一种镰形扇头蜱的抗凝血分子Rhipilin-1的基因序列和重组表达与应用

摘要

本发明提供了镰形扇头蜱抗凝血分子Rhipilin-1的基因序列及其在大肠杆菌中的重组表达方法。通过构建镰形扇头蜱雌蜱吸血前后的唾液腺消减文库和测序分析，从镰形扇头蜱克隆到一个抗凝血分子Rhipilin-1的全长编码基因，核苷酸全长620bp，开放阅读框编码164个氨基酸残基，预测分子量为18kDa，在N-端有一个18个氨基酸构成的信号肽序列，并含有一个典型的Kunitz功能域，该分子与抗凝血分子之一的组织通道抑制因子显著同源。将该基因亚克隆到pGEX-4T-1表达载体，转化到BL21(DE3)宿主菌中，经IPTG诱导，重组GST融合蛋白以可溶性的形式高效表达。以纯化的重组蛋白进行兔血浆复钙时间和部分凝血酶激活时间实验，证实Rhipilin-1分子具有抗凝血生物活性，可用于制备抗凝血生物制剂。