一种对细菌中必需基因进行反向遗传分析的方法

摘要

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种对细菌中必需基因进行反向遗传分析的方法。本发明通过敲除质粒同源重组、插入回补质粒以及环出敲除质粒三步法方案来构建基于自杀质粒的细菌必需基因的缺失突变菌株。利用该方法，以铜绿假单胞菌PA0006基因作为目的基因，团队详细研究了假单胞菌必需基因PA0006的功能与抑制分析，结合显微观察、免疫印迹、转录组测序与DNA重测序等技术发现PA0006在细胞形态和脂多糖核心寡糖的生物合成中发挥着调节作用。PA0006基因也是开发治疗和预防铜绿假单胞菌引起疾病的新药靶标。与现有技术对比，本发明简单、快速、有效，方法可广泛应用于细菌必需基因的表型和抑制分析。