于对流PCR管的内部以过滤从对流PCR管的第一端流至第二端的溶液并能够使溶液中的核酸吸附在FTA膜的表面；流动控制模块，用于使存储腔内的溶液进入对流PCR管并经FTA膜过滤后进入废液腔中；加热模块，用于加热对流PCR管内的物质；光学检测模块，用于对对流PCR管内的物质进行荧光检测。本发明能够提高核酸分析效率。

摘要： 本发明涉及一种核酸释放剂、核酸PCR扩增方法和PCR扩增试剂盒，包括Tris‑HCl、氯化钠、氯化钾、吐温20、曲拉通X‑100、乙基苯基聚乙二醇和强碱；其中，Tris‑HCl的摩尔浓度为0.5mM～500mM，氯化钠的摩尔浓度为20mM～500mM，吐温20的体积百分比为0.1％～2％，曲拉通X‑100的体积百分比为0.1％～3％，乙基苯基聚乙二醇的体积百分比为0.1％～3％，氯化钾的质量浓度为5mg/mL～8mg/mL，强碱的质量浓度为2mg/mL～50mg/mL。该核酸释放剂可以使含有RNA的样品在室温下直接释放出RNA，且能够与PCR反应液直接混合进行PCR扩增，无需进行复杂的核酸提取和纯化过程即可完成扩增。

摘要： 本发明提供一种植物免提取直接实时荧光快速PCR扩增稳定剂、PCR扩增组合物和PCR扩增方法，具体公开了一种植物免提取PCR反应的稳定剂，所述稳定剂包括MgCl

摘要： 本发明提供了琼脂糖在PCR扩增中的应用，在配置PCR扩增体系过程中加入琼脂糖。进一步的，本发明还提供了相应的PCR扩增试剂盒及PCR扩增方法，PCR扩增试剂盒包括盒体及盒体中单独存放的试剂，所述试剂包括琼脂糖。所述PCR扩增方法，包括在配置PCR扩增体系过程中加入琼脂糖的步骤。本发明通过实验证明了在配置PCR扩增体系过程中加入琼脂糖，可以提高PCR扩增反应敏感度，使反应更加充分，提高微量DNA的PCR扩增效果，最终获得完整STR分型结果。并且，由于PCR扩增反应敏感度的提高，PCR扩增过程中试剂的使用量可明显降低，从而降低实验成本。

摘要： 本发明提供利用PCR扩增法从作为模板的核酸分子可以优先扩增含有所期望核酸序列的核酸链，可以更简便、而且具有重复性更高的核酸扩增法。即提供分别设计在PCR扩增反应使用的两个引物的碱基序列，要使得夹住应当扩增的碱基序列区域的两个引物的溶解温度Tm值在PCR反应条件下各不相同，使用Tm值不同的这两个引物，由作为模板的核酸分子进行PCR扩增反应的方法。

摘要： 本发明公开了一种用于PCR扩增的大豆DNA快速获得方法以及PCR扩增方法，应用碱处理大豆叶柄直接作为PCR反应模板，能够快速、有效、简便地进行植物DNA提取获得大豆组织DNA模板；然后利用SSR标准引物，以所述DNA模板进行PCR扩增。本发明在进行种性检测及分子标记辅助育种时，具有时效性强、提取步骤简单、化学试剂较少、气味小以及环保的技术效果。

摘要： 本申请公开了一种PCR扩增的方法和PCR扩增装置。本申请的PCR扩增方法，包括采用至少三个加热室，各加热室分别独立的采用气浴加热严格控制加热室的温度；其中包括用于PCR扩增的变性加热的加热室、退火加热的加热室和延伸加热的加热室；进行PCR扩增时，PCR反应芯片依序进入变性、退火和延伸的加热室。本申请的PCR扩增方法，将PCR扩增的变性、退火、延伸三个温度参数分别在三个加热室中进行；在PCR扩增时，各加热室的温度恒定，无需变温，避免了温度改变的过冲现象。并且，就算要调整其中一个加热室的温度，也可在PCR反应芯片位于其它两个加热室的时候，预先进行温度调整，避免温度过冲现象影响PCR扩增。

摘要： 本实用新型涉及一种PCR扩增平台的散热结构及PCR扩增仪，包括仪器本体，所述仪器本体包括第一立板、第二立板、水冷泵支板和后盖板；所述仪器本体内设置PCR扩增平台，所述PCR扩增平台下方设置水仓，所述水仓下方设置水仓底盖；所述水仓一侧设置进水接头，所述水仓的另一侧设置出水接头，所述水仓与所述水仓底盖之间设置水道；所述仪器本体的底部设置散热器，所述散热器的一侧设置进水口，所述散热器的另一侧设置出水口，所述散热器的左侧设置风扇；所述进水口与所述出水接头之间通过水管连接。本实用新型整体结构紧凑，设计合理，结合水冷和风冷的双重散热方式，不仅直接对PCR扩增平台进行散热，而且对仪器本体内部的空气进行风冷循环，具有优异的散热效果。

摘要： 本实用新型提供了一种PCR扩增模块，包括从上往下依次设置的反应单元、温控单元和检测单元；反应单元上设置有容置槽，容置槽用于放置反应管；温控单元位于容置槽的底部，用于对容置槽加热或降温；检测单元上设置有光源和探头，光源与容置槽之间设置有第一光纤，容置槽与探头之间设置有第二光纤；光源用于向容置槽发射光线，探头用于接收穿过容置槽后的光线。本实用新型的PCR扩增模块，将反应单元、温控单元和检测单元分别独立设置，反应单元和检测单元通过光纤连接，简化了PCR扩增仪的光学扫描控制过程，缩短了扫描耗时，降低了对PCR扩增仪的环境温度的影响。在此基础上，本实用新型还提供了一种组合式PCR扩增仪。