一种基于PRE-HPLC从党参中制备党参炔苷、苍术内酯III和紫丁香苷的方法

摘要

本发明公开了一种基于PRE‑HPLC从党参中制备党参炔苷、苍术内酯III和紫丁香苷的方法，具体为：(1)单药提取：取党参药材粉碎，添加12～15倍量的乙醇溶液，在400‑500W超声提取2‑3次，每次30～60min，提取结束后粗滤，合并滤液得党参提取液；(2)浓缩干燥：将上述过滤后的提取液减压真空浓缩干燥；(3)制备纯化：取干燥后的提取物超声溶解，过0.22μm微孔滤膜后上制备液相；(4)馏分收集：分别收集党参炔苷、苍术内酯III和紫丁香苷馏分；(5)浓缩干燥：将上述收集的馏分减压真空浓缩干燥。本发明具有操作便利、重现性好、周期短、同时制备3种单体成分等特点，制备的单体成分具有纯度高的特点。

说明书

技术领域

本发明涉及化学成分分离纯化技术领域，具体涉及一种基于高效制备型液相色谱从党参提取物中快速分离制备党参炔苷、苍术内酯III和紫丁香苷的方法。

背景技术

党参，为桔梗科植物党参(Codonopsis pilosula(Franch.)Nannf.)、素花党参(Codonopsis pilosula Nannf.var.modesta(Nannf.)L.T.Shen)或川党参(Codonopsistangshen Oliv.)的干燥根和根茎，党参之名始见于《本草从新》，谓：“按古本草云：参须上党者佳。历代本草均有收录，为我国药典收藏的常用中草药。秋季采挖，洗净，晒干。本品味甘，性平。有补中益气、止渴、健脾益肺，养血生津。用于脾肺气虚，食少倦怠，咳嗽虚喘，气血不足，面色萎黄，心悸气短，津伤口渴，内热消渴。懒言短气、四肢无力、食欲不佳、气虚、气津两虚、气血双亏以及血虚萎黄等症。

党参具有以下功效：1.镇静解热：可以改善记忆,抗惊厥和解热作用。2.降血压作用：能扩张周边血管。增加血流量，改善心功能与保护血管内皮。3.降血糖作用：对抗胰岛素性低血糖。4.增进造血功能：能令红血球和血色素增多，白血球减少，有降血脂作用。5.解痉作用：能抑制离体胃肠应激性。而促进胃粘膜溃疡愈合。6.保肝作用：对肝损伤有保肝作用，增进乳糜管吸收。7.抗利尿作用：可以使其大鼠尿排泄减少，引起大白鼠离体子宫收缩。8.抗疲劳：能提升动物的游泳能力，抗疲劳。党参可增加动物体重23％。9.抗肿瘤作用：煎剂和环磷酰胺有协同抑制肿瘤与减少转移等作用。

研究表明党参所含化学成分复杂，种类繁多，包括糖类、苷类、多炔类、生物碱类、萜类、苯丙素类、甾体类、黄酮类、木脂素类及酸类等多种成分，其中8类成分及其分离得到的化合物有显著药理活性。具有调节机体免疫力、抗氧化、保护胃肠道黏膜及抗溃疡抑菌、抗癌、延缓衰老等多种活性成分，目前对党参活性成分研究主要集中在多糖、炔苷类、生物碱等。

党参炔苷、苍术内酯III和紫丁香苷是党参中的几个主要功能成分。据药理学研究表明，党参炔苷除了有抗癌、抗菌、抗炎等作用，还对胃黏膜损伤有很好的保护作用；苍术内酯III具有较明显抗炎、抗肿瘤功能，对胃肠道功能有调节作用、可以促进营养物质的吸收；紫丁香苷是一种强的抗肝毒药物,其恢复微粒体酶系统的酶活性及抑制脂质过氧化作用可以促进肝毒物代谢并改善肝功能使之正常化。党参生物碱的药理作用主要是对神经系统的作用，党参总生物碱通过放大有丝分裂原激活的蛋白激酶依赖的信号通路某个上游步骤而增强神经生长因子(NGF)诱导PC12细胞延伸大量突起；党参总碱能明显改善东莨菪碱所引起的小鼠记忆损伤作用。

目前，从党参药材中获取这些功能成分的提取分离方式：一般采用逆流提取、超声提取、萃取等，或是通过一定方式将目标成分修饰改性后再进一步分离，后期进一步借助层析柱及中低压制备相结合的方式进行分离纯化，也有通过超临界流体萃取等方式分离纯化来获得纯度较高的单体化合物，但是这些方法大多工艺步骤繁琐，消耗试剂量较大，且单体得率相对较低，并且每次只能获得1-2种单体成分，若需得到多种单体成分，则需要采取不同条件或方法进行多次操作，因此，一般具有周期较长，工艺复杂，效率较低、成本较高、分离成分单一等缺点。

发明内容

本发明的目的是提供一种便捷、高效、工艺简单、易推广的用于从党参中分离制备高纯度党参炔苷、苍术内酯III和紫丁香苷单体的方法。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种基于PRE-HPLC从党参中制备党参炔苷、苍术内酯III和紫丁香苷的方法，由下述步骤组成：

(1)单药提取：取党参药材粉碎，添加12～15倍量的乙醇溶液，在400-500W超声提取2-3次，每次30～60min，提取结束后粗滤，合并滤液得党参提取液；

(2)浓缩干燥：将上述过滤后的提取液减压真空浓缩干燥；

(3)制备纯化：取干燥后的提取物加入100～200倍量70～80％乙醇超声溶解，过0.22μm微孔滤膜后上制备液相；

(4)馏分收集：利用馏分收集器进行收集，在12-14min区间段收集所得馏分为党参炔苷、在19-21min区间段收集所得馏分为紫丁香苷，在37-38min区间段收集所得馏分为苍术内酯III；

(5)浓缩干燥：将上述收集的馏分减压真空浓缩干燥。

优选的，所述步骤(1)中乙醇溶液的浓度为70％～80％。

优选的，所述步骤(2)中干燥温度为40～50℃。

优选的，所述步骤(3)中色谱柱为：色谱柱(Amethyst C18-H,21.2*250mm,10μm)，具体色谱条件为：流动相为乙腈：水按照下表梯度洗脱，流速8～15mL/min，检测波长214～225nm和267～275nm双波，柱温25～35℃。

优选的，所述梯度洗脱条件为：

优选的，所述步骤(5)中干燥温度为40-50℃。

本发明与现有技术相比，具有以下优点：

一、工艺便捷：大多数当参有效成分制备方法主要是通过溶剂逆流提取后再经过树脂层析柱的方式进行吸附除杂，或者借助其他溶剂逐级提纯以达到分离纯化党参中有效成分的目的；而本发明是将党参提取后的浓缩液干燥后借助流动相溶解过膜后直接通过制备液相进行分离纯化，从而得到高纯度的党参炔苷、苍术内酯III和紫丁香苷，这种方法工艺简单、流程清晰，大大降低了分离纯化的周期。

二、分离高效：相比其他的党参单体制备方法，本制备方法只需将党参提取物借助流动相溶解后过膜，在制备液相上进行检测分离，便可同时分离纯化出三种单体成分，分离效率高，可以做到一次分三种的效果，相比于其他方法中的反复利用树脂、试剂提纯等方法，该方法大大提高了分离的效率。

三、产物纯度高：党参提取物在经过前处理后，经过制备型液相色谱仪分离纯化，能够获得产品纯度在95％以上的单体成分，杂质少，产品纯度高。

具体实施方式

下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

一种基于PRE-HPLC从党参中制备党参炔苷、苍术内酯III和紫丁香苷的方法，由下述步骤组成：

(1)药材提取：取100g党参药材，粉碎后添加12倍量体积的65％乙醇溶液，每次1200mL，400W超声提取60min，共提取3次，提取结束后粗滤，收集并合并滤液。

(2)浓缩干燥：将上述提取液在45℃条件下减压浓缩干燥，得到党参粗提物9.9g。

(3)制备纯化：取干燥后的党参提取物适量加入100倍量70％乙醇溶液超声溶解，然后过0.22μm微孔滤膜后得到待制备样品，最后通过制备液相进行分离制备，色谱条件为：色谱柱为C18反相色谱柱，流动相为甲醇：0.1％甲酸按照下表梯度洗脱，流速8mL/min，检测波长214nm和267nm双波长，柱温25℃。

(4)馏分收集：在12-13min区间段收集所得馏分为党参炔苷、在19-20min区间段收集所得馏分为紫丁香苷，在37-38min区间段收集所得馏分为苍术内酯III；

(5)浓缩干燥：将上述收集的馏分减压真空浓缩干燥(温度40℃)，测定各馏分纯度分别为97.6％、96.1％和96.3％(与(4)中馏分顺序对应，下同)。

实施例2

一种基于PRE-HPLC从党参中制备党参炔苷、苍术内酯III和紫丁香苷的方法，由下述步骤组成：

(1)药材提取：取100g党参药材，粉碎后添加14倍量体积的70％乙醇溶液，每次1400mL，450W超声提取45min，共提取3次，提取结束后粗滤，收集并合并滤液。

(2)浓缩干燥：将上述提取液在60℃条件下减压浓缩干燥，得到党参粗提物10.4g。

(3)制备纯化：取干燥后的党参提取物适量加入150倍量65％乙醇溶液超声溶解，然后过0.22μm微孔滤膜后得到待制备样品，最后通过制备液相进行分离制备，色谱条件为：色谱柱为C18反相色谱柱，流动相为乙腈：水按照下表梯度洗脱，流速15mL/min，检测波长220nm和270nm双波长，柱温30℃。

(4)馏分收集：在13-14min区间段收集所得馏分为党参炔苷、在20-21min区间段收集所得馏分为紫丁香苷，在37-38min区间段收集所得馏分为苍术内酯III；

(5)浓缩干燥：将上述收集的馏分减压真空浓缩干燥(温度45℃)，测定各馏分纯度分别为96.2％、96.0％和96.7％。

实施例3

一种基于PRE-HPLC从党参中制备党参炔苷、苍术内酯III和紫丁香苷的方法，由下述步骤组成：

(1)药材提取：取100g党参药材，粉碎后添加15倍量体积的75％乙醇溶液，每次1500mL，500W超声提取60min，共提取3次，提取结束后粗滤，收集并合并滤液。

(2)浓缩干燥：将上述提取液在50℃条件下减压浓缩干燥，得到党参粗提物10.7g。

(3)制备纯化：取干燥后的党参提取物适量加入200倍量75％乙醇溶液超声溶解，然后过0.22μm微孔滤膜后得到待制备样品，最后通过制备液相进行分离制备，色谱条件为：色谱柱为C18反相色谱柱，流动相为乙腈：水按照下表梯度洗脱，流速10mL/min，检测波长225nm和275nm双波长，柱温30℃。

(4)馏分收集：在12.5-13.5min区间段收集所得馏分为党参炔苷、在19.5-20.5min区间段收集所得馏分为紫丁香苷，在37-38min区间段收集所得馏分为苍术内酯III；

(5)浓缩干燥：将上述收集的馏分减压真空浓缩干燥(温度50℃)，测定各馏分纯度分别为95.7％、96.1％和95.3％。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。