一种促肾上腺皮质激素粗品精制的方法

摘要

一种促肾上腺皮质激素粗品精制的方法，其特征是采用以下步骤：a.采用超滤仪截留分子量较大的杂质；b.采用超滤仪截留促肾上腺皮质激素，去除分子量较小的杂质；c.采用高压制备液相纯化促肾上腺皮质激素；d.浓缩并冷冻干燥，得高纯度样品。本发明方法简单易行，适于对促肾上腺皮质激素粗品进行精制提取，以提高纯度，为促肾上腺皮质激素生产工艺的改良提供技术数据支持。

说明书

技术领域

本发明涉及一种精制促肾上腺皮质激素粗品的方法，尤其涉及一种采用超滤和高压制备技术提高促肾上腺皮质激素纯度的方法。

背景技术

促肾上腺皮质激素(ACTH)是提取自脑垂体的多肽类天然药物，现有粗品提取工艺生产产品含量低，纯度约1％-2％，急需提纯工艺改进。

超滤是以压力为推动力的膜分离技术，可分离分子量500Da以上的物质，根据目标产物分子量的分布，采用合适分子量的膜对样品进行截留，去除杂质提高纯度。促肾上腺皮质激素分子量为4500Da，采用较大分子量截取滤膜去除分子量较大的杂质，采用较小分子量截取滤膜截取目标产物促肾上腺皮质激素，纯度可提升至5％以上。

制备液相色谱是指采用色谱技术纯化物质，能够分离、收集一种或多种色谱纯物质。 Sepax Bio-C18色谱柱采用大孔径结构的高纯度球形硅胶做载体，特殊化学键合技术形成单层十八烷基硅烷键合硅胶，使得该系列色谱柱可使用纯水做流动相，因此，SepaxBio-C18系列色谱柱是制备多肽类药物的理想色谱柱，可用于纯化促肾上腺皮质激素，提高其纯度至50％以上。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有提取促肾上腺皮质激素粗品纯度低等问题，提供了一种简便快速，能有效提高促肾上腺皮质激素纯度的制备方法。

为实行上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种促肾上腺皮质激素粗品精制的方法，其特征是采用以下步骤：

a.采用超滤仪截留分子量较大的杂质；

b.采用超滤仪截留促肾上腺皮质激素，去除分子量较小的杂质；

c.采用高压制备液相纯化促肾上腺皮质激素；

d.浓缩并冷冻干燥，得高纯度样品。

根据所述的采用超滤和高压制备技术提高促肾上腺皮质激素纯度的方法，其特征是采用以下步骤：

a.首先采用配备20KDa超滤膜的超滤仪过滤料液，截留除去分子量较大的杂质；

b.再采用配备2KDa超滤膜的超滤仪过滤透过液，截留促肾上腺皮质激素，去除分子量较小的杂质；

c.然后采用配备Sepax Bio-C18制备柱的安捷伦PrepStar高压制备液相，纯化二次截留的促肾上腺皮质激素，收集目标峰；

d.最后浓缩并冷冻干燥收集到的料液，得高纯度促肾上腺皮质激素样品。

本发明方法简单易行，适于对促肾上腺皮质激素粗品进行精制提取，以提高纯度，为促肾上腺皮质激素生产工艺的改良提供技术数据支持。

附图说明

图1为本发明获得的纯化前后的样品与USP标准品对照谱图(1.促肾上腺皮质激素粗品 2.促肾上腺皮质激素精品 3.促肾上腺皮质激素USP标准品)。

具体实施方式

本发明一种促肾上腺皮质激素粗品精制的方法，其步骤为：

a.采用超滤仪截留分子量较大的杂质；

b.采用超滤仪截留促肾上腺皮质激素，去除分子量较小的杂质；

c.采用高压制备液相纯化促肾上腺皮质激素；

d.浓缩并冷冻干燥，得高纯度样品。

实施例

首先将10.021g促肾上腺皮质激素粗品溶于200mL纯化水中，采用配备20KDa超滤膜的超滤仪过滤料液，设置超滤参数(进口压力0.25MPa，流速5mL/min)，弃去截留液1，保留透过液1；再采用配备2KDa超滤膜的超滤仪过滤透过液1，设置超滤参数(进口压力0.20MPa，流速1mL/min)，弃去透过液2，保留截留液2，浓缩并冷冻干燥制得促肾上腺皮质激素中间体2.013g；将促肾上腺皮质激素中间体全部溶于100mL纯化水中，然后采用配备SepaxBio-C18制备柱的安捷伦PrepStar高压制备液相纯化料液，设置流速10mL/min，以水和乙腈为流动相梯度洗脱，收集保留时间35min-40min之间的目标峰洗脱液；最后合并收集的洗脱液，浓缩并冷冻干燥，得高纯度促肾上腺皮质激素样品0.159g。

图1为本发明获得的纯化前后的样品与USP标准品对照谱图。

表格1：为本发明制备液相的洗脱梯度参数

表格2：为本发明方法对实施例样品进行分析检测的实验结果

结果：实施例促肾上腺皮质激素粗品超滤后，样品纯度提高到6.6％；再经制备液相纯化后，样品纯度提高到68.1％；实施例中使用本发明精制促肾上腺皮质激素的收率为72.0％。