一种手性衍生试剂柱前衍生高效液相色谱拆分R/S-N-Boc-哌啶醇的方法

摘要

本发明属于分析化学技术领域，具体公开了一种手性衍生试剂柱前衍生高效液相色谱拆分R/S‑N‑Boc‑哌啶醇的方法：先将R/S‑N‑Boc‑哌啶醇与(+)‑萘普生经过酯化反应得到(+)‑萘普生‑R/S‑N‑Boc‑哌啶醇酯；再采用高效液相色谱仪，以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，用水相和有机相作为流动相，控制(+)‑萘普生‑R/S‑N‑Boc‑哌啶醇酯样品溶液流速为0.4‑0.8mL/min，进样量为2‑10μL，检测波长为210‑260nm，柱温为20‑35℃，从而将R/S‑N‑Boc‑哌啶醇分离。本发明方法得到的色谱峰峰型和对称性好、分离度高，可以灵敏地拆分R/S‑N‑Boc‑哌啶醇。

说明书

技术领域

本发明属于分析化学技术领域，涉及一种手性衍生试剂柱前衍生高效液相色谱拆分R/S-N-Boc-哌啶醇的方法。

背景技术

S-N-Boc-哌啶醇

目前，R/S-N-Boc-哌啶醇手性拆分方法主要是酶促法。经文献检索，CN105420307A公开了一种制备(S)-N-叔丁氧羰基-3-羟基哌啶的方法，该专利通过酶催化拆分N-叔丁氧羰基-3-哌啶酮，但未说明检测方法。CN103789368A公开了一种N-保护哌啶醇的生产方法，该专利采用酶催化N-叔丁氧羰基-3-哌啶酮和1-苄基-3-哌啶酮产生相应的哌啶醇，并对最终的产物进行了检测，其检测方法为：通过使用Chiralpak ODH柱(250×4.6mm，5μm)色谱柱，流动相为正己烷/异丙醇＝95/5；出峰时间：S型7.0min，R型7.4min；该方法响应低，未达到完全分离。并且，目前没有采用手性衍生试剂柱前衍生，反向色谱系统拆分R/S-N-Boc-哌啶醇的方法。

发明内容

本发明的目的在于解决现有R/S-N-Boc-哌啶醇的拆分方法成本高、灵敏度低以及色谱峰分离度未达到要求等问题。

为了解决上述技术问题，本发明提供了如下技术方案：一种手性衍生试剂柱前衍生高效液相色谱拆分R/S-N-Boc-哌啶醇的方法，包括以下步骤：

a、将R/S-N-Boc-哌啶醇与(+)-萘普生经过柱前衍生酯化反应得到(+)-萘普生-R/S-N-Boc-哌啶醇酯；

b、采用高效液相色谱仪，以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，用水相和有机相作为反相流动相，将(+)-萘普生-R/S-N-Boc-哌啶醇酯配制成浓度为0.2-1.0mg/mL的样品溶液，控制流速为0.4-0.8mL/min，进样量为2-10μL，检测波长为210-260nm，色谱柱柱温为20-35℃，从而将R/S-N-Boc-哌啶醇分离。

其中，上述的一种手性衍生试剂柱前衍生高效液相色谱拆分R/S-N-Boc-哌啶醇的方法，所述柱前衍生酯化反应包括以下步骤：将R/S-N-Boc-哌啶醇与(+)-萘普生溶解在草酰氯溶剂中，以吡啶作为催化剂进行酯化反应得到R/S-Boc-哌啶醇酯；所述(+)-萘普生：R/S-N-Boc-哌啶醇：吡啶的摩尔比为0.80～0.84：1.00：1.20～1.24。

其中，上述的一种手性衍生试剂柱前衍生高效液相色谱拆分R/S-N-Boc-哌啶醇的方法，步骤b中，所述有机相为甲醇。

其中，上述的一种手性衍生试剂柱前衍生高效液相色谱拆分R/S-N-Boc-哌啶醇的方法，步骤b中，所述流动相中甲醇与水的体积比为74～82：18～26。

其中，上述的一种手性衍生试剂柱前衍生高效液相色谱拆分R/S-N-Boc-哌啶醇的方法，步骤b中，所述流动相中甲醇与水的体积比为76：24。

其中，上述的一种手性衍生试剂柱前衍生高效液相色谱拆分R/S-N-Boc-哌啶醇的方法，步骤b中，进行色谱分离时，流速为0.6mL/min，进样量为10μL，色谱柱柱温为25℃。

其中，上述的一种手性衍生试剂柱前衍生高效液相色谱拆分R/S-N-Boc-哌啶醇的方法，步骤b中，所述色谱柱为十八烷基键合在3.5μm硅胶表面作为固定相的AkzoNobelKromail 100-3.5-C

其中，上述的一种手性衍生试剂柱前衍生高效液相色谱拆分R/S-N-Boc-哌啶醇的方法，步骤b中，所用的高效液相色谱仪为：Agilent 1260 Infinity Ⅱ1260 Quat Pump VLG7111A 1260 VWD G7114A 1260 Viaisample G7129C。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

本发明的方法采用廉价(+)-萘普生作为手性衍生试剂与R/S-N-Boc-哌啶醇反应，使得衍生物具有较强的紫外吸收，在广泛使用的紫外检测器中检测时，具有较高的灵敏度；并且选用(+)-萘普生作为衍生试剂只需采用一般的C18色谱柱就可对衍生物进行分离检测，而非使用填料昂贵的手性色谱柱。另外，本发明使用有机相(甲醇)与水相组成的反相流动相系统作为流动相，具有较好的分离效果，且分离度大于1.5。本发明方法克服以往技术中存在的缺陷和不足，具有操作简单便捷、检测快速灵敏、色谱峰峰型和对称性好，分离度高等的技术效果，在医药合成分析领域具有实际推广的前景。

附图说明

图1是实施例1所得的白色固体(+)-萘普生-S-N-Boc-哌啶醇酯核磁谱图；

图2是实施例1所得的白色固体(+)-萘普生-S-N-Boc-哌啶醇酯的液相定位色谱图；

图3是实施例2所得的白色固体(+)-萘普生-R/S-N-Boc-哌啶醇酯核磁谱图；

图4是实施例2所得的白色固体(+)-萘普生-R/S-N-Boc-哌啶醇酯的液相色谱定位图；

具体实施方式

下面通过具体实施例和附图对本发明进行进一步的阐述，但并不限制本发明。

本发明所用的高效液相色谱仪为：Agilent 1260 InfinityⅡ1260 Qua tPump VLG7111A 1260 VWD G7114A 1260 Viaisample G7129C。

实施例1

(1)在带有温度计和干燥管的50mL的三口瓶中依次加入(+)-萘普生(1.00g,4.34mmol)，草酰氯(1.38g,10.87mmol)，随后加入15mL二氯甲烷，回流反应2h，随后旋干二氯甲烷，加入S-N-Boc-哌啶醇对照品(1.05g，5.22mmol)以及吡啶(0.51g，6.46mmol)，随后控温20℃，并保温搅拌1小时，然后浓缩体系，用石油醚：乙酸乙酯(10：1，v/v)做淋洗液硅胶柱柱层析即得白色固体(+)-萘普生S-Boc-哌啶醇酯纯品，收率为85％，液相检测纯度大于98％。

采用核磁共振仪器(Bruker-500/VANCEIII)对上述所得的白色固体进行测定，核磁谱图1共振数据如下：

从上述的核磁共振数据可以看出，所得的白色固体含有(+)-萘普生-S-Boc-哌啶醇酯，其结构式分别如下：

(2)取50mg步骤(1)所得的(+)-萘普生-S-Boc-哌啶醇酯，用流动相溶解定容至50mL容量瓶，得到1.0mg/mL定位溶液；按下述液相条件进行高效液相色谱分析；

液相色谱分析的条件如下：

仪器：Agilent 1260InfinityⅡ；

色谱柱：AkzoNobel Kromail 100-3.5-C18 4.6*250mm色谱柱；

流动相流速：0.6mL/min；

色谱柱温度为25℃；

进样量为10μL；

检测波长为230nm；

流动相：甲醇-水＝76-24(v/v)

从图2液相定位谱图可以看出，(+)-萘普生-S-Boc-哌啶醇酯保留时间为32.596min。

实施例2

(1)在带有温度计和干燥管的50mL的三口瓶中依次加入(+)-萘普生(1.00g,4.34mmol)，草酰氯(1.38g,10.87mmol)，随后加入15mL二氯甲烷，回流反应2h，随后旋干二氯甲烷，加入R/S-N-Boc-哌啶醇(1.05g，5.22mmol)以及吡啶(0.51g，6.46mmol)，随后控温20℃，并保温搅拌1小时，然后浓缩体系，用石油醚：乙酸乙酯(10：1，v/v)做淋洗液硅胶柱柱层析即得白色固体(+)-萘普生R/S-Boc-哌啶醇酯纯品，收率为82％，液相检测纯度大于99％。

采用核磁共振仪器(Bruker-500/VANCEIII)对上述所得的白色固体进行测定，核磁谱图3共振数据如下：

从上述的核磁共振数据可以看出，所得的白色固体含有(+)-萘普生-S-Boc-哌啶醇酯和(+)-萘普生-R-Boc-哌啶醇酯，其结构式分别如下：

(2)取25mg步骤(1)所得的(+)-萘普生-R/S-Boc-哌啶醇酯非对映异构体衍生物，用流动相溶解定容至50mL容量瓶，得到0.5mg/mL供试品溶液；按下述液相条件进行高效液相色谱分析；按下述液相条件进行高效液相色谱分析；

液相色谱分析的条件如下：

仪器：Agilent 1260InfinityⅡ；

色谱柱：AkzoNobel Kromail 100-3.5-C18 4.6*250mm色谱柱；

流动相流速：0.6mL/min；

色谱柱温度为25℃；

进样量为10μL；

检测波长为230nm；

流动相：甲醇-水＝76-24(v/v)；

从图4中可以看出，保留时间32.248min为(+)-萘普生-S-Boc-哌啶醇酯，保留时间33.674min为(+)-萘普生-R-Boc-哌啶醇酯，两者的分离度为2.10,对称性0.99，1.00，由此表明了该方法的分离度更高、色谱峰峰型和对称性更好、出峰时间合适，可以快速灵敏的检测(+)-萘普生-R/S-Boc-哌啶醇酯。

实施例3

(1)同实施例1的步骤(1)；

(2)同实施例2的步骤(2)，得到供试品溶液；

(3)将所得的供试品溶液，按不同的色谱条件(柱温、流速或流动相)，其他色谱条件同实施例2，进行高效液相色谱分析，从色谱图中可以得到不同的色谱条件下(+)-萘普生-S-Boc-哌啶醇酯和(+)-萘普生-R-Boc-哌啶醇酯的分离度分别如下：

1)不同流动相比例，色谱分离结果如表所示：

其中t

从上表的结果可以看出，本实施例中不同流动相比例色谱峰分离度有影响。随着甲醇的增多，保留时间减少但是分离度下降。减少有机相的量，分离度增加但是保留时间增大。故最后选择流动相比例甲醇：水＝76：24；

2)流动相：甲醇-水＝76-24，不同流速比例，色谱分离结果如表所示：

本实施例中不同的流速对色谱峰分离度有影响。随着流速增加保留时间减少，分离度减少。综合考虑保留时间和分离度两方面的因素，最后选择最佳流速0.6mL/min；

3)不同色谱柱温度，色谱分离结果如表所示：

从上表的结果可以看出，本实施例中不同色谱柱温度对色谱峰分离度影响不大；随着温度的升高，保留时间缩短。考虑环境因素，最后选择25℃。

综上所述，本发明提供了一种手性衍生试剂柱前衍生高效液相色谱拆R/S-N-Boc-哌啶醇的方法。综合考察了流动相比例、色谱柱温度、流速等方面因素对色谱峰之间的分离度、出峰时间、色谱峰峰型和对称性的影响，(+)-萘普生-R/S-N-Boc-哌啶醇酯提供了可以快速灵敏检测其构型和比例的液相方法，与以往分析方法相比，使用了普通色谱柱即可实现R/S-N-Boc-哌啶醇的分离和测定使用方向色谱柱就能达到良好的分离、成本低、操作简便。

以上所述仅是本发明的实施方式的举例，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和变型，这些改进和变型也应视为本发明的保护范围。