一种用于过敏性休克的肾上腺素舌下喷雾剂及其制备方法和应用

摘要

本发明属于药物制剂领域，公开了一种用于过敏性休克的的肾上腺素舌下喷雾剂及其制备方法。本发明解决了肾上腺素现有制剂稳定性差、吸收延迟的问题。患者可在过敏性休克病发第一时间用药，并快速透过舌下黏膜，进入血液循环，15min内即可发挥药效，可作为常备应急药品替代注射剂，在过敏性休克的治疗领域具有良好的临床应用前景。

说明书

技术领域

本发明属于药物制剂领域，具体涉及一种用于过敏性休克的的肾上腺素舌下喷雾剂及其制备方法和应用。

背景技术

肾上腺素(Epinephrine)是一种肾上腺素受体激动药，可以在几分钟内逆转过敏性休克导致的支气管痉挛、哮喘、呼吸困难、晕厥、休克、荨麻疹、水肿等症状，是治疗过敏性休克的唯一首选药物。但是，肾上腺素在中性或碱性水溶液中不稳定，与空气接触或受日光照射易氧化、易消旋，活性降低，限制了其制剂开发。

肾上腺素国内上市的产品主要为盐酸肾上腺素或酒石酸肾上腺素注射液，国外上市产品除常规注射剂外，还有一种可以自注射的肾上腺素笔(如

舌下黏膜含有丰富的血管和腺体，药物在这里吸收能迅速进入血液循环，避开首过效应，快速起效，适用于急救；同时，患者的用药依从性也得到极大的改善，可在过敏性休克病发第一时间得到救治。专利US20070202163A和专利CN109310646A分别涉及了一种肾上腺素舌下片和舌下膜，舌下给药40mg才可以达到了肾上腺素肌注0.3mg后相似的血药浓度，生物利用度低，且给量剂量大存在安全性风险。

针对上述问题，本研究设计了一种用于过敏性休克的的肾上腺素舌下喷雾剂及其制备方法。该肾上腺素舌下喷雾剂解决了目前肾上腺素制剂稳定性差的问题，并能快速透过黏膜，进入血液循环，发挥药效；以喷雾的形式给药，极大改善了患者的依从性，有望替代注射剂作为常备应急药品，在过敏性休克的相关治疗领域具有良好的应用前景。

发明内容

本发明的目的是克服肾上腺素注射剂存在的缺陷和不足，设计了一种用于过敏性休克的的肾上腺素舌下喷雾剂，并基于该发明思路，本发明还公开了该肾上腺素舌下喷雾剂的制备方法。

为实现本发明的目的，提供如下实施方案。

本发明的第一个目的在于提供一种用于过敏性休克的肾上腺素舌下喷雾剂，所述肾上腺素舌下喷雾剂由活性成分和药学上可接受的辅料组成，所述活性成分为肾上腺素。

进一步的，所述药学上可接受的辅料包括吸收促进剂、pH调节剂、金属离子螯合剂中的一种或多种的组合。

进一步的，所述肾上腺素舌下喷雾剂pH值为2～5；进一步优选的，所述肾上腺素舌下喷雾剂pH值为3～4。

进一步的，所述肾上腺素选自其或其盐酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐中的一种或多种，所述肾上腺素舌下喷雾剂中，肾上腺素含量为1～10mg/mL。

进一步的，所述吸收促进剂选自聚山梨酯20、聚山梨酯80、聚氧乙烯35蓖麻油、聚氧乙烯40氢化蓖麻油、十二烷基硫酸钠、氮酮、泊洛沙姆188、油酸和/或其盐、壳聚糖、乙醇、丙二醇中的一种或多种；

所述肾上腺素舌下喷雾剂中，吸收促进剂的含量为0.1～50mg/mL；

优选的，吸收促进剂的含量为1～20mg/mL；

进一步优选的，吸收促进剂的含量为1mg/mL、2.5mg/mL、5mg/mL、10mg/mL、20mg/mL。

进一步的，所述pH调节剂选自盐酸、氢氧化钠、柠檬酸和/或其盐、磷酸和/或其盐中的一种或多种，通过pH调节剂调节所述肾上腺素舌下喷雾剂pH值为2～5。

进一步的，所述金属离子螯合剂选自乙二胺四乙酸和/或其盐，所述肾上腺素舌下喷雾剂中金属离子螯合剂的含量为0～2mg/mL。

本发明的第二个目的是提供一种前述肾上腺素舌下喷雾剂的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：

(1)肾上腺素储备液的制备：按肾上腺素舌下喷雾剂处方量取肾上腺素加入盐酸溶液中，搅拌至完全溶解，得到肾上腺素储备液；优选的，取肾上腺素加入0.05～0.5M盐酸溶液中；

(2)辅料稀释液的制备：按肾上腺素舌下喷雾剂处方量将吸收促进剂、金属离子螯合剂溶于纯水中，搅拌直至完全溶解，添加pH调节剂调节pH值为2～5，得到辅料稀释液；

优选的，步骤(2)中所述搅拌的温度为20～50℃，转速为100～1000r/min，搅拌时间为 0.5～4h；

优选的，添加pH调节剂调节pH值为3～4，得到辅料稀释液；

(3)舌下喷雾剂的制备：按处方量合并步骤(1)得到的肾上腺素储备液和步骤(2)得到的辅料稀释液，搅拌均匀后添加pH调节剂，调节pH值为2～5，过滤，灌装至定量喷雾装置中得到肾上腺素舌下喷雾剂，优选的，调节pH值为3～4；进一步优选的，调节pH值为3.5。

本发明步骤(1)中盐酸溶液和(2)中纯水的加入量无特殊限制，步骤(1)肾上腺素储备液和步骤(2)辅料稀释液混合后，所述各成分在舌下喷雾剂中的浓度符合本发明前述范围即可；

优选的，本发明方法步骤(1)所述盐酸溶液的加入量为恰好使肾上腺素溶解于盐酸溶液中；步骤(2)中纯水的加入量为使辅料稀释液与肾上腺素储备液混合后恰好为全量；或者步骤(1)肾上腺素储备液和步骤(2)辅料稀释液混合后，再次加入纯水至全量。

进一步的，步骤(3)所述定量喷雾装置为单剂量、双剂量或多剂量装置，所述定量喷雾装置无金属部件与药液直接接触；所述单剂量装置装量0.1～0.2mL，每喷喷量100～200μL；所述双剂量装置装量0.2～0.5mL，每喷喷量100～200μL；所述多剂量装置装量0.5～10mL，每喷喷量50～200μL。

本发明的第三个目的是提供前述肾上腺素舌下喷雾剂在制备治疗过敏性休克症状药物中的应用。

所述过敏的过敏原包括食物、药物、昆虫或花粉；

所述过敏性休克症状包括支气管痉挛、哮喘、呼吸困难、晕厥、休克、荨麻疹或水肿中的一种或几种。

优选的，所述肾上腺素舌下喷雾剂的剂量为以肾上腺素计1～2mg/次。

本发明所述用于过敏性休克的肾上腺素舌下喷雾剂为将制得的肾上腺素舌下喷雾剂灌装至定量喷雾装置中，通过舌下黏膜途径给药。

本发明所述用于过敏性休克的肾上腺素舌下喷雾剂中的活性成分肾上腺素通过吸收促进剂快速渗透黏膜，发挥药效，给药15min内即可达到肌注相类似的药效。

本发明的第四个目的是提供前述肾上腺素舌下喷雾剂的制备方法在提高肾上腺素舌下喷雾剂稳定性中的应用，所述肾上腺素舌下喷雾剂在40℃±2℃，相对湿度75％±5％下放置3个月，制剂中肾上腺素降解小于1％，杂质生成小于0.2％。

与现有技术相比，本发明具有以下特点：

(1)本发明有效解决了肾上腺素黏膜吸收差的问题，舌下给药后快速吸收入血，15min 内可以达到肌注相类似的药效。

(2)目前现有上市产品均有报道在储存过程中出现溶液稳定性问题，本发明通过pH调节剂对制备过程中的pH进行调节，除了适应施药部位生理环境外，还有效解决了肾上腺素稳定性差的问题，40℃±2℃，相对湿度75％±5％下放置3个月，制剂中肾上腺素降解小于1％，杂质生成小于0.2％。

(3)本发明有效避免了焦亚硫酸钠等抗氧剂的使用，避免了肾上腺素磺酸的生成以及潜在过敏反应的产生。

(4)本发明以喷雾剂的形式进行给药，解决了现有肾上腺素注射剂使用不便，患者用药不及时导致病情延误的问题，极大提高了患者的依从性，有望替代注射剂作为常备应急药品。

(5)本发明制备工艺简单，运输贮存要求低，降低了工业成本。

附图说明

图1为不同pH肾上腺素10mg/mL目标浓度溶液中肾上腺素含量变化；

图2为吸收促进剂聚山梨酯80不同用量180min内肾上腺素体外黏膜渗透曲线；

图3为吸收促进剂十二烷基硫酸钠不同用量180min内肾上腺素体外黏膜渗透曲线；

图4为吸收促进剂聚氧乙烯40氢化蓖麻油不同用量180min内肾上腺素体外黏膜渗透曲线；

图5为吸收促进剂氮酮不同用量180min内肾上腺素体外黏膜渗透曲线；

图6为不同种类吸收促进剂30min时肾上腺素体外黏膜渗透效果比较；

图7为肌注、舌下同制剂组3h内药动曲线；

图8为肌注、舌下同制剂组1h内药动曲线；

图9为肌注、舌下同制剂组15min内药动曲线。

具体实施方式

以下具体实施方式为本发明的进一步详细说明，实施例仅用于说明，不应认为是以任何方式对本发明的限制。

其中，实施例1～20为肾上腺素舌下喷雾剂的制备，实施例21～23为肾上腺素舌下喷雾剂的性质研究。

一、肾上腺素舌下喷雾剂的制备

1、不同聚山梨酯80用量的肾上腺素舌下喷雾剂的制备

精密称取10mg肾上腺素加入茄型瓶中，加入0.2M盐酸溶液0.3mL，搅拌至肾上腺素完全溶解，得到肾上腺素储备液(制品一)，该过程避光完成。

精密称取处方量的吸收促进剂聚山梨酯80、金属离子螯合剂乙二胺四乙酸二钠(EDTA2Na)，加入纯水0.7mL，使本步骤制品二与制品一的总体积为全量1mL，调节温度至25℃，转子转速100r/min，搅拌2h后停止加热，自然冷却至室温，添加pH调节剂柠檬酸、柠檬酸钠调节pH值3～4，得到辅料稀释液(制品二)。

合并制品一和制品二，搅拌均匀后添加pH调节剂柠檬酸、柠檬酸钠，调节pH值3～4，过滤除去不溶物，得到肾上腺素舌下喷雾剂，其中，肾上腺素含量为10mg/mL；将制得的肾上腺素舌下喷雾剂定量灌装至喷雾装置中，实施例1～5制得的肾上腺素舌下喷雾剂分别装入定量喷雾装置：(1)Aptar公司APF多剂量装置，装量10mL，每喷喷量0.1mL；(2)UDS单剂量装置，装量0.1mL，每喷喷量0.1mL；(3)BDS双剂量装置，装量0.2mL，每喷喷量0.1 mL。

具体实施处方如下，其中对比例1为不含吸收促进剂的空白肾上腺素舌下喷雾剂，除不加入吸收促进剂聚山梨酯80外，制备方法和配方与实施例1～5相同。

表1不同聚山梨酯80用量的肾上腺素舌下喷雾剂的制备处方

2、不同十二烷基硫酸钠用量的肾上腺素舌下喷雾剂的制备

精密称取10mg肾上腺素加入茄型瓶中，加入0.2M盐酸溶液0.3mL，搅拌至肾上腺素完全溶解，得到肾上腺素储备液(制品一)，该过程避光完成。

精密称取处方量的吸收促进剂十二烷基硫酸钠、金属离子螯合剂乙二胺四乙酸二钠 (EDTA2Na)，加入纯水0.7mL，使本步骤制品二与制品一的总体积为全量1mL，调节温度至30℃，转子转速200r/min，搅拌1h后停止加热，自然冷却至室温，添加pH调节剂柠檬酸、柠檬酸钠调节pH值3～4，得到辅料稀释液(制品二)。

合并制品一和制品二，搅拌均匀后添加pH调节剂柠檬酸、柠檬酸钠，调节pH值3～4，过滤除去不溶物，得到肾上腺素舌下喷雾剂，其中，肾上腺素含量为10mg/mL；将制得的肾上腺素舌下喷雾剂定量灌装至喷雾装置中，实施例6～10制得的肾上腺素舌下喷雾剂分别装入定量喷雾装置：(1)Aptar公司APF多剂量装置，装量10mL，每喷喷量0.1mL；(2)UDS 单剂量装置，装量0.1mL，每喷喷量0.1mL；(3)BDS双剂量装置，装量0.2mL，每喷喷量 0.1mL。

具体实施处方如下，其中对比例2为不含吸收促进剂的空白肾上腺素舌下喷雾剂，除不加入吸收促进剂十二烷基硫酸钠外，制备方法和配方与实施例6～10相同。

表2不同十二烷基硫酸钠用量的肾上腺素舌下喷雾剂的制备处方

3、不同聚氧乙烯40氢化蓖麻油用量的肾上腺素舌下喷雾剂的制备

精密称取10mg肾上腺素加入茄型瓶中，加入0.2M盐酸溶液0.3mL，搅拌至肾上腺素完全溶解，得到肾上腺素储备液(制品一)，该过程避光完成。

精密称取处方量的吸收促进剂聚氧乙烯40氢化蓖麻油、金属离子螯合剂乙二胺四乙酸二钠(EDTA2Na)，加入纯水0.7mL，使本步骤制品二与制品一的总体积为全量1mL，调节温度至40℃，转子转速400r/min，搅拌3h后停止加热，自然冷却至室温，添加pH调节剂柠檬酸、柠檬酸钠调节pH值3～4，得到辅料稀释液(制品二)。

合并制品一和制品二，搅拌均匀后添加pH调节剂柠檬酸、柠檬酸钠，调节pH值3～4，过滤除去不溶物，得到肾上腺素舌下喷雾剂，其中，肾上腺素含量为10mg/mL；将制得的肾上腺素舌下喷雾剂定量灌装至喷雾装置中，本实施例11～15制得的肾上腺素舌下喷雾剂分别装入定量喷雾装置：(1)Aptar公司APF多剂量装置，装量10mL，每喷喷量0.1mL；(2)UDS 单剂量装置，装量0.1mL，每喷喷量0.1mL；(3)BDS双剂量装置，装量0.2mL，每喷喷量 0.1mL。

具体实施处方如下，其中对比例3为不含吸收促进剂的空白肾上腺素舌下喷雾剂，除不加入吸收促进剂聚氧乙烯40氢化蓖麻油外，制备方法和配方与实施例11～15相同。

表3不同聚氧乙烯40氢化蓖麻油用量的肾上腺素舌下喷雾剂的制备处方

4、不同氮酮用量的肾上腺素舌下喷雾剂的制备

精密称取10mg肾上腺素加入茄型瓶中，加入0.2M盐酸溶液0.3mL，搅拌至肾上腺素完全溶解，得到肾上腺素储备液(制品一)，该过程避光完成。

精密称取处方量的吸收促进剂氮酮、金属离子螯合剂乙二胺四乙酸二钠(EDTA2Na)，加入纯水0.7mL，使本步骤制品二与制品一的总体积为全量1mL，调节温度至35℃，转子转速 600r/min，搅拌4h后停止加热，自然冷却至室温，添加pH调节剂柠檬酸、柠檬酸钠调节pH 值3～4，得到辅料稀释液(制品二)。

合并制品一和制品二，搅拌均匀后添加pH调节剂柠檬酸、柠檬酸钠，调节pH值3～4，过滤除去不溶物，得到肾上腺素舌下喷雾剂，其中，肾上腺素含量为10mg/mL；将制得的肾上腺素舌下喷雾剂定量灌装至喷雾装置中，本实施例16～20制得的肾上腺素舌下喷雾剂分别装入定量喷雾装置：(1)Aptar公司APF多剂量装置，装量10mL，每喷喷量0.1mL；(2)UDS 单剂量装置，装量0.1mL，每喷喷量0.1mL；(3)BDS双剂量装置，装量0.2mL，每喷喷量 0.1mL。

具体实施处方如下，其中对比例4为不含吸收促进剂的空白肾上腺素舌下喷雾剂，除不加入吸收促进剂氮酮外，制备方法和配方与实施例16～20相同。

表4不同氮酮用量的肾上腺素舌下喷雾剂的制备处方

对比例5市售盐酸肾上腺素注射液(上海禾丰制药有限公司)

二、肾上腺素舌下喷雾剂的性质研究

实施例21未添加其他辅料的肾上腺素目标浓度溶液(10mg/mL)的稳定性

精密称取10mg肾上腺素加入茄型瓶中，加入0.2M盐酸溶液0.3mL，搅拌至肾上腺素完全溶解，加入纯水0.7mL至总体积为全量1mL，添加pH调节剂柠檬酸、柠檬酸钠分别调节最终pH值至2.5、3.5、4.5、5.5、6.5，得到不同pH值肾上腺素10mg/mL目标浓度溶液。

将制得不同pH值肾上腺素10mg/mL目标浓度溶液放置1个月后，pH4及以上的肾上腺素溶液含量显著降低，溶液颜色明显发生改变，杂质含量显著增加；pH4以下的肾上腺素溶液含量未发生显著变化，溶液无明显颜色变化(图1)。考虑口腔对于酸性溶液的耐受性，因此，将肾上腺素10mg/mL目标浓度溶液pH控制在3～4之间。

实施例22肾上腺素舌下喷雾剂的体外舌下黏膜渗透性

选择猪口腔黏膜作为实验模型，分成对照组(对比例1～4中不含吸收促进剂的空白肾上腺素舌下喷雾剂)、制剂组(实施例1～20中不同处方)。选择Franz扩散池进行体外渗透实验，给药后，第0、5、10、15、20、30、40、60、90、120、180min取样，采用高效液相色谱检测肾上腺素含量，并同对照组进行比较，评价不同处方制得的肾上腺素喷雾剂的体外黏膜渗透性(图2、3、4、5、6)。结果如下表所示。

表5不同聚山梨酯80用量下肾上腺素30min内黏膜渗透参数(mean±SEM，n＝3)

表6不同十二烷基硫酸钠用量下肾上腺素30min内黏膜渗透参数(mean±SEM，n＝3)

表7不同聚氧乙烯40氢化蓖麻油用量下肾上腺素30min内黏膜渗透参数(mean±SEM，n＝3)

表8不同氮酮用量下肾上腺素30min内黏膜渗透参数(mean±SEM，n＝3)

通过对对照组和制剂组的体外舌下黏膜渗透性进行研究，证明了制剂组的黏膜渗透性得到了显著提高。对照组30min内肾上腺素的舌下黏膜渗透仅4.12％，黏膜渗透性差。制剂组中考察不同种类吸收促进剂对肾上腺素的舌下黏膜吸收促进能力，发现随着吸收促进剂用量的增加，吸收促进效果提高。其中十二烷基硫酸钠作为吸收促进剂的制剂组显著优于其他制剂组， 30min内肾上腺素的舌下黏膜渗透达到20％。聚山梨酯80最高达16％，十二烷基麦芽糖苷最高达17％，氮酮最高达16％。

综上，本发明设计的一种用于过敏性休克的的肾上腺素舌下喷雾剂，与对照组比较，效果提高了385％，显著提高了肾上腺素黏膜渗透性，在舌下黏膜递送中具有显著优势。

实施例23肾上腺素舌下喷雾剂的稳定性

通过实施例21发现肾上腺素10mg/mL目标浓度溶液pH值3～4之间稳定性良好，因此，将肾上腺素舌下喷雾剂pH控制在3～4之间，并通过实施例1～20进一步体现。

进一步结合不同多剂量喷雾装置考察不同处方下肾上腺素喷雾剂的稳定性。多剂量喷雾装置分别选择了国产装置(世通公司)、进口装置(Aptar公司的VP7和APF两种型号)；按照对照组(对比例1)、制剂组(实施例9)进行稳定性测试。考察制剂的外观性状、含量、杂质、 pH变化等，并同对照组进行比较，评价肾上腺素舌下喷雾剂的稳定性。结果如下表所示。

表9不同喷雾装置下相同处方(实施例9)中肾上腺素稳定性(40℃±2℃，75％RH±5％RH)

表10 APF喷雾装置不同处方中肾上腺素稳定性(40℃±2℃，75％RH±5％RH)

对不同多剂量喷雾装置、相同处方制剂3个月的加速实验可以发现，国产和VP7装置中的制剂氧化严重，颜色发生明显变化，呈红棕色，杂质含量显著提高，制剂质量不符合要求，其主要原因是这两种装置中的金属弹簧同管路中的药液会有直接接触，导致肾上腺素氧化。而 APF装置中药液通路中无金属部件，且按压制动后空气、药液不会回流，装置密封性更好，3 个月后制剂依然无色澄清，制剂质量未发生明显变化。由于UDS单剂量、BDS双剂量装置自身不存在金属弹簧部件，且药物不存在与药液与金属直接接触的问题，故不会导致肾上腺素氧化，亦适用于肾上腺素舌下喷雾剂的灌装使用。

表中所述杂质A为肾上腺酮，杂质B为肾上腺红。

进一步对相同喷雾装置(APF)、不同处方制剂3个月的加速实验可以发现，尽管两种处方下制剂依然澄清透明，主药含量、杂质含量等均符合质量要求，但制剂组同对照组比较，肾上腺素的稳定性得到显著提高，30天后总杂质为对照组的50％。

综上，本发明设计的一种用于过敏性休克的的肾上腺素舌下喷雾剂，同已有的肾上腺素制剂比较，显著提高了肾上腺素的稳定性，解决了肾上腺素易氧化的问题，在黏膜给药中具有显著优势。

实施例24肾上腺素舌下喷雾剂的体内药动学研究

选取家兔25只，随机分成空白组1(肌注生理盐水)、空白组2(舌下生理盐水)、对照组 1(对比例5中市售盐酸肾上腺素注射液肌注给药)、对照组2(对比例1中不含吸收促进剂的空白肾上腺素舌下喷雾剂舌下给药)、制剂组(实施例9中肾上腺素舌下喷雾剂舌下给药)。禁食12h后，分别肌注0.3mg或舌下给药1mg，给药后，第0、2、4、6、8、10、15、20、25、 30、45、60、90、120、180min，家兔耳缘静脉取血0.5mL，置于肝素化的EP管中，离心取上层血浆并进行固相萃取工艺萃取血浆中肾上腺素，采用高效液相-质谱联用检测肾上腺素含量，并同对照组进行比较，评价肾上腺素舌下喷雾剂的生物利用度(图7、8、9)。空白组1、 2(不含药物)的检测结果为体内基线水平，对照组和制剂组结果如下表所示。

表11给药组肾上腺素体内药动参数(mean±SEM，n＝3)

表中所述T

表中所述C

表中所述AUC

表中所述AUC

其中，空白组直接给药，测得体内肾上腺素含量为正常基线水平，不会干扰实验结果。进一步对对照组和制剂组的体内药动学进行研究，证明了制剂组效果显著优于对照组，其中对照组2几乎无吸收；制剂组舌下给药达峰更短，16min即可达峰，与对照组1肌注比较，达峰时间缩短了40％，AUC

综上，本发明设计的一种用于过敏性休克的的肾上腺素舌下喷雾剂，与对照组比较起效时间显著缩短，在过敏性休克抢救中更具有优势。